Universidad Autónoma de

Baja California

Facultad de Ciencias Marinas

Laboratorio de Bioquímica

Práctica no. 2
Determinación del contenido de proteína soluble.

Pérez Cazabal Paola

Matrícula:
368085

Profesor:
Felix Augusto Hernández Guzman.

Fecha de entrega:
Jueves 1 de septiembre, 2022.
Resumen
Calcular la concentración de proteína soluble en un organismo como en este caso
un ejemplar de la especie de Umbrina coroides, es de gran importancia en el área
acuícola, y hay diferentes métodos para lograrlo, entre ellos la espectrofotometría
con reactivo de Biuret. Siguiendo el respectivo método y aplicando fórmulas de
conversión para determinar en mg/g las concentraciones calculadas en mg/mL de la
ecuación de la curva de calibración previamente realizada, se obtuvo que los tubos
B1 y B2 fueron los de mayor concentración, con 34,56904 mg/g y 28,15719 mg/g
respectivamente.

Introducción
Las proteínas son solubles en agua cuando adoptan una conformación globular. La
solubilidad es debida a los radicales (-R) libres de los aminoácidos que, al ionizarse,
establecen enlaces débiles (puentes de hidrógeno) con las moléculas de agua. Así,
cuando una proteína se solubiliza queda recubierta de una capa de moléculas de
agua (capa de solvatación) que impide que se pueda unir a otras proteínas lo cual
provocaría su precipitación (insolubilización). (Calabokis, 2020). Esta propiedad es
la que hace posible la hidratación de los tejidos de los seres vivos.

Estimar la concentración de proteína es necesario no solo en los laboratorios sino

también en la industria alimenticia, farmacéutica y biotecnológica en general
(acuicultura). La cuantificación de proteínas es la medición de la concentración de
proteína total en una muestra. Existen muchos métodos para la determinación de
proteínas, se puede cuantificar directamente mediante absorbancia, o
indirectamente mediante métodos colorimétricos o fluorimétricos que ofrecen
ventajas como una mayor sensibilidad. (García-Arellano y Vázquez-Duhalt, 1998).

Para identificar y medir una proteína específica dentro de una muestra compleja, por
ejemplo, suero o lisado celular, puede utilizarse un ensayo de inmunoadsorción
ligado a enzima (ELISA). La señalización celular y otros procesos biológicos pueden
analizarse usando proteínas fluorescentes. Por ejemplo, la proteína fluorescente
verde (GFP) puede expresarse en células vivas y utilizarse para visualizar la
localización y la dinámica de proteínas en condiciones experimentales. El triptófano,
un aminoácido cuyas propiedades de emisión de fluorescencia se ven afectadas por
su microambiente, también se ha utilizado para obtener información sobre los
cambios en el estado conformacional de las proteínas (Molecular Devices, 2019).

En el desarrollo de esta práctica se utilizó el Reactivo de Biuret; el método de Biuret

se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de
los enlaces peptídicos en medio básico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH. La
intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad de proteínas
(enlaces peptídicos) y la reacción es bastante específica, de manera que pocas
sustancias interfieren. La sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda
para la cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados (por ejemplo
en suero) (Fernández-Reyes y Galván-Cejudo).

Metodología
Materiales
● 5 Tubos de ensayo de vidrio.
● 2 Pipetas graduadas de 5 mL de vidrio.
● 2 Pipetas graduadas de 1 mL de vidrio.
● Vaso de precipitados de vidrio de 250 mL.
● Celdas para espectrofotómetro.
● Material de disección (espátula, bisturí).
● Charola de disección.
● Charola con hielo.
● Homogeneizador manual.
● Termómetro
● Pipetero
● Gradilla
● Piseta
Equipo
● Agitador de tubos (Vórtex).
● Plancha de calentamiento.
● Espectrofotómetro
● Centrífuga
Reactivos
● Reactivo de Biuret (3.75 g CuSO4•5H2O + 1.51 g NaKC4H4O6•4H2O + 7.5 g
NaOH en 25 mL de agua destilada).
● Buffer salino (NaCl 0.5M, citrato de sodio 0.015M, pH 7).
● Agua destilada.
Método
1. Se hizo la disección del organismo por duplicado, para tomar dos muestras.
 2. Se cortó y pesó aprox 1 g de tejido + 5 mL de buffer salino.
3. Posteriormente se vertió en los homogeneizadores manuales, y se
homogeneizó el tejido en baño con hielo.
4. Se llevaron los 4 tubos a la centrífuga a 3000 rpm x 5 min.
5. Después de separar sobrenadante, se agregó a los 0.8 mL de agua destilada
y 4.5 mL reactivo Biuret en los tubos previamente preparados y etiquetados.
6. Se preparó también el blanco con 0.8 mL de agua destilada y 4.5 mL reactivo
Biuret.
7. Se calentaron a 37°C durante unos minutos y se dejaron enfriar antes de leer
la absorbancia.
8. Se hizo la lectura en el espectrofotómetro a leer A 550nm y se calcularon las
concentraciones usando la curva de calibración obtenida en la práctica
anterior.

Figuras 1, 2 y 3. Homogenización del tejido en baño con hielo. Calentamiento de

los tubos A1, A2, B1, B2 y el blanco. Tubos A1 y B1 con suero separado.
 Resultados
El organismo analizado fue el Berrugata Umbrina coroides.

Figura 4. Ejemplar de Umbrina coroides, comúnmente conocida como Berrugata.

Tabla I. Contenido de los tubos, absorbancia y concentración calculada con la

ecuación de la recta.

Tubo Buffer Reactivo Agua Proteína Concentración Absorbancia

salino Biuret destilada
A1 0.5 mL 4.5 mL 0.8 mL 1.0273g 1.0336mg/mL 0.160
A2 0.5 mL 4.5 mL 0.8 mL 1.0273g 1.0269mg/mL 0.159
B1 0.5 mL 4.5 mL 0.8 mL 1.0095g 1.2690mg/mL 0.195
B2 0.5 mL 4.5 mL 0.8 mL 1.0095g 1.0336mg/mL 0.160

Utilizamos la ecuación de la recta que nos resultó de la gráfica de concentración vs

absorbancia en la práctica 1:

y = 0,1487x + 0,0063
Donde:

y= A550nm
m= pendiente = 0,1487
x= concentración (mg/mL)
b= intercepto = 0,0063
Despejando para calcular concentraciones de los tubos A1, A2, B1 y B2, con las
absorbancias tomadas (Tabla I):

x= (y(absorbancia) - 0,0063)/ 0,1487

Obtenemos las concentraciones en unidades de mg/mL, por lo tanto, convertimos a
mg/g:

mg/mL a mg/g
Para los tubos A1 y A2:

mg/mL * Factor dilución (5) * (vol final tubo (5.5mL)) / (peso muestra
(1.0273g))
Para los tubos B1 y B2:

mg/g * Factor dilución (5) * (vol final tubo (5.5mL)) / (peso muestra
(1.0095g))
Obtenemos:

A1 27,66931 mg/g

A2 27,48929 mg/g

B1 34,56904 mg/g

B2 28,15719 mg/g

Conclusión
El análisis nos proporcionó la concentración proteica soluble de un organismo
aunque con posibles errores por usar la curva de calibración obtenida de los valores
de absorción de albúmina tomada una semana antes.

Referencias
Calabokis, M. (2020). El agua y la dinámica molecular de las proteínas en las masas
panaderas. Recuperado de:
https://www.exiliopanadero.com/post/el-agua-y-la-din%C3%A1mica-molecular-de-las
-prote%C3%ADnas-en-las-masas-panaderas
García-Arellano, H. y Vázquez-Duhalt, R. (1998). Cuantificación de proteínas: una
revisión. UNAM. Recuperado de:
https://d1wqtxts1xzle7.cloudfront.net/51985028/bitacora-with-cover-page-v2.pdf?Exp
ires=

Fernández-Reyes, E., y Galván-Cejudo, A. G. 27. Métodos para la cuantificación de

proteínas. Recuperado de:
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/27%20METODOS%20PARA%20
LA%20CUANTIFICACION%20DE%20PROTEINAS.pdf

Molecular Devices. (2019). Detección, cuantificación y análisis de proteínas.

Recuperado de:
https://es.moleculardevices.com/applications/protein-detection-quantitation-and-anal
ysis#gref