366 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, undecima edic.ion.
Agregar de 20 mL a 30 mL de alcohol neutralizado y agitar.
Adicionar 1.0 mL de SI de fenolflaleina y valorar con SV de
hidroxido de potasio 0.5 N en alcohol hasta neutralizar el
acido libre. Agregar 25 mL de SV de hidr6xido de potasio
0.5 N en alcohol, ensarnblar a1 matraz un condensador de
aire frio de 75 cm de longitud por 6 mm de ditnnetro interno,
calentar en BV, mantener a reflujo durante 30 min, agitar por
rotacion frecuentemente el contenido del matraz, agregar
1.0 mL de Sl de fenolftaleina y titular el exceso de hidroxido
de potasio con SV de acido clorhidrico 0.5 N. Efectuar una
determinacion en blanco, con las rnismas cantidades y
condiciones usadas en Ia prueba.
Calculos. Calcular el indice de ester por media de la formula:
indice de ester = (8 - V) 28.0S/m
Donde:
B = Volumen en mililitros de SV de acido clorhidrico 0.5 N
gastados en la determinacion de la prueba en blanco.
V= Volumen en mililitros de SV de acido clorhidrico 0.5 N
gastados en Ia determinacion de la muestra.
m = Peso en gramos de la muestra.
28.05 = Equivalente de la SV de hidroxido de potasio 0.5 N.
Nota: tambien se puede obtener del indice de ester mediante la
diferencia entre et indice de saponificaci6n y el indice de acidez.
MGA 0381. ESTERILIDAD
Esta prueba tiene como finalidad investigar la presencia
de microorganismos contaminantes en sustancias, prep a-
raciones, 0 dispositivos medicos que de acuerdo con 1a
Farmacopea, requieren ser esteriles.
Esta prueba, por S1 misma no asegura que un lote de
producto sea esteril, esto solo se logra con 1a validacion
de los procesos de esterilizaci6n y de llenado aseptico.
PRECAUCIONES PARA PREVENJR LA CONTAMI-
NACION MICROBIANA
La prueba debe realizarse bajo condiciones asepticas en
campanas 0 modulos de flujo laminar 0 aisladores, ubicados
en un ambiente SlUeto a control microbio16gico peri6dico.
Las precauciones necesarias para evitar la contaminaci6n de Ia
muestra, no deben afectar a los rnicroorganisrnos que puedan
estar presentes en la muestra.
EI personal debe estar calificado y entrenado en microbio-
10gb, durante la prueba deben inc1uirse controles del equipo,
material, soluciones diluyentes y de enjuague.
Eslerilizar por calor humedo, seco 0 filtraci6n, segun
corresponda los medios de cultivo, soluciones diluyentes y
de enjuague, asi como los materiales en contacto con 1a
muestra, empleando cic10s de esterilizaci6n validados.
MEDIOS DE CULTlVO Y TEMPERATURAS DE
INCUBACION
El medio liquido de tioglicolato y medio de digerido de
soya--tripticaseina, son los medios de cultivo que se utilizan
MGA 0381. ESTERILIDAD
para llevar a cabo la prueba de csterilidad. EI primero
fundamental mente para e1 cultivo de bacterias anaer6bicas,
sin embargo en este medio de cultivo pueden crecer
bactcrias aerobicas. EI segundo es adecuado para el cultivo
de hongos y bacterias aer6bicas.
Los medios de cultivo pueden prepararse en e1 laboratorio 0
usar medios preparados comercialmente, siempre y cuando se
demuestre que cumplen con los requisitos de la Prneba de
promocion de crecimiento para aerobios, anaerobios y hongos.
Si se requiere aj ustar el pH de los medios de cultivo ulilizar
una soluci6n de hidr6xido de sodio 1.0 Node acido
clorhidrico 1.0 N, para que despues de la esterilizaci6n se
obtenga e1 valor indicado en cada caso. Esterilizar en
autoclave usando procesos validados.
No usaf los medios de cultivo por periodos mayores a los
que se ha validado su uso.
Medio liquido de tioglicolato
L-Cistina 0.5 g
Cloruro de sodio 2.5 g
Glucosa monohidratadalanhidra 5.5/5.0g
Agar granu1ado con un contenido de humedad
no mayor deliS % 0.75 g
Extracto de levadura soluble en agua 5.0 g
Digerido pancreatico de caseina 15.0 g
Tioglicolato de sadio· 0.5 g
Soluci6n de resazurina de sodio 1: 1 000 recien
preparada 1.0 mL
Agua purificada 1000 mL
pH despues de esterilizar 7.1 ± 0.2
* Puede sustituirse por 0.3 mL de acido tioglic61ico.
Mezclar los ingredientes en agua y calentar hasta que se
disuelvan completamente. Si es necesario, filtrar en caliente
a traves de papel fittro. Anadir ia soluci6n de resazurina de
sodio, mezclar) envasar y esterilizar en autoclave. EI medio
de cultivo pucde presentar una zona superficial de color rosa
debido a su oxidaci6n, la cual no debe rebasar la tercera
parte del volumen totaL Si mas de 1a tercera parte del medio
presenta un colora rosa, antes de su uso, calcntar una sola
vez en bane de agua hasta que el color desaparezca. Si e1
medio de cultivo se almacena efectuarlo a una temperatura
de entre 2 y 25°C en un recipiente hermetico.
[neubar el Medio liquido de tioglicolato de 30 a 35°C,
excepto cuando se prueban productos que contienen como
preservativos derivados del mercuric por el metoda directo,
en estos casos incubar el medio de cultivo a 20 a 25°C, este
medio puede usarse en lugar del medio de digerido de soya-
tripticaseina siempre y cuando se valide su uso como se
describe en la Prueba de promocion de crecimiento de
aerobios, anaerobios, y hongos.
Medio liquido de tioglicolato a!terno. Cuando se sefiale en la
monografia del articulo) 0 se justifique usar este medio de cul-
tivo, que tiene la misma composicion que e1 medio liquido
de tioglicolato, excepto que no contiene agar ni resazurina de
sodio. Esterilizar en autoclave. EI pH despues de esteri-

lizacion debe ser 7.1 ± 0.2. Calentar en bano de agua antes
de usaf e incubar a 30 -35°C bajo condiciones anaer6bicas.
Caldo soya tripticasein.
Digcrido pancreatico de cascina t 7.0 g
Digerido papainico de soya 3.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Fosfato dibasico de potasio 2.5 g
Glucosa monohidratada/anhidra 2.5/2.3 g
Agua purificada 1 000 mL
pH despues de esterilizar 7.3 ± 0.2
Disalver los ingredientes en el agua. Filtrar sl es necesario.
Envasar y esterilizar en autoclave. Alrnacenar entre 2 y
25°C a menos de que sc use de inmediato. Durante la
prueba incubar a 22.5 ± 2.5 °C.
Medios de cultivo para peniciUnas 0 cefalosporinas. Para
preparados farrnaceuticos que contengan penicilinas 0
cefalosporinas, adicionar a cada uno de los medias de cultivo
1a cantidad determinada de p-lactamasa para inactivar el
antibi6tico en la muestra.
Determinar Ia cantidad de ,8-1actamasa que debe adicionarse
a los medios de cultivo, en un area totalmente independiente a
Ia de pruebas de csterilidad. Proceder de acuerdo a 10 indi-
cado en Ia prueba de adecuaci6n del metodo, usando no mas
de 100 liFC en el volumen apropiado, de Staphylococcus
aureus ATCC 6538.
La confirmaci6n de la inactivaci6n del antibi6tico se observa
por e1 crecimiento del microorganismo de prueba.
Los medios de cultivo deben cumplir con las siguientes
pruebas, que se conducen previamente, 0 en paralelo, con
la prueba del producto.
Esterilidad
lncubar a ia temperatura indicada, un nfunero representativo de
unidades del late (se recomienda e14 % de las tmidades) de los
medios de cultivo por 14 dias. No debe haber crecimiento.
Prucha de Promocion del crccimiento de microorganismos
aero bios, anaerobios y hongos
Mantener viables a los microorganismos de prueba, mediante
Ia tecnica del Iote semilla, (vease Apendice VI, Conservacion,
mantenimiento y mane.jo de cultivos de referencia: sistema
lote semilla) de manera que no mas de 5 pases sc efectuen a
partir de Ia cepa original.
La pmeba pucde realizarse simulttmeamente con Ia prueba
de esterilidad del producto.
Probar cada 10t.e de medio de cultivo preparado comer-
cialmentc 0 en el laboratorio con los microorganismos que
se indican en la tabla 0381.1. Efectuar la pmeba de forma
independiente para cada microorganismo. Incubar en las
condiciones indicadas en Medios de cultivo y temperaturas
de incubacion.
Inocular el medio liquido de tioglicolato con suspensiones
que contengan cada una de ellas no mas de 100 liFe en el
volumen apropiado, de los siguientes microorganismos:
Clostridium sporogenes, Pseudomonas aernginm;a, y
J _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ __
I
Metodos Generales de Analisis 367
5'taphylococcus aureus. Inocular cl medio alternativo de
tioglicolato con no mas de 100 liFC en el volumen apro-
piado, de Clostridium sporogenes. Inocular individualmente
envases conteniendo el medio digerido de soya-tripticaseina,
con no mas de J 00 UFC/mL en el volumen apropiado de los
siguientes microorganismos: Aspergil!u,S' brasiliensis
(Aspergillus niger),Baeillus subtilis, y Candida albieans.
Incubar cada uno de los medios inoculados no mas de tres
dias en el caso de bacterias y no mas de cinco dias en el caso
de hongos a las tempcraturas indicadas en Medias de cultivo
y temperaturas de incubacion.
Los medios de cultivo son adecuados S1 se presenta creci-
miento c1aramente visible de los microorganismos.
SOLUCIONES DILUYENTES Y DE ENJUAGUE PARA
EL METODO DE FILTRACION POR MEMBRANA
Saludon de pep/ana al 0,1 %. Disolver l.0 g de peptona de
cascina 0 de carne en 1 000 mL de agua puriticada, en casa
necesario, filtrar, ajustar el pH a 7.1 ± 0.2, distribuir en envases
y esterilizar en autoc1ave. Para productos que contengan
penicilinas 0 cefalosporinas, agregar en condiciones asepticas la
cantidad necesaria de ,8 -lactamasa para inactivar al antibi6tico.
Saludon de peptana al 0.1 % con polisorbato 80. Preparar
como se indica en la soluci6n de peptona al 0.1 % s610 que,
agregar l.0 mL de polisorbato 80 por cada litro de solucion.
Esta soIuci6n se utiliza para articulos que contienen lecitina
o aceite 0 para dispositivos etiquetados como "via esteril".
Solution de peptona y extracto de carne con polisorbato 80.
Disolver 5.0 g de peptona de caseina 0 came, 3.0 g de
extracto de came y 109 de polisorbato 80 en 1 000 mL
de agua purificada. Ajustar el pH a 6.9 ± 0.2, distribuir en
envases y esterilizar.
Prucba de adecuadon del metodo
Para cada preparado farmaceutico Los volumenes de media
de cultivo, diLuyente y concentracion del agente inactivante
deben determinarse mediante esta prueba.
La pmeba de adecuaci6n del metoda se efectua:
a) Antes de realizar por primera vez la pnlCba de esterilidad
a un producto.
b) En caso de modificar las condiciones experimentales de Ia
prueba.
Efectuar Ia pmeba como se indica para cada tipo de producto,
con las siguientes modificaciones:
Metodo directo. Transferir a cada medio de cultivo Ia
cantidad de muestra indicada en las tablas 0381.2 y 0381.3,
inocular individualmente los medios, con una suspension que
contenga no mas de 100 liFe en el volumen apropiado, de cada
uno de los microorgamsmos especificados en la tabla 0381.1.
Metodo de filtracion por membrana. Transferir Ia cantidad
de muestra indieada en las tablas 0381.2 y 0381.3, inocular
individual mente el ultimo enjuague con una suspension que
contenga no mas de 100 UFC en el volumen apropiado, de cada
uno de los microorganismos indicados en la tabla 0381.1.
Para ambos metodos reahzar la Prueba de promoci6n
crecimiento de aerobios, anaerobios y hongos como control
MGA 0381. ESTERILIDAD
368 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, undecima ed;ci6n.

positivo. Incubar todos los envases durante no mas de cinco
dias a las temperaturas indicadas en Medias de cultiva y
temperaturas de incubacion.
Si despues de la incubaci6n, el crecimiento que presentan los
envases conteniendo la muestra es similar al del control
positivo, se considera que la muestra no po see actividad antimi-
crobiana bajo las condiciones de prueba, 0 que ha sido
eliminada satisfactoriamente. Por consiguiente, la prueba de
esterilidad del producto debe realizarse bajo estas condiciones.
Si por el contrario, no se obtiene crecimiento en presencia de
la muestra, se considera que el producto posee actividad anti-
microbiana 0 que no se ha eliminado bajo las condiciones de
prueba, por 10 tanto es necesario modificar las condiciones, por
ejemplo: aumentando el volumen del medio de cultivo, el
numero de enjuagues 0 usando agentes neutralizantes, etc.
PRUEBA DE ESTEruLIDAD DEL PRODUCTO DE
PRUEBA
A menos que se especi£lque 10 contrario en este capitulo 0 en
la monografia individual, probar el numero de articulos
especi£lcados en la tabla 0381.3. Si el contenido de cada
articulo es su£lciente (tabla 0381.2), pueden dividirse de
manera que porciones iguales se agreguen a cada uno de los
medios de cultivo especi£lcado.
Nota: realizar la prueba de esterilidad empleando dos 0 mas
de los medios de cultivo especi£lcados.
Si el articulo no es suficiente para cada medio de cultivo,
utilizar el doble de articulos que se sefialan en la tabla 0381.3.
La prueba puede llevarse a cabo utilizando la tecnica de
£lltraci6n por membranas 0 por el metodo directo, sin
embargo, independientemente del metodo utilizado se deben
incluir controles negativos.
METODO DE FILTRACION POR MEMBRANA
El metoda de £lltraci6n por membrana se utiliza siempre que la
naturaleza del producto 10 permita, se aplica para productos
acuosos, con base alcoh6lica, oleosos, y solubles 0 miscibles
en solventes que previamente se demuestre que no poseen
actividad antimicrobiana bajo las condiciones de prueba.
Utilizar £lltros de membrana con un tamafio de poro nominal
no mayor a 0.45 micras, en los que la e£lcacia para retener a
los microorganismos ha sido establecida.
Seleccionar el tipo de membrana de acuerdo a la naturaleza
de la muestra, por ejemplo, las membranas de nitrato de
celulosa se usan para soluciones acuosas, oleosas y con bajo
contenido de alcohol; las membranas de acetato de celulosa
se usan para soluciones con alto contenido de alcohol. Para
determinados productos, como los antibi6ticos, puede ser
necesario usar membranas especiales.
La tecnica descrita supone el uso de membranas de 50 mm
de diametro. Si se utilizan de un diametro diferente, el
volumen de diluci6n y los lavados deben ajustarse.
Esterilizar las membranas y equipo de £lltraci6n utilizando
procesos de esterilizaci6n validados. Los equipos de £lltraci6n
estan disefiados para que la muestra de analisis se intro-
duzca, £lltre, extraiga la membrana en condiciones asepticas
y se trans£lera al medio de cultivo 0 para incubar despues de
afiadir el medio de cultivo.

Tabla 0381.1. Microorganismos de referencia para pruebas de promoci6n crecimiento

(aerobios, anaerobios y hongos) y adecuaci6n del metodo.

Numero de colecdon
Bacterias aero bias
Staphylococcus aureus ATCC 6538, CIP 4.83, NCTC 10788, NCIMB 9518, NBRC 13276
Bacillus subtilis ATCC 6633, CIP 52.62, NCIMB 8054, NBRC 3134
Pseudomonas aeruginosa 1 ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118, NBRC 13275
Bacterias Anaerobias
Clostridium sporogenei ATCC 19404, CIP 79.3, NCTC 532 0 ATCC 11437, NBRC 14293

Hongos
Candida albicans ATCC 10231, IP 48.72, NCPF 3179, NBRC 1594
Aspergillus brasiliensis (Aspergillus niger) ATCC 16404, IP 143l.83, IMI 149007, NBRC 9455

Nota: Los cultivos de los microorganismos, no deben tener mas de cinco pases a partir de la cepa original.
ATCC American Type Culture Collection
CIP Collection de 1 'Institut Pasteur
IMI Commonwealth Mycological Institute
NCIMB The National Collection of Industrial and Marine Bacteria Limited
NCPF National Collection of Pathogenic Fungi
NBRC Center Resource Biological
1 Microoganismo altemo Kocuria rhizophila (Micrococcus luteus) ATCC 9341.
2 Microrganismo altemo a Clostridium sporogenes, cuando se desea utilizar un microorganismo no esporulado: Bacteroides vulgatus

(ATCC 8482).

MGA 0381. ESTERILIDAD

 Metodos Generales de Analisis 369

Tabla 0381.2. Cantidad minima del producto para cada medio de cultivo.

Cantidad minima por envase para cada medio de cultivo a

Cantidad del producto por envase
menos se auto rice otra indicacion
Uquidos Menos de 1 mL Contenido total
De 1 a 40 rnL La mitad del contenido, pero no menos de 1 mL
De 41 rnL a menos de 100 mL 20 rnL
Mayor a 100 mL 10 % del contenido del envase, pero no menos de 20 mL
Antibi6ticos Hquidos 1 mL
Preparaciones solubles en agua 0 en Contenido total de cada envase para obtener no menos de 200 mg
miristato de isopropilo
Preparaciones insolubles, cremas y U sar el contenido de cada envase para obtener no menos de 200 mg
unglientos para suspender 0 emulsificar
S61idos Menos de 50 mg Contenido total
Mayor de 50 mg y menor de 300 mg La mitad del contenido, pero no menos de 50 mg
300 mg a 5 g 150 mg
500
Dispositivos medicos Catgut y otras suturas quirurgicas para uso 3 secciones de 30 ern de longitud de cada pieza
veterinario
Ropa quirurgica, algod6n y gasas (en 100 mg por paquete
paquetes)
Suturas y otros materiales envasados Material completo
individualmente
Otros dispositivos medicos Dispositivos completos (cortar 0 desensamblar)

Tabla 0381.3. Cantidad minima de articulos para la prueba en relaci6n con el tamano dellote.
Numero de articulos dellote* Numero minimo de muestras para cada medio de cultivo **
(envases 0 contenedores) (a menos que se justifique y auto rice otra indica cion)

Parenterales No mas de 100 10 % 0 4 envases, 10 que sea mayor

101 a 500 10
Mas de 500 2% 0 20 envases, 10 que sea menor
Soluciones de volumen 2% 0 10 envases, 10 sea menor
Antibi6ticos Paquetes < de 5 g 20
s6lidos Paquetes ~ de 5 g 6
Mezclas y graneles Vease productos S6lidos a granel
Oftalmicos y no No mas de 200 5% 0 2 envases, 10 que sea mayor
parenterales Mas de 200 10
Articulos envasados en dosis individual
aplicar el esquema de parenterales
Dispositivos Catgut y otras suturas quirurgicas de 2% 0 5 paquetes, 10 que sea mayor, hasta un maximo de 20 paquetes
medicos uso veterinario
No mas de 100 10 % 0 4 articulos, 10 que sea mayor
101 a 500 10 articulos
Mas de 500 2%0 10 sea menor
S6lidos a granel Rasta 4 Cada contenedor
5 a 50 20 % 0 4 contenedores, 10 que sea mayor
Mas de 50 2 % 0 10 contenedores, 10 que sea mayor

* Si el tamafio dellote no se conoce, usar el numero maximo sefialado.

** Si el contenido de un recipiente es suficiente para inocular los dos medios, esta columna proporciona el numero de envases necesarios
para ambos medios.

MGA 0381. ESTERILIDAD

370 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, undecima ecJici6n.
Soluciones acuosas. Si es necesario, adicionar a una
membrana colocada en el equipo de filtraci6n una pequefia
cantidad de Solucion de peptona al 0.1 % (vease Soluciones
diluyentes y de enjuague para el metodo de filtracion por
membrana), la cual puede contener sustancias neutralizantes
y/o inactivantes apropiadas.
Filtrar inmediatamente. Si el producto tiene propiedades
antimicrobianas, lavar la membrana no menos de tres veces
con el volumen del diluyente determinado en la prueba de
adecuaci6n del metodo. No exceder de cinco lavados, cada
uno de 100 mL, aim si en la prueba de adecuaci6n del
metodo se demuestra que tal cantidad no elimina completa-
mente la actividad antimicrobiana.
Transferir la membrana completa al medio de cultivo 0
cortar asepticamente en dos partes iguales y colocar cada
mitad en cada uno de los dos medios de cultivo. Usar
el mismo volumen de cada medio de cultivo que se us6 en la
Prueba de adecuacion del metodo. Altemativamente, pasar el
medio de cultivo sobre la membrana en el equipo de prueba.
Incubar en las condiciones establecidas, por 10 menos 14 dias.
Solidos solubles. U sar para cada medio no menos de la
cantidad del producto sefialada en las tablas 0381.2 y
tabla 0381.3, disolver con el solvente proporcionado en la
preparaci6n, agua esteril para inyecci6n, soluci6n salina
esteril u otra soluci6n esteril adecuada (vease Soluciones
diluyentes y de enjuague para el metodo de filtracion por
membrana) y proceder como se describe para Soluciones
Acuosas usando una membrana apropiada.
Aceites y soluciones oleosas. U sar para cada medio de
cultivo no menos de la cantidad de producto indicada en las
tablas 0381.2 y 0381.3. Los aceites y las soluciones oleosas
de baja viscosidad pueden filtrarse a traves de una
membrana seca sin diluir. Los aceites viscosos pueden
diluirse con una soluci6n esteril apropiada como el miristato
de isopropilo que previamente se haya demostrado que no
posee actividad antimicrobiana en las condiciones de la
prueba. Permitir que el aceite penetre en la membrana, filtrar
aplicando vacio gradualmente. Lavar la membrana por 10
menos tres veces, cada una con 100 mL de una soluci6n
esteril (vease Soluciones diluyentes y de enjuague para el
metodo de filtracion por membrana) adicionada de un agente
emulsionante apropiado como por ejemplo, polisorbato 80 a
una concentraci6n de 109 por litro que haya demostrado su
idoneidad en la prueba de adecuaci6n del metodo.
Transferir laCs) membrana(s) a los medios de cultivo 0
adicionar el medio de cultivo como se indica en Soluciones
acuosas. Incubar en las condiciones establecidas.
Cremas y ungiientos. U sar para cada medio de cultivo no
menos de la cantidad de producto indicada en las
tablas 0381.2 y 0381.3. Las emulsiones tipo agua en aceite y
los ungiientos en base grasa pueden diluirse al 1 % en
miristato de isopropilo como se describi6 anteriormente. Si
es necesario, calentar a no mas de 40°C, en casos
MGA 0381. ESTERILIDAD
excepcionales a no mas de 44°C. Filtrar tan rapido como sea
posible y proceder como se indica en Aceites y soluciones
oleosas. Incubar en las condiciones establecidas.
Solidos para inyeccion no antibioticos. Reconstituir los
productos de prueba de acuerdo a las instrucciones del
marbete y pro ceder como se indica en Soluciones acuosas 0
en Aceites y soluciones oleosas, segun aplique.
Nota: si es necesario, se puede adicionar un exceso del
diluyente para favorecer la reconstituci6n y filtraci6n de la
muestra. Incubar en las condiciones establecidas.
Antibioticos solidos para inyeccion (envases <5 g).
Seleccionar 20 envases del lote, tomar aproximadamente
300 mg de cada envase y disolverlos en 200 mL de la
Solucion de peptona al 0.1 % (vease Soluciones diluyentes y
de enjuague para el metodo de filtracion por membrana); 0
bien, reconstituir los 20 envases como se indica en el
marbete y transferir una cantidad de muestra equivalente
aproximadamente a 300 mg de s61ido y disolver en 200 mL
de la soluci6n seleccionada. Proceder como se indica en
Soluciones acuosas 0 en Aceites y soluciones oleosas, segun
corresponda.
Antibioticos solidos para inyeccion (envases ~ 5 g).
Seleccionar seis envases del lote, tomar aproximadamente
1 g de cada envase, transferirlo a 200 mL de la Solucion de
peptona al 0.1 %, y disolver; 0 bien, reconstituir los seis
envases como se indica en el marbete y transferir una
cantidad de muestra equivalente aproximadamente a 1 g de
s6lido y disolver en 200 mL de la soluci6n. Pro ceder como se
indica en Soluciones acuosas.
Antibioticos so.lidos, mezclas y graneles. Tomar aseptica-
mente la cantidad de muestra del numero de envases
indicados en la tabla 0381.2, mezclar para obtener un
compuesto equivalente aproximadamente a 6 g de s61idos,
transferir a un frasco esteril. Disolver en aproximadamente
200 mL de la soluci6n de peptona al 0.1 %. Proceder como
se indica en Soluciones acuosas.
Jeringas prellenadas. Para jeringas prellenadas sin agujas,
expulsar el contenido de cada jeringa en una 0 dos
membranas 0 en frascos separados antes de su transferencia.
Si se anexa la aguja esteril, expulsar directamente el contenido
de la jeringa como se estableci6 anteriormente y proceder como
se indica en Soluciones acuosas. Determinar la esterilidad de
la aguja con el metodo directo en las condiciones estable-
cidas durante la prueba de adecuaci6n del metodo.
Productos esteriles en aerosol. Congelar durante 1 h el
envase en una mezc1a de hielo seco-alcohol, a una tempe-
ratura igual 0 menor a -20 °e. Antes de abrir asepticamente
el envase, si es posible, permitir que se libere el propelente,
transferir la muestra a 100 mL de Solucion de peptona al
0.1 % con polisorbato 80 y mezclar suavemente. Proceder

como se indica en Soluciones acuosas 0 en Aceites y
soluciones oleosas, segun corresponda.
Dispositivos medicos cuyo interior se indica es esteril. Para
los equipos en los que unicamente la parte interior debe ser
esteril, pasar asepticamente no menos de 10 volumenes de
Solucion de peptona al 0.1 % con polisorbato 80 a traves
de cada dispositivo. Colectar la solucion en un envase esteril
y pro ceder como se indica en Soluciones acuosas 0 en
Aceites y soluciones oleosas, segun corresponda.
Jeringas vadas esteriles. A traves de la aguja esteril que se
anexa, llenar la jeringa con el diluyente seleccionado, 0 bien,
a traves de una aguja esteril exclusivamente para este
proposito, colectar el liquido en un frasco esteril. Proceder
como se indica en Soluciones acuosas 0 en aceites y
soluciones oleosas.
METODO DIRECTO
Procedimiento. A menos que se indique 10 contrario,
transferir directamente a los medios de cultivo, la cantidad
de muestra indicada en las tablas 0381.2 y 0381.3, de tal
forma que el volumen de la muestra no sea mayor del 10 %
del volumen del medio de cultivo. Incubar en las
condiciones establecidas por 10 menos durante 14 dias.
JLJ"'lI 'UL..... "'''' oleosos. Emplear medios de cultivo adicionados de
un agente emulsionante a la concentracion que durante la
prueba de adecuacion del metodo proporciono resultados
satisfactorios.
El volumen de cada medio de cultivo para estos productos
varia de 15 a 250 rnL, sin embargo dichos volumenes
pueden modificarse de acuerdo con los resultados obtenidos
en la prueba de adecuacion del metodo. Incubar en las
condiciones establecidas.
Cremas y ungiientos. Preparar una dilucion 1 en lOde la
muestra utilizando la solucion de peptona al 0.1 %
adicionada de un agente emulsionante apropiado, 0 bien, uti-
lizar la Solucion de peptona al 0.1 % con polisorbato 80.
Transferir la muestra diluida a los medios de cultivo sin
emulsionante. Incubar en las condiciones establecidas.
Durante el periodo de incubacion observar diariamente los
cultivos, agitar suavemente. La agitacion de los medios
de cultivo para deteccion de microorganismos anaerobios debe
reducirse al minimo con la finalidad de mantener las
condiciones anaerobicas.
El volumen de cada medio de cultivo sugerido varia de 15 a
250 mL, sin embargo dichos volumenes pueden modificarse
de acuerdo a los resultados obtenidos en la prueba de
adecuacion del metodo.
Solidos. Transferir la cantidad de muestra solida indicada en
las tablas 0381.2 y 0381.3 0 de la suspension del producto
preparada con su diluyente. Transferir a 200 rnL de medio
Metodos Generales de Analisis 371
liquido de tioglicolato y 200 mL de caldo soya tripticaseina
mezclar e incubar en las condiciones establecidas.
Suturas. Para cada medio de cultivo emplear la cantidad
indicada en las tablas 0381.2 y 0381.3. Usar tecnica aseptic a
para abrir el paquete y cortar tres secciones de 30 cm de
longitud de la sutura para cada medio de cultivo. Realizar la
prueba con las tres secciones, obtenidas del inicio, parte
media y final de la sutura. Transferir las secciones de la
sutura a cada medio de cultivo seleccionado, empleando
volumenes suficientes (20 a 150 mL) para cubrir el material
a ser analizado. Incubar en las condiciones establecidas.
Algodon, gas as, uniformes y articulos relacio-
nados. De la parte central de cada paquete de algodon, rollo
de gas a 0 uniformes quirurgicos, tomar asepticamente dos 0
mas porciones de 100 a 500 mg cada una. Para muestras
empacadas individualmente y materiales de un solo uso,
to mar asepticamente la pieza completa. Sumergir las
porciones del articulo en cada medio de cultivo (minimo
200 mL). Incubar en las condiciones establecidas.
Dispositivos esteriles. Los dispositivos pueden sumergirse
intactos 0 desensamblados. Para asegurar que todas las
partes del dispositivo se encuentran en contacto con el medio
de cultivo, sumergir un numero apropiado de unidades en un
volumen suficiente de medio de cultivo que las cubra
completamente.
Para dispositivos medicos de gran tamafio, sumergir en un
volumen suficiente de medio de cultivo aquellas porciones
del dispositivo que estaran en contacto con el paciente.
Cateteres. Para cateteres en los cuales la parte intern a y
externa deben ser esteriles, cortar en porciones pequefias de
tal forma que el medio de cultivo este completamente en
contacto con la parte interna del mismo, 0 bien, llenar la
parte interna del cateter con el medio de cultivo y sumergir
la unidad intacta en un volumen no mayor de 2 000 mL de
medio de cultivo. Incubar en las condiciones establecidas.
OBSERVACION E DE
RESULTADOS
Durante el periodo de incubacion y su termino observar si se
presenta 0 no crecimiento microbiano en los medios de
cultivo. Cuando el material de prueba enturbia el medio
de cultivo y la presencia de contaminacion no puede deter-
minarse por observacion visual, a los 14 dias de incubacion
transferir por 10 menos 1 mL del cultivo conteniendo la
muestra al mismo tipo de medio de cultivo. Continuar
la incubacion de todos los medios de cultivo (originales y
resiembras) por no menos de 4 dias.
Si no se observa crecimiento microbiano el producto cumple
los requisitos de la prueba de esterilidad.
Si se observa crecimiento microbiano el producto no cumple
con la prueba de esterilidad a menos que se demuestre
MGA 0381. ESTERILIDAD
372 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, undecima edici6n.
claramente la invalidez de la prueba por causas no relacio-
nadas con el producto en amilisis.
Las causas por las que una prueba de esterilidad se invalida
son las siguientes:
a) Los datos del control microbio16gico del area de pruebas
presenta resultados fuera de los limites establecidos.
b) La revisi6n del procedimiento de prueba revela fallas.
c) Los controles negativos muestran crecimiento
microbiano.
d) La identificaci6n del microorganismo aislado de la
prueba revela indiscutiblemente errores relacionados
con el personal, material y (0) la tecnica analitica.
Si la prueba se declara invalida, debe repetirse con el mismo
numero de unidades que la prueba original.
Si en la prueba de repetici6n, no se observa desarrollo
microbiano el producto cumple los requisitos de la prueba de
esterilidad.
Si se observa crecimiento microbiano en la prueba de repe-
tici6n, el producto no cumple con la prueba de esterilidad.
APLICACION DE LA PRUEBA DE ESTERILIDAD EN
PRODUCTOS PARENTERALES, OFTALMICOS Y
OTROS PRODUCTOS NO INYECTABLES QUE
REQUIEREN CUMPLIR CON ESTA PRUEBA
Cuando se use la tecnica de filtraci6n por membrana,
siempre que sea posible utilizar todo el contenido del envase,
pero no menos de la cantidad establecida en las tab las
0381.2 y 0381.3, diluir cuando sea necesario aproxima-
damente a 100 mL con una soluci6n esteril apropiada, como
la soluci6n de peptona al 0.1 %. Cuando se aplique el
metodo directo, usar la cantidad indicada en las
tablas 0381.2 y 0381.3, a menos que se justifique y autorice
10 contrario. Si el contenido de cada envase es insuficiente
para realizar la prueba, utilizar el contenido de dos 0 mas
recipientes para inocular los diferentes medios de cultivo.
0391. IDENTIFICACION Y
VALORACION DE ESTEROIDES
El esteroide por valorar se separa de los esteroides
contaminantes relacionados y de los excipientes por medio
de cromatografia en capa del gada MGA 0241, Y la determi-
naci6n se lleva a cabo despues de desarrollar el cromato-
grama.
Preparadon de la placa. Mezclar gradualmente 30 g de gel
de silice grado cromatografico con indicador de fluorescen-
cia (CD08), con 65 mL aproximadamente, de una mezcla de
agua:alcohol (5:2). Transferir la mezcla a una placa limpia
de 20 cm x 20 cm y extenderla uniformemente de manera
que quede una capa de 250 /-lm de espesor, secar a tempera-
tura ambiente durante 15 min.
MGA 0391. IDENTIFICACION Y VALORACION DE ESTEROIDES
Calentar la placa a 105°C durante 1 h y enfriar en el desecador.
Disolvente A. Cloruro de metileno: metanol (180:16 v/v).
Disolvente B. Cloroformo: acetona (4:1 v/v).
Preparadon de referenda. Pesar una porci6n adecuada de
la SRef especificada en la monografia respectiva, previa-
mente secada como se indica en la monografia individual y
disolver en una mezcla de volumenes iguales de cloroformo
y alcohol, hasta obtener una soluci6n que contenga
aproximadamente 2 mg/mL.
Preparadon de la muestra. Preparar segun se indica en la
monografia individual.
Procedimiento. Dividir la placa cromatografica en tres
secciones iguales, la de la izquierda y la de la derecha se
utilizan para la preparaci6n de la muestra y para la
preparaci6n de la soluci6n de referencia, respectivamente, y
la del centro para el blanco. Depositar en la placa, 200 /-lL de
la preparaci6n de la muestra y de la soluci6n de referencia a
una distancia de 2.5 cm del borde de la secci6n adecuada.
Secar con ayuda de una corriente de aire de las soluciones
aplicadas. Desarrollar el cromatograma en una camara
apropiada provista de tiras de papel filtro y previamente
saturada con el disolvente que se indique en la monografia
individual, hasta que el frente del disolvente haya recorrido
% partes desde la linea de aplicaci6n.
Retirar la placa, evaporar y localizar por medio de luz UV, la
banda principal correspondiente a la soluci6n de referencia.
Marcar esta banda y las correspondientes a la preparaci6n de
la muestra y al blanco.
Separar el gel de silice de las tres diferentes bandas. Retirar,
ya sea raspandola y recogiendola sobre un papel, puesto a
peso constante, de superficie lisa 0 por medio de vacio,
empleando un aditamento especial para recoger el material
raspado, el cual se pasa, respectivamente, a tres tubos de
centrifuga de 50 mL con tap6n esmerilado.
Depositar en cada uno de los tubos 25 mL de etanol y agitar
durante 2 min por 10 menos.
Centrifugar los tubos durante 5 min. Medir de cada uno
20 mL del liquido sobrenadante y pasar a matraces
Erlenmeyer de 50 mL.
Agregar 2 mL de una soluci6n que se prepara disolviendo
50 mg de azul de tetrazolio en 10 mL de metanol y mezclar.
Depositar en cada matraz 2 mL de una mezc1a de SR de
hidr6xido de tetrametilamonio:metanol (1:9 v/v); mezclar el
contenido y dejar reposar en la oscuridad durante 90 min.
Determinar la absorbancia de las preparaciones de la muestra
y de la preparaci6n de referencia a 525 nm, aproximada-
mente, en un espectrofot6metro adecuado, usar un blanco
para ajustar el aparato.
Calcular los resultados por medio de la f6rmula indicada en
cada monografia, en donde C es la concentraci6n,
en microgramos por mililitro, de la soluci6n de referencia, en
tanto que Am Y Aref son las absorbancias de la soluci6n de la
muestra y de la soluci6n de referencia, respectivamente.