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Pasta Dental utilizando papaína como ingrediente activo

Misión
Proveer productos de consumo de la más alta calidad y mejor costo, que satisfagan las
expectativas de nuestros clientes y consumidores, de tal manera que nuestra Compañía y
nuestro personal crezca y prospere.

Visión
Ser la mejor compañía de productos de consumo masivo en la República Mexicana.

Valores
Es una empresa preocupada por las personas, ya sean empleados de la empresa, clientes,
accionistas o socios de negocios. Nuestro compromiso es actuar con compasión, integridad
y honestidad en todo momento, escuchar respetuosamente a los demás y valorar las
diferencias. También estamos comprometidos a proteger el ambiente a nivel de estado y a
contribuir al mejoramiento de las comunidades
Control de calidad-
Justificar el Ph del producto
Aunque las soluciones de papaína tienen buena estabilidad a la temperatura, esta depende
del pH. En condiciones ácidas son inestables, es decir, a valores de pH por debajo de 2.8 hay
una pérdida significativa en la actividad.
La papaína es utilizada en la elaboración de la pasta dental en estudio debido a que actúa
directamente sobre los cúmulos de la placa proteica y bacteriana, sin alterar el esmalte
dental, garantizando un pH neutro, que no solo permite la acción de los componentes, sino
que además protege la hidroxiapatita del esmalte de una desmineralización provocada por
ambientes ácidos
Ingredientes

Carbonato de calcio 50 gramos

Glicerina 12.5 gramos

Carboximetilcelulosa 0.9 gramos

Sacarina 0.15 gramos

Nipagin 0.01

Laurisulfato de sodio 1 gramo

Agua destilada 90 ml

Papaya

Carboximetilcelulosa (CMC): Formula: C6H7O2(OR1)(OR2)(OR3)


Presentación: Polvo granulado o fibroso, blanco o ligeramente amarillento o grisáceo,
ligeramente higroscópico, inodoro e insípido.
Propiedades físicas y químicas
Punto de descomposición: 274 °C
Nº CAS: [9004-32-4]
Densidad: 0,7-0,9
Solubilidad: 20 mg/ml
Es similar a la celulosa, pero a diferencia de ella, es soluble en agua; se disuelve en azúcares
(sacarosa, fructosa).
Sacarina sódica: Nombre: Sal sódica del 1,1-dióxido 1,2-benziso-tiazolin-3-ona. Sinónimos:
Sacarina, sal sódica de sacarina Fórmula: C7H4NNaO3S 2 H2O (forma di hidratada),
C7H4NNaO3S 2/3 H2O (forma 6% hidratada)
Propiedades físicas y químicas.
Aspecto: Cristales o polvo blanco cristalino
Densidad aparente: 0,6 a 0,8 kg/L
Olor: Ninguno
Sabor: Intensamente dulce.
Solubilidades: Poco soluble en agua: 1000 g/l a 20ºC; 2540 g/l a 75ºC.
Soluble en soluciones básicas. Ligeramente soluble en etanol
pH (10% p/v, 20ºC): 6,0 a 7,5
Propiedades explosivas: No tiene propiedades explosivas Intervalo de fusión: 226 ºC a 230
ºC Inflamabilidad: No inflamable
Propiedades comburentes: No comburente

Lauril sulfato: El lauril sulfato sódico es un detergente aniónico que es efectivo tanto en
medio ácido como en medio básico y también en agua dura. Se usa en champúes y para la
limpieza de la piel. También se usa en la preparación de la Cera Emulsionante (alcohol
cetoestearílico + lauril sulfato sódico en proporción 9:1) con la cual se preparan emulsiones
aceite-en-agua añadiéndola sobre bases grasas o parafínicas.
Nipagin: El Nipagin inhibe el crecimiento de hongos, bacterias, levaduras y gérmenes. Se
usa como conservante en preparaciones farmacéuticas.
Polvo cristalino blanco, con ligero olor.
Es efectivo en un amplio rango de pH(4-8)
Puede usarse disolviéndolo directamente en el producto a preservar o en el agua utilizada
en la preparación. En cualquier caso, esta operación debe realizarse a elevada temperatura
y con fuerte agitación para que el Nipagin quede dispersado uniformemente en la
preparación.
Punto de fusión: 125-128°C
Solubilidad
Agua Muy poco soluble (1:400)
Alcohol Libremente soluble (1:3)
Éter Libremente soluble (1:10)
Carbonato de Sodio: Es una sal blanca y translúcida que es usada entre otras cosas en la
fabricación de jabón, vidrio y tintes. Se puede hallar en la naturaleza u obtenerse de forma
artificial.
Propiedades físicas y químicas:
Estado físico a 20°C: Polvo, granulos
Color: Blanco
Olor: Inodoro
Punto de fusión [°C] :851 °C
Punto de ebullición [°C] : Descomposición.
Presión de vapor, 20°C :N. A.
Densidad relativa al agua 2,54 g/cm3
Solubilidad en agua [% en peso] : 71 g/l a 0 °C / 471 g/l a 32 °C
Límites de explosión - Inferior [%] : N.A.
Límites de explosión - Superior [%] : N.A.
Peso molecular: 105.99 g/mol

Glicerina: Sustancia incolora, viscosa y de sabor dulce, que se obtiene de grasas y aceites
animales y vegetales; se emplea en la industria farmacéutica y cosmética, y para obtener
nitroglicerina.
Líquido incoloro, con olor ligero. Su punto de fusión es igual a 20 °C. Tiene una densidad
específica igual a 1.2613 g/mL a 20°C. Es soluble en agua y acetona. Tiene una presión de
vapor igual a 1.58x10-4 mm Hg a 25 °C y una constante de la ley de Henry igual a 1.73x10-8
atm m3/mol a 25 °C
Agua: El agua como compuesto está formada por dos átomos de hidrogeno y uno de
oxígeno, con la formula H2O.
El agua no tiene color, olor ni sabor. Al agua químicamente pura se le llama agua destilada,
y esta no tiene sustancias disueltas, es nada más que H2O.
El punto de ebullición del agua a nivel del mar es de 100°C, y su punto de congelación es de
0°C. La densidad máxima del agua líquida es 1 g/ml, alcanzándose este valor a una
temperatura de 4°C; la densidad del agua solida es menor a la del agua líquida 0.917g/ml.
Material y equipo
Mortero
Bascula analítica
Bascula manual
Probeta graduada
Vaso precipitado
Entorno
Humedad relativa: 60%
Temperatura: 25 ± 5°C
Método patrón

1. Colocar la glicerina en un vaso de precipitado de 100 ml y agregar poco a poco el


benzoilmetronidazol hasta completa humectación.
2. En un vaso de 250 ml colocar 50 ml de agua destilada y disolver la sacarosa
3. En un vaso de precipitado de 50 ml colocar 20 ml de agua destilada y calentar agregar la
Carboximetilcelulosa y la pectina, agitación hasta completa disolución
4. En una solución del paso 2 agregar poco a poco la mezcla de benzometronidazol y agitar
hasta su completa incorporación
5. Agregar la mezcla anterior la solución que contiene la pectina y la carboximeticelulosa,
agitar lentamente hasta completa incorporación
6. En 10 ml de agua destilada disolver benzoato de sodio y agregar a la mezcla principal
7. Agitar la suspensión y adicionar la esencia
8. Una vez incorporados todos los elementos, llevar el aforo con agua destilada
9. Agitar 5 minutos más

10. Una vez preparada la suspensión se coloca en un vaso de precipitado de 250 ml

11. Envasar en frascos adecuados para la conservación correcta del producto

Material
12 TUBOS DE ensayo
Dibasico de sodio, fosfato monobásico para solución buffer 0.1 M
Vasos de precipitado
Sal disódica y Cloruro de magnesio para solución edta 0.1 M
Matraz volumétrico
Ph metro
Agitador
Centrifuga
Extracción.- establecemos que lavextracción de papaína se realizará con un buffer ácido -el
más recomendado es el ácido cítrico / fosfato ácido de sodio- a una temperatura de trabajo
ambiente y además, se evitará prolongados contactos con el ambiente durante este paso.
Se utilizará como agente quelante al EDTA (ethylen-diamin-tetra-acid) en el buffer, pues es
así mismo el más recomendado por otros autores.
Purificación intermedia.- En este paso se logrará la precipitación del enzima mediante la
adición de etanol. Sin embargo, esta precipitación incluye las dos proteasas presentes en el
látex: papaína y quimopapaína.
Purificación final (Refinado).- Dado que el nivel de pureza requerido para nuestros
propósitos es por debajo del 90%, prescindiremos de esta fase.
Acerca de la extracción de la papaína:
En el siguiente protocolo se experimentarán diferentes cantidades de buffer fosfato ácido
de sodio-EDTA a una concentración 0.1N y pH 6.5 para la extracción de la papaína a partir
del látex de papaya, con el fin de hallar la cantidad óptima requerida para tal objetivo. Luego
purificaremos estos extractos en base a una cantidad constante de etanol 98° y se realizarán
algunos ensayos con diferentes cantidades del solvente. Los resultados de los distintos
pesos obtenidos determinarán la mejor de las extracciones y también el rango bajo el cual
tenemos que experimentar la cantidad óptima de etanol requerido para la purificación.
Protocolo N°1
1.- Disponer de 12 muestras de 500mg de látex cada una.
2.- Agregar x microL de buffer ácido cítrico / fosfato ácido de sodio / EDTA
0.1N, pH 6.5 a cada muestra. Agitar durante 5min.
3.- Centrifugar a 3000g durante 5min.
4.- Filtrar la muestra y separar el sobrenadante.
5.- Añadir al sobrenadante 5000microL de etanol 98° y agitar.
6.- Centrifugar a 3000g durante 5min.
7.- Desechar el sobrenadante y secar el precipitado.
Tiempo de secado = 18 horas a 35.5°C
8. Pesar el precipitado y re suspenderlo en 1000 microL de buffer de extracción.

Para determinar un rango apropiado de la cantidad de etanol necesaria para la purificación.


1.- Disponer de 8 muestras de 500mg de látex cada una.
2.- Agregar 3500 microL de buffer ácido cítrico - fosfato ácido de sodio -
EDTA 0.1N pH 6.5 a cada muestra. Agitar durante 10min.
3.- Centrifugar a 4000g (6000rpm) a una temperatura de 10°C durante
5min.
4.- Separar el sobrenadante y eliminar el precipitado.
5.- Añadir al sobrenadante y microL de etanol 98° y agitar.
6.- Centrifugar a 4000g (6000rpm) a una temperatura de 10°C durante
5min.
7.- Desechar el sobrenadante y secar el precipitado.
Tiempo de secado = 18 horas a 35.5°C
8.- Pesar el precipitado y re suspenderlo en 500 microL de buffer de extracción 0.1N.

EDTA al 0.1N
Pesar 3.72g de la sal disódica de EDTA y 0.1g de Cloruro de magnesio, disolver en el matraz
volumétrico de 100 ml y aforar.
Para determinar si se encuentra presente la enzima papaína.
Método colorimétrico.- Consiste en la hidrólisis del sustrato sintético BAPA (benzoil arginina
p-nitroanilina) hasta obtener el producto pnitroanilina que tiene coloración amarilla. El
cambio de color y su intensidad están en función de la actividad proteolítica del enzima. Los
digeridos se miden en un espectrofotómetro a 410nm. El tiempo de reacción es de 6 horas
a 25ºC. Este método dio resultados muy bajos y se recomienda esta técnica para un ensayo
con tripsina –enzima proteolítica- pues con éste enzima los resultados son más confiables.
Método titulométrico.- Esta técnica utiliza otro sustrato sintético: BAEE (N-benzoil-L-
arginina etil ester). Se titula con NaOH 0.015N, al producto de reacción a pH constante de
6.2 y temperatura de 25ºC. Este método permitió obtener resultados proporcionales a la
concentración de enzima así como un ajuste regresión lineal en la gráfica de calibración de
la actividad. Es exacto. Sin embargo, su costo es elevado.
Método de hidrólisis con caseína.- Se lleva a cabo una reacción con caseína y al final de la
misma se hace precipitar con ácido tricloroacético (TCA) 30%. Luego se realizan las lecturas
del sobrenadante formado en el espectrofotómetro a 280nm. Este método no permitió
obtener una curva aceptable salvo a bajas concentraciones.
Por otra parte, Enzyme Development Corporation publicó un reporte acerca de un método
de digestión de gelatina por acción proteolítica de la bromelaína; enzima obtenido de la
corteza de piña y semejante a la papaína. Este método se basa en la titulación con NaOH
0.1N del nitrógeno amino de la solución de gelatina digerida con bromelaína a 45ºC durante
20min.
Otro método, el cual es una alternativa del método que utiliza como sustrato a la caseína,
es el de la coagulación de la leche descremada; las proteínas precipitan en un tiempo
determinado de acuerdo a la concentración de enzima añadida. El tiempo de coagulación
es la variable sujeta de control. Es de naturaleza cualitativa.
En esta ocasión para determinar la actividad de la enzima se desarrollara una solución de
sustrato y un tipo de ensayo exploratorio donde se conocerá cuáles serán los rangos bajo
las cuales la enzima puede actuar.
1.-Preparación de las soluciones de enzima:
-Tomar x mlL de la solución de enzima (tubo madre) y completar en otro tubo de ensayo un
volumen de 300 microL (T#1). Tomar del T#1 un volumen de 150 mL y completar con buffer
hasta 300 microL (T#2). Así mismo, agregar del T#2 150 microL y completar 300microL (T#3).
Por último, tomar 180 microL del T#3 y completar hasta 300 microL con buffer.
2.- Preparar la solución de sustrato:
-Añadir 0.1gr de leche descremada en 10mL de agua; calentar hasta 40ºC.
-Disponer 800microL en 6 tubos de ensayo. Uno de los tubos corresponde a una muestra
testigo, sin adición de papaína.
3.-Añadir 150microL de solución enzimática a los tubos de reacción donde se encuentran la
solución de leche.
5.-Luego de la incubación, tomamos 60 L del sobrenadante formado y lo diluimos en
2000microL de agua desmineralizada.
6.-Tomar 60microL de cada una de las diluciones y depositar en las cubetas para la lectura
en el espectrofotómetro; las mismas deberán ser rotuladas de acuerdo a los tubos de
reacción.
7.-Llevar las cubetas al espectrofotómetro: ajustar la función para la lectura de absorbancia
de proteínas. Colocar una cubeta con agua destilada y ajustar la función blank (el
espectrofotómetro ajusta a absorbancia cero). Luego depositamos las demás cubetas y
ajustamos la función sample. Reportar los resultados obtenidos en la siguiente tabla.
Este esta parte nos servirá posteriormente para evaluar, mediante espectrofotometría, la
presencia del enzima en los lavados que se realice

https://www.redalyc.org/html/3374/337443854007/
Proceso
https://docplayer.es/20299771-Sustitucion-electrofilica-aromatica.html