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2.1 Objetivos
Comprender la función del medio de cultivo en el desarrollo y crecimiento de
microorganismos.
Identificar los diferentes componentes de los medios de cultivo.
Adoptar criterios de selección de un medio de cultivo, para un determinado
uso, a través del conocimiento de sus diferencias de composición.
Adquirir destreza en técnicas de laboratorio de microbiología: Preparación de
medios de cultivo y esterilización.
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Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales
Departamento de Química Industrial y Aplicada
Microbiología General y de los Alimentos
Según su composición:
Medio sintético o definido: Tiene una composición química definida cuali y
cuantitativamente.
Disolución de componentes:
Se limpia cuidadosamente el recipiente a utilizar y luego se enjuaga con agua destilada con
el fin de eliminar totalmente residuos.
Se pesan los componentes y se les agrega, para su disolución, agua destilada con pH 7. Se
agita para obtener una suspensión homogénea y luego se completa el volumen con el agua
restante, aprovechando para desprender e incorporar al conjunto, las partículas del medio
de cultivo que hubieran quedado adheridas a la pared interna del recipiente.
Los medios de cultivo que no contienen agar-agar se los disuelve en agua fría o bajo un
ligero calentamiento. Los que poseen agar-agar deben ser calentados a Baño María para
alcanzar la disolución completa del medio. No calentar más de lo necesario (recordar que en
mayor o en menor grado los medios de cultivo son sensibles al calor).
En el caso de medios de cultivo con base de agar y pH menor a 5, deben prepararse con
sumo cuidado, pues el agar se hidroliza al ser calentado en medio ácido y por tanto
disminuye la estabilidad del gel del medio de cultivo. Por lo que se tratará de no fundirlos
nuevamente. Ante una inevitable fundición, puede agregarse aproximadamente 5 g/L más
de agar.
Ajuste de pH:
Cuando se utiliza agua neutra para la preparación del medio, estos muestran el valor de pH
indicado para cada uno de ellos a la temperatura de trabajo. A pesar de todo, se recomienda
comprobarlo y si es necesario corregirlo. El pH depende de la composición del medio de
cultivo, la temperatura al instante de la medición y del tratamiento a que ha sido sometido.
La medición de pH se hace luego de la esterilización.
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Microbiología General y de los Alimentos
En los medios de cultivo sólidos y semisólidos la medición y corrección se realiza entre los
45 y 50 °C y en los medios líquidos se realiza a temperatura ambiente.
La corrección se logra por adición de solución 1N o 1/10 N de ácido clorhídrico o hidróxido
de sodio, esterilizado por filtración, a una muestra de medio de cultivo exactamente medida.
La cantidad de disolución correctora necesaria para la totalidad del producto preparado, se
calcula fácilmente a partir de la cantidad de solución correctora empleada para la muestra
del medio de cultivo.
Esterilización:
Antes de esterilizar es conveniente distribuir el medio en recipientes pequeños de vidrio, de
50 a 100 mL. Si las normas de preparación no indican lo contrario, se esteriliza en autoclave
a 121 °C durante 15 minutos.
Ágar Nutritivo
Se lo recomienda para aquellos microorganismos que no son demasiado exigentes.
Composición (g/L)
Extracto de carne 3,0
Peptona 5,0
Ágar-ágar 15,0
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Ágar Cetrimide
Para aislamiento y diferenciación de Pseudomona aeruginosa.
Composición (g/L)
Peptona de gelatina 20,0
Cloruro de magnesio 1,40
Sulfato de potasio 10,0
N-cetil-N,N,N, trimetila-moniobromuro (cetrimide) 0,3
Ágar-ágar 13,0
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Microbiología General y de los Alimentos
Composición (g/L)
Polipeptona 7,0
Glucosa 5,0
Fosfato de potasio 5,0
pH de medio a 37 ºC : 6,8-7,0
Se disuelven 17 g en 1 L de agua destilada. Se esteriliza en autoclave 15 minutos a 121 ºC.
Agua peptonada al 1%
Medio usado como diluyente y para enriquecimiento bacteriano a partir de alimentos y otros
materiales de interés sanitario.
Composición (g/L)
Peptona de carne 10,0
Cloruro de sodio 5,0
pH final 7,0-7,2
Suspender 15 g de polvo en 1 L de agua destilada. Mezclar bien y distribuir. Esterilizar en
autoclave a 121°C durante 15 minutos.
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Composición (g/L)
Triptosa 20,0
Lactosa 5,0
Cloruro de sodio 5,0
Lauril sulfato 0,1
Fosfato dipotásico 2,75
Fosfato monopotásico 2,75
pH del medio a 37 ºC : 6,8-0,2.
Suspender 35,6 g del polvo en 1 L de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar a
ebullición hasta la disolución total. Distribuir en tubos conteniendo tubos de fermentación.
Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121°C.
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EC-MUG
Medio selectivo utilizado para la detección de Escherichia coli en muestras de agua y
alimentos.
Composición (g/L)
Triptona 20,0
Lactosa 5,0
Sales biliares 1,5
di-fosfato de potasio 4,0
Mono-fosfato de potasio 1,5
Cloruro de sodio 5,0
4-metilumbelliferil- -D-glucurónido 0,05
pH a 25 ºC: 6,9 ± 0,2
Suspender 37 g de Caldo EC con MUG en 1 L de agua destilada. Mezclar bien para disolver
y distribuir en tubos de ensayo que contienen tubos de Durham invertidos. Esterilizar en
autoclave a 121 ° C durante 15 minutos.
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Agar Sabouraud
Composición (g/L)
Peptona especial 10,0
D (+) Glucosa 20,0
Ágar-ágar 17,0
pH previsto del medio: 5,5-5,7
Agar Czapek
Composición (g/L)
Nitrato de sodio 2,0
Cloruro de potasio 0,5
Sulfato de magnesio 0,5
Sulfato ferroso 0,01
Fosfato dipotásico 1,0
Sacarosa 30,0
Ágar-ágar 15,0
pH del medio 7,8
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Reactivos utilizados:
Solución fisiológica
Disolver 8,5 g de cloruro de sodio en 1 L de agua destilada. Esterilizar en autoclave durante
15 minutos a 121 ºC.
Reactivo de Kovacs
Composición (g/L)
p-dimetilaminobenzaldehido 5,0
Alcohol amílico o isoamílico 75,0
Ácido clorhídrico (conc.) 25,0
Solución 2:
Hidróxido de potasio 40 g
Agua destilada 100 mL
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