Laboratorio de Análisis Farmacéutico 01 (2023) 1-2

Químico
Laboratorio de Análisis Farmacéutico Farmacéutico
Biólogo

Práctica 3. Determinación de un principio activo en tabletas I

Chan, Astrid; Gamboa, Alejandra; Novelo, Litzy; Pech, Andrea; Puc, Jafet.

*Laboratorio de Docencia 1, Facultad de Química, Universidad Autónoma de Yucatán. Fecha: 2/10/2023

1. Introducción (3 pts)
Según la NOM-001-SSA1-93 un principio activo o 2. Materiales y métodos (7 pts)
fármaco es toda sustancia natural o sintética con alguna
actividad farmacológica, la cual se pueda identificar por sus Materiales
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propiedades físicas, químicas o acciones biológicas. ● Vaso de precipitado de 50 ml (4)
En esta práctica se busca la determinación del ● Vaso de precipitado de 20 ml (3)
principio activo de las tabletas del Naproxeno, esto mediante ● Vaso de precipitado de 5 ml (2)
sus características químicas por medio de la cromatografía ● Probeta de 10 ml (3)
líquida de alta resolución (HPLC). ● Pipeta graduada de 1 ml (3)
El HPLC es una técnica analítica que permite ● Matraz volumétrico de 10 ml (3)
separar mezclas complejas de sustancias de procedencia ● Embudo de vidrio (1)
diversa, con el propósito de identificarlas, cuantificarlas y ● Pipela beral graduada (1)
purificarlas; en el que participan dos fases (inmiscibles entre ● Espátula (1)
sí) y la muestra de interés; la cual consiste en una fase ● Mortero con pistilo (1)
estacionaria no polar (columna) y una fase móvil. La fase ● Perilla de seguridad (1)
estacionaria es octadecil silano o silica tratada y la fase ● Vidrio de reloj (1)
móvil, acetonitrilo-agua (50-50), que actúa de portador de la ● Jeringa de 3 ml (2)
muestra. La muestra en solución es inyectada en la fase ● Microespátula (1)
móvil y los componentes de la solución emigran de acuerdo ● Acrodisco (3)
a las interacciones no-covalentes de los compuestos con la ● Vial cromatográfico (2)
columna. Estas interacciones químicas, determinan la ● Punta para micropipeta (3)
2 ● Tijera (1)
separación de los contenidos en la muestra. El
● Pizeta (1)
cromatograma resultante muestra cada compuesto que sale
de la columna en forma de picos simétricos con un tiempo
I. Fase móvil
de retención característico por lo que este tiempo se emplea
para identificar el compuesto. Este tiempo de retención (t,)
Esta fase de acetonitrilo-agua fue preparada previamente por
se mide desde el momento de la inyección de Ia muestra
las doctoras de la asignatura.
hasta el momento en que aparece el máximo del pico en el
3
cromatograma. II. Mezcla de disolvente
El naproxeno es un analgésico, antipirético y
antiinflamatorio no esteroideo (AINE), de administración Se preparó una mezcla de acetonitrilo-agua (agua Mili Q
4
exclusivamente vía oral. Su nombre químico es ácido e-pure) en una proporción 90:10 (27 mL de acetonitrilo y 3
mL de agua) en un vaso de precipitado de 50 mL.
(S)-2-(6-metoxi-2-naftil) propanoico y tiene un peso
Posteriormente se filtró con ayuda de una jeringa adaptada a
molecular de 230.26 g/mol. Su solubilidad es variable según
un acrodisco. Se desgasificó el sistema de elusión por 3
su pH, pero en condiciones normales es soluble en alcohol,
minutos.
cloroformo y etanol; ligeramente soluble en éter dietílico y
casi insoluble en agua. Su temperatura de fusión es entre
5
III. Preparación de la solución de referencia
1564-158° C.
1
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Se prepararon 5 mL de la solución de sustancia de referencia
en mezcla de disolvente (previamente por las doctoras de la
asignatura), que contenía 1 mg/mL de Naproxeno.
Posteriormente se prepararon 10 mL de una dilución (a
partir de la solución anterior) que contenía 25 μg/mL de
Naproxeno en la mezcla de disolvente. Para esto se tomaron
250 μg (0.25 mL) de la solución de referencia y se aforó en
un matraz volumétrico de 10 mL con la mezcla de
disolvente.
1𝑚𝑔/𝑚𝐿 (5𝑚𝐿) = 5 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑁𝑎𝑝𝑟𝑜𝑥𝑒𝑛𝑜
Dilución de 25 μg/mL
1 𝑚𝑔/𝑚𝐿 = 1000 µ𝐿/ 𝑚𝐿
(25µ𝑔/𝑚𝐿)(10𝑚𝐿)
𝑉= 1000 µ𝑔/𝑚𝐿
𝑉 = 0.25mL
IV. Preparación de la solución de la muestra
Se pesaron 2 tabletas de Naproxeno y se trituraron en un
mortero hasta polvo fino. Se transfirió a un vaso de
precipitado una cantidad de polvo equivalente a 25 mg de
Naproxeno (equivalente a 30.4 mg de las tabletas trituradas
de Naproxeno y se agregó 1 mL de la mezcla de disolvente,
se agitó vigorosamente hasta su dispersión. Se filtró la
mezcla directamente en un matraz volumétrico de 10 mL
con ayuda de una jeringa adaptada a un acrodisco y se aforó
con la mezcla de disolvente. A partir de la solución anterior
se preparó una dilución de 10 mL que contuvo 25 μg/mL de
Naproxeno, es decir, se tomaron 0.1 mL y se aforó en un
matraz volumétrico.
cromatográfico y se marcó con los datos del equipo. Lo
mismo se hizo con la solución de la muestra. Posteriormente
se le entregó a la maestra para que sea analizada por HPLC.
3. Resultados y discusión (7 pts)
Después de que se analizó la muestra y la referencia, para la
determinación de un principio activo en tabletas se utilizó
una muestra de Naproxeno, se realizó un análisis,
empleando la Cromatografía de líquidos de alta resolución
(HPLC). En la HPLC se obtuvieron los resultados para la
identificación de la muestra mediante un cromatograma de
la muestra con naproxeno (imagen 1) y un cromatograma de
referencia (imagen 2).
Una vez teniendo los cromatogramas, se analizó los picos de
referencia, se obtuvieron los datos sobre el tiempo de
retención para el análisis del principio activo, por lo tanto se
determinó que para seleccionar el pico correspondiente al
analito, se seleccionó un valor de referencia del tR más
prolongado, este factor de retención en el Naproxeno se
eluyó primero el que tiene un tiempo de retención (tR) de
1.850 y un área de 12.324 mAU x min. Se comparó con el
cromatograma de la muestra y se seleccionó el pico más
cercano a este valor de (tR) en la referencia, que es el pico
marcado con un RT de 1.853 y un área de 0.788 mAU x
min.
El pico más alto fue de 1.853 m/z, por lo tanto, nos indica
que es el pico base del gráfico, mientras que el pico con
valor de 1.850 m/z corresponde al ión molecular del
Naproxeno.

Total de tabletas pesadas: 1.2192 g

Promedio: 0.6096 g = 609.6 mg.

Equivalencia a 25 mg de Naproxeno

(25𝑚𝑔)(609.6𝑚𝐿)
500 𝑚𝑔 𝑁𝑎𝑝𝑟𝑜𝑥𝑒𝑛𝑜
= 30. 4 𝑚𝑔

Dilución de 25 μg/mL
Imagen 1. Cromatograma de la muestra.
2. 5 𝑚𝑔/𝑚𝐿 = 2500 µ𝐿/ 𝑚𝐿

(25µ𝑔/𝑚𝐿)(10𝑚𝐿)
𝑉= 2500 µ𝑔/𝑚𝐿

𝑉 = 0.1mL

V. Cuantificación de la muestra problema

Para analizar la muestra, se tomó 1 mL aproximadamente de

la solución de referencia y se colocó en un vial

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Todos estos puntos pudieron afectar directa o indirectamente

el análisis del naproxeno por el equipo de HPLC.

4. Conclusiones (5 pts)
La Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia (HPLC) nos
permitió identificar el pico perteneciente del ión molecular
del Naproxeno por medio del cromatograma. Se concluye
que los resultados obtenidos por medio del HPLC del
principio activo de las tabletas de Naproxeno no son los
valores adecuados como se presentan en el marbete del
medicamento y esto puede ser resultado de las interferencias
del equipo o del material utilizado, por contaminación en
alguna de las disoluciones preparadas o por la diferencia de
excipientes que contienen las tabletas.
Imagen 2. Cromatograma de la solución de referencia.

Una vez que se obtuvo los resultados se realizó el cálculo 5. Referencias (3 pts)
para la determinación cuantitativa del naproxeno con la 1) NOM-001-SSA1-93. Que instituye el
fórmula: procedimientos por el cual se revisará, actualizará y
𝑝𝑝𝑚 𝑑e 𝑁𝑎𝑝𝑟𝑜xe𝑛𝑜 = 𝐷 × 𝐶 × 𝑅𝑚𝑝/𝑅𝑟e𝑓 editará la Farmacopea de los Estados Unidos
Mexicanos. 1994, junio 17.

Tabla 1. Resultados obtenidos

D (FD) C (g/ml) Rmp Rref

100 25 12,324 0,788

http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/001ssa
100 𝑥 25 µ𝑔/𝑚𝑙 𝑥 12.324 𝑚𝐴𝑈 𝑥 𝑚𝑖𝑛.
ppm de naproxeno = 0.788 𝑚𝐴𝑈 𝑥 𝑚𝑖𝑛. 13.html (accedido 02/10/2023).
2) Cromatografía líquido de alto rendimiento (HPLC)
Obteniendo un total de 39,098.98 ppm en los 30.4 mg de y cromatografía de gases (CG), [Internet].
naproxeno que se pesó, lo que sería igual a 500mg por cada https://bonga.unisimon.edu.co [citado el 02 de
tableta. octubre de 2023]. Disponible en:
https://bonga.unisimon.edu.co/bitstream/handle/20.
Los resultados obtenidos no son acorde con los datos de lo 500.12442/7985/Guía%20de%20Cromatografía%2
que está indicando en el marbete del medicamento, esto se 0liquida%20de%20alto%20rendimiento(HPLC)%2
puede adjudicar a que el principio activo que se encuentra en 0y%20Cromatografía%20de%20gases%20(CG).pd
la tableta contiene otros excipientes como Croscarmelosa f?sequence=1&isAllowed=y
4 3) SSA. Farmacopea de los Estados Unidos
sódica, Povidona, Óxido de hierro y Estearato de magnesio.
Mexicanos. Undécima edición. México 2014. pp.
Estos excipientes pueden interferir al momento de realizar el
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análisis del compuesto de interés obteniendo resultados
4) LABORATORIOS NORMON. Ficha Técnica del
como el reportado, por lo que se recomienda el uso de un
Naproxeno. Datos farmacéuticos y lista de
método de separación para el compuesto previo a su análisis
excipientes. [Internet]. [citado el 2 de octubre de
y poder garantizar una correcta cuantificación.
2023]. Disponible en:
cima.aemps.es/cima/pdfs/es/ft/68435/FT_68435.ht
Sin embargo, consideramos la posibilidad de que los
ml.pdf
resultados obtenidos pudieron presentar fallas dentro del
5) SSA. Farmacopea de los Estados Unidos
equipo de HPLC al momento de realizar el análisis, ya sea
Mexicanos. Undécima edición. México 2014. pp.
con la configuración de la inyección en el sistema o la
1205 y 1206.
columna utilizada. De igual forma, se considera la
posibilidad de interferencias debido a la reutilización de los
acrodiscos, pudiendo así afectar nuestra muestra y
contaminarla en el proceso. Igualmente, desconocemos si
los materiales utilizados para realizar la solución de
referencia estaban completamente libres de interferencias.