Química o Bioquímica I

Fecha, 24/10/2023

DETERMIANCIÓN DE CARBOHIDRATOS POR

COLORIMETRÍA
Kevin Bernardo Sandoval1, Jorge Mora Castillo2, Diego Alejandro Ríos Díaz3
1170049311, 1170047232, 1170047353
Programa de xxxxxxx, Facultad de xxxxxx,
Universidad de los Llanos
Vereda Barcelona, km 12 vía a Puerto López, Villavicencio 500017, Meta, Colombia.
1
kbsandoval@unillanos.edu.co, 2 jorge.mora@unillanos.edu.co,3 Diego.rios@unillanos.edu.co

Resumen- En esta práctica se desarrolló de manera experimental la determinación de carbohidratos por

colorimetría por medio de la implementación del equipo espectrofotómetro el cual tiene la capacidad de proyectar
un haz de luz monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por la muestra,
teniendo como objetivo dar información sobre la naturaleza de la muestra en diferentes concentraciones de la
glucosa al 0.2%. Para el desarrollo de la elaboración de la práctica se usó el reactivo orto-toluidina con la finalidad
de determinar la reacción de la glucosa donde a partir de esta se generó una condensación, formando grupos
aminas aromáticas. Por medio de cada uno de los datos se determinó la transmitancia, el porcentaje de
transmitancia y la concentración de la glucosa por medio de la ley de Lambert-Beer. Finalmente por medio de los
resultados se observó una variación de gran nivel en la absorbancia de la glucosa al igual que su longitud de
onda.

Palabras Clave- glucosa, colorimetría, absorbancia, carbohidratos.

I. INTRODUCCIÓN
Para entender mejor el presente informe definimos como sucede la absorción conocida como luz
monocromática formada por componentes de un solo color, tiene una única longitud de onda correspondiente
a cada color, es utilizada en cámaras monocromáticas, provee mejor visibilidad en ciertos aspectos y mediante
contrastes, ya que todos los colores opuestos se absorben.

Longitud de onda conocida como la distancia existente entre dos planos inmediatos de partículas del medio que
estén en el mismo estado de movimiento. Es igual, como en cualquier otro tipo de onda, a la velocidad de
propagación de la onda dividida por la frecuencia. Debemos tener en cuenta que vamos a mantener
constante la frecuencia, pero la velocidad va a depender del medio que esté atravesando en ese
momento, por lo que, al ser la velocidad muy variable en tejidos orgánicos, la longitud de onda también lo será.

Espectro electromagnético distribución energética del conjunto de ondas electromagnéticas, referido a un

objeto se denomina espectro electromagnético a la radiación electromagnética que emite o absorbe una
sustancia, dicha radiación sirve para identificar la sustancia de manera análoga a una huella dactilar. Los
espectros se pueden observar mediante espectroscopios que, además de permitir ver el espectro, permiten
realizar medidas sobre el mismo, como son la longitud de onda, la frecuencia y la intensidad de la
radiación. (Ordoñez, 2012)

En el espectro de absorción la representación gráfica trabajada que indica la cantidad de luz absorbida (ε) a
diferentes valores de λ. A partir de una solución diluida de un compuesto, cuya absorbancia máxima entra
dentro del rango de medida del espectrofotómetro, se verá el valor de absorbancia a diferentes longitudes de
onda frente a un blanco que contenga el disolvente de la solución de la muestra a caracterizar. A partir del
espectro de absorción se obtendrá el valor de λ al que el compuesto presenta la mayor absorbancia (λmax).
Dicho λ se utilizará a la hora de hacer determinaciones cualitativas y cuantitativas del compuesto. El espectro
de absorción de un cromóforo depende, fundamentalmente, de la estructura química de la molécula. (Díaz,
2010)

Para la realización de cálculos y base del informe se empleo la ley de Beer es la ley expresa la relación
entre absorbancia de luz monocromática (de longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en solución:

1
 A=log I /Io=ε·c·l
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración -a mayor número de moléculas
mayor interacción de la luz con ellas- ;también depende de la distancia que recorre la luz por la solución -a igual
concentración, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará-; y por último,
depende de ε, una constante de proporcionalidad -denominada coeficiente de extinción- que es específica
de cada cromóforo. Como A es adimensional, las dimensiones de ε dependen de las de c y l. La segunda
magnitud (l)se expresa siempre en cm mientras que la primera (c)se hace, siempre que sea posible, en M, con lo
que las dimensiones de ε resultan ser M-1·cm-1. Este coeficiente así expresado, en términos de unidades de
concentración molar (o un submúltiplo apropiado), se denomina coeficiente de extinción molar (εM). Cuando,
por desconocerse el peso molecular del soluto, la concentración de la disolución se expresa en otras unidades
distintas de M, por ejemplo g·L-1, las dimensiones de ε resultan ser distintas, por ejemplo g- 1·L·cm-1, y al
coeficiente así expresado se denomina coeficiente de extinción específico (εs). La ley de Lambert-Beer se
cumple para soluciones diluidas; para valores de c altos, ε varía con la concentración, debido a fenómenos de
dispersión de la luz, agregación de moléculas, cambios del medio, etc. (Díaz, 2010)

II. RESULTADOS DE INVESTIGACIÓN Y ANÁLISIS

Primeramente se utilizó el método conocido como la determinación de glucosa por colorimetría con o-
toluidina para la formación de glucosamina coloreada donde se determinó cuantitativamente por su
colorimetría, posteriormente se realizó las soluciones necesarias que se muestran a continuación

Figura 1. La coloración de la glucosa posterior al baño Figura 2. La coloración de la glucosa posterior al baño
maría de izquierda a derecha tubo B’, 1’ ,2’ y 3’ maría de izquierda a derecha tubo 4’, 5’ y M’
respectivamente. respectivamente

Tabla 1. La transmitancia y el porcentaje de transmitancia

con su longitud de onda con mayor absorbancia resaltada
LONGITUD %T T A
DE ONDA
550 73,961 0,7 0,131
40
570 70,146 0,701 0,154

590 62,806 0,628 0,202

610 55,976 0,560 0,253

630 53,333 0,533 0,273

2
 650 57,016 0,570 0,244

670 71,016 0,713 0,147

690 86896 0,869 0,061

710 95,280 0,953 0,021

A A
(1) T =1/10 %T =1 /10 x 100 Ec.
Donde: T = transmitancia, A = absorbancia y %T = Porcentaje de transmitancia

Datos para la tabla 1:

Para longitud de onda 550; T =1/100,131=0,7396 %T =0,7396 x 100=73,961

Así sucesivamente con cada longitud de onda para la muestra en del tubo 3 respaldando en la tabla 3
el valor con mayor absorbancia representada por 630 nm. La transmitancia es la luz transmitida respecto a
la luz incidente por la celda dada por el espectrofotómetro típico.

Gráfica 1. Absorbancia respecto a la longitud de onda estudiada,

resalta el punto rojo como el valor mayor de absorbancia.

Tabla 2. Concentración de glucosa de cada tubo.

TUBO C. GLUCOSA % (mg/ml) TUBO C. GLUCOSA % (mg/ml)

B 0 B’ 0

1 0,004 1’ 0,0008

2 0,008 2’ 0,0016

3 0,012 3’ 0,0024

4 0,016 4’ 0,0032

5 0,02 5’ 0,004

M 0 M’ 0

(2) [ ]1 V 1=[ ]2 V 2 [ ]2=V 1 [ ]1 /V 2 Ec.

Donde: [ ] = Concentración V = Volumen

La anterior ecuación se utiliza para hallar las concentraciones de glucosa en cada uno de los tubos desde el
B al M para los tubos prima se realiza multiplicando la concentración hallada multiplicándose por 1/5 esto
se debe a que se mide un1 ml de cada tubo a los tubos prima.

Datos para la tabla 2:

3
Tubo 1 : [ 0 ,2 ]1 ( 0 ,1 ml )1=[ ]2 ( 5 ml )2 '
Tubo 1 :0,0044 x 1/5=0,0008
: [ 0 , 2 ] 1 ( 0 , 1 ml )1 / ( 5 ml )2 [ ]2 [ 0 , 004 % ] 1 ( 1 ml )1=[ ]2 ( 5 )2
[ 0 , 004 % ] 1 ( 1 ml )1 / ( 5 ml )2 []2
0,004 %=[ ]2 0 , 00 08 %=[]2
Así para todos los tubos hasta completar la tabla 4para encontrar su concentración de glucosa % mg/ml por
medio de la ecuación 2.

Tabla 3. Concentración de glucosas de los tubos primas y su

absorbancia (A) a una longitud de onda de 630 nm.
TUBOS C. GLUCOSA % (mg/ml) A

B’ 0 0
1' 0,0008 0,124

2’ 0,0016 0,213

3’ 0,0024 0,273

4’ 0,0032 0,408

5’ 0,004 0,501

M’ X 0,276

Gráfica 2. Absorbancia de las muestras primas con

respecto a la concentración de glucosa.

Para hallar la muestra problema M´ con la ecuación de la gráfica 2 esta recta se escribe de la forma y = mx +b o y
= 122,04x + 0,0091 se le llama la forma pendiente-intersección de la ecuación. Donde m es la pendiente de la
recta

Datos para la incógnita x de la tabla 3:

Y = 0,276 la concentración de glucosa del tubo M’

Y =122 , 04 X +0,0091
Y −0,0091/122, 04=X
X =122 ,04 /0,0091−0,276
X =122 ,04 /0,2669
X =0,002186 %
A continuación con los datos obtenidos anteriormente, procedemos a hallar la concentración en el tubo M con la
ecuación 2.

4
Datos para hallar la concentración de glucosa Procedemos hallar la concentración de nuestra
del tubo M: muestra problema:
[ ]1 V 1=[ ]2 V 2 [ ]2=V 1 [ ]1 /V 2 (2) [ ]1 V 1=[ ]2 V 2 [ ]2=V 1 [ ]1 /V 2 (2)

[ ]1 ( 1 ml )1 =[ 0,002186 % ]2 ( 5 ml )2 [ 0,01039 % ]1 ( 5 ml )1=[ ]2 ( 0 , 3 ml )2

[ ]1=( 5 ml )1 [ 0,002186 % ]1 / ( 1 ml )2 [ ]2=( 5 ml )1 [ 0,01039 % ]1 / ( 0 , 3 ml )2
[ ]1=0,01039 % [ ]2=0,1731 %
Por tanto la concentración de glucosa que se encuentra en la muestra problema es de 0,1731%.

La colorimetría es una técnica frecuentemente utilizada por los laboratorios de Bioquímica, con ella podemos
determinar la información cualitativa y cuantitativa de una sustancia que se encuentra en disolución, esto se
basa en utilizar la transmisión de la luz por medio de una solución para así determinar la concentración de un
soluto dentro de la solución, la luz de una determinada longitud de onda pasa a través de una muestra a partir de
esto se mide la cantidad de luz que es transmitida.(Pinzon,2017)

La fracción de luz incidente absorbida por una solución a una longitud de onda está relacionada con el paso
óptico y con la concentración de la especie absorbente. La absorbancia nos sirve más que la transmitancia, ya
que la absorbancia aumenta con la concentración creciente del colorante y la transmitancia decrece cuando se
aumenta la cantidad de colorante rojo. La relación de la absorbancia con la concentración es lineal, por esto se
parte de una medición de una sustancia la cual no contenga colorante (sin absorbancia) = 0 implementando
la Ley de Beer:

¿ε

Existen distintos métodos para realiza la cuantificación por medio de espectrofotometría Métodos basados
en el poder reductor de los carbohidratos (método de la o-toluidina) y métodos enzimáticos, los cuales
utilizan las enzimas como reactivos para tener más especificidad. (Espinoza,2005)

En nuestra práctica utilizamos el método de la o-toluidina en el cual se presenta una reacción de

condensación de la glucosa y aminas aromáticas primarias en un medio de ácido glacial.

Imagen 1. Reacción de o-toluidina en las soluciones de laboratorio para la glucosa

III. CONCLUSIONES

Logramos conocer diferentes técnicas para la determinación de los carbohidratos por colorimetría, así mismo
conociendo este método a fondo, para así determinar la concentración de nuestra muestra problema por medio
de la glucosa.
Se pudo determinar la concentración %m/v de la muestra problema, gracias a los datos de absorbancia
registrados con ayuda del espectrofotómetro y gracias a las concentraciones halladas para las otras 5
muestras.

De igual forma se pudo comprender cómo se realizan las mediciones de composición de la glucosa y la
muestra problema por medio del espectrofotómetro obtuvimos los valores de absorbancia y de ahí se
pudieron hacer los respectivos cálculos donde se logró encontrar las concentraciones de cada una de las
muestras trabajadas.

5
 REFERENCIAS
[1] https://cuidateplus.marca.com/alimentacion/diccionario/carbohidratos.html.

[2] Abelardo. Fernández. Recuperado https://es.slideshare.net/AbelardoFernndez1/presentacin11-85150529.

[3] Bonner, William A.; Castro, Albert J. (1974). «12». Química orgánica básica (3ª edición). Madrid: Alhambra S.A.

[4] Bioquímica de Harper, Murray, manual moderno, 16ed, 2004, México

[5] Libro multimedia de Bioquímica. Santiago Valbuena, solubilidad de proteínas, Ed universidad de los Llanos, 2010.

[6] Díaz, N. A. (2010). Espectrometría: Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de las biomoléculas. Departamento de
Bioquímica y Biología molecular.

[7] Bioquímica de Harper, Murray, manual moderno, 16ed, 2004, México

[8] Libro multimedia de Bioquímica. Santiago Valbuena, solubilidad de proteínas, Ed universidad de los Llanos, 2010.

. [9] Espinoza, M. P. (2005). Preparación y evaluación de un equipo de reactivos para la determinación de glucosa. Bioquímica, Vol 3.
Asociación Mexicana de Bioquímica, AC.

[10] Ordoñez, J. L. (2012). Espectro electromagnético y espectro radioeléctrico. ACEA

[11].Pinzón García, Ana Delia, Sandoval Hernández, Adrián Gabriel, & Rivera Diaz, Paola Andrea, & Gómez Camargo, Doris Esther, &
Gómez Alegría, Claudio Jaime (2017). Determinación colorimétrica de glucosa y consumo de glucosa en cultivos de células
adiposas 3T3-L1. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana, 51 (2), 195-202. [Fecha de Consulta 9 de abril de 2021]. ISSN: 0325-
2957.Disponible en:https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=535525080 04