ESPECTROFOTOMETRÍA

Bueno Vivas Angie Marcela-1827099, Muñoz Urbano Mayra Alejandra-1833301,

Reyes Guacaneme Kelly Johanna-1832293.

RESUMEN

La espectrofotometría es un método químico que se utiliza para determinar concentraciones de

soluciones que contienen compuestos coloreados a través de la absorbancia de luz visible del
espectro electromagnético. En la primera parte de la práctica se determinaron los espectros de
absorbancia, por medio del espectrofotómetro, de 5 soluciones coloreadas diferentes: azul de
bromotimol- amortiguador de pH 7,5, azul de bromotimol- medio ácido, rojo congo- permanganato
de potasio, y una última que corresponde a la mezcla de la primera y tercera solución, el cual arrojó
resultados de 0,410 , 0,200 , 0,414, 0,180, 0,858 respectivamente, encontrando a su vez la longitud
de onda máxima de absorción (610, 430, 490, 550, 610 nm). Posteriormente, en el segundo
procedimiento se comprobó la ley de Beer-Lambert al realizar mediciones de absorbancia de la
solución rojo congo a diferentes concentraciones, construir un gráfico de concentración vs
absorbancia y demostrar su tendencia lineal, también se pudo conocer la concentración de una
solución problema al medir su absorbancia y encontrar este valor con ayuda de la ecuación de la
recta encontrada anteriormente en el gráfico dando como resultado 22,77 g/mL.

Palabras clave: espectrofotómetro, concentración, absorbancia, longitud de onda, Ley de

Beer-Lambert..
INTRODUCCIÓN

Una onda es una alteración vibracional mediante la cual se transmite energía, sus propiedades
básicas son: longitud, que se define como la distancia entre dos puntos iguales de ondas sucesivas,
medida comúnmente en nanómetros (nm); la frecuencia, que cuantifica las ondas que pasan en un
segundo por un punto particular; y la amplitud, que es la distancia vertical de la línea media de una
onda hasta su cresta o valle, así pues, existen muchos tipos de ondas, como las del agua, del sonido,
etc (Chang & Goldsby). Las ondas electromagnéticas, son aquellas que tienen un componente de
campo eléctrico y un componente magnético, que se emiten y transmiten conformando la distintas
radiaciones electromagnéticas, estas se pueden distribuir entre sí debido a las diferencias de
frecuencia y longitud de onda que se ordenan formando un conjunto llamado espectro
electromagnético, dentro de las cuales se encuentran algunas como: las ondas largas de radio,
microondas, las ondas de luz visible (perceptible al ojo humano a través del color), etc.(Chang &
Goldsby). A partir de esto, los químicos estudian cómo las diferentes formas de radiación
electromagnética interactúa con los átomos y moléculas, ya que estos pueden absorber energía a
través de fotones creando su propio espectro característico llamado espectro de absorción o emitir
energía radiante, empleando técnicas conocidas como la espectroscopía que utiliza varias
frecuencias de onda y se clasifica dependiendo del espectro de radiación que utilice, por lo tanto, la
espectroscopia rotacional es provocada por cambios en la energía de rotación de las moléculas y
corresponden a frecuencias de radiación dentro de la región de microondas; la espectroscopia
vibracional es producto de la interacción de la radiación y los modos de vibración de las moléculas
o cristales, respondiendo a frecuencias de la región infrarroja; la espectroscopía UV/VIS es debido a
cambios de energía como consecuencia de los estados electrónicos de los sistemas y a frecuencias
de la región visible y ultravioleta; y por último la espectrofotometría, que fue el método utilizado
en esta experimentación, utilizando frecuencias de la zona ultravioleta y luz visible del espectro
para determinar concentraciones de soluciones en compuestos coloreados.(Alabella, J).

La espectrofotometría de absorción, es posiblemente la más utilizada en la práctica del análisis

cuantitativo de todas las técnicas espectroscópicas, se basa en la medida de la radiación que llega a
1
un detector tras producirse un fenómeno de absorción de luz por parte de una sustancia o analito,
dicho detector se denomina espectrofotómetro y emplea prismas o redes de difracción, esto es usado
para determinar concentraciones de soluciones que contienen compuestos coloreados , cuando un
haz de luz incide sobre una cubeta que contiene una solución de este estilo, ésta absorberá luz de
una determinada longitud de onda y el haz de luz que sale después tendrá una intensidad menor, la
diferencia entre ambas es denominado transmitancia. (Silva, C. & García M.). La absorbancia de
una solución se mide del 0 al 1, donde 0 significa que la luz pasa totalmente a través de la solución
y 1 que no pasa luz a través de ella, cabe destacar que los compuestos coloreados absorben de
manera selectiva determinados intervalos de la región visible y que el color que vemos corresponde
al complementario de la zona espectral absorbida. (Silva, C. & García M.) , esto se puede relacionar
con la concentración de la solución empleada (analito) por medio de la ley de Beer-Lambert la cual
indica que la absorbancia de una sustancia depende directamente de la concentración de la misma,
es decir, que hay una relación lineal entre estas dos variables; dicha ley se puede resumir mediante
la siguiente ecuación:
A=εbc
Ecuación 1. Ley de Beer-Lambert

donde A corresponde a la absorbancia de luz de la sustancia, c indica la concentración (mg/L) de la

sustancia en la disolución, b es la longitud del camino óptico (cm), es decir, el ancho de la celda que
contiene la disolución, y ε es la absortividad molar (L mol-1 cm-1), propiedad característica de cada
sustancia correspondiente a la cantidad de radiación que absorbe a una longitud de onda
determinada por unidad de concentración (Harris, D. 2007).

MATERIALES Y MÉTODOS

Se determinaron los espectros de absorción de cinco soluciones diferentes (la última una mezcla de
dos de estas) cada una preparada en su respectivo tubo de ensayo y transferida al tubo de ensayo del
espectrofotómetro , se midió la absorbancia cada 30 nm, desde 400 hasta 700 nm, calibrando el
espectrofotómetro en cada ensayo con un blanco de agua destilada al 100% de transmitancia. La
primera solución se preparó con 1 mL de azul de bromotimol (100 mg/L), 1 mL de amortiguador de
fosfatos de pH 7.5 más 8 mL de agua destilada , la segunda solución con azul de bromotimol (100
mg/L) en medio ácido más 9 mL de agua destilada y 1 gota de ácido acético (5%), para la tercera y
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cuarta solución se empleó rojo congo (100 mg/L) y permanganato de potasio (100 mg/L)
respectivamente, agregando las mismas cantidades exceptuando la adición de ácido acético.
Finalmente en un tubo de ensayo se realizó una mezcla de 2 ml de azul de bromotimol (100 mg/l), 1
ml de amortiguador de fosfatos de pH 7.5 más 1 ml de la solución de rojo congo (100 mg/l) y 6.0
ml de agua destilada. Cada grupo de laboratorio realizó el ensayo con una sustancia.
Para la comprobación de la ley de Beer-Lambert se realizaron 7 diluciones de la solución original
de rojo congo (2,5 mg/L, 5 mg/L, 10 mg/L, 15 mg/L,20 mg/L,30mg/L,40 mg/L ), se programó el
espectrofotómetro con la longitud de onda máxima de absorbancia de la solución de rojo congo
obtenida en el primer procedimiento por uno de los grupos, se calibró con un blanco con 10 mL de
agua destilada y se midió la absorbancia de las soluciones a diferentes concentraciones.

RESULTADOS

Tabla 1. Espectros de absorción de las soluciones empleadas.1. Azul de bromotimol pH 7.5. 2.

Azul de bromotimol en medio ácido. 3. Rojo congo. 4. Permanganato de potasio. 5. mezcla: azul
de bromotimol pH 7.5 más rojo congo.
Longitud de Absorción de soluciones
onda (nm)
1 2 3 4 5

400 0,114 0,166 0,152 0,057 0,542

430 0,072 0,200* 0,208 0,046 0,392

460 0,050 0,168 0,293 0,048 0,449

490 0,064 0,090 0,414 0,100 0,580

520 0,110 0,038 0,388 0,176 0,604

550 0,183 0,013 0,216 0,180 0,596

580 0,296 0,006 0,066 0,066 0,675

610 0,410 0,005 0,008 0,019 0,858

640 0,308 0,002 0,006 0,012 0,655

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 670 0,088 0,004 0,004 0,008 0,177

700 0,014 0,003 0,000 0,002 0,022

*Los valores de longitud de onda máxima absorción de cada solución están

indicados por la absorbancia de dicho punto subrayados.

Figura 1. Gráficas de Absorbancia vs Longitud de onda (nm) de los espectros de absorción de las
respectivas soluciones.

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Tabla 2. Absorbancia de la sustancia rojo congo a diferentes concentraciones.

Tubo N° Concentración Porcentaje de Absorbancia

(mg/litro) transmitancia
(%)

1 2,5 73,8 0,132

2 5 60,8 0,216

3 10 39,5 0,405

4 15 25,0 0,602

5 20 16,0 0,795

6 30 7,2 1,145

7 40 5 1,303

Problema 22,76 14,8 0,829

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Figura 2. Gráfico de concentración vs absorbancia de disoluciones de rojo congo.

DISCUSIÓN
La absorbancia de una sustancia a diferentes longitudes de onda constituyen el espectro de
absorción de esta y su gráfica ilustra el o los picos de absorbancia máxima que indican hasta qué
longitud de onda la sustancia absorbe radiación electromagnética ( que es incidida por un haz de luz
sobre la sustancia) . En el espectro electromagnético la región visible al ojo humano abarca
longitudes de onda desde 400 nm hasta 700 nm, y comprenden una amplia gama de colores, pero es
una región mínima comparada con otras regiones del espectro como la infrarroja y ultravioleta
(Arenas & López 2004).Cuando se hace incidir un haz de luz emitida en forma de radiación
electromagnética sobre un objeto (disolución, gas) , según la sustancia esta absorbe solo cierta
cantidad de luz correspondiente a una región del espectro electromagnético, y la que no es
absorbida, es decir que atraviesa la solución, es transmitida (expresada por la transmitancia %) y
esta es la responsable del color que capta el ojo humano, los objetos que se perciben de color negro
absorben todas las longitudes de onda y las blancas emiten todas las longitudes de onda
En las disoluciones que se emplean en estos análisis, las muestras suelen tener colores
característicos que les otorga un o unos se los átomos que las conforman, por ejemplo una
disolución de sulfato de cobre es azul debido al cobre, estos colores se pueden ver afectados por
otros aspectos, como el pH. En el caso de la sustancia rojo congo su valor de longitud de onda de
máxima absorbancia fue de 490 nm, se puede apreciar que esta longitud de onda corresponde a
colores azules-verdes por lo cual su color complementario es el naranja-rojo y es que el se percibe ,

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al igual que para la solución de permanganato de potasio cuyo color característico es púrpura (este
puede variar de acuerdo a su concentración hasta color rosa), la longitud de onda de máxima
absorción de este fue de 550 nm que corresponde a colores complementarios como el amarillo o el
verde (Skoog & Holler 1997).

Para la interpretación del espectro de absorción de las tres soluciones restantes a las cuales se les
adicionaron otras sustancias,se han de considerar otros aspectos. Para las soluciones de azul de
bromotimol más la adición de amortiguador de pH 7.5 (es un medio básico, su color cambia a azul
respecto a la solución original de color amarillo claro), la longitud de onda de máxima que absorbe
la solución es aproximadamente 610 nm cuyo rango de colores son entre naranja-rojo porque lo que
la solución se emite el color complementario, azul; para el azul de bromotimol en medio ácido
(color amarillo claro) cuyo pico de absorción fue de 430 nm este concuerda según el espectro
electromagnético, con colores azules por lo que emite radiación cuyo color es el complementario,
amarillo, esto explica que las gráficas de ambas soluciones difieran en gran magnitud en cuanto a su
pico de absorción, siendo estas inversas.Para el último procedimiento del espectro de absorción de
la mezcla en la que hay dos especies absorbentes se debe de considerar que según la Ley de Beer
para mezclas las absorbancias son aditivas, trabajando bajo el supuesto de que estas no interactúan
entre sí (Skoog & Holler 1997), los valores de absorbancia de las dos soluciones de estas mezclas
fue de 0,410 y 0,414, en total 0,824 que es un valor próximo al valor de absorbancia máxima de la
mezcla, 0,858 a una longitud de onda de 610 nm al igual que la solución del azul de bromotimol
básico.

En el segundo procedimiento se realizó la comprobación de la ley de Beer-Lambert mediante el

análisis de la variación de la absorción con respecto a la concentración de la solución de rojo congo
y a su vez se halló la concentración de una solución problema de la misma sustancia. Así pues, se
encontró previamente el espectro de absorción del rojo congo, y en este se seleccionó el valor de la
longitud de onda donde hubo una absorbancia mayor, el cual fue de 490 nm; con este valor se
calcularon los valores de absorbancia que tuvieron 8 disoluciones con diferentes concentraciones de
rojo congo (entre ellos la solución problema), los cuales se pueden observar en la tabla 2.
Posteriormente se realizó una curva de calibración con los datos de absorbancia y concentración
hallados anteriormente, en la gráfica _ se pudo observar una tendencia lineal positiva de los datos,
principalmente en concentraciones bajas, lo cual indicó que se cumplió la ley de Beer-Lambert.
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Esta curva de calibración se utilizó a su vez para hallar el valor de la concentración de la solución
problema, para esto se halló la ecuación de la recta en Excel:
y= 0,0327x + 0,0844
Ecuación 2. Ecuación de la recta de la curva de calibración de rojo congo.

donde y indicaba el valor de absorbancia (0.829) y x indicaba el valor de la concentración. Por lo

tanto, se reacomodó la ecuación para así despejar x y hallar el valor de la concentración:
x= 0,829 - 0,0844 / 0.0327
x= 22,77
Se halla entonces que el valor de la concentración de la solución problema proporcionada era de
22,77 mg/L.

CONCLUSIONES

La relación entre la absorbancia de radiación de una solución y la radiación que transmite es

responsable del color aparente de esta.
La absorbancia de una mezcla es la suma de cada absorbancia de sus componentes, y su pico de
absorción máxima se encuentra a la longitud de onda más grande que corresponde a uno de estos.
La interacción entre radiaciones electromagnéticas y en este caso soluciones con soluciones
coloreadas , conforman uno de los métodos más utilizados en química para determinar
concentraciones de sustancias desconocidas gracias a sus propiedades de absorción y emisión.
La ley de Beer-Lambert permite comprobar la relación entre la absorbancia de luz de una sustancia
y su concentración, siendo estas directamente proporcionales.

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REFERENCIAS

ALABELLA, J ; CINTAS, A ; MIRANDA, T; SERRATOSA, J . 1993 . Consejo Superior de

Investigaciones Científicas. Madrid. Pag 666.

ARENAS, I. & LÓPEZ, J. 2004. Espectrofotometría de absorción. Tesis de maestría, Instituto de

biotecnología. Universidad Nacional Autónoma de México.

CHANG, R & GOLDSBY K. 2013. Química. McGraw-Hill/Interamericana Editores S.A. México

D.F. Pag 278-281.

HARRIS, D. 2007. Análisis químico cuantitativo. Editorial Reverté, S. A. China Lake, California.
Pág 410-415.

SILVA, C. & GARCÍA M. (eds). 2006. Editorial MAD S.L . Sevilla, España. Pag 347.

SKOOG, D. & HOLLER, J. 1997.Fundamentos de Química Analítica. Editorial Reverté, México.