FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE MEDICINA
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

Semana 8

MÉTODOS DE
DIAGNÓSTICO COPROPARASITOLÓGICO
Técnicas Directas:
- Técnica de Sedimentación Rápida (TSR).
- Coproantígenos.
- Kato Katz.

Técnicas Indirectas:
- ELISA.
- Western Blot.
 Técnica de Lumbreras:
• Se separa una cantidad aproximada de 5 g de materia fecal y homogeneizar
en 10 mL de solución salina fisiológica 0.9%, hasta lograr una suspensión
adecuada.
• La mezcla se filtra con gasa doble en tubos Falcon de plástico de 50 mL. Se
completa el volumen final del tubo con solución salina y se tapa
herméticamente.
• Se agita vigorosamente durante 30 segundos; se deja reposar por 60 minutos y
se elimina el sobrenadante.
• Se completa de nuevo el volumen del tubo con solución salina fisiológica 0.9%;
se agita enérgicamente y se deja sedimentar por 15 minutos;
• Repetir de nuevo este paso disminuyendo el tiempo a 10 minutos.
• Finalmente, eliminar el sobrenadante y con ayuda de una pipeta Pasteur,
depositar el sedimento de manera fraccionada y diluir con agua destilada
sobre placas de Petri de vidrio.
• Observar al microscopio.
Huevo de Fasciola hepatica
Técnica de sedimentación espontánea en tubo (TSET):
• Se basa en la capacidad que presentan algunas estadíos parasitarios, como los
huevos, para sedimentar espontáneamente en un medio menos denso y
adecuado como la solución salina fisiológica al 0,9%.
• Se toma una cantidad aproximada de 5 g de materia fecal y se homogeniza en 10
mL de solución salina hasta lograr una suspensión adecuada; la mezcla se filtra
con gasa doble en tubos Falcon de plástico con capacidad de 50 mL.
• Se completa el volumen final del tubo con solución salina y se tapa
herméticamente.
• Se agita con fuerza durante 30 segundos; se deja reposar por 45 minutos y se
elimina el sobrenadante.
• Con una pipeta Pasteur tomar una muestra del fondo del tubo y se colocan tres
gotas del sedimento en dos láminas portaobjetos diferentes, agregándole dos
gotas de lugol a una de ellas y dos gotas de solución salina a la otra.
• Las láminas portaobjetos se cubren con laminillas de vidrio y se observan al
microscopio en aumentos de 100X y 400X .
Técnica de Coproantígenos
https://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-28-pdf-S0213005X10700069

https://reader.elsevier.com/reader/sd/pii/S0325754113700178?token=33CFAEBC6CECC4446C65B9451506E0520B2
135F0414BBD9289CC92DC892E3BCD7529D5C5C03A3B102A414652A78550D9&originRegion=us-east-
1&originCreation=20210524233141

https://www.scielosp.org/pdf/spm/2011.v53n6/516-519/es

https://bvs.ins.gob.pe/insprint/SALUD_PUBLICA/NOR_TEC/2014/serie_normas_tecnicas_nro_37.pdf
Técnica de Kato-Katz:
 Técnica de Kato-Katz:

• Se aclaran 50 mg de heces sin diluir con el uso de glicerina; lo cual

permite visualizar mejor las formas parasitarias.
• En un frasco de vidrio, se dispensa solución de Kato (250 mL de agua,
250 mL de glicerina y 6 mL de verde de malaquita al 3%).
• Se introducen cortes rectangulares de papel celofán (22 X 30 mm), los
cuales se dejan por 24 horas antes de ser usados.
• Posteriormente se tamiza 0.5 g de la muestra de heces a través de una
malla con poros de 500 μm de diámetro;
…Técnica de Kato-Katz:
• Luego se toma el filtrado y se coloca en un molde de cartón (templete)
con un orificio circular central de 6 mm de diámetro y 1.37 mm de
profundidad, el cual está sobre una lámina portaobjetos.
• Se remueve el molde cuidadosamente dejando la muestra de
aproximadamente 50 mg sobre la lámina y se cubre con una laminilla
de papel celofán impregnada con la solución de Kato11.
• Se espera durante 60 - 120 minutos para estabilizar la preparación y se
observa al microscopio en aumento de 100X - 400X.
https://www.youtube.com/watch?v=apuE0YQxVnk&list=PLexXzFmIw7IWBVJqWcBXkm_Lmiu-fbAvO
 Huevo de Huevo de Huevo de
Ascaris lumbricoides Trichuris trichiura “Ancylostomideo”
Métodos Indirectos
ELISA
WESTERN BLOT
A ELECTROFORESIS
 INTRODUCCIÓN Arne Tiselius
1937
ELECTROFORESIS (Nobel 1948)
Separar y analizar moléculas: Anticuerpos

... en función de su diferente movilidad al aplicar un campo eléctrico

(dependerá de su carga eléctrica)
cátodo ánodo * Moléc. (+)  polo (-) o cátodo
* Moléc. (-)  polo (+) o ánodo

ELECTROFORESIS LIBRE
 moléculas en disolución o suspensión:
poco resolutiva

SOPORTE ánodo
ELECTROFORESIS DE ZONA
 SOPORTE que retiene las moléculas:
elevado poder de resolución

cátodo
 EQUIPO ELECTROFORÉTICO
fuente de cable Componentes:
alimentación

cátodo ánodo * Fuente de alimentación

- muestra +
electrodo
electrodo gel
* Dos electrodos
ánodo (+)
cátodo (-)
cubeta (E. horizontal) tampón

electrodo gel muestra * Cubeta

cátodo
-
* Tampón de electroforesis

cubeta * Soporte electroforético

(gel)
ánodo cable
+
fuente de
alimentación

(E. vertical)
tampón
 EN GEL DE POLIACRILAMIDA (PAGE)
Soporte: (restrictivo) Gel de Poliacrilamida

* Polimerización de dos componentes: Acrilamida + Bisacrilamida

* Variación de la concentración  variación del tamaño de poro
[poliacrilamida] tamaño poro

Electroforesis vertical

1. Preparación del gel

2. Montaje de la cubeta
3. Aplicación de la muestra
4. Electroforesis
5. Detección por tinción:
Azul de Coomassie
Sales de plata
 EN ACETATO DE CELULOSA
Soporte: (no restrictivo) Tiras de acetato de celulosa

Electroforesis horizontal
muestra

+ Avance de los anticuerpos -

Campo eléctrico (DV)

1. Aplicación de la muestra
2. Electroforesis
3. Detección por tinción:
Azul de Coomassie
Negro amido
4. Densitometría

Aplicaciones diagnósticas en serología

(separación proteínas séricas)
B INMUNOTRANSFERENCIA
Permite transferir del gel de
poliacrilamida al papel de
nitrocelulosa
C ELISA
INTERPRETACIÒN DE RESULTADOS

 POSITIVO: Si se observa coloración de

bandas.

. NEGATIVO: No aparece coloración en

ninguna de las bandas.
 GRACIAS
POR SU ATENCIÓN