Electroforesis de proteínas en el

diagnostico clínico
PhD Hector BAUTISTA
Diagnostic Department
SEBIA
 Programa de la presentación
I. La proteína monoclonal como marcador tumoral sérico o urinario
Etiología de las gammapatías monoclonales
Papel de la proteína monoclonal en el diagnóstico, pronóstico y
seguimiento de las gammapatías (De acuerdo a las recomendaciones
internacionales mas recientes)
II. La electroforesis de proteínas séricas y urinarias como método para la
detección de proteínas monoclonales
Separación de proteínas mediante electroforesis capilar y en gel
Inmunofijación e inmunotipado
III. Interpretación de perfiles electroforéticos y recomendaciones para el
reporte de resultados
Ejemplos de casos que no requieren análisis confirmatorio por
inmunofijación/inmunotipado
Ejemplos de casos que requieren un análisis confirmatorio por
inmunofijacion/inmunotipado
 Etiología de las gammapatías monoclonales

 Gammapatías Sintomáticas:
• Mieloma Múltiple(MM)
• Enfermedad de Waldenström
• Linfoma Non Hodgkins
• Leucemia Linfoide Crónica
• Enfermedad de cadenas pesadas
• Amiloidosis
 Gammapatías Asintomáticas:
•Mieloma Asintomático (Smoldering myeloma (SM))
•Gammapatías Monoclonales de Significado Incierto (MGUS)
 Gamapatias secundarias :
•Enfermedades autoinmunes (Poliartritis reumatoide, lupus…
•Infecciones (CMV, hepatitis B, hepatitis C, tuberculosis…)
•Inmunodeficiencias primarias y secundarias (HIV, transplantes…)

La presencia de una proteína monoclonal en el suero y algunas veces en la orina, es

uno de los rasgos característicos en la mayoría de las gammapatías sintomáticas y
asintomáticas
 Incidencia de las gammapatías monoclonales
 Gammapatías monoclonales diagnosticadas en la Clínica Mayo en el 2005

Mieloma múltiple 18%

El mieloma múltiple posee el

índice mas elevado de
mortalidad dentro de los
cánceres

Kyle & Rajkumar, 2006: Br J Haematol,134(6):573-89

Mieloma múltiple
• El mieloma es una neoplasia maligna de la médula ósea, consecuencia de
la proliferación maligna de las células plasmáticas (plasmocitos) en el
hueso. Dicha proliferación se traduce en lesiones líticas óseas, asociadas a
otras complicaciones, anemia, hipercalcemia o insuficiencia renal.

Población
activa
(de menos de
65 años)

 Tasa de sobrevivencia relativa: 40% sobrevive de 3 a 4 años

después del descubrimiento de la enfermedad tomando
quimioterapia o con trasplante de células madre
 Incidencia de las gammapatías monoclonales
 Gammapatías monoclonales diagnosticadas en la Clínica Mayo en el 2005

Mieloma múltiple 18%

Mieloma asintomático (SM) 6%

MGUS 51%

Kyle & Rajkumar, 2006: Br J Haematol,134(6):573-89

Diferenciación entre Mieloma múltiple,
MGUS y Mieloma asintomático (SM)
 Por qué es importante detectar los pacientes
con MGUS y con mieloma asintomático?
MGUS y el SM son considerados como una condición pre tumoral que puede
evolucionar hacia la malignidad  Mieloma múltiple, Macroglobulinemia, Linfoma
Amilosis etc…
Frecuencia de transformación
 MGUS: 1%/año
 SM: 10-20%/año
Factores predictivos de progresión

1 2 3 4
Riesgo bajo Riesgo alto
Isotipo Ig G Isotipo no- IgG
Concentración de la proteina mc < 15 g/l Concentración de la proteína mc < 15 g/l
Tasa kappa/lambda: normal Tasa kappa/lambda: normal
 Señalan la importancia de la
electroforesis de proteínas séricas y
de la orina en el diagnóstico y
monitoreo del mieloma múltiple

Los lineamientos internacionales

mas recientes publicados por el
grupo internacional de trabajo del
mieloma en 2011 :
Monoclonalidad
Fondo policlonal

Inmunoglobulinas Proteina
Clon neoplásico de
linfocitos B monoclonal
 La electroforesis, al ser una técnica de
separación, es el único sistema que permite
detectar la monoclonalidad.

La PM se puede detectar como una banda

compacta (en gel) o un pico bien focalizado (en
el perfil densitométrico) ya que está formado por
Ig con una misma carga eléctrica.

Electroforesis de proteínas /
Inmunofijación
 Diagnóstico

La proteína monoclonal debe buscarse en el suero y en la

orina* del paciente
Las técnicas de elección para la detección de la proteína
monoclonal son la electroforesis capilar y la electroforesis en
gel de agarosa.
La confirmación de la monoclonalidad se hace mediante la
técnica de inmunofijación*.
Cuantificación del componente monoclonal debe hacerse por
electroforesis de proteínas.

* Las especificaciones se describen en extenso en la publicación mencionada

 Pronóstico y eficacia del tratamiento

La evolución de la concentración de la proteína

monoclonal es uno de los parámetros claves en el
monitoreo de los pacientes.

 Para los pacientes que presentan una proteína monoclonal cuantificable, el

seguimiento se hace con electroforesis de proteínas séricas
 Para los pacientes con mieloma de cadenas livianas se recomienda la
cuantificación de la proteína de Bence Jones en la orina de 24 h.
 Para los pacientes con mieloma no secretor o pauci secretor, se recomienda la
cuantificación de las cadenas livianas libres.

Proteína de Bence Jones: Cadena liviana monoclonal presente en la orina

 Programa de la presentación
I. La proteína monoclonal como marcador tumoral sérico o urinario
Etiología de las gammapatías monoclonales
Papel de la proteína monoclonal en el diagnóstico, pronóstico y
seguimiento de las gammapatías (De acuerdo a las recomendaciones
internacionales mas recientes)
II. La electroforesis de proteínas séricas y urinarias como método para la
detección de proteínas monoclonales
Separación de proteínas mediante electroforesis capilar y en gel
Inmunofijación e inmunotipado
III. Interpretación de perfiles electroforéticos y recomendaciones para el
reporte de resultados
Ejemplos de casos que no requieren análisis confirmatorio por
inmunofijación/inmunotipado
Ejemplos de casos que requieren un análisis confirmatorio por
inmunofijacion/inmunotipado
 Electroforesis en gel y capilar

Gel de agarosa
Tinción con Negro amido
Proceso completamente
automatizado
Migración con alto voltaje (10000 V)
en un capilar de diámetro muy
pequeño (<100 µm)
Detección y cuantificación directa a
200 nm
Cuantificación de fracciones Microtécnica con alta resolución
por densitometría
 Principio de la electroforesis de proteínas en gel
 Desplazamiento de proteínas ionizadas al ser sometidas a un campo eléctrico en
condiciones definidas de fuerza iónica, pH, duración e intensidad de la corriente
eléctrica aplicada.
 Es una electroforesis de zona: los componentes de la muestra se separan en zonas
o fracciones definidas.

---
--
---
- --- +
+-
Cátodo --
0 Ánodo
----
--
Punto de aplicación
Resultados
Patrón de migración en gel de agarosa

HYDRAGEL
HYDRAGEL PROTEIN BETA1-BETA2

Alb
Alfa-1
Alfa-2
Beta
Gamma

5 Fracciones 6 Fracciones
 Principio de la electroforesis capilar
inyección
Detección

+ + + + + + + + + + + + + + + + + +
---
--
- --- +
---
Cátodo
--- Ánodo
--
-
+ + + + + + + + + + + + + + + + + +

Flujo electroendosmótico Movilidad electroforética

Existen dos fuerzas opuestas que determinan la migración de cada molécula dentro del capilar
Patrón de migración en electroforesis capilar
Sensibilidad de detección de proteínas
monoclonales
[proteína monoclonal] = 0,18 g/L

El limite de detección para ambas técnicas es de 0.2 a 0.6 g/L

La sensibilidad varia en función de:
La posición de migración de la proteína monoclonal
La intensidad del fondo policlonal de la muestra
Electroforesis de proteínas urinarias
Confirmación de la monoclonalidad y tipificación
mediante inmunofijación/Inmunotipado

Pico de aspecto
monoclonal

Inmunofijación Inmunotipado
 Programa de la presentación
I. La proteína monoclonal como marcador tumoral sérico o urinario
Etiología de las gammapatías monoclonales
Papel de la proteína monoclonal en el diagnóstico, pronóstico y
seguimiento de las gammapatías (De acuerdo a las recomendaciones
internacionales mas recientes)
II. La electroforesis de proteínas séricas y urinarias como método para la
detección de proteínas monoclonales
Separación de proteínas mediante electroforesis capilar y en gel
Inmunofijación e inmunotipado
III. Interpretación de perfiles electroforéticos y recomendaciones para el
reporte de resultados
Ejemplos de casos que no requieren análisis confirmatorio por
inmunofijación/inmunotipado
Ejemplos de casos que requieren un análisis confirmatorio por
inmunofijacion/inmunotipado
 Información que se puede obtener de la
electroforesis de proteínas séricas

Diagnóstico de gammapatías
Monitoreo del paciente y eficacia del
Principalmente : tratamiento
Diagnóstico y monitoreo de pacientes MGUS y
SM
Pero además :

Inflamación
Detección de enfermedad infecciosa, autoinmune o sistémica (alfa-1, alfa-2, beta y
sobre todo gamma)
Detección de déficit congénito o adquirido de Igs u otras proteínas: albúmina, A1AT
y gammaglobulinas
Evaluación de la repercusión de una patología conocida y realización del
seguimiento:
Lesión hepática: cirrosis o hepatitis
Lesión renal: síndrome nefrótico
Otras: Hemolisis intravascular, carencia en fierro…
Exploración de múltiples PT, Puente
Alb α-1 α-2 β 2 βs β-γ γ
patologías g/dL
Patrón inflamatorio agudo   
Dolencias inflamatorias crónicas    
Gammapatía policlonal +/- +/- 
Enfermedad hepática/Cirrosis  +/- 
Síndrome nefrótico   +/-  * +/- 
     
Patrón de pérdida
proteica/malnutrición

Reacciones autoimmunes   
Deficiencia alfa-1-antitripsina 
Hipogammaglobulinemia  

Anemias hemolíticas/defectos
congénitos de la hemoglobina
* En gel, un perfil nefrótico puede presentar una fracción beta elevada por la presencia de
proteínas, ese fenómeno no se observa en electroforesis capilar.
Interpretación de resultados
Requiere:
El conocimiento del perfil normal
El conocimiento de las distintas proteínas que migran en cada fracción
El establecimiento de un rango de valores normales para cada fracción
La concentración de proteínas totales en g/dL , edad del paciente etc… son datos muy útiles

Perfil Normal
1. Aspecto gaussiano de la
fracción gamma

2. Ausencia de pico (s) o

deformación (es) en
gamma, beta 1, beta 2 y
Albúmina

alfa 2

3. Ausencia de
disminución o
a1 a2 b1 b2 g incremento de las
fracciones.
Recomendaciones para el reporte de
resultados de la electroforesis de proteínas
Por el momento no existe un consenso sobre la manera de
reportar los distintos resultados. Algunos países han
intentado establecer una lista de comentarios
estandarizados.

Dos puntos importantes que se deben de tener en cuenta:

El reporte de resultados debe de proveer una información clara para ayudar al
médico a elegir los exámenes complementarios y el tratamiento a seguir.
El interés principal del médico cuando receta una electroforesis de proteínas es
saber si hay una proteína monoclonal y si es el caso, en que concentración se
encuentra.
…

Tate et al. 2012 Recommendations for standardized reporting of protein electrophoresis in

Australia and New Zeland. Ann Clin Biochem. 49: 242 -256
 Perfiles electroforéticos que en
general no requieren de un
análisis adicional por
inmunofijación o inmunotipado

Nota: En raras ocasiones el paciente puede presentar síntomas de un mieloma aun

cuando su patrón electroforético es normal. En este caso la inmunofijación debe de
realizarse.
 Reporte: Perfil electroforético normal. Ausencia de proteína
monoclonal

[PT]: 72 g/L

Nota: Según la edad y el contexto clínico del paciente (síntomas sugerentes de un

mieloma): prescribir una inmunofijación y la cuantificación de cadenas livianas
libres
 Reporte: Disminución de las alfa 1 globulinas

[PT]: 69 g/L
A1AT= 0.17 g/L

(Valores normales: 0.97-1.93 g/L)

Nota: Se puede sugerir la cuantificación de la A1AT así como la caracterización del

fenotipo.
No se requiere hacer inmunofijación y/o inmunotipado
 Reporte: Perfil compatible con un síndrome inflamatorio
agudo

Incremento de alfa 1
y alfa 2 globulinas
[PT]: 69 g/L

Nota: No se requiere hacer inmunofijación y/o inmunotipado. Se sugiere

controlar al paciente dentro de 3 a 6 meses por EPS
 Reporte: Perfil compatible con un síndrome inflamatorio
crónico

Incremento de alfa 1 Incremento policlonal

y alfa 2 globulinas de Ig A en beta 2 y de
Ig G en gamma

Nota: No se requiere hacer inmunofijación y/o inmunotipado. Se sugiere

controlar al paciente dentro de 3 a 6 meses por EPS
 Reporte: Perfil compatible con un síndrome nefrótico a
corroborar con los exámenes lipídicos

Alpha 2
macroglobulina

En gel, la fracción beta

puede estar aumentada
La concentración debido a la presencia de
total de proteínas es las lipoproteínas
baja (debajo de los 6
g/dl) [PT]: 4.6 g/dL

Nota: No se requiere hacer inmunofijación y/o inmunotipado si el resultado es

confirmado por el perfil lipídico del paciente.
 Reporte: Presencia de un bloque beta – gamma. Perfil encontrado en
casos de cirrosis y de algunas inflamaciones cutáneas y de mucosas

Incremento policlonal
de Ig A en beta 2 y de
Ig G en gamma

Nota: No se requiere hacer inmunofijación y/o inmunotipado sin embargo se

recomiendo analizar la función hepática (GGT, AST, ALT)
 Reporte: Hipogammaglobulinémia

Nota: 1) Verificar las otras fracciones, si hay indicios de la presencia de una

proteína monoclonal, realizar inmunofijación.
2) Si las otras fracciones son normales pero no se tiene información sobre la causa
de la deficiencia en inmunoglobulinas se recomienda analizar la orina del paciente
para buscar una proteína de Bence Jones.
Casos en los que se pueden encontrar
picos adicionales, pero que en general,
no requieren un análisis adicional por
inmunofijación o inmunotipado. O bien,
que dan resultados negativos en la
inmunofijación o en el inmunotipado
 Reporte: Bisalbuminémia

 Bisalbuminémia hereditaria
 Bisalbuminémia medicamentosa.
Hacer un nuevo muestreo 4 dias después
-Antibióticos
-Medicamentos
-Productos de contraste de
radiografía
 Otros: Explorar el aspecto del suero

-Lipoproteínas  (lechoso)
-Pigmentos biliares (ictérico)

Nota: No se requiere hacer inmunofijación y/o inmunotipado

 Reporte: Bisalbuminémia

 Bisalbuminémia medicamentosa.
Hacer un nuevo muestreo 4 dias después
-Antibióticos
-Medicamentos
-Productos de contraste de
radiografía
 Otros: Explorar el aspecto del suero

-Lipoproteínas  (lechoso)
-Pigmentos biliares (ictérico)

Nota: No se requiere hacer inmunofijación y/o inmunotipado.

 Reporte: Perfil heterocigoto de la alfa1 antitripsina

α1 antitripsina

Nota: No se requiere hacer inmunofijación y/o inmunotipado. Sin embargo es

conveniente hacer una cuantificación de la enzima y una caracterización fenotípica.
Doble pico en alfa 2

• La fracción alfa 2 se encuentra dividida en 2:

o En muestras hemolizadas (complejo Haptoglobina-Hemoglobina)
o Según el fenotipo de hatoglobina
En estos casos un análisis por inmunofijación o inmunotipado no es necesario

Fenotipo II - II

Fenotipo I - I Fenotipo I - II

Cuidado!!!!: En alfa 2 ya se pueden

encontrar proteínas monoclonales
 Reporte: Se sospecha la presencia de fibrinógeno

Nota: Se requiere hacer inmunofijación y/o inmunotipado, si no hay reactividad

con los antisueros entonces puede ser fibrinogeno.
 Reporte: Fracción C4 del complemento en beta 2 en proceso
inflamatorio

C4

Nota: Se requiere hacer inmunofijación y/o inmunotipado, si no hay reactividad

con los antisueros entonces puede ser el C4.
 Proteína C reactiva en gamma durante proceso inflamatorio
agudo

PT= 5.9 g/dL

CRP = 200mg/L

Nota: Se requiere hacer inmunofijación y/o inmunotipado, si no hay reactividad

con los antisueros entonces puede ser la Proteina C Reactiva.
Casos en los que una proteína
monoclonal esta presente y por lo
tanto un análisis complementario de
inmunofijación o inmunotipado es
necesario.
 Se sospecha la presencia de una proteína
monoclonal
 Presencia de un pico, banda o distorsión en la zona gamma

 Presencia de un pico, banda o distorsión adicional en beta 1 o beta 2 (sobre

todo si hay una hipogammaglobulinemia asociada)

 Cuando Beta 2 ≥ beta 1 fuera de proceso inflamatorio o enfermedad hepática

 Aumento aislado de beta 1 (en suero si hemolisis y paciente sin deficiencia en

hierro)

 Cuando la fracción alfa 2 esta aumentada (superior a los valores normales) de

manera aislada y fuera de contexto inflamatorio
Presencia de un pico, banda o distorsión en la
zona gamma
Presencia de un pico, banda o distorsión en la
zona gamma
Presencia de un pico, banda o distorsión
adicional en beta 2
Presencia de un pico, banda o distorsión
adicional en beta 1
Cuando la fracción alfa 2 esta aumentada (superior a los valores
normales) de manera aislada y fuera de contexto inflamatorio
Reporte

• Para los ejemplos anteriores se tiene que reportar la

presencia de la anomalía monoclonal y además
sugerir el análisis complementario de
inmunofijación/inmunotipado
Ejemplo:
Reporte:Presencia de un pico de aspecto monoclonal
en beta 2. Un análisis complementario de
inmunofijación/inmunotipado es necesario.

• Además se tiene que proveer información sobre la

concentración de la anomalía
Cuantificación de la proteína monoclonal
 Las proteínas monoclonales deben cuantificarse por electroforesis en g/L o g/dL

 Las proteínas monoclonales discretas que no pueden ser cuantificadas de manera fiable
deben ser reportadas como sigue « discreta proteína monoclonal cuya concentración es <1
g/L »

 Las proteínas que son visibles únicamente por inmunofijación, no se cuantifican y eso se
señala en el comentario.

 Si la proteína migra sobre beta 1 o beta 2, se recomienda cuantificar la totalidad de la zona y

el resultado se reporta como la suma de los dos elementos:
[beta1 + proteína monoclonal]= g/dL

 El mismo método de cuantificación tiene que utilizarse durante el monitoreo de un paciente

 La integración del pico permite una cuantificación más fiable y exacta del CM que la
determinación por nefelometría, especialmente para la IgM y en menor grado para IgA e IgG.
 2 modos de cuantificación

Modo
ortogonal

Modo
tangencial

Imperativo!
utilizar siempre del
mismo modo para el mismo
paciente
 Perfil oligoclonal

Presencia de dos o mas picos o bandas discretas y que esta

frecuentemente ligado a una hipergammaglobulinemia.

 Se detecta frecuentemente en pacientes trasplantados y tratados con

inmunosupresores (Permite detectar precozmente un síndrome
linfoproliferativo; en concreto, la emergencia de una Ig monoclonal
preponderante en un contexto de perfil oligoclonal post-transplante)

 Se detecta en pacientes que presentan enfermedades autoinmunes

tratados con inmunosupresores

 Pacientes con enfermedades virales crónicas

Perfil oligoclonal

Electroforesis capilar Electroforesis en gel

 Reporte: Potencial perfil oligoclonal

Nota: La primera vez se recomienda hacer inmunofijación o inmunotipado.

Posteriormente se requiere un control únicamente por EPS
 Es conveniente utilizar el adjetivo “potencial” porque se puede
tratar de una proteína monoclonal polimerizada…

+BME

Ig M polimerizada

Nota: La primera vez se recomienda hacer inmunofijación o inmunotipado.

Posteriormente se requiere un control únicamente por EPS
 Reporte: Aumento policlonal de las Ig G con picos subyacentes

Nota: La primera vez se recomienda hacer inmunofijación o inmunotipado.

Posteriormente se requiere un control únicamente por EPS
Ejemplos
 Reporte: Pico de aspecto monoclonal en beta +
hypogammaglobulinémia.

Hydragel β1- β2

Nota: Se requiere hacer inmunofijación o inmunotipado.

 Reporte: Perfil compatible con un síndrome inflamatorio
crónico

Hydragel β1- β2

Nota: No se requiere hacer inmunofijación o inmunotipado. Monitorear dentro

de tres meses mediante EPS.
 Reporte: Bloque beta-gamma. Perfil encontrado en casos de
cirrosis y de algunas inflamaciones cutáneas y de mucosas

Beta 2 gamma bridge

(Polyclonal increase of Ig A in beta 2 and Ig G in gamma)

Nota: No se requiere hacer inmunofijación y/o inmunotipados sin embargo se

recomiendo analizar la función hepática (GGT, AST, ALT)
 Reporte: Pico de aspecto monoclonal en beta 2

Nota: Se requiere una análisis por inmunofijación o inmunotipado. En caso de

ausencia de reactividad con los antisueros, se puede sospechar la presencia de
fibrinógeno puede
Gracias por su atención