ELECTROFORESIS

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de

estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa
por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
La técnica clásica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un
electrolito. Sus extremos se sumergen en dos depósitos independientes que contienen
ambos al electrolito y están unidos a los electrodos del generador de corriente. La
muestra se deposita en forma de un pequeño trazo transversal en la tira. La distancia
de migración se mide en relación un marcador interno. Las placas son reveladas con
sales de plata, azul de Coomassie, o reactivos en particular.

ELEMENTOS
Gel: bloque de material similar a la gelatina. Los geles para
separar ADN suelen estar hechos de un polisacárido llamado
agarosa, que se consigue como hojuelas secas pulverizadas.
Cuando la agarosa se calienta en una solución amortiguadora
(agua mezclada con algunas sales) y deja enfriar, se forma un
gel sólido ligeramente blando. A nivel molecular, el gel es una
matriz de moléculas de agarosa que se mantienen unidas por
puentes de hidrógeno y que forman pequeños poros.

Buffer de corrimiento: es una solución para

transportar la corriente eléctrica a través del gel y
ayudar a mantener un ambiente constante durante
la ejecución. El buffering es necesario para
mantener un pH constante y proporcionar iones en
la solución para facilitar el flujo de electricidad. El
calor es generado por la aplicación de una corriente
al gel, el búfer de funcionamiento también ayuda a
mantener el gel fresco. Esto es especialmente
importante para los geles de agarosa porque se
derriten si se calientan demasiado.
Cámara de electroforesis: La cámara de electroforesis
es un dispositivo que permite la generación de un campo
eléctrico alrededor de un gel donde se depositan las
muestras. Este campo se genera dentro de una solución
amortiguadora en la que se encuentra sumergido el gel
que contiene las muestras; el alto contenido de
electrolitos permite la transmisión de la corriente
eléctrica, manteniendo el pH estable al paso de la
corriente. La cámara cuenta con dos polos que se
conectan a una fuente de energía. En las cámaras de
electroforesis vertical el polo positivo se encuentra en la
parte inferior de la cámara y en las horizontales, en uno de los extremos. En ambos
tipos de cámaras el polo positivo se distingue con color rojo y el negativo con negro.
Fuente de poder: La fuerza necesaria para extraer
el ADN a través del gel es proporcionada por la
electricidad. Una fuente de alimentación toma la
electricidad de corriente alterna estándar disponible
de un tomacorriente de pared y la convierte de una
forma, la corriente continua necesaria para
configurar un campo eléctrico a través del gel.
Existen numerosas fuentes de alimentación
disponibles, con una variedad de características. En
general, si usas constante fuentes de alimentación de voltaje o voltaje variable, o
incluso baterías. Las fuentes de alimentación también proporcionan un mecanismo para
controlar la cantidad y la fuerza (amperaje y voltaje) contenidas en el campo. Cuanto
más bajo sea el voltaje, más lento migrará el ADN.
Bandejas de gel: Las bandejas de fundición moldeadas
por inyección EDVOTEK (también llamadas camas de
gel) son Disponibles en dos tamaños, proporcionando
flexibilidad para una variedad de experimentos. Las
tapas de goma de los extremos encajan firmemente en
los extremos de la fundición de gel. Bandeja. Esta
característica elimina el problema de fugas de solución
de agarosa. asociado con las bandejas de fundición que
requieren que los extremos del lecho de gel estén Cerrado con cinta.
Peine: Unidades de electroforesis moldeadas por inyección (modelos M6 +, M12 y
M36). los peines estándar de 6 dientes y el peine doble 8/10
proporcionan flexibilidad para una Variedad de opciones
experimentales. El tamaño del peine afectará la cantidad
de muestra que se puede cargar en la muestra pozos,
puede ser necesario verter geles más gruesos para que los
pozos puedan acomodar suficiente muestra para
resultados óptimos.
 Peine de 6 dientes. Peine de policarbonato moldeado por inyección para fundir
6 pozos que albergan hasta 38-40 µl de muestra.
 Doble Peine 8/10. Peine de policarbonato moldeado por inyección para
aumentar Número de pocillos por gel.
Capacidad de pozos:
- Pozos de 8 dientes - hasta 30 µl
- Pozos de 10 dientes - hasta 20 µl
Tampón TAE: Es el medio usado para preparar el gel y desarrollar la electroforesis.
Recibe este nombre de las iniciales de sus componentes (Tris + Acético + EDTA) El pH
es alcalino, para que todos los grupos fosfato del DNA estén ionizados por completo y
éste se mantenga cargado negativamente. La composición habitual es Tris 40 mM, ác.
acético 19 mM, EDTA 1 mM, pH=7,5. En la electroforesis, permite mantener las
moléculas de DNA con una carga negativa uniforme y constante. Es, por ello,
componente del gel y del tampón de electroforesis, o tampón de cubeta.
Tampón de carga: Es una disolución que se mezcla con la muestra antes de aplicarla
al gel. Sus componentes cumplen varios propósitos:
 En electroforesis de DNA: Glicerol para aportar densidad a la muestra y facilitar
su aplicación a los pocillos.
Azul de bromofenol (u otro colorante como el xileno-cianol) como marcador del
frente de avance de la electroforesis. Asimismo, su color es una ayuda visual
durante la carga de muestra en los pocillos.
Tampón para estabilizar el pH y, por tanto, la carga de las moléculas.
 En electroforesis de proteínas SDS-PAGE se denomina también tampón de
ruptura (ya que provoca la desnaturalización):
Glicerol para aportar densidad a la muestra y facilitar su aplicación a los pocillos.
Azul de bromofenol como marcador del frente de avance de la electroforesis.
Asimismo, su color es una ayuda visual durante la carga de muestra en los
pocillos.
SDS para provocar la desnaturalización de las proteínas (ayudado por un
calentamiento breve a 90-100° C).
β-mercaptoetanol para romper los enlaces disulfuro (una reacción de reducción,
el disulfuro se convierte en dos tioles).
Tampón para estabilizar el pH y, por tanto, la carga de las moléculas.
Electrodos: Un electrodo es un conductor eléctrico utilizado para hacer contacto con
una parte no metálica de un circuito, por ejemplo, un semiconductor, un electrolito, el
vacío del grupo. ánodo (+) cátodo (-)
Pinza de sujeción: Son un tipo de sujeción ajustable, generalmente de metal, que
forma parte del equipamiento de laboratorio, mediante la cual se pueden sujetar
diferentes objetos de vidrio (embudos de laboratorio, buretas…) o realizar montajes
más elaborados (aparato de destilación). Se sujetan mediante una doble nuez a un pie
o soporte de laboratorio o, en caso de montajes más complejos (línea de Schlenk), a
una armadura o rejilla fija.
Micro pipeta: Instrumento preferido para entregar volúmenes de
muestra precisos y reproducibles, otros menos costosos. Las
alternativas de equipo incluyen micro pipetas de volumen fijo o pipetas
de transferencia desechables.
 PARTES DE UN EQUIPO ELECTROFORETICO

EQUIPO DE ELECTROFORESIS HORIZONTAL

EQUIPO DE ELECTROFORESIS VERTICAL