SIEMBRAS Y AISLAMIENTOS

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Gòmez S, Nathalia; Suarez J, Lised; 1Olarte C, Daniela; 1Amaris R, Sebastián
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Universidad de Pamplona, Facultad de Ciencias Básicas, Departamento de

microbiología, Colombia, mayo de 2023

RESUMEN
La siembra de cultivos microbianos, hace referencia al proceso de colocar microorganismos en un
medio de cultivo, para este caso se realizó por repique, el cual, consiste en pasar una pequeña
muestra de un cultivo a otro, en este procedimiento se empleó salmonella spp, la cual, se sembró
en un medio líquido y sólido, para el medio líquido se realizó en tubos de ensayo con caldo BHI,
en el cual, se observó la formación de un sedimento o precipitado, por otra parte, el medio solido
se realizó en cajas de Petri con agar BHI, en primera instancia se realizaron dos siembras por
agotamiento, seguidamente, se realizaron dos siembras masivas, de las cuales al observar los
cultivos obtenidos se logró realizar las caracterización morfológica de la bacteria, esta presentaba
una forma irregular, con bordes ondulados, de elevación plana con una tonalidad de color beige.
Se puede decir, que la selección de un medio de cultivo adecuado y la creación de condiciones
óptimas de crecimiento son fundamentales para obtener resultados precisos y confiables en el
cultivo microbiano.

PALABRAS CLAVES: cultivo microbiano, bacteria, morfología.

INTRODUCCIÓN

Una siembra es introducir una porción de una
muestra en un medio adecuado, con el fin de
comenzar un cultivo microbiano, para su
desarrollo y multiplicación.
Hay varias clases de tipos de siembras, las
que se usaron en esta práctica fueron: siembra
masiva en caja de Petri, siembra por
agotamiento en caja de Petri, siembra por
dilución en medio líquido.
La siembra masiva en caja de Petri, es una
técnica muy utilizada porque permite obtener
un gran número de microorganismos en la
superficie del medio “Igraham J. y Igraham
C. (1998)”.
La siembra por dilución o cultivo en tubo con
medio líquido consiste en tomar la muestra y
simplemente diluirla en el medio líquido
“Igraham J. y Igraham C. (1998)”.

La siembra por agotamiento en caja de Petri Las bacterias en condiciones normales se

es un método empleado para el aislamiento
de colonias, mediante esta se busca obtener
colonias separadas a partir de un inoculo
“Igraham J. y Igraham C. (1998)”.
desarrollan con formas definidas, las cuales
son proporcionadas por la rigidez de la pared
celular; estas formas son esféricas, ovaladas,
en forma de bastón o como espirales. De
acuerdo a lo anterior, es importante realizar
una correcta observación de estas
características, dado que, dicha forma se
convierte en uno de los principales
marcadores para la identificación inicial de
géneros bacterianos, encontrándose
registrado en el Manual de Bacteriología
Sistemática de Bergey; adicionalmente, es
importante subrayar que, cada género posee
unas características particulares que permiten
diferenciarlo de otros, esto teniendo en
cuenta que, la caracterización de un
aislamiento debe incluir otro tipo de
marcadores, como los bioquímicos,
serológicos y moleculares, para poder
concluir al respecto de un género y una
especie. “Viteri A, Blanco M, Carbó R, (julio
2017)”.
En cuanto a la morfología de la colonia
bacteriana esta hace referencia a las
características que exhiben los
microorganismos al crecer sobre un medio lo
cual genera diferencias en la apariencia
macroscópica de su crecimiento, estas
diferencias llamadas características del
cultivo, son la base para la separación de ellas
en grupos taxonómicos. Las características
del cultivo de los microorganismos
conocidos, están consignadas en Bergey´s
Manual of Systematic Bacteriology y, son
determinadas por el cultivo de los
microorganismos en agar Nutritivo inclinado
y en placas de Petri, en caldo Nutritivo y en
Gelatina Nutriente. “Viteri A, Blanco M,
Carbó R, (julio 2017)”.
Salmonella spp es una bacteria de la familia
Enterobacteriácea constituida por bacilos
gram-negativos intracelulares, anaerobios
facultativos, con flagelos periticos,
Salmonella spp. se puede encontrar en varios
alimentos, como en las carnes de pollo, res,
cerdo, en huevos, frutas, vegetales, y hasta en
los alimentos procesados “Gutiérrez L.
(2000)”.
Los objetivos de esta práctica fueron: Aplicar
las diferentes técnicas de siembra empleadas
en Microbiología. Distinguir los métodos de
siembra empleados en Microbiología.
Ejecutar siembras en medio líquidos.
Ejecutar siembras en caja de Petri masivas y
por agotamiento.
PARTE EXPERIMENTAL
Materiales
4 cajas de Petri con agar BHI (Infusión
Cerebro Corazón), 2 tubo con caldo BHI
(Infusión Cerebro Corazón), mechero de
bunsen, asas bacteriológicas redondas y
cultivo bacteriano (Salmonella spp.)
Metodología
Con el área previamente preparada y con las
respectivas indicaciones de la maestra e
identificación de cultivos y muestras;
Posterior a la elaboración de los medios de
cultivo se procedió a sembrar los
microorganismos a través de un repique del
cultivo (Salmonella spp).
Siembra en medio solido: inicialmente se
esterilizo el asa por medio de un flameado
hasta obtener un rojo incandescente, se enfrío
en la pared de la caja de Petri donde se
encontraba el inoculo, seguido a esto se
recolecto una pequeña muestra del inoculo de
la bacteria. Seguidamente se transfirió el
inoculó al área designada (caja de Petri con
agar BHI), realizando dos siembras por
agotamiento y otras dos por siembra masiva. Siembra en medio liquido: se esterilizo el
En el primer caso el inoculo se colocó en el asa, se enfrió en la pared del agar donde se
área periférica de la caja donde se realizaron encontraba el inoculo, seguidamente se tomó
estrías horizontales con el asa hasta la mitad una muestra del inoculo, se abrió el tubo con
o una tercera parte de la caja, seguidamente el dedo meñique cerca a la llama, se flameo
se giró de tal forma que esta primera estría la boca del tubo y se introdujo el asa haciendo
quedara enfrente, se flameo el asa hasta el movimientos circulares (figura 3), se flameo
rojo vivo y se repitió el procedimiento 3 la boca del tubo y se cerró el tubo. Finalmente
veces más, para finalizar con una estría en el se esterilizo el asa.
centro del medio de cultivo (figura 1). Se
flameo el asa antes y después de la siembra.
En el caso de la siembra masiva, se esterilizo
el asa y se realizó un espiral a lo largo y ancho
de la caja, seguidamente se roto 90° y se
realizó una nueva espiral encima del hecho
anteriormente (figura 2). Finalmente se
esterilizó el asa.

Figura 3: Forma gráfica de método de

siembra en tubo con medio liquido

Finalmente, todas las siembras se agruparon

en una bolsa plástica donde fueron llevadas a
la incubadora a una temperatura de 37°C por
24 horas.

RESULTADOS Y ANÁLISIS

Figura 1: forma gráfica del método de Soluciones

siembra por agotamiento en cajas de Petri.
A continuación, en la tabla 1 y 2 se presentan
los resultados obtenidos de los cultivos de
Salmonella spp. en caja de Petri después del
periodo de incubación.

Tabla 1: Resultados de siembras masivas de

Salmonella spp. en cajas de Petri con medio
de cultivo agar BHI.

Figura 2: forma gráfica del método de

siembra masiva en cajas de Petri.
 Siembras masivas Al presentar una forma irregular se refiere a
que esta colonia no tiene una forma
claramente definida o geométrica y se
presenta de manera desordenada (Murray et
al., 2017).

Un borde ondulado, el cual se refiere a la

Tabla 2: Resultados de siembra de
Salmonella spp. por agotamiento en cajas de
Petri con medio agar BHI.
Siembras por agotamiento
forma de la colonia en agar (Garrity, 2015)
describe el aspecto del perímetro de la
colonia, al ser ondulado presenta pequeñas
fenestraciones (Robles y Ayala, s.f.).
Respecto a su elevación plana hace énfasis
que su superficie no tiene protuberancias
notables, significa que la colonia tiene una
altura baja en relación con el agar en el que
se cultiva. Esto indica que la bacteria no
produce enzimas ni otras sustancias que le
permitan crecer en altura, sino que se
extiende sobre la superficie del agar (Tille,
2013).

Se pudo identificar colonias de color beige

A partir de los resultados obtenidos en la
siembra de la bacteria Salmonella spp. Y
tomando como guía las características de
descripción macroscópica en colonias sobre
agar nutritivo se obtuvieron las
características situadas en la tabla 3.
claro, el cual es un tono general de la colonia,
dado que su siembra fue en un medio de uso
general (BD BHI,2013). Este color es común
en muchas especies bacterianas (Whiteman
& Graham, 1998).
A continuación, se presentan los resultados
de la siembra de Salmonella spp. en tubos de
ensayo con medio líquido.

Tabla 3: Características de los cultivos de

salmonella spp. en caja de Petri

Forma Irregular
Bordes Ondulado
Elevación Plana
Color Beige

Figura 4: resultados obtenidos de siembra de
Salmonella spp. en tubo de ensayo con medio
liquido caldo BHI.
Por otro lado, en cuanto al medio liquido en
los tubos con caldo BHI, se presentó en forma
de sedimento o precipitado. Esto significa
que después de incubar la muestra en el
medio líquido, se ha producido una
separación o sedimentación de material
bacteriano en el fondo del tubo de ensayo, así
mismo puede deberse a la producción de
exopolisacáridos o proteínas por parte de las
bacterias, que pueden acumularse en el fondo
del tubo (Forbes et al., 2007).
CONCLUSIONES
En conclusión, las técnicas de siembra y
aislamiento de microorganismos son
fundamentales para el estudio y la
identificación de los mismos.
La selección de los medios de cultivo
apropiados y la observación cuidadosa de la
morfología de las colonias son esenciales
para caracterizar diferentes especies
microbianas.
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