TÉCNICAS DE AISLAMIENTO Y CULTIVO DE BACTERIAS

Yeisson David Cera Vallejo, Gian Pérez, Carlos Reales Escobar

Microbiología Y Parasitología
Programa Química Y Farmacia- Universidad Del Atlántico
2017

RESUMEN
Durante la experiencia realizada en el laboratorio de técnicas de aislamiento y
cultivo de bacterias se buscó comprobar cómo crecen los microorganismos en
diferentes medios de cultivo y como aislarlos, para ello se realizó una siembra de
microorganismo en medios distintos, cultivo en caja Petri, cultivó en caldo nutritivo
y cultivo en agar inclinado, esto con el objetivo de aislar bacteria y que se formen
colonias puras, luego de realizar la siembra se llevó a incubación por un periodo de
24 -48 horas a 37°C, después de realizar las observaciones en el medio agar
inclinado se observó cómo se cultivó la bacteria y que creció en forma equinulada.
Posteriormente el periodo de incubación establecido para esta muestra, se toma
material cultivado del mismo para ser sembrado en una caja de Petri, después este
paso a ser dividido en cuatro cuadrantes; los cuales por método de estrías se
sembró y luego, se procedió a incubar por 24-48 horas; dando como resultado
crecimiento notable y específico en cada cuadrante. en el resto del trabajo se puede
apreciar más de esta interesante experiencia.
Palabras Claves: Aislamiento, Cultivo, Agar, Equinulada

INTRODUCCIÓN
Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos
que permiten cultivarlos bajo condicione artificiales, con el fin de obtener colonias
puras. Una de las técnicas más usadas en el laboratorio de microbiología consiste
en transferir una muestra microbiológica de un ambiente determinado a un medio
de cultivo, lo que permite obtener cultivos microbianos. Al efectuar este
procedimiento, es necesario considerar que, en el área de trabajo, existen muchos
otros microorganismos; debido a esto, es necesario tomar precauciones para
impedir que éstos penetren y contaminen los cultivos en estudio. Por otra parte,
para considerar no sólo el aspecto nutricional, sino también las condiciones
ambientales de su hábitat natural, por lo que en el medio de cultivo se debe ajustar
el pH y concentración de sales y durante la incubación condiciones tales como la
temperatura, aireación, la luminosidad. La aplicación de estos procedimientos ha
permitido propagar a los microorganismos en cultivos mixtos, así como su
aislamiento y la obtención de cultivos puros, facilitando de este modo, el estudio,
caracterización, aplicación y control de los mismos.

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OBJETIVO GENERAL
Reconocer los métodos, más
utilizados para el aislamiento y cultivo
de bacterias a partir de diferentes
muestras, utilizando tres medios de
cultivo
OBJETIVO ESPECÍFICOS
 Conocer la composición de los
diferentes medios de cultivos
utilizados en la práctica
 Diferenciar las características de
crecimiento de las bacterias en los
distintos medios de cultivo
 Desarrollar destreza en el
estudiante a la hora de realizar
siembras de microorganismos
diferentes medios.
METODOLOGÍA
Materiales
 Tubo de ensayo con agar inclinado
 Asa de punta o aguja de
inoculación
 Caja Petri con cultivo contaminado
 Mechero
 Cinta de rotular
Procedimiento
1. En la primera parte, para este
procedimiento se tomaron
materiales antes nombrados, se
encendió el mechero, el integrante del
grupo primero tomo el asa de
inoculación y lo esterilizo, lo enfrió en
una parte del agar que no contenía
microorganismos, luego de esto se
tomó una muestra una cepa
cualquiera con en asa, luego se
destapo el tubo con agar inclinado y se
flameo la boca del tubo para
esterilizar, luego se introduce el asa
sin tocar las paredes del tubo luego de
este paso se continua flameando
nuevamente la boca del tubo, se tapa,
se rotula y se lleva a incubación, de
24-48 horas el asa utilizada debe ser
esterilizada nuevamente, se debe
anotar como creció la cepa bacteriana
el color, tamaño, consistencia borde
,superficie y como fue el crecimiento
en los distintos medios utilizados.
2. En la segunda parte, para siembra
por estrías cruzadas en la superficie
en la caja Petri: primero en la parte
posterior externa de la caja y con
ayuda del marcador se realizó una
división en cuatro cuadrantes. Se
tomo una muestra con el asa
previamente flameada y fría, se
inoculó la muestra haciendo 4.5
estrias simples muy juntas de lado a
lado sobre el primer cuadrante de la
caja y se cerro la caja. Luego se
flameo el asa de inoculación y se giro
la caja en un cuarto. Se abrió
nuevamente la caja y se enfrio el asa
tocando la superficie de los lados del
medio lejos de la zona de estrias
recién hechas. Después, rozamos con
el asa una vez la superficie del primer
cuadrante y se hizo un segundo grupo
de estrias en el segundo cuadrante.
Se repitió el anterior procedimiento en
lo
el tercer cuadrante y se efectuo la
siembra en el ultimo cuadrante sin
flamear el asa y haciendo estrias mas
abiertas. Se incubo la caja de Petri a
37°C dorante 24-48 horas.
RESULTADOS
Basándose en los resultados
obtenidos y observados durante el
proceso de incubación, y guiándonos
2
de las formas de crecimiento
presentes en la guia se determinó que
la bacteria creció en forma equinulada
como se observa en la fig. 1. Y
también basándose en los resultados
hallados durante la siembraen la caja
Petri, se pudo observar que a las
primeras 24 horas (igura 2), el
crecimiento era evidente y claro pero
no en todos los cuadrantes; en
cambio, cumplida las 48 horas (Figura
3), las formas de las colonias crecidas
en los cultivos son mucho mejor
evidenciadas y detalladas en cuanto a
su morfología a lo largo de recorrido
del estriado hecho anteriormente
Figura 1. Cultivo de microrganismos, medio
agar inclinado, crecimiento bacteriano de
forma equinulada
Figura 2. Cultivo de Microorganismos en caja
de Petri a transcurrir 24 horas
Figura 3. Cultivo de Microorganismos en caja
de Petri a transcurrir 48 horas
CONCLUSION
Para concluir, los resultados obtenidos
durante el periodo de incubación,
arrojo a una cepa bacteriana que
creció de forma equinulada, color
amarillo bastate llamativo, la práctica
concluyo como se esperaba, se
determinó que, por agar inclinado, se
pueden cultivar y aislar bacterias,
obteniendo colonias puras, este
sencillo procedimiento puede ser de
gran utilidad en el campo
microbiológico e igual manera el
mismo resultado positivo con los
resultados del cultivo en la caja de
Petri donde los patrones de
crecimiento bacteriano son notables y
claros.
CUESTIONARIO
¿Qué es el agar y de donde se
obtiene?
El agar es un agente solidificante
usado en medios de cultivos
bacteriológicos y en otras aplicaciones
(cultivo de tejidos, difusión
inmunológica, estudios nutricionales,
3
etc.). Es un poligalactosido
(polisacárido formado por la mezcla de
agarosa y agaropectina) que se
obtiene a partir de algas rojas marinas
principalmente de los géneros
gracilaria, gellidium y euchema.
¿Por qué el agar es un medio
general para el cultivo de bacterias?
El agar es un medio general para el
cultivo de bacterias pues estos
microorganismos son incapaces de
degradarlos, puesto que presenta una
capacidad superior a la gelatina
animal para resistir la capacidad
licuadora de los microorganismos y
mantenerse estables a una
temperatura adecuada para la
incubación de los mismos. Por otra
parte, puede ser solidificado o
convertido en gel con facilidad lo que
permite que lo microorganismos
puedan mezclarse en el fácilmente.
¿Cuáles son las ventajas de un
cultivo puro?
Un cultivo puro es aquel que se
desarrolla a partir de una célula única
y por lo tanto está formado por un
solo tipo de microorganismo, entre sus
ventajas están:
Son esenciales para poder
6estudiar las características de los
Microorganismos Importantes para
poder identificarlos con seguridad. Se
han diseñado para conservar la
pureza de los cultivos y evitar su
Contaminación con otros
microorganismos que no nos
interesan.
¿Por qué razón no debes compartir
el mechero de Bunsen?
En las prácticas de microbiología no
se debe compartir el mechero, ya que
al ser este un mechero de gas al
compartirlo se necesitaría tenerlo
apartado del lugar donde se esté
trabajando y este es muy necesario
para tener asepsia y tener el lugar
esterilizado y los materiales, teniendo
buen uso de este.
¿Cuál es la razón para flamear los
tubos antes y después de cada
transferencia?
En microbiología es importante que en
el material donde se va a inocular se
flamee antes ya que así se evitaría
que al momento de destaparlo se
encuentre contaminado por algún
microorganismo, y después en caso
de que el asa llena de inoculo
accidentalmente toque a boca del tubo
se debe flamear para que no queden
restos de microorganismos en este.
Explica por qué debes evitar que el
asa llena de inóculo toque la boca
del tubo fuente o del tubo al ser
inoculado
Se debe evitar que el asa toque la
boca del tubo ya que podría
contaminarlo de microorganismos
llegando así a no dar los
resultados esperados y
contaminando el material con que se
trabaja.
Cuando tomas un inóculo de una
caja de Petri. ¿Por qué es necesario
tocar una parte estéril del agar con
el asa antes de tocar el crecimiento
bacteriano?
Se debe de tocar una parte estéril
para enfriar el asa que previamente
4
se flameo ya que se encuentra
caliente y es necesario que se enfrié
para que en el momento de tomar el
cultivo no se elimine los
microorganismos que se van a
inocular.
¿Porque el asa debe ser flameada
antes y después de todos los
procedimientos de siembra?
El asa de siembra debe ser flameada
antes y después de utilizarla en un
proceso de siembra, antes del
procedimiento se flamea para
esterilizarla y así evitar que se
contamine con otros microorganismos
que podrían estar presentes en el asa.
Se debe flamear el asa después del
procedimiento para evitar que los
microorganismos que hemos tomado
de la muestra contaminen el
laboratorio. El asa se flamea hasta que
el filamento tome un color rojo intenso
y luego se retira de la llama y se deja
enfriar para posteriormente tomar
muestras del cultivo.
¿Por qué las cajas de agar se deben
mantenerse invertidas durante la
incubación?
Durante los procesos de incubación se
generan vapores por la temperatura,
vapores que pueden condensarse, si
la caja no se mantiene invertida estos
vapores caerán sobre el cultivo y lo
dañaran, en cambio si esta invertida
caerán sobre la tapa y no ocasionaran
ningún daño a la muestra.
BIBLIOGRAFIA
 Brock biología de los
microorganismos, capitulo 5,
unidad, crecimiento microbiano,
pág.128-129,, décima edición.
 Corella, R. y Amato, S. Extracción
e identificación de agar-agar de
Gracilaria fortissima (Dawson).
 Congreso latinoamericano de
Química para el desarrollo.
Memoria, 1981; San José, Costa
Rica, 426i — 426iii.