Laboratorio de Separación de aminoácidos empleando
cromatografía en capa fina
Esquivel Luis (4-818-33)1 , Jimenez Mayerlis (4-816-1680)2,
Henriquez Lucia (4-814-2109)3, Cubilla Lorena (4-814-267)4, Castillo Luis (4-819-2037)5
Universidad Autónoma de Chiriquí, Facultad de Medicina, Doctor en Medicina, Química,
David, Chiriquí, Ciudad de Panamá. E-Mail: luis.esquivel1@unachi.ac.pa 1,
mayerlis.jimenez@unachi.ac.pa 2, lucia.henriquez@unachi.ac.pa 3,
lorena.cubilla@unachi.ac.pa4, luis.castillo5@unachi.ac.pa 5
Resumen
El presente informe trata sobre la separación de aminoácidos utilizando la técnica de capa fina, que no
es más que la división de componentes de una mezcla que sea de nuestro interés. Para realizar este
experimento utilizamos el simulador virtual que nos proporcionó la plataforma biomodel, en donde
analizamos dos muestras, para conocer qué componentes contenían las mismas. Primero, tomamos
una pequeña cantidad de cada una, y la colocamos en una placa cubierta de gel de sílice, a esta se le
conoce como fase estacionaria, después pasamos a la fase móvil, en donde se pudieron observar los
aminoácidos gracias a que utilizamos la disolución de ninhidrina. Otros aspectos relevantes es que
evaluaremos los aminoácidos que tengan un mayor factor de retención ya que con esto podremos
saber el grado de solubilidad que tiene las sustancias y también podremos evidenciar las reacciones
que tienen las muestras analizadas.
Palabras claves equilibrio de los componentes entre dos fases
Biomoléculas, movilidad, cromatografía, inmiscibles, a saber, la fase estacionaria y la
patrón.
fase móvil. Estas diferencias en la distribución
Objetivos de equilibrio son el resultado de la naturaleza y
● Distinguir los diferentes aminoácidos el grado de interacción de los componentes
con la utilización de la cromatina en con estas dos fases. La fase estacionaria es un
capa fina.
● Observar la movilidad de cada patrón medio poroso, como la sílice o la alúmina, a
con relación a su estructura. través del cual se filtra la mezcla de la muestra
● Calcular los resultados empleando la bajo la influencia de un disolvente en
técnica de cromatografía en capa fina
movimiento (la fase móvil). Existe una serie
de manera virtual.
de interacciones entre la muestra y la fase
Marco teórico estacionaria que se han aprovechado para
separar compuestos (Maracas, 2021).
La cromatografía es, con mucho, el grupo
general de técnicas más útil para la separación
La técnica de cromatografía en capa fina
de compuestos estrechamente relacionados en
(TLC) proporciona fácilmente información
una mezcla. En este caso, la separación se
cualitativa y, con una cuidadosa atención a los
efectúa por diferencias en la distribución de
detalles, es posible obtener datos cuantitativos. carboxilo y un grupo amino unidos al mismo
La cromatografía en capa fina es una técnica átomo de carbono (el carbono α). Se
utilizada para separar e identificar compuestos diferencian entre sí en sus cadenas laterales, o
de interés. Una placa de TLC se compone de grupos R, que varían en estructura, tamaño y
una fina capa de sílice adherida a vidrio o carga eléctrica. La interacción de los
aluminio como soporte. El gel de sílice actúa aminoácidos con la fase estacionaria como la
como fase estacionaria y la mezcla de sílice varía según sus grupos 'R'. El
disolventes actúa como fase móvil. En el aminoácido que interactúa fuertemente con la
sistema solvente ideal, los compuestos de sílice será transportado por el solvente a una
interés son solubles en diferentes grados. La pequeña distancia, mientras que el que tiene
separación resulta del equilibrio de partición menos interacción se moverá más lejos. Al
de los componentes en la mezcla. (Luisot P, ejecutar controles [compuestos conocidos] al
1982) mismo tiempo, es posible identificar los
En la forma más simple de la técnica, se aplica componentes de la mezcla.
una zona estrecha o punto de la mezcla de Dado que los aminoácidos son compuestos
muestra que se va a separar cerca de un incoloros, se usa ninhidrina para detectarlos.
extremo de la placa de TLC y se deja secar. Para identificar esto, después del revelado, la
Luego se coloca la tira o placa con este placa de TLC se rocía con reactivo de
extremo sumergido en la mezcla de solvente, ninhidrina y se seca en un horno a 105°C
cuidando que el punto/zona de muestra no durante aproximadamente 5 minutos. La
quede sumergido en el solvente. A medida que ninhidrina reacciona con los α-aminoácidos
el solvente se mueve hacia el otro extremo de que dan como resultado manchas de color
la tira, la mezcla de prueba se separa en varios púrpura [debido a la formación del complejo -
componentes. Esto se denomina desarrollo de púrpura de Rheuman] (Smith I, Feinberg JG,
placas de TLC. La separación depende de 1965).
varios factores; (a) solubilidad: cuanto más
soluble sea un compuesto en un solvente, más Materiales y Reactivos
rápido se moverá hacia arriba en la placa. (b)
atracciones entre el compuesto y la sílice, Reactivo Toxicidad
cuanto más interactúa el compuesto con la
Arginina Puede causar algunos
sílice, menos se mueve, (c) tamaño del efectos secundarios
como: dolor de
compuesto, cuanto más grande es el
estómago, hinchazón,
compuesto, más lento se mueve hacia arriba en diarrea y presión arterial
baja.
la placa. (Luisot P, 1982)
Glicina Causa: dolores
intestinales y
Los 20 aminoácidos comunes [aminoácidos abdominales, dolor de
estándar] son a-aminoácidos. Tienen un grupo
cabeza y confusión.
Leucina No tiene efectos
adversos en su uso.
Triptófano Puede causar algunos
efectos secundarios
como somnolencia, dolor
de estómago, vómitos,
diarrea, dolor de cabeza,
visión borrosa y otros.
Valina Puede ocasionar
alteraciones cutáneas,
hepáticas o desórdenes
del sistema nervioso.
Ninhidrina 0,2% en Nocivo en caso de
etanol ingestión. Provoca
irritación cutánea.
Provoca irritación
ocular grave, irritación
de las vías respiratorias.
Gel de sílice No es tóxico.
Materiales Cantidad
Capilares 7
Capa de muestra 1
Gel de sílice 1
Metodología
Resultados y Cálculos
Figura 1. Patrones y muestras de
aminoácidos.
solubles en agua y más solubles en el
disolvente llegarán más lejos (Ruíz, 2018).
Este análisis podemos aplicarlo a los diferentes
aminoácidos mostrados y su posición final en
la lámina. De acuerdo a lo mostrado en la
figura 2 podemos decir que la muestra 1
corresponde a un compuesto con los siguientes
aminoácidos: leucina, triptófano y valina.
Por su parte, la muestra 2 contiene los
siguientes aminoácidos: glicina, arginina y
valina.
Otro dato importante que podríamos sacar para
Figura 2. Cromatografía de aminoácidos. explicar estas relaciones es el factor de
retención (Rf) de cada aminoácido. A partir de
Muestra 1: Esta muestra contiene una la estructura química hay que relacionar el
mayor o menor valor de Rf con la mayor o
mezcla de arginina (c), glicina (g),
menor solubilidad en las fases estacionaria y
triptófano (f).
móvil (Jorrín, Abril, Bárcena; sf).
En base a esto podemos observar en los
Muestra 2: Esta muestra contiene una resultados, que los aminoácidos con un mayor
mezcla de arginina (c), glicina (g), valina desplazamiento obtuvieron un Rf mayor que
(d). los aminoácidos con menor desplazamiento.
Para poder contrastar todo lo descrito
𝑅𝑓 𝑎𝑟𝑔𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 = 𝐷𝑚/𝐷𝑓 = 3, 3 𝑐𝑚/ 6 𝑐𝑚 = 0. 55 anteriormente fue necesario el uso de un
𝑅𝑓 𝑙𝑒𝑢𝑐𝑖𝑛𝑎 = 𝐷𝑚/𝐷𝑓 = 2 𝑐𝑚/ 6 𝑐𝑚 = 0. 33 marcador que evidenciara los resultados
𝑅𝑓 𝑣𝑎𝑙𝑖𝑛𝑎 = 𝐷𝑚/𝐷𝑓 = 4 𝑐𝑚/ 6 𝑐𝑚 = 0. 67 obtenidos. La formación de color se toma
𝑅𝑓 𝑡𝑟𝑖𝑝𝑡ó𝑓𝑎𝑛𝑜 = 𝐷𝑚/𝐷𝑓 = 3, 7 𝑐𝑚/ 6 𝑐𝑚 = 0. 62 como resultado positivo e indica la presencia
𝑅𝑓 𝑔𝑙𝑖𝑐𝑖𝑛𝑎 = 𝐷𝑚/𝐷𝑓 = 0 𝑐𝑚/ 6 𝑐𝑚 = 0 de la sustancia, mientras que el no desarrollo
de color es indicativo de que no está presente.
De todos los métodos reseñados, el utilizado
fue el de la reacción con la ninhidrina. La
ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno)
reacciona con aminoácidos que tengan el
grupo amino libre, dando lugar a la formación
de amoniaco y anhídrido carbónico, con
reducción del reactivo (ninhidrina) a
hidrindantina. La hidrindantina reacciona a su
vez con el amoniaco y otra molécula de
Figura 3. Reacción entre la ninhidrina y
ninhidrina para dar un compuesto de adición
los aminoácidos.
doble que presenta una coloración
azul-púrpura, con la excepción de la prolina
Discusión de Resultados que da una coloración amarillenta (Jorrín,
Abril, Bárcena; sf).
El fundamento de este experimento fue que la Este mecanismo se puede observar en la figura
separación se realizó en función de la afinidad 3.
de los solutos con las dos fases, las más
solubles en agua se quedaron cerca del punto Conclusiones
donde se aplicó la muestra, y las menos
● La movilidad de los aminoácidos se ve
afectada por la polaridad; de igual
manera a los enlaces que forman y la
concentración de dicha estructura.
● Se logró determinar un buen
recorrido;y por ende, una mejor
interacción con el solvente por los
aminoácidos empleados para la
cromatografía (Valina, Glicina y
Triptófano) las cuales son
aminoácidos apolares.
Referencias bibliográficas
● Maracas, B. (2021). La Cromatografía en
Capa Fina.
https://www.iitg.ac.in/biotech/BTechProto
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%20Protocol.pdf
● Luisot P (1982). “Bioquímica
Estructural”, 2ª Ed. Editorial AC.
● Smith I, Feinberg JG (1965). “Paper &
Thin Layer Chromatography and
Electrophoresis”. Shandon Scientific
Company Ltd.
● Ruíz, L. (2018). Práctica No 6:
Separación de aminoácidos por
cromatografía en papel. Recuperado el
17/5/2023 de:
https://www.studocu.com/es-mx/documen
t/universidad-autonoma-de-aguascalientes
/bioquimica/practica-6-separacion-de-ami
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59101
● Jorrín, J; Abril, M; Bárcena, J. (sf).
Separación de aminoácidos por
cromatografía en capa fina y detección
mediante reacción con ninhidrina.
Recuperado el 17/5/2023 de:
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol
-mol/pdfs/11%20CROMATOGRAFOA%
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As.pdf
