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SEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA

RESUMEN

La cromatografía es una técnica de análisis químico cuyo objetivo es la separación de


sustancias puras en mezclas complejas, esta técnica depende del principio de adsorción
selectiva.

Debido a ciertas limitaciones que se presentan para la identificación de sustancias se hace


necesario recurrir a métodos más confiables tales como la cromatografía de papel.
En la cromatografía en papel, una muestra liquida (fase móvil) fluye por una tira vertical de
papel adsorbente (fase estacionaria), sobre lo cual se están depositando los componentes en
lugares específicos.

La cromatografía en papel puede ser desarrollada en el campo de bioquímica para la


separación de Aminoácidos, la determinación de proteínas y pigmentos.
El uso de la cromatografía está ampliamente extendido en el análisis de alimentos,
medicinas, sangre, productos petrolíferos y de fisión radiactivas.

Palabras clave: fase estacionaria, movilidad, solubilidad en las fases, solvente.

INTRODUCCIÓN

Es importante reconocer que la identificación de sustancias orgánicas ha despertado el


interés de los analistas debido a que esta actividad es muy eficaz, en el sentido de usar
técnicas conocidas y desarrollar nuevos métodos de análisis cada vez más rápidos y
eficientes.

Como fundamento la cromatografía es una técnica de separación de sustancias que afines


que tuvo sus primeros ensayos hechos por el botánico ruso Tswett en 1900. Aún, solamente
en 1906 que este investigador consiguió la separación de pigmentos de hojas. La técnica
iniciada por Tswett para la separación de sustancias coloreadas (cromos - color) también es
válida para sustancias incoloras, desde que haya un revelador

OBJETIVOS
 Capacitarnos para ejecutar una corrida cromatografía en
papel.
 Calcular el Rf, interpretar el cromatograma e identificar las
muestras

MARCO TEÓRICO

 Cromatografía

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas


complejas, la cual tiene aplicación para todas las ramas de la ciencia y la física. Es un
conjunto de técnicas basadas de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos
componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos
componentes.

TIPOS DE CROMATOGRAFÍA

Existen diferentes criterios de clasificación de la cromatografía:

Por la naturaleza de sus fases:

 Cromatografía líquido - líquido


 Cromatografía gas - líquido
 Cromatografía líquido - sólido
 Cromatografía gas - sólido.

Atendiendo al proceso químico-físico que va a protagonizar el proceso de separación:


siendo este el criterio más coherente de clasificación:

 Cromatografía de Adsorción (líquido - sólido o cromatografía de fases normales).


 Cromatografía de Reparto (o líquido - líquido), se basa en las características de
solubilidad relativa de los solutos entre la fase móvil y una fase estacionaria de un
líquido no polar. La fase líquida se impregna a un soporte inerte de sílice o, en el
caso de cromatografía de fase invertida, se une químicamente.
 Cromatografía de Intercambio iónico.
 Cromatografía de Exclusión.
 Con base en la naturaleza del soporte en el que se aloja la fase estacionaria:
 Cromatografía plana:
 Cromatografía en papel
 Cromatografía en capa fina (TLC)
 Cromatografía en columna:
 Cromatografía de gases (GC)
 Cromatografía líquida (LC)
 Cromatografía líquido - líquido
 Cromatografía sólido – líquido

Cromatografía en papel

La cromatografía es una técnica de separación de sustancias que se basa en las diferentes


velocidades con que son arrastradas cada una de ellas a través de un medio poroso por un
disolvente en movimiento.

A medida que el agua (el disolvente) va desplazándose por el papel de filtro (el medio
poroso), arrastra consigo los pigmentos que contiene la mancha de tinta. Como no todos
son arrastrados con la misma velocidad, al cabo de un rato se forman unas franjas de
colores que corresponden a los componentes de la tinta del rotulador.

MATERIALES Y EQUIPOS

 Papel de filtro (Whatman no. 1)


 Muestra (solución de aminoácidos
 Soluciones estándar de aminoácidos (0,1 M)
 Teomina
 Valina
 Lisina
 Mezcla problema
 Revelador: solución de ninhidrina al 0,1% en acetona
 Cámara cromatográfica
 Tubos capilares
 Estufa a 100C
 Nebulizador
PROCEDIMIENTO

CORTAR PAPEL

Trazar con lápiz al


Con auxilio de una Dejar secar en
grapadora dar la estufa
forma cilíndrica al
papel

Revelar con ninhidrina


Se introduce el papel y secar. Aparecerán
Marcar puntos
las manchas que
distintos donde se en el beaker hasta el
señalan la presencia
aplicara la muestra solvente llegue a su de los aminoácidos
punto máximo

Identificar los
Aplicar círculos de
Retirar el cilindro de aminoácidos de la
solución de aminoácidos
papel y marcar con lápiz muestra por
de 0,5 cm de diámetro
alcanzada por el cilindro comparación con los
usando tubos capilares
estándares y calcular los
Rfs.

RESULTADOS Y ANÁLISIS
La cromatografía de papel es un método de separación de sustancias. Se basa en dos
fases, fase móvil que es una capa de solvente orgánico que asciende por el papel, y la fase
estacionara que es el papel filtro la solución de ninhidrina al 0.1% no revela las posiciones
de los aminoácidos (treonina, valina, lisina y mezcla desconocida). Utilizada en la prueba
que se tornaron de color violeta.

La ninhidrina es un poderoso agente reactivo común, para visualizar las bandas de


aminoácidos por cromatografía, esta reacción con los aminoácidos y el colorante producen
un complejo de color purpura azulado. Todos los aminoácidos primarios forman el mismo
complejo químico tras su reacción con ninhidrina, estos lo podemos comparar en muchas
prácticas de laboratorio ya que los tres aminoácidos que utilizamos son primarios y
efectivamente al poco tiempo de rociar la inhibrida que contenía el papel los aminoácidos
toman una coloración purpura.

Las estructuras de los aminoácidos utilizados son:

TREONINA LISINA
VALINA

DISPOSICION RECORRIDA POR EL SOLVENTE = 4.3 cm

1.3 cm
TREONINA: RF = =0.28 cm
4.5 cm

2.4 cm
VALINA : RF = =0.53 cm
4.5 cm
0.7 cm
LISINA: RF = =0.15 cm
4.5 cm

0.4 cm
MUESTRA PROBLEMA: RF = =0.08 cm
4.5 cm

Estos valores obtenidos son muy variados debido a varias características debido a la
afinidad de la fase estacionaria y la fase móvil de cada compuesto, también algunas
características físicas y químicas de las moléculas, tales como la solubilidad, polaridad,
efecto de potencial de hidrogeno.
Analizando la polaridad, los aminoácidos que no ascienden demasiado serán de mayor
polaridad según nuestros resultados obtenidos fueron: la lisina y la muestra problema.
Mientras que los poco polares serán aquellos que recorren una mayor distancia en el papel
en nuestro caso la treonina y valina.

CONCLUSION

En este laboratorio nos capacitamos para ejecutar una corrida cromatografía en


papel, calculando el Rf, logrando interpretar la cromatografía e identificamos todas
las muestras que se utilizaron en este laboratorio.

REFEENCIAS
 http://www.textoscientificos.com7quimica /cromatografía
 Murray Robert k. Mays peter A. Granner daryl k. RODWELL VICTORW
Bioquímica de harper 14 edicion. Editorial manual moderno S.A de CV
mexico D.F santa fe de bogota pag 35-37

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