Difusión radial

de Mancini
Equipo 7:
• Avila Hernández Arantxa
• Faustino Morales Sayuri
• Fuentes Muñoz Tania Yared
 ¿qué es la Difusión radial?
La inmunodifusión radial es una técnica cuantitativa, basada en la precipitación en
gel de un sistema antígeno-anticuerpo monoespecífico. Para cuantificar un
antígeno dado, se incorpora en el gel una cierta cantidad de los anticuerpos
correspondientes, con lo que al aplicar una muestra en un hoyo y dejarla difundir
libremente, se forma un precipitado circular.
De aquí se deriva el nombre de esta técnica, ya que la difusión de la muestra y su
precipitación ocurren en forma radial. El diámetro del círculo o anillo de Precipitado
guarda una proporción con la cantidad de antígeno en la muestra.
De esta forma, se puede establecer una curva de referencia con cantidades
conocidas del antígeno (estándares o patrones de referencia) y así interpolar los
valores de muestras desconocidas.
La técnica de inmunodifusión radial puede
utilizarse también para cuantificar anticuerpos
contra un antígeno dado, incorporando dicho
antígeno en el gel. Sin embargo, esta
aplicación es menos común. Entre los usos
más frecuentes de este método se encuentran
la cuantificación de inmunoglobulinas séricas
(que en este caso actuarían como antígeno),
de algunos componentes del sistema de
complemento (C3, C4), y de algunas otras
proteínas plasmáticas.
 Tipos de métodos de la INMUNODIFUSIÓN RADIAL
Existen dos variantes principales del método de inmunodifusión radial:
• La variante descrita por Mancini (1965), se basa en una difusión completa
de la muestra (48-72hr) y establece una relación lineal entre la
concentración de antígeno y el cuadrado del diámetro del precipitado.
• La variante descrita por Fahey y McKelvey (1965), se basa en una difusión
parcial de la muestra (4-16 hr), y establece una relación lineal entre el
logaritmo de la concentración de antígeno y el diámetro del precipitado.
El método de difusión completa es más lento, pero proporciona mayor
exactitud y precisión, por lo que es el más utilizado
¿qué es la Difusión radial de MaNcini?
Es un tipo de prueba que utiliza un
soporte sólido, compuesto por diferentes
sustancias siendo la más común el agar o
la agarosa; en este gel existen una serie
de poros a través de los cuales la
sustancia que se coloca en ellos puede
difundir libremente.
Es usada para cuantificar los niveles de
proteína en una muestra. Se aplican
muestras a pocillos cilíndricos cortados
en un gel de agarosa que contiene un
anticuerpo monoespecífico respecto a la
proteína de interés.
DESCRIPCIÓN DE LA TÉCNICA
La Difusión radial es una técnica precipitado en gel.

En esta técnica el agar se mezcla con un antisuero

monoespecifico sobre un portaobjetos o placa Petri. A esta se
le hacen perforaciones cilíndricas, por estas perforaciones se
vierten volúmenes fijos soluciones de referencia de antígeno
para el cual el antisuero es específico y con soluciones o
muestras problemas. La difusión del Ag en el agar permite la
formación de anillos de precipitación, cuya área es
proporcional a la concentración inicial del Ag.

Al término de 48 a 72 horas de incubación en cámara húmeda

y con una temperatura constante, se leen los diámetros del
halo de precipitación. Se construye un gráfico o se obtiene la
ecuación de la recta con las concentraciones de referencias
versus área o diámetro del anillo.
 fundamento de la reacción
La formación de complejos antígeno-anticuerpo es el primer paso para eliminar
agentes infecciosos del cuerpo. Debido a que cada anticuerpo puede unirse a
más de un antígeno y cada antígeno puede estar unido por más de una molécula
de anticuerpo, pueden formarse complejos macromoleculares muy grandes.
Estos complejos forman precipitados que pueden ser eliminados del cuerpo a
través de diversos medios. Estos precipitados son también útiles para pruebas
de laboratorio y de diagnóstico.
Cuando los anticuerpos y antígenos se insertan en diferentes áreas de un gel de
agarosa, se difunden entre sí y forman bandas opacas de precipitado en la
interfaz de sus frentes de difusión. Las reacciones de precipitación de
anticuerpos y antígenos en geles de agarosa proporcionan un método de
análisis de las diversas reacciones anticuerpo-antígeno en un sistema.
 procedimiento
1. Fundir agarosa al 1,5% en solución salina tamponada con fosfato y enfriarla a
~60°, manteniéndola en un baño calibrado. Adicionar el volumen necesario del
antisuero (seleccionado a partir de pruebas preliminares) y mezclar. De inmediato,
chorrear la(s) placa(s), sobre una superficie nivelada. El volumen del gel debe
estandarizarse mediante pruebas preliminares del sistema, para que el grosor sea
constante.
2. Una vez gelificadas las placas, estabilizar el gel a 4°C por 60 min, en cámara
húmeda. Posteriormente, abrir los hoyos para muestras, con un sacabocados de
tamaño predeterminado y constante (entre 2-3 mm). Si se mantienen las placas en
bolsas herméticas y con preservante (ej. azida de sodio 0,02%) a 4°C, se pueden
conservar durante meses
3. Al momento de utilizar las placas, cargar las muestras y los estándares en
los hoyos, con una micropipeta de precisión (10 μl), preferiblemente por
duplicado. El volumen de las muestras debe ser constante y estandarizado.
Finalmente, dejar las placas en una cámara húmeda a temperatura ambiente,
sobre una superficie nivelada, por 48 hr (difusión completa).

4. Medir los diámetros de los anillos de precipitado, preferiblemente con un

visor de precisión, graduado a divisiones de 0,1 mm. La lectura se facilita
utilizando una iluminación indirecta del gel. Los precipitados ovales, causados
por desnivel o por mala técnica manual en la colocación de las muestras,
conducen a error.
5. Construir una curva de referencia para cada corrida de muestras, con al menos tres
estándares de concentración conocida. Graficar en papel milimétrico el diámetro elevado al
cuadrado (d2 ) en el eje Y, contra la concentración de los estándares del antígeno (ej., mg/dl)
en el eje X. Trazar la línea de mejor ajuste entre los puntos (notar que no sale del origen, sino
del valor que representa el diámetro del hoyo vacío elevado al cuadrado). En condiciones
óptimas, los puntos son prácticamente colineales, por lo que las desviaciones usualmente
sugieren una imprecisión instrumental o manual.
6.Interpolar las incógnitas. Si una muestra proporciona un diámetro mucho
mayor que el estándar más alto, debe diluirse y repetir la determinación
hasta que el valor sea interpolable (no es correcto extrapolar la curva de
referencia).
Nota: si la temperatura de la agarosa es demasiado alta al momento de
adicionar el antisuero, se desnaturalizarán los anticuerpos, afectando su
capacidad de reconocimiento.
 utilidad diagnóstica
Por su simplicidad, rapidez, y escaso requerimiento técnico continúa hoy siendo
el método de referencia y las alternativa de elección en pequeños y medianos
laboratorios.
● Ventajas: Es un método sencillo de realizar en laboratorio, los materiales y
reactivos que se utilizan son económicos.
● Desventajas: El desarrollo de la reacción es muy lento y la sensibilidad del
método es muy baja

Se utiliza para el análisis de cuantitativo y cualitativo de proteínas en suero y

otros líquidos corporales.
La aplicación clínica más importante es la cuantificación de inmunoglobulinas
séricas G, A Y M, los componentes C3, C4 del complemento, transferrina,
presentes en nuestras biológicas.
 REFERENCIAS
● De Costa, U., Facultad, R., Instituto, M., Picado, C., & Vigliotti, B. L. (s/f). Ucr.ac.cr. Recuperado el 9
de marzo de 2023, de
https://www.kerwa.ucr.ac.cr/bitstream/handle/10669/9244/2007_Manual_Metodos_Inmunologi
cos_completo_web.pdf?sequence=1&isAllowed=y
● Peralta, J. C. D. (2018, 7 agosto). REACCIONES DE PRECIPITACIÓN EN GEL. ppt descargar.
https://slideplayer.es/amp/13610807
● IPN. (s. f.). Metodos inmunologicos. https://es.slideshare.net/iltaitDes/metodos-inmunologicos-
199934249IPN. (s. f.). Metodos inmunologicos. https://es.slideshare.net/iltaitDes/
● Resino, S. (2021, 24 julio). Reacciones de precipitación. EMEI.
https://epidemiologiamolecular.com/reacciones-precipitacion/amp/
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