PRÁCTICA No.

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USO ADECUADO DE EQUIPO BÁSICO DE LABORATORIO
Laura Cecilia Morales Marroquin1 (202005938)
1Departamento de Bioquímica, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia,
Universidad de San Carlos de Guatemala, Carrera de (Químico Farmacéutico)

Pre-Laboratorio
1. ¿Qué pipeta(s) utilizaría para medir cada uno de los siguientes volúmenes con
mayor exactitud? 1 µL, 12 µL, 30 µL, 75 µL, 200 µL, 725.5 µL
1 µL = micropipeta P2
12 µL = micropipeta P20
30 µL = micropipeta P100
75 µL = micropipeta P100
200 µL = micropipeta P1000
725.5 µL = micropipeta P1000
2. ¿Qué sucedería si usted coloca incorrectamente el “tip” en la pipeta? Y ¿Por qué
razón no se debe aspirar una solución teniendo inclinada la pipeta?
Al colocar el tip de forma incorrecta puede llegar a causar que la pipeta gotee, en
micropipetas múltiples y de monocanal puede causar que el cierre no sea hermético
(Eppendorf, 2019).
Porque podríamos dañar el equipo o descalibrarla ocasionando que los resultados
sean erróneos (Dharan, 2002).
3. Investigue qué es el pipeteo inverso y para qué tipo de muestras o soluciones se
utiliza.
Es una técnica que permite la entrega de una cantidad medida de líquido por medio
de pipetas basadas en el desplazamiento del aire. El pipeteo inverso es más preciso
en la dosificación de pequeños volúmenes de líquidos que contienen proteínas y
soluciones biológicas (Eppendorf, 2019).
4. Busque un esquema del espectro electromagnético, identifique sus diferentes
regiones, su relación con la longitud de onda y la energía de la radiación que se
encuentra en cada región. ¿Qué regiones del espectro pueden analizarse utilizando
un espectrofotómetro?
 Región Longitud de onda Energía
Rayos gamma 10-11 – 10-14 1010
Rayos x 10-8 – 10-11 105
Ultravioleta 10-6 – 10-8 103
Visible 4x10-6 – 7x10-6 1
Infrarroja 10-3 – 10-5 10-3
Microondas 10-1 – 10-3 10-5
Ondas de radio 105 – 10-1 10-10
(Fontal, 2005).
Las regiones del ultravioleta y el visible (400-780 nm) (Díaz, Bárcena, Fernández,
Galván, Jorrín, Peinado, Toribio y Tunez, 2011).
5. ¿Cuáles son los principales componentes de un espectrofotómetro y cuáles son
sus funciones? Utilice un esquema para responder esta pregunta.

1)una fuente de radiación continua en las longitudes de onda que interesan; 2) un

monocromador para seleccionar una banda angosta de longitudes de onda del
espectro de la fuente; 3) una celda para la muestra; 4) un detector o transductor,
para convertir energía radiante en energía eléctrica, y 5) un instrumento para
interpretar la respuesta del detector (Gary, 2006)
6. ¿Qué es el espectro de absorción de una sustancia y qué relación tiene el
“barrido” con este término? ¿Por qué se utilizan las regiones de mayor absorbancia
para cuantificar dicha sustancia?
El espectro de absorción es una representación gráfica de la cantidad de luz que se
absorben en función de la longitud de onda. (García, 2018).
El barrido es la variación de la longitud de onda, necesario para la búsqueda de una
λ max donde el analito absorbe más luz (García, 2018).
7. Defina: Blanco y estándar en términos de espectrofotometría.
Blanco: Contiene todos los reactivos que se usan en la muestra, pero no el analito
(Gary, 2006)
Estándar: Disolución o material que contiene el analito a una concentración
conocida (Gary, 2006)

8. ¿Cómo se construye una curva de calibración en un análisis espectrofotométrico

y para qué sirve?
Para obtener una curva de calibrado de un compuesto se preparan soluciones de
diferentes concentraciones del mismo, determinándose para cada una de ellas el
valor de absorbancia a λmax. Estos valores de absorbancia se representan en el
eje de abscisas (eje de x) y los de concentración en el eje de ordenadas (eje de y).
Se observará que, a bajas concentraciones, el aumento de concentración se
corresponde con un incremento lineal en la absorbancia (Díaz, Bárcena, Fernández,
Galván, Jorrín, Peinado, Toribio y Tunez, 2011).
Una curva de calibración sirve para predecir la concentración del analito de
concentración desconocida de una muestra (Skoog, West, Holler y Croush, 2015).
9. Si una solución 100 mM de un analito “X” posee una absorbancia de 0.537 a una
longitud de onda específica para cuantificar este analito. ¿Cuál será la
concentración de una muestra desconocida que contiene este único analito la cual
posee una absorbancia de 0.658? (No olvide dejar constancia de su razonamiento
y cualquier procedimiento o cálculo que realice).
0.537/100 = 0.658/x
X= 100mM x 0.658/0.537= 122.53
La concentración es de 122.53 mM
10. ¿Cuál es el rango de absorbancia que un espectrofotómetro puede medir? ¿Es
posible obtener lecturas de absorbancia de 5.0? Explique su respuesta
El espectrofotómetro se comporta linealmente hasta absorbancias
aproximadamente iguales a 1.000 UA. Este instrumento no debería usarse para leer
absorbancias mayores a este valor ya que pierde sensibilidad de respuesta ante
aumentos en la concentración (Duymovich, Acheme, Sesini y Mazziotta, 2005).
Si es posible, ya que es una absorbancia menor a 1.000.

Referencias
Díaz, A., Bárcena, A., Fernández, E., Galván, A., Jorrín, J., Peinado, J., Toribio, F.,
y Tunez, I. (2004). Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación
colorimétrica de biomoléculas. Departamento de Bioquímica y Biología
Molecular.
Doria, G., Paz, P. y Hormanza, A. (2013). Estandarización de la difenilcarbazida
como indicador y acomplejante en la identificación de cromo hexavalente –
Cr (VI). Revista Producción + Limpia.8(2), 9-20.
Duymovich, C., Acheme, R., Sesini, S.y Mazziotta, D. (2005). Espectrofotómetros y
Fotocolorímetros Guía práctica de actualización. Acta Bioquímica Clínica
Latinoamericana, 39(4), 529-539.
Eppendorf. (2019). Procedimiento de comprobación estándar para sistemas de
dispensación manual. Alemania: Eppendorf.
https://www.eppendorf.com/productmedia/doc/es/15525_SOP/Eppendorf_Li
quid-Handling_SOP_Pipettes_Standard-operating-procedure-manual-
dispensing-systems.pdf.
Fontal B. (2005). El espectro electromagnético y sus aplicaciones (1a ed.). Escuela
Venezolana para la Enseñanza de la Química.
Dharan, M. (2002). Control de Calidad en los laboratorios clínicos (1a ed.). Reverté.
Garcia, R. (2018). Instrumentos que revolucionaron la química: la historia del
espectrofotómetro. Avances en quimica, 13(3), 79-82.
Gary, C. (2006). Química analítica (6a. ed.). MGraw-Hill.
Skoog, D., West, D., Holler, F., y Crouch, S. (2015). Fundamentos de química
analítica (9a ed.). Cengage Learning.