Fecha de Entrega: 22 de Septiembre del 2014

Nombres del Equipo:

Hernndez Alcaraz Anglica
Lpez Rodrguez Isaac
Olvera Plata Alfredo
Equipo: 02

Prctica: Ejercicio experimental 5. Determinar la

cantidad de C4 en el plasma humano.
Introduccin:
La inmunodifusin radial (IDR) es una tcnica que puede determinar
cuantitativamente la concentracin de un antgeno. Es una tcnica sensible
que es usada clnicamente para detectar niveles de protenas plasmticas.
Principio: Un anticuerpo es incorporado en agarosa fundida, la cual es vertida
dentro de una caja de Petri la cual se deja solidificar. Se cortan pequeos pozos
dentro de la agarosa y estos son llenados con concentraciones conocidas de
antgeno correspondientes al anticuerpo, con el objeto de construir una curva
de calibracin. Las muestras desconocidas se colocan dentro de los pozos.
Los antgenos en solucin difundirn hacia fuera del pozo en un patrn circular
rodeando al pozo. El anticuerpo est presente en exceso y la difusin del
antgeno continuar hasta que se forme un precipitado antgeno-anticuerpo en
forma de anillo estable. Habr complejo Ag-Ac en toda la zona circundante al
pozo dentro de la lnea de precipitina. En esta lnea es donde est presente el
mayor nmero de complejos, ya que en ese punto el antgeno y el anticuerpo
estn en proporciones iguales. Esta es conocida como la zona de equivalencia.
Generalmente toma de 24 a 48 horas para que ocurra la difusin ptima y la
precipitacin se haga evidente. Para cada antgeno, se formar una
precipitacin final en anillo de cierto dimetro. De las concentraciones
conocidas estndar, se traza una curva de calibracin, colocando en los ejes:
concentracin de antgeno vrs mediciones de dimetro cuadrado de los anillos.
A partir de esta curva de calibracin lineal, la presencia y cantidad de antgeno
en las muestras desconocidas pueden ser determinadas.
Esta prueba se puede utilizar para aquellas sustancias que se encuentren en
orden de mg/mL, el anticuerpo incorporado determina la sensibilidad de la
tcnica.Este mtodo se aplica en inmunologa clnica para la cuantificacin de
antgenos, fundamentalmente de las fracciones plasmticas humanas, como
son la albmina srica humana, las inmunoglobulinas G, A y M, los
componentes C3 y C4 del complemento, factores de coagulacin, etc.

Objetivo.
Cuantificar la protena C4 del complemento en una muestra de suero problema.
Resultados.
Tabla 1. Concentraciones utilizadas de los estndares y halos de precipitacin obtenidos en el ensayo.

Muestra
1
2
3
Problema 3

Concentracin
(mg/dL)
100
200
400
-

Dimetro del halo de precipitacin

(cm)
2
2.1
2.4
1.8

Curva Patrn
2.6
2.4

f(x) = 0x + 1.85

2.2
2
Dimetro del halo (cm)

1.8
1.6
1.4
1.2
1
50

100

150

200

250

300

350

Concentracin (mg/dL)

Grfico 1. Curva patrn en base a la concentracin de los estndares.

Se tiene que:

Concentracin=

Dimetro1.85 1.81.85
=
=35 mg/dL
0.0014
0.0014

Anlisis de Resultados.

400

450

Se obtiene un valor negativo en la concentracin. Esto puede indicar varias

cosas; la primera, que la muestra no contena suficiente concentracin para ser
cuantificada, tambin est el hecho de que la curva patrn no abarca el
dimetro que se obtuvo para la muestra y por ltimo, pudo haber sido un error
de apreciacin a la hora de medir el halo. Otro factor a considerar es a la hora
de llenar los pozos, si stos no se rellenaban de forma correcta, entonces la
muestra no difundira de manera adecuada.
Conclusiones.
Con base en los resultados obtenidos se puede concluir que no se pudo
determinar la concentracin de la protena C4 del complemento por el mtodo
de RID, se atribuye principalmente a un error durante la experimentacin.
Bibliografa.
Kindt, Goldsby y Osborne. (2014). Inmunologa de Kuby. Sptima
Edicin. Edit. Mc Graw Hill Interamericana, Mxico. Pginas: 656-657
Bennington, N.C. (2000). Diccionario Enciclopdico del Laboratorio
Clnico. Primera Edicin. Edit. Mdica Panamericana, Espaa. Pginas:
754-757