proteína (p. ej., un cofactor enzimático).
Los tres tipos de regulación
_. ~:t'asas de serina hidrolizan los enlaces peptídicos en los sustra­
. ;<"icos empleando las cadenas laterales de Ser-195, His-57 y Asp­
grupos catalíticos. Los aminoácidos de los cuales depende la
~ ::dad en el bolsillo de unión del sitio de unión de las proteasas de
n los que determinan qué residuo en el sustrato de la proteína
__ :uyo enlace peptídico será hidrolizado y dan cuenta de las dife­
la especificidad de la tripsina, la quimotripsina y la elastasa.
;:"?C uencia, las enzimas, emplean la catálisis ácido-base media­
: ~s cadenas laterales de uno o más aminoácidos, tales como los
, ' m idazol en la His-57 de las proteasas de serina, para catalizar
-:iones. La dependencia del pH de la protonación de los grupos
- ;JS (pK,J, con frecuencia se refleja en el perfil de tasa de pH de
;:!ad enzimática.
~ l1J.l as enzimas, pequeñas moléculas no poLipeptídicas o iones,
cofactores o grupos prostéticos, pueden unirse al sitio activo
- .?Cñar un papel esencial en la catálisis enzimática. Los peque­
; ?QS prostéticos orgánicos presentes en las enzimas también son
coenzimas; las vitaminas que no pueden ser sintetizadas por
~ s de los animales superiores, funcionan como coenzimas o se
- -ara generarlas.
-..timas de una vía común se localizan dentro de compartimentos
-tó específicos y pueden además estar asociadas como dominios
- . ¡;roteína monomérica, subunidades de una proteína multimé­
. - mponentes de una proteína compleja ensamblados en un an­
:Dm ún (véase la E g. 3-28).
Regulación de la función de las proteínas
_ .-¡.ai'oría de los procesos celulares no son independientes entre
. :~JJ ren a una velocidad constante. Las actividades de todas las
.;...1~ y biomoléculas están reguladas para integrar sus funcio­
- ~ el óptimo desempeño para la supervivencia. Por ejemplo,
dad catalítica de las enzimas está regulada de modo tal que
- ­ ....ad de producto de reacción es la suficiente para satisfacer
~~ .Jerimientos de la célula. Como resultado de ello, las concen­
- -:'.S de los sustratos y los productos en el estado estacionario
;:¡.--: dependiendo de las condiciones celulares. La regulación de
-' :"'iDas no enzimáticas -la apertura o cierre de los canales de
-- ::;::;;.."Irana o el ensamblaje de un complejo macromolecular, por
.: -=~ también es esencial.
eral, hay tres formas de regular la actividad enzimática. En
_ ';'lr, las células pueden aumentar o disminuir el nivel de una
o::: el estado estacionario al alterar su velocidad de síntesis,
-=-:: de degradación, o ambas. En segundo término, las célu­
: ~ iar la actividad intrínseca, de un modo independien­
~ad de la proteína. Por medio de interacciones covalentes
~ _, pueden cambiar la afinidad por la unión al sustrato o
'lile la proteína se encuentra en la conformación activa
-. a la forma inactiva. En tercer lugar, puede haber un
n calización o la concentración de la proteína dentro de
diana de la actividad proteica (p. ej., un sustrato enzi­
alguna otra molécula requerida para la actividad de la
desempeñan papeles y funciones esenciales en las células vivas. En
esta sección analizaremos primero los mecanismos para la regulación
de la cantidad de una proteína y luego pasaremos a las interacciones
covalentes y no covalentes que regulan la actividad de la proteína.
La síntesis y degradación regulada de las proteínas
es una propiedad fundamental de las células
La velocidad de síntesis de las proteínas está determinada por la veloci­
dad a la cual el DNA se convierte a mRNA (transcripción), la cantidad
de mRNA activo en la célula en el estado estacionario y la velocidad a la
cual el mR.t'\JA se convierte a proteínas recién sintetizadas (traducción).
Estas vías importantes se describen en detalle en el Capítulo 4 .
El espectro de vida de las proteínas intracelulares varía desde
unos pocos minutos, para las cielinas de la mitosis, que ayudan a re­
gular el paso a través de la etapa de la división celular de este proceso
(véase Cap. 19), hasta toda la vida de un organismo, para las proteínas
del cristalino ocular. El espectro vital de una proteína está controlado,
principalmente, por la degradación regulada de las proteínas.
Hay dos papeles especialmente importantes para la degradación
de las proteínas. En primer lugar, la degradación elimina las proteí­
nas que son poten cialmente tóxicas, están inadecuadamente plega­
das o ensambladas o están dañadas -lo cual incluye a los productos
de los genes mutados y las proteínas dañadas por los metabolitos
químicamente activos de las células o el estrés (p. ej., el choque tér­
mico)-. A pesar de la existencia del plegamiento proteico mediado
por chaperonas, algunas proteínas recién sintetizadas se degradan
rápidamente porque están plegadas de modo incorrecto. Esto puede
ocurrir por una falla en la participación de las chaperonas necesa­
rias en el momento adecuado para guiar su plegamiento o por su
ensamblaje defectuoso en complejos. La mayoría del resto de las
proteínas se degradan con mayor lentitud; la degradación es de al­
rededor 1-2% por hora, en las células de mamífero. En segundo tér­
mino, la destrucción controlada de proteínas, por lo demás norma­
les, proporciona un mecanismo poderoso para mantener los niveles
adecuados de estas moléculas y de sus actividades y para permitir
cambios rápidos de sus niveles y ayudar a las células a responder a
las condiciones cambiantes.
Las células eucariontes tienen varias vías para la degradación
de las proteínas. Una de las principales es la degradación median­
te las enzimas de los lisosomas, que son orgánulos limitados por
membrana, cuyo interior acídico (pH - 4,5) está lleno de enzimas
hidrolíticas del huésped. La degradación en el interior de los lisoso­
mas está dirigida principalmente contra los orgánulos envejecidos o
dañados de la célula -mediante un proceso conocido como autofa­
gia- (véase el Cap . 14 ) y hacia las proteínas extracelulares captadas
por la célula. Los lisosomas serán analizados extensamente en capí­
tulos posteriores. Aquí nos centraremos en otra vía importante: la
degradación de las proteínas en el citoplasma por los proteasomas,
que puede constituir hasta el 90% de la degradación proteica en las
células de los mamíferos.
El proteasoma es una máquina molecular usada
pa ra la degradación de las proteínas
Los proteasornas son máquinas macro moleculares muy grandes que se
usan para degradar proteínas e influencian muchas funciones celulares
3.4 Regulación de la función de las proteínas 85
 ~ ANIMACIÓN GENERAL: El proteosoma

(b) FIGURA 3-29 Proteólisis mediada por ubicuitina y

proteasomas. (a) Izquierda' el proteosoma 265 tiene un a
E1 E2 Proteína diana estructura d línd rica con un casquete 195 (azu l) en cada
Ub AMP I I citosólica extremo de un núcleo 205, que consiste en cuatro anillos
C=O E2 E1

~ 1;'"~:~~~;co
+ ATP + pp¡ heptaméricos apilados (- 11 0 Ade diámetro x 160 Ade
I
E1 '-- J ~ Ub '-- J' ~ largo), cada uno de los cuales contiene o bien subuni­
dades a (a nillos externos) o bien subunidades (3 (anillos
r -_
D fJ
_ _ __ __ _ _ _ __ -----,UTb:O fJ internos) (a marillo). Derecho. corte tra nsversal del núcleo
205 que muestra las cámaras internas. La proteólisis de las
El enzima acti vadora de la ubicuitina
= proteínas marcadas por la ubicuitina tiene lugar dentro de
E2 enzima conjugadora de la ubicuitina
= -NH ~- Ub la cámara interna de l núcleo for mado por los anillos (3. (b)
E3 = ligasa de ubicuitina Las proteínas son ma rcadas para la degradación proteasó­
mica med ian te poliubicui inac ión. La enzima E1 se activa
Ub = ubicuitina por la unión de une moléc ula de ubicu itina (Ub) (paso D
¡ Jy I ego transfiere su mo lécula Ub a un residuo de cisteína
D ¡ Pasos 1, 2, 3 presente en E2 (paso El) La ligasa de ubicuitina (E3) tran s­
(a)
¡ (n veces) fiere la molécula de Ub presente en la cadena lateral-NH2
de una I/sina de la E2 en una proteína marcada, formando
un enlace isopeptídico (paso Dl 5e añade n moléculas
-Ub-Ub-Ub n+ 1
adidonales de Ub a la proteína marcada, modificada por la
Ub por medio de en laces isopeptídicos a la Ub previamente
añadida por repetic ión de los pasos RO, formando una
ATP ~ mi cadena de poliubicUi ina (paso D, La proteina marcada
poliubi cuitinilada es reconocida por el casquete del proteo­
ADP~l soma que emplea desubicuitinasas para retirar los grupos
Ub y la hidrólisis de ATP para llevar a cabo el desplegam ien­
Liberación Reconocimiento to y la transferencia de la proteína desdoblada dentro de la
Ub cámara de proteólisis de la zona central, a partir de la cual
Ub Ub Ub
Ub Ub luego se liberan fragmentos de digestión del péptido más
Ub
~ corto (paso OJ.War:e r'J¡j" .v. I!a"".,e'~ery(ols.. 1998,CeI1 98J 57.
ccnes[.2 de \. BaUf" i$ er mod.fkDda de M. Bochtier y rols" 19 , AnIl.Rev.
ATP) ------ Desplegamiento B'ophYl B:om-o/.lrru,r. 28.<95-317)

Péptidos

\ ~
---- Escisión

Descarga

diferentes, incluidos el ciclo celular (véase el Cap. 1':) ), la transcripción,
la reparación del DNA (véase el Cap. '¡ ), la muerte celular programada
o apoptosis (véase el Ca p. 21 ), el reconocimiento y respuesta a las in­
fecciones por organismos extraños (véase el Cap, 23 ) y la eliminación
de proteínas plegadas de modo incorrecto. En una célula de rnamífero
típica hay aproximadamente 30 000 proteasornas.
Los proteasomas consisten en - 50 subunidades y tienen una masa
de 2-2,4 x lO' Da. Tienen una zona central catalítica, en forma de ba­
rril, llamada proteasoma 205 (en la que S es una unidad Svedberg so­
bre la base de las propiedades de sedimentación de la partícula y es
proporcional a su tamaño), que tiene aproximadamente 14,8 nm de
altura y 11,3 nm de diámetro. Unidos a los extremos de este núcleo se
encuentran uno o dos complejos llamados casquetes 19S (Fig. 3-29<1 )
que regulan la actividad catalítica de la zona central 20S. Cuando este
núcleo 20S y uno de los casquetes, o ambos, se combinan, se conoce
como el complejo 26S, si bien el que contiene ambos casquetes tiene
tamaño mayor (30S). Un casquete 19S tiene entre 16 y 18 subunidades
proteicas, 6 de las cuales pueden hidrolizar ATP (es decir, son ATPa­
sas del tipo AAA) con el fin de proporcionar la energía necesaria para
desplegar los sustratos proteicos y transferir selectivamente la energía
de ellos a la cámara interna del núcleo catalítico del proteasoma. Los
estudios genéticos hechos en levaduras han mostrado que las células
no pueden sobrevivir sin proteasomas funcionales, lo que da cuenta de
su importancia. Más aún, la actividad adecuada de los proteasomas es
de importancia tal que las células gastarán hasta el 30% de la energía
necesaria en sintetizar una proteína para degradarla en un proteasoma.
El núcleo catalítico 20S de un proteasoma está formado por dos ani­
Uos internos cada uno de los cuales consta de siete subunidades ~, con
tres sitios activos proteolíticos por anillo, que delimitan la cámara inter­
na de - 1,7 nm de diámetro, con forma de barril, y dos anillos externos
cada uno con siete sub unidades a., que controlan el acceso del sustrato
(Fig, J-29a ), Los proteasomas pueden degradar la mayoría de las proteí­
nas por com pleto, a raíz de que los tres sitios activos en cada anillo de
subunidades ~pueden separar residuos hidrofóbicos, acídicos o básicos.
Los sustratos polipeptídicos deben entrar a la cámara a través de una
abertura regulada de - 1,3 nm de diámetro, que se encuentra en el cen­

86 CAPITULO 3 • Estructura y función de las proteínas

 ~~ los anillos de subunidades a, más externos. En el proteasoma 265,
~~ ~rtu ra de este orificio, que es estrecho y con frecuencia solo permi­
- en trada de proteínas no plegadas, está controlada por las ATPasas
tes en el casquete 19S, que también participan en la unión y el
~nb la miento selectivo del sustrato ( Fig. 3-29b, abajo a la derecha).
;:>ro ductos peptídicos cortos de la digestión proteasómica (2-24 re­
__ ,,~ de longitud) salen de la cámara y son adicionalmente degradados
- ::¡p idez por las pepdidasas lisosomales del citosol, convirtiéndose
- '. m ente en aminoácidos individuales ("libres"). Un investigador ha
- .;neado diciendo que los proteasomas son las "salas de ejecución ce­
-;:>" en las cuales las proteínas "mueren por miles de cortes':
Los inhibidores de la función de los proteasomas pueden em­
plearse terapéuticamente. Dada la importancia global de los pro­
m as para las células, su inhibición completa y permanente provo­
e:, muerte celular. Sin embargo, su inhibición parcial durante
-' !"'"\'alos breves se introdujo como un enfoque para la quimioterapia
~ á.n cer. Para sobrevivir y crecer, las células necesitan normalmente
=tividad intensa de una proteína reguladora llamada NFkB (véase el
6) así como de otras proteínas similares "pro supervivencia". A su
. • 3 NFkB puede operar completamente y promover la supervivencia
- cuando su inhibidor, el IkB, está separado y es degradado por los
!~a Somas (véase el Cap. 16). La inhibición parcial de la actividad de
?Toteasomas por una molécula pequeña de un fármaco inhibidor
como resultado el aumento de los niveles de IkB y, en consecuencia,
-:1.>Jl1inución de la actividad de la NFkB (es decir, la pérdida de su
..-idad pro supervivencia). En consecuencia, las células mueren por
: ~rytosis. Dado que algunos tipos de células tumorales son más sensi­
~ a la eliminación por los inhibidores de los proteasomas que las
..las normales, la administración controlada de los inhibidores de los
~easomas a niveles que matan las células cancerosas pero no las nor­
, mostró ser una terapia efectiva para al menos un tipo de cáncer
.-::.:, el mieloma múltiple. •
La ubicuitina marca a las proteínas citosólicas
fa su degradación en los proteasomas
- proteasomas degradan rápidamente solo aquellas proteínas que
-en defectos o están programadas para ser eliminadas, deben po­
distinguir entre las proteínas que necesitan degradarse y las que no
:"quieren. Las células marcan las proteínas que deberían ser degra­
.!as, uniendo covalentemente a ellas una cadena lineal de múltiples
_. -:> ias de un polipéptido de 76 residuos llamado ubicuitina, que está
-"v conservado desde las levaduras hasta los seres humanos. Esta "cola
_ poliubicuitina" sirve como un "beso de la muerte" celular que marca
proteínas para su destrucción en los proteasomas. La adición de
: : u itina (T'ig. 3-29 b) implica tres pasos distintos:
~ activación de la enzima activadora de la ubicuitina (El) por la adi­
-, de una molécula de ubicuitina, reacción que requiere ATP.
• :..a transferencia de esta molécula de ubicuitina a un residuo de cis­
':!.a en la enzima que conjuga ubicuitina (E2).
~ formación de un enlace covalente entre el grupo carboxilo de la
~aa C-terminal 76 de la ubicuitina unida a la E2 y el grupo amino de
~ ! d ena lateral de un residuo de lisina en la proteína diana , reacción
cataLizada por la ¡igasa ubicuitina-proteína (E3). Este tipo de enlace se
Llama enlace isopeptídico porque une covalentemente un grupo amino
de una cadena lateral, más que un grupo ami no a, al grupo carboxilo.
Las reacciones posteriores de las ligasas unen covalentemente la glicina
C-terminal a una ubicuitina adicional por medio de un enlace isopép­
tido a la cadena lateral de la lisina 48, de la ubicuitina adicionada pre­
viamente, para generar una cadena de poliubicuitina unida en forma
covalente a la proteína efectora.
Después de la adición de al menos cuatro ubicuitinas a la cadena
de poliubicuitina, el casquete regulador 19S del proteasoma 26S (en
ocasiones con la ayuda de proteínas accesorias) reconoce las proteí­
nas marcadas con la poliubicuitina y las despliega y transporta al
interior del proteasoma para su degradación (véase la Fig. 3-29b ). A
medida que el sustrato poliubicuitinado se despliega y pasa a la parte
central del proteasoma, enzimas llamadas desubicuitinasas (Dubs)
hidrolizan los enlaces entre las ubicuitinas individuales y entre la
proteína efectora y la ubicuitina, reciclando las ubicuitinas para ci­
clos adicionales de modificación de proteínas (véase la Fig. 3-2%).
El análisis de las secuencias del genoma humano indica la presencia
de - 90 Dubs, de los cuales aproximadamente el 80% emplea cisteí­
na en una tríada ca talítica similar a las proteasas de serina descritas
previamente. En algunas Dubs, el cinc es un participante clave de las
reacciones catalíticas.
Especificidad de la degradación El marcado de proteínas específicas
para la degradación proteasómica se logra principalmente por medio
de la especificidad de sustrato de la ligasa E3. Como un testimonio de
su importancia, hay más de 600 genes de ligasa de ubicuitina predi­
chos en el genoma humano. Las muchas ligasas E3 de las células de los
mamíferos aseguran que pueda modificarse, cuando fuera necesario,
la ampl ia variedad de proteínas que requerirán ser poliubicuitinadas.
Algunas ligasas E3 están unidas a chaperonas que reconocen proteí­
nas desplegadas o mal plegadas; por ejemplo, la ligasa E3 CHIP es una
co-chaperona para la Hsp70. t.stas y otras proteínas (co chaperonas,
factores escolta, adaptadores ) pueden mediar la poliubicuitinación
catalizada por la ligasa E3 de estas proteínas disfuncionales, que no
pueden volver a plegarse en forma adecuada rápidamente, y su entre­
ga a los proteasomas para la degradación. En estos casos, el sistema
proteasoma-ubicuitinación-chaperona opera concertadamente para
el control de calidad de las proteínas.
Además del control de calidad, el sistema proteasoma-ubicuitina
puede emplearse para regular la actividad de importantes proteínas
celulares. Ejemplo de ello es la degradación regulada de proteínas
llamadas ciclinas, que controlan el ciclo celular (véase el Cap. 1'l ).
Las ciclinas contienen la secuencia interna Arg-X-X-Leu-Gli-X-lle­
Gli-Asp/Asn (X puede ser cualquier aminoácido), reconocida por
complejos enzimáticos ubicuitinantes específicos. En un momento
específico del ciclo celular, cada cictina es fosforilada por una cielina
cinasa. Se piensa que esta fosforilación provoca un cambio de con­
formación que expone la secuencia de reconocimiento a las enzimas
ubicuitinantes, lo que conduce a la poliubicuitinación y la degrada­
ción proteaosómica.
Otras funciones de la ubicuitina y de las moléculas relacionadas
con la ubicuitina Hay varios parientes cercanos de la ubicuitina que
emplean mecanismos similares dependientes de El, E2 y E3 para la
activación y transferencia a sustratos aceptores. Estas modificaciones
3.4 Regulación de la función de las proteínas 87
 La rotura o fragmentación proteolítica activa
irreversiblemente algunas proteínas o las inactiva
A diferencia de la fosforilación y la adición de ubicuitina, que son reversi­
bles, la activación o inactivación de la función proteica por rotura o frag­
mentación proteolítica es un mecanismo irreversible de regulación de la
actividad proteica. Por ejemplo, muchas hormonas polipeptídicas como la
insulina se sintetizan como precursores más largos y, antes de la secreción
desde la célu la, parte de sus enlaces peptídicos deben hidrolizarse para que
se plieguen adecuadamente. En algunos casos, u n precursor único largo
polipeptídico, una prohormona, puede fragmentarse a varias hormonas
activas distintas. Para evitar que las proteasas de serina pancreática digie­
ran inadecuadamente proteínas antes de que lleguen al intestino delgado,
se sintetizan como zimógenos, enzimas precursoras inactivas. La rotura de
un enlace peptídico cerca del e>..1:remo N-terminal del tripsinógeno (el zi­
mógeno de tri psi na), por una proteasa altamente específica del intestino
delgado, genera W1 nuevo residuo N-terminal (Ile-16 ) cuyos grupos a mino
pueden formar un enlace iónico con la cadena lateral del ácido carboxili­
ca de un ácido aspártico interno. Esto provoca un cambio de conforma­
ción que abre el sitio de unión al sustrato, activando la enzima. La tripsina
activa, luego puede activar al tripsinógeno, el quimotripsinógeno y otros
zimógenos. Cascadas de proteasas semejantes pero más elaboradas (una
proteasa que activa precursores inactivos de otras) que pueden amplificar
una señal inicial, desempeñan funciones importantes en varios sistemas,
tales como la cascada de coagulación de la sangre y el sistema del comple­
mento (véase el Cap. 23 ). La importancia de regular cuidadosamente estos
sistemas queda clara -la coagulación inapropiada puede provocar coágulos
fatales en el sistema circulatorio mientras que la coagulación insuficiente
llevaría a hemorragias sin control-.
Un tipo raro e inusual de procesamiento proteolítico, llamado Quto­
corte y empalme de proteínas ocurre en las bacterias y algunos eucariontes.
Este proceso es análogo a la edición de una película. Un segmento interno
de un polipéptido se retira y los extremos de los polipéptidos se vuelven a
unir (se ligan ). A diferencia de lo que ocurre con otras formas de procesa­
miento proteolítico, el autocone y empalme de las proteínas es un proceso
autocatalítico que avanza por sí mismo, sin la participación de otras enzi­
mas. El péptido escindido parece autoeliminarse de la proteína mediante
un mecanismo semejante al que se emplea en el procesamiento de ciertas
moléculas de RNA (véase el Cap. R). En las células de los vertebrados, el
procesamiento de algunas proteínas incluye la autosegmentación, pero el
paso de unión posterior no existe. Una proteína de este tipo es la Hedge­
hog, una molécula de señalización unida a la membrana que resulta crítica
para una diversidad de procesos del desarrollo (véase el Cap. 16).
La regulación de orden superior incluye el control
de la localización y concentración de las proteínas
Todos los mecanismos de regulación descritos hasta aquí afectan a una
proteína localmente en su sitio de acción, activándola o desactivándola.
Sin embargo, el normal funcionamiento de una célula requiere además
la segregación de las proteínas a compartimentos específicos como las
mitocondrias, el núcleo y los lisosomas. Con respecto a las enzimas,
la compartamentalización no solo proporciona una oportunidad de
controlar la llegada de un sustrato o la salida de un producto, sino que
permite además que reacciones que compiten entre sí tengan lugar si­
multáneamente en distintas partes de la célula. Describimos los meca­
nismos que emplean las células para dirigir varias proteínas a diferentes
compartimentos en los Capítulos 13 y P .
92 CAPITULO 3 • Estructura y función de las proteínas
CONCEPTOS CLAVE de la Sección 3 .3
Regulación de la función de las proteínas
• Las proteínas pueden estar reguladas a nivel de la síntesis proteica, de la
degradación o de la actividad intrinseca de las proteínas, por medio de inte­
racciones no covalentes o covalentes.
• El espectro vital de las proteínas intracelulares está determinado en gran
medida por su susceptibilidad a la degradación proteolítica.
uchas proteínas están marcadas para ser destruidas con una etiqueta po­
liubicuitína por acción de las ligasas de ubicuitina, y luego se degradan den­
tro de los proteasomas, grandes complejos cilíndricos con múltiples sitios
activos de proteasa en sus cámaras interiores (véase la Fig. 3-29).
• La adición de ubicuitina a las proteínas es reversible, debido a la actividad de
las enzimas desubicui tinantes.
• En el alosterismo, la unión no covalente de una molécula de ligando, el
efector alostérico, induce un cambio de conformación que altera la actividad
de una proteína o su afinidad por otros ligandos. El efector alostérico puede
ser de la misma estructura O de estructura distinta a las de los otros ligandos
cuya unión afecta. El efector alostérico puede ser activador o inhibidor.
• En las proteínas multiméricas como la hemoglobina, que unen múltiples
moléculas de ligando idénticas (p. ej., oxígeno), la unión de una molécula de
este tipo puede awnentar o disminuir la afinidad o disminuir la dificultad de
unión por las moléculas de ligando adicionales. Este tipo de alosterismo se
conoce como cooperatividad (véase la Fig.3-30).
• Varios mecanismos alostéricos actúan como interruptores, encendiendo o
apagando la actividad de las proteinas en fonna reversible.
• Hay dos clases de proteínas intracelulares interruptoras que actúan sobre
una variedad de procesos celulares: 1) las proteínas que unen Ca l+ (p. ej.,
calmoludina) y 2) los miembros de la superfamilia de la GTPasa (p. ej., Ras),
que ciclan entre las formas activas unidas a GTP e inactivas unidas a GDP
(véase la Fig. 3-32).
• La fosforilación y desfosfOlilación de los grupos hidroxilo de las cadenas
laterales de los residuos de serina, treonina o tirosina, por acción de las pro­
teincinasas y las fosfatasas proporciona una regulación reversible de tipo en­
cendido/apagado en numerosas proteínas (Fig. 3-33).
• Las variaciones en la natmaleza de la unión covalente de la ubicuitina a las
proteínas (monoubicuitinación, multiubicuitinación y poliubicuitinación
que implican una diversidad de enlaces entre los monómeros de ubicuitina)
están involucradas en una amplia variedad de funciones celulares distintas
de la degradación mediada por proteasomas, como los cambios en la loca.l.i­
zación o actividad de las proteínas (véase la Fig. 3-34).
• Muchos tipos de regulación covalente y no covalente son reversibles, pero
algunas formas de regulación como la escisión proteolítica, son irreversibles.
• La regulación de orden superior incluye la compaJ1imentación de las pro­
teinas y el control de su concentración.

r.n el DNA eucarionte, cada gen que codifica proteínas se transcribe
rartir de su propio promotor. Con frecuencia, el transcrito primario
cial contiene regiones no codifican tes (intrones) interpuestas entre
' ,;jones codifican tes (exones).
'-Os transcriptos primarios eucariontes deben sufrir procesamientos
R.,"'IA para obtener RNA funcionales. Durante el procesamiento, los
: ,emos de casi todos los transcriptos primarios de los genes que co­
- ~ :an proteínas se modifican por la adición de un casquete 5' y una
.... de poli(A). Los transcriptos de los genes que contienen intrones
-en corte y empalme, la eliminación de los intrones y la unión de los
es (véase la Fig. 4- 15),
- .., dominios individuales de las proteínas multidominio que se encuen­
- en los eucariontes superiores, con frecuencia son codificados por
.es individuales o por un pequeño número de exones. Con frecuen­
uistintas isoFormas de estas proteínas se expresan en tipos celulares
. -~ :ili cos, como resultado del corte y empalme alternativo de los exones.
3 La decodificación de los mRNA por los tRNA
0' ­ -e:n el DNA almacena la información para la síntesis proteica y el
_ :\ lleva las instrucciones codificadas en el DNA, la mayoría de las
,jades biológicas son realizadas por las proteínas. Como vimos
.- apítul o 3, el orden lineal de los aminoácidos de cada proteina
-llina su estructura tridimensional y su actividad. Por esta razón,
-....m blado de los aminoácidos en el orden correcto, tal como está
:. :ddo en el DNA, resulta crítico para la producción de proteínas
C}¡lales y así para el adecuado funcionamiento de las células y de
= ,mismos.
_.:'. traducción es el proceso completo mediante el cual la secuencia
tidos de un mRNA se usa como molde para unir los aminoá­
~ una cadena polipeptídica en el orden correcto (véase la Fig.
• ::",'0 ~). En las células eucariontes, la síntesis proteica ocurre en el
,:na, lugar en que los tres tipos de moléculas de RNA se reúnen
- ~mpeñar funciones distintas pero cooperativas (Fig. 4- ) -):
'..\ mensajero (mRNA) lleva la información genética transcrip­
-- - del DNA en forma lineal. El mRNA se lee en conjuntos de se­
~ e tres nucleótidos, llamadas codones, cada uno de los cuales
- ~_ tm aminoácido en particular.
' A de transferencia (tRNA) es la clave para descifrar los codo­
-- R..'\'A. Cada tipo de aminoácido tiene su propio subconjunto
que unen el aminoácido y lo llevan al extremo creciente de
..l polipeptídica donde el siguiente codón del mRNA lo re­
~:-'¡A adecuado, con su aminoácido unido, es seleccionado
'.$0, porque cada molécula de tRNA específica contiene una
i c tres nucleótidos, un anticodón, que se aparea con las ba­
:i>-1ón complementario presente en el mRNA.
,-ibosómico (rRNA) se asocia con un conjunto de proteínas
. ribosomas. Estas estructuras complejas que se mue­
. :. lo largo de una molécula de mRNA, catalizan el en­
"minoácidos en las cadenas polipeptídicas. También
'-ias proteínas accesorias, necesarias para la síntesis
aa7- tRNA 7
entrante H
I
H2N-C-R
I 7
H C===o
I I
H-C' ......-- N-C-R6 O
\ ,{ \ I
C~O H C=O
\ I
O O
tRNA4
saliente
mRNA
5·. . . ! ! 3'
'-,---' '-,---' i
Codón Codón
aa, aa2 aa3
Movimiento del ribosoma - - - -.....
FIGURA 4-17 Los tres papeles del RNA en la síntesis proteica. El RNA
mensajero (mRNA) se traduce a proteínas por la acc ión conjunta del RNA
de transfe re ncia (tRNA) y el ri bosoma, que está compuesto por numerosas
proteínas, y tres (en las bacterias) o cuatro (en los eucariontes) moléculas de
RNA ribosómico (rRNA) (no se muestran). Nótese el apareamiento de bases
e ntre los anticodones de! tRNA y los codones complementarios en el mRNA.
La formación de un enlace peptídico entre el grupo amino N en el aa-tRNA en·
trante y el e carboxi-termina l en la cadena de proteína crecien te (en verde) está
ca talizado por uno de los rRNA. aa = am inoácido; R= grupo lateral. (Adap;ado de A.
J. Gr,¡'f¡t.. . s y coís., 1999, f/.odem Ger.-flic Al?a'ysis. W H. Freeman and Company.l
proteica. Los ribosomas están compuestos por una subunidad grande
y una pequeña, cada una de las cuales contiene su propia molécula o
moléculas de rRNA .
Estos tres tipos de RNA participan en la síntesis de proteínas en
todos los organismos. En esta sección, nos centraremos en la decodi­
ficación del mRNA por los tRNA adaptadores y de qué manera la es­
tructura de cada uno de estos RNA se relaciona con su tarea específica.
De qué manera operan en conjunto con el rRNA, los ribo somas y otros
factores proteicos para sintetizar proteínas está detallado en la sección
siguiente. Dado que la traducción es esencial para la síntesis proteica,
los dos procesos comúnmente se refieren como intercambiables. Sin
embargo, las cadenas polipeptídicas resultantes de la traducción atra­
viesan un plegamiento postraduccional y con frecuencia otros cambios
(p. ej., modificaciones químicas, asociación con otras cadenas) nece­
sarios para la producción de proteínas maduras funcionales (Cap. 3) .
El RNA mensajero lleva información desde el DNA
en un código genético de tres letras
Como se mencionó previamente, el código genético empleado por las
células es un código de triple tes, en el que cada secuencia de tres nucleó­
tidos, o codón, es "leída" a partir de un punto de iniciación especificado
en el mRNA. De los 64 codones posibles en el código genético, 61 espe­
cifican aminoácidos individuales y tres son codones de terminación. El
Cuadro 4-1 muestra que la mayoría de los aminoácidos está codificada
4.3 La decodificación de los mRNA por los tRNA 131
 Cuadro 4-1 • ti •• • • •

Segunda posición

u e A G

Phe Ser Tyr Cys

Phe Ser Tyr Cys

U
Leu Ser Tyr Terminación

Leu Ser Terminació n Trp

Leu Pro Terminación Arg

ro ~
c: Leu Pro His Arg ri
·E ro
....
C Q¡

....W Leu Pro His Arg -o

o
!!!. '"
;:¡.
c:
-o Leu (Met) * Pro Gln Arg o:::J
:ºo
Vl
~
a. !le Thr GLn Ser ....
ro
ro ....
W !le Thr Asn Ser
3
E ::J
A ~
~
He Thr Asn Arg

Met (Iniciación) Thr Lys Arg

Val Ala Lys Gly

Val Ala Asp Gly

G
Val Ala Asp Gly

Val (Met )* Ala Glu Gly

~ Aue es el cedó n iniciador mas común; GUG habitualment e codifica ¡..'! J ra \";¡li nJ y CCG para Ic-ucina, pero en rJr¡¡s ocaSio ne5 estos cadanes pu eden codifi: ­
CM para mClionioa para inici ar una c..ldena de pro iein<e>.

por más de un codón. Solo dos -la m etio nina y el triptófano- tienen pecifica la secuencia lineal precisa de aminoácidos en una cadena polipep­
un único codón; en el otro extrem o, la leucina, la serina y la arginina tídica, y también señala dónde se inicia y termina la síntesis de la cadena.
son especificados cada uno por seis codones diferentes. Los diferentes Dado que el código genético es un código de tripletes que no se
codones para un aminoácido dado se denominan sinónimos. El código superponen, sin divisio nes entre ellos, un mRNA particular, en teor ía,
en sí se llama degenerado, lo que significa que un am inoácido en parti­ debería traducirse en tres marcos de lect ura distintos. De hecho, algu­
cular puede ser especificado por múltiples codones. nos mRNA mostraron contener información que se superpone y puede
La síntesis de todas las caden as polipeptídicas de una célula eucarion­ traducirse en diferentes marcos de lectura, dando como resultado di­
te o procarionte comienza con el aminoácido metionina. En las bacterias ferentes polipép tid os (Fig. -l - I R). La gran mayoría de mRl'iA , sin em­
se em plea una forma especializada de la m etionín a con un grupo formiJo bargo, puede leerse en solo un marco, porque los codones de detención
unido a su grupo amino. En la mayoría de los mRl'iA, el codón de inicia­ que se encuentran en los otros dos posibles marcos de lect ura terminan
ción (i niciador) que especi1i.ca esta metionina ami no term in al es el AUG. la traducción an tes de qu e se produzca una pro teí na funcion al. En muy
En unos pocos mRNA bacterianos, el codón iniciador es GUG y ocasio­ raras ocasiones ocurre otra configuración codifican te inusual por un
nalmente se usa como codón iniciador para metionina en los eucariontes corrimiento del marco de lectura. En este caso, la m aq uin ar ia de síntesis
CUG. Los tres codones UAA, UGA y UAG no especi1i.can aminoácidos proteica puede leer cua tro nucleótidos como un aminoácido y lu ego
sino que constituyen codones de detención (terminación) que marcan el ex­ continuar leyendo tripletes, o puede retro ceder la base y leer todos los
tremo carboxilo de las cadenas polipeptídicas de la mayoría de las células. tripletes que se continúan en el nuevo marco, hasta la terminació n de la
La secuencia de codones que va entre un codón de iniciación específico cadena. Se conoce solo una docena de casos de este tipo.
hasta un codón de terminación se llama un marco de lectura. Esta dispo­ El significado de cada codón es el mismo en la mayoría de los
sición lineal precisa de ribonucleótidos en grupos de tres, en el mRl\!A, es­ organ ismos conocidos -un fuerte argumento en favor de que la vida

132 CAPíTULO 4 • Meca nismo s genéticos moleculares

 Marco 1
- -,GCU " UGU " UUA " CGA , AU U,AA- mRNA
~~~
Polipéptido 1
Marco 2
:. -G,CU U " GUU UAC" GAA " UUA ,A - mRNA
Polipéptido 2
Marco 3
--GCUUG UUU ACG AAU UAA- mRNA
Polipéptido 3
; .1 4- 18 Múltiples marcos de lectura en una secuencia de mRNA.
_::Clón de la secue ncia de mRNA mostrad a comien za en :res sik)s
" ~ " , ba diferentes (q ue no se muestran). entonces son pos ibles ¡res
" 'ectu ra superpuestos, En es le eJecnp lo, los codo ne, estar co '¡:dos
.,.? ~ d erecha en el marco de l mea io y do s bases 2 la derec ha e'l el
- I.·e fi naliza en un codón de detención. Co mo res ult ado, la 'l1is n'¡ a
e - ucleótidos especifica diferentes amin oácic os durante la rra ­
.~ ,;"'1 05 regiones de secuencia que se tradu=en en dos de los tres
. uro posibles son rar as, hay eje mpl:Js ta mo en procariome s C0 "10
..-: '1, en especial, en sus viru s, e n los que la mi sma seevencia se
: r 'llRI'<A alternativos expresados a partir de la misma reg iór elel
::~...¡a se lee en un marco de lec tura en un mRNA y en un marco
allvQ en otro, Hay incluso pocos casos en los qu e 13 r'li,ma
se lee en los tres marcos de lectura pos ibles,
. -:- J evolucionó solo una vez-o De hecho, el código genético
- -:1" en el C u adro 4- 1 se conoce como código universal. Sin
~ ~ <1 d igo genético difiere en unos pocos codones en mu­
J I ias, en los protozoarios ciliados y en Acetabularia, una
- -r~·lLa r. Como se muestra en el Clhldro -1-2 , la mayoría de
, im plican la lectura de codones normales de termina­
;uesen aminoácidos, no un intercambio de un aminoá­
.. Estas excepciones al código universal, probablemente
---o llos evolutivos tardíos; es decir, en ningún momento el
tij o de manera inmutable, aunque no se toleraron cam­
.: n3 vez que se comenzó a funcionar un código general
~ .:'e la evolución.
: J .t-2
Código universal
Terminación
Leu
Terminación
Terminación
":""...~ nucl eares de los organismos que aparecen en la lista y en los genes de las mitocondrias según se indican .
. 1992, Microbio/. Re\'. 56:229.
La estructura plegada de los tRNA promueve sus
funciones de decodificación
La traducción o decodificación del lenguaje de cuatro nucleótidos del
DNA y el mRNA al lenguaje de 20 aminoácidos de las proteínas re­
quiere tRt\fA y enzimas llamadas aminoacil-tRNA sintetasas, Para par­
ticipar en la síntesis de proteínas, la molécula de tRNA debe ligarse
químicamente a un aminoácido particular mediante un enlace de alta
energía formando un aminoacil-tRNA ( Fig. ·1-19). El anticodón del
tRNA se aparea luego con las bases de un codón del mRNA, de modo
tal que el aminoácido activado pueda añadirse a la cadena polipeptí­
dica creciente (véase la Fig . -i-I- ),
Se han identificado alrededor de 30-40 tRNA diferentes en las bac­
terias, y hasta 50-100 en las células animales y vegetales. Así, el número
de tRNA de la mayoría de las células es mayor que el número de ami­
noácidos empleados en la síntesis de proteínas, y también difiere del
número de codones de aminoácidos del código genético (61). En con­
secuencia, muchos aminoácidos tienen más de un tRNA al que pueden
unirse (lo cual explica que pueda haber más tRNA que aminoácidos);
además, muchos tRNA pueden aparearse con más de un codón (lo cual
explica por qué puede haber más codones que tRNA) .
La función de las moléculas de tRNA que tienen 70-80 nucleóti­
dos de largo depende de sus estructuras tridimensionales precisas. En
solución, todas las moléculas de tRNA se pliegan en una estructura
similar de tallo y bucle, lo cual se asemeja a una hoja de trébol cuando
se lo transporta a dos dimensiones ( r ig. .J.-.2lJa ), Los cuatro tallos son
doble hélices cortas estabilizadas por apareamiento de bases de Wat­
son-Crick; tres de los cuatro tallos tienen bucles que contienen siete
u ocho bases en sus extremos, mientras que el resto del tallo que no
forma bucles, contiene los extremos 3' y 5' de la cadena, Los tres nu­
cleótidos que constituyen el anticodón se encuentran localizados en el
medio del bucle central, en una posición accesible que facilita el apa­
reamiento de bases codón-anticodón. En todos los tRNA, el extremo
3' del tallo aceptar del aminoacido que no participa en el bucle tiene
la secuencia CCA que, en la mayoría de los casos, se añade después de
que la síntesis y el procesamiento del tRNA están completos. Algunas
bases, en la mayoría de los tRNA, también se modifican después de la
transcripción, creando nucleótidos no estándar como la inosina, di­
hidrouridina y la seudouridina. Como veremos brevemente, algunas
de estas bases modificadas tienen papeles importantes conocidos en
Código inusual * Se encuentra en
Trp Mycoplasma, Spiroplasma, mitocondrias de muchas especies
Thr Las mitocondrias de las levaduras
Gln Acetabularia, Tetrahymena, Paramecium, etc.
Cys Euplotes
4.3 La decodificación de los mRNA por los tRNA 133
 Amin oácido (phe) Enlace éster
H o de alta energía
. -_ _H
I
_ ,_N-¡:-C-OH
n H
I
o/
I
H,N - C -C-o H,N-C-C-O
H
I
o
11

I
6 OH
I
11
Unión de la
Phe al tRNAPhe 6
¿H, fJ
Phe-tRNA Phe se
une al codón UUU 6
¿H, I
Resultado neto:
la Phe es
seleccionada

/\)1 • • por su codón

ATP AMP
+ pp¡
I
Aminoacil-tRNA AAA AAA 5_AAA
__
sintetasa especí­ tRNA específico Aminoacil -tRNA 3'
fica para Phe para Phe (tRNA Phe ) mRNA

FIGURA 4-19 Decodificación de la secuencia de ácidos nucleicos a la
secuencia de aminoácidos. El proceso pa ra la traducc ión de las secuencias
de ác idos nucleicos del mR NA a secuencias de aminoácidos de las proteínas
involucra dos pasos. Paso il una aminoacil-tRNA sintetasa se acopla en primer
térm ino a un aminoácido específico por medio de un enlace éster de alta
energ ía (en am2nllo) a un 2' o 3' hidroxilo de la adenosina termina len el tRNA
correspondiente. Paso 1'1: una sec ue ncia de tres bases en el tRNA (elan ticodón)
se apa rea luego por la s bases con un codón presente en el mRNAque especi­
fica el amlnoácico unido. Si oc urre un error en cualquier paso, el aminoácido
incorrecto puede incorporarse a una cadena poli peptíd ica. Phe = fenilalani na.

(a) 3' la sín tesis pro teica . Vista en tres dimensio nes, la molécula plegada de
A tRl\lA tiene forma de L, en la qu e el bucle con el an ticodón y el tallo
@ ~ dihidro uridina aceptor forman los extremos de los dos brazos (Fig. 4-20b ).
CD ~ in os ina
(El = ribotimidina Tall o aceptor Entre los codones y los anticodones con frec uencia
® = seudourídina ocu rre el apareamiento de bases no estándar
m = grupo metilo
Si fuera imperativo el apareamiento pe rfecto de bases Watson-Crick
entre los codones y los anticodones, las cél ulas deberían con tener
al menos 61 tipos diferentes de tRNA, uno para cada codón que es­
pecifica un aminoácido. Sin embargo, como se indicó previamente,
muchas célul as co ntienen menos de 61 tRNA. La explicación para
el menor nú me ro, radica en la capacid ad de un único anticodó n de
tRNA de reconocer más de un codón, pero no necesariamente cada
codón que cor respon da a un aminoácido dado. Este reconocim ien to
variable más amplio puede ocu rri r por el apareamiento 110 estándar entre las
bases de la así lIa mada posición de balanceo: es decir, la tercera base
(3') en un codón de mRNA y la primera base correspondiente (5') en
: Anticodón su anticodón de tRN A.
La primera y segunda bases de un codón casi siempre fo rman pa­
res de bases es tándar de Watson-Crick y las tercera y segu nda bases,
2 1
respectivamente, del an ticodón correspondi en te, pero pueden ocurrir
,---~~~~--- ,
(b) interacciones no estándar en la cuarta posición, entre las bases en la
f"'. . .
Bucle T'I'CG Tall o aceptor

3' FIGURA 4-20 Estructura de los tRNA. (a) Si bien la secuencia de nucleótidos
exacta varia entre los ¡RNA, todos se pliegan en tallos de cuatro pares de bases
y tres bucles. La secu er cia CCA en el ex remo 3' también está presente en todos
los R\lA. La unión de un aminoácido al A3'da un a'1linoacil-tRNA. Alg unos de
los residuos A, C, G Y Use modifican postranscripcionalmente en la mayoría de
los t R~ .ll, (véase la clave). La c ihidrouridlna (D) casi siempre está prese nte en el
bucle D; de modo similar, la ribotimidina (T) y la seudouridina N') casi siempre
están presen tes en el bucle T'l'CG. El ¡RNAde la alanina de las levaduras, que se
reOéesenta aq f. contiene tan- bién otras bases modificadas. El triplete que se
encue1tra en el extremo de bucle del anticodón se apa rea por sus bases con el
codón correspc ndleme en el mRNA. (b) iVodelo tridimens ional de la es truc tura
general de todos los tR A. Nótese la forma de Lde la molécula . (Pa rte taJ. véaSf
.'.I. ~:; 1:, ) ( C'} 1965, 31.. ¿,net'. 147 '4ó2. Pa1lé ~b~ ,aja¡::tJ::I3 d-e J. A ,"\'n z y D ""oras, 1~9' . T,ends Blochem.
oa 22- ' ,

134 CAPITULO 4· Mecanismos genéticos moleculares

 tRNA tRt'\fA que contienen inosina se emplean mucho en la traducción de los
3' codones sinónimos que especifican un único aminoácido. Por ejemplo,
cuatro de los seis codones para la leucina (eUA, eue, euu y UUA)
son reconocidos por el mismo tRNA con el anticodón 3'-GAI-S'; la
inosina en la posición de balanceo forma pares de bases no estándar
Si estas bases se encuentran en la
pr imera posición, o posición de balanceo, con la tercera base de los cuatro codones. En el caso del codón UUA,
del anticodón también se forma un par no estándar G·U entre la posición 3 del anti­
codón y la posición 1 del codón.
32 e
12 G e I entonces el tRNA puede Los aminoácidos se activan cuando se unen
5' mRNA 3' A reconocer los codones
U en el mRNA que tienen en forma covalente a los tRNA
estas bases en la
tercera posición El reconocimiento del codón o de los codones que especifican un ami­
noácido dado por un tRNA en particular es, de hecho, el segundo paso
Si estas bases están en la tercera
posición, o posición de balanceo, en la decodificación del mensaj e genético. El primer paso, la unión del
5' mRNA 3' de un codón de mRNA aminoácido apropiado a un tRNA, es catalizado por una aminoacil­
12 CI A I GI U tRNA-sintetasa. eada una de las 20 diferentes sintetasas reconoce un
aminoácido y todos sus tRNA compatibles o afines. Estas enzimas aco­
32 GI U e A
1 I U G
entonces el codón puede
ser reconocido por un tRNA pIadas unen un aminoácido al hidroxilo libre 2' o 3' de la adenosina,
I que tenga estas bases en en el 3' terminal de las moléculas de tRNA mediante una reacción que
la primera posición del requiere ATP. En esta reacción, el aminoácido es unido al tRNA me­
anticodón
diante un enlace de alta energía, por lo que se dice que está activado. La
energía de este enlace, posteriormente, es la que impulsa la formación
5'
del enlace peptídico que mantiene unidos a los aminoácidos adyacen­
3' tes de la cadena polipeptídica creciente. El equilibrio de la reacción de
tRNA aminoacilación es impulsado adicionalmente hacia la activación del
aminoácido por la hidrólisis del enlace fosfoanhidrido de alta energía
IGURA 4-21 Apareamiento de bases no estándar en la posición de
del pirofosfato liberado (véase la hg. ·H'» ),
ba lanceo. La base en la tercera posición (de balanceo) de un codón de mRNA
Las aminoacil-tRNA sintetasas reconocen sus tRNA afines al inte­
l lrecuencia form a un par de bases no estándar con la base en la primera
osición (o posición de balanceo) del anticodón del tRNA, El apareamiento de ractuar principalmente con el bucle del anticodón y el tallo aceptar, si
¿lanceo permite que el tRNA reconozca más de un codón de mRNA (arriba); bien, en algunos casos, las interacciones con otras regiones de un tRNA
''''iprocamente, permite que el codón sea reconocido por más de un tipo de también contribuyen al reconocimiento. Además, las bases específi­
';"'A (abajo), aunque cada tRNA llevará el mismo aminoácido, Nótese que un cas en los tRNA incorrectos, que son de estructura similar a un tRNA
A con I (inosina) en la posición de balanceo puede "leer" (aparearse con)
afín, inhibirán la carga del tRNA incorrecto. Así, el reconocimiento del
'~ codones distintos, y un tRNA con G o U en la posición de balanceo puede
tRNA correcto depende de ambas, las interacciones positivas y la au­
'\"' dos codones, Aunque A es en teoría posib le en la posición de balanceo del
.:;--ícodón, casi nunca se la encuentra en la na turaleza, sencia de interacciones negativas, Aun así, dado que algunos aminoá­
cidos son de estructura muy sin1ilar, las aminoacil-tRNA sintetasas en
ocasiones comenten errores. Estos, sin embargo, se corrigen por acción
de las propias enzimas que tienen una actividad de verificación de lectu­
ra que controla la corrección en su bolsillo de unión de aminoácidos. Si
::-osición de balanceo. Es de particular importancia el par de bases G·U, se ha unido un aminoácido incorrecto al tRNA, la sintetasa unida cata­
yue estructuralmente se adecua casi tan bien como el par estándar G·c. liza la elin1inación del aminoácido desde el tRNA. Esta función crucial
j, un anticodón dado en el tRNA con G en la primera posición (ba­ ayuda a garantizar que el tRNA entregue el aminoácido correcto a la
.anceo) puede formar un par de bases con los dos codones correspon­ maquinaria de síntesis proteica. La tasa global de errores de traducción
'entes que tengan una pirimidina (e o U) en la tercera posición (Fig. en E. coli es muy baja, aproximadamente 1 por cada 50 000 codones,
2 l ). Por ejemplo, los codones de fenilanalina UUU y uue (5' ---7 3') evidencia tanto de la fidelidad del reconocimiento del tRNA como de
n reconocidos ambos por el tRNA que tiene como anticodón GAA la importancia de la verificación de la lectura por las aminoacil-tRNA
:: --') 3'), De hecho, cualquiera dos anticodones del tipo NNPir (N = sintetasas.
:ualquier base; Pir = pirimidina) codifica un aminoácido único y es
1ecodificado por un tRNA único, con una G en la primera posición
balanceo) del anticodón.
Si bien en raras ocasiones se encuentra adenina en la posición de
alanceo del anticodón, muchos tRNA de plantas y animales contienen CONCEPTOS CLAVE de la Sección 4.3
asina (1), un producto desaminado de la adenina, en esta posición. La decodificación del mRNA por los tRNA
, inosina puede formar pares de bases no estándar con A, e y U. Un
'A con la inosina en la posición de balanceo, puede así reconocer La información genética se transcribe del DNA al mRNA en forma de
'odones correspondientes en el mRNA que tengan A, e o U en la un código de tripletes superpuestos degenerado.
~ : ~a posición (de balanceo) (véase la Fig. ·1-11 ). Por esta razón, los

4.3 La decodificación de los mRNA po r los tRNA 135

• Cada aminoácido está codificado por una o más secuencias de tres
nucleótidos (codones) del mRNA. Cada codón especifica un aminoáci­
do, pero la mayoría de los aminoácidos están codificados por múltiples
codones (véase el Cuadro 4- 1).
· El codón AUG para la metionina es el codón de iniciación más común
que especifica el aminoácido en el extremo NH,-terminal de una cade­
na proteica. Tres codones (UAA, UAG, UGA) funcionan como codones
de terminación y no especifican aminoácidos.
• Un marco de lectura, la secuencia ininterrumpida de codones del
mRNA desde un codón de iniciación específico hasta un codón de
terminación, se traduce en la secuencia lineal de aminoácidos de una
cadena polipeptídica.
· La decodificación de la secuencia de nucleótidos del mRNA a la se­
cuencia de aminoácidos de las proteínas depende de los tRt'\fA y de las
aminoacil-tRNA sintetasas.
• Todos los tRNA tienen estructura tridimensional semejante, que in­
cluye un brazo aceptor para la unión de un aminoácido específico y un
tallo-bucle con una secuencia de anticodón de tres bases en sus extre­
mos (véase la r ig. 4-20). El anticodón puede aparear sus bases con su
codón correspondiente en el mRNA.
• Dadas las interacciones no estándar, un tRNA puede aparear sus bases
con más de un codón del mRt'\fA; recíprocamente, un codón particular
puede aparearse por sus bases con múltiples tRNA. Sin embargo, en
cada caso solo el aminoácido adecuado se insertará en la cadena poli­
peptídica creciente.
• Cada una de las 20 aminoacil-tRNA sintetasas reconoce un único ami­
noácido y lo une de manera covalente a un tRNA afín, formando un
aminoacil-tRNA (véase la Fig. 4-19 ). Esta reacción activa el aminoácido,
de modo que puede participar en la formación del enlace peptídico.
4.4 Síntesis escalonada de las proteínas
en los ribosomas
Las secciones previas han presentado dos de los principales partici­
pantes en la síntesis proteica -el mRNA y el tRNA aminoacilado. Aquí,
describimos por primera vez el tercer jugador clave en la síntesis de
proteínas - el ribosoma que contiene rRNA- antes de hacer un detalle
de cómo estos tres componentes se unen para llevar a cabo los eventos
bioquímicos que conducen a la formación de las cadenas polipeptídi­
cas en los ribosomas. De modo similar a la transcripción, el complejo
proceso de la traducción puede dividirse en tres etapas -la iniciación, la
elongación y la terminación-, que consideraremos de manera ordena­
da. Centraremos nuestra descripción sobre la traducción en las células
eucariontes, aunque el mecanismo de la traducción es fundamental­
mente el mismo en todas las células.
los ribosomas son máquinas de síntesis proteica
Si los muchos componentes que participan en la traducción de] mRNA
debiesen interactuar libres en solución, la probabilidad de que ocurrie­
ran colisiones simultáneas sería tan baja que la tasa de polimerización de
los aminoácidos sería también muy baja. La eficiencia de la traducción
aumenta, en gran medida, por la unión del mRNA y los aminoacil-tRNA
136 CAPíTULO 4 • Mecanismos genéticos moleculares
individuales dentro de un ribosoma. El ribosoma, el complejo celular
con mayor abundancia de RNA y proteínas, dirige el alargamiento de
un polipéptido a una tasa de entre tres y cinco aminoácidos adicionados
por segundo. Por lo tanto, se sintetizan pequeñas proteínas de 100-200
aminoácidos en un minuto o menos. Por otra parte, tarda entre dos y tres
horas sintetizar la proteína más grande conocida, la titina , presente en el
músculo, que contiene alrededor de 30 000 residuos de aminoácidos. La
máquina celular que lleva a cabo esta tarea debe ser precisa y persistente.
Con ayuda del microscopio electrónico, los ribosomas se descu­
brieron como pequeñas partículas individuales, ricas en RNA presentes
en las células, que secretan grandes cantidades de proteínas. Sin embar­
go, su papel en la síntesis proteica no se identificó hasta que se obtuvie­
ron preparados razonablemente puros de ribosomas. Los experimentos
in vitro, con radiomarcaje de preparados de este tipo, mostraron que
los aminoácidos radiactivos se incorporaban en primer lugar en las ca­
denas polipeptídicas crecientes asociadas con los ribosomas, antes de
aparecer en las cadenas terminadas.
Si bien hay diferencias entre los ribosomas procariontes yeucarion­
tes, las grandes similitudes estructurales y funcionales entre los ribo­
somas de todas las especies reflejan un origen evolutivo común de la
mayoría de los constituyentes básicos de las células vivas. Un ribosoma
está compuesto por tres (en las bacterias) o cuatro (en los eucariontes)
moléculas distintas de rRNA y hasta 83 proteínas, organizados en una
subunidad grande y una subunidad pequeña (rig. 1-- 22). Las subunida­
des ribosómicas y las moléculas de rRNA se designan comúnmente en
unidades Svedberg (S), una medida de la velocidad de sedimentación
de las macromoléculas centrifugadas en condiciones estándar -esencial­
mente una medida de su tamaño-o La subunidad ribosómica pequeña
contiene una única molécula de rRNA, conocida como rRNA peque­
ño. La subunidad grande contiene una molécula de rRNA grande y una
molécula de rRNA SS, más una molécula adicional de rRNA 5,8S en
los vertebrados. Las longitudes de las moléculas de rRNA, la cantidad
de proteínas en cada subunidad y, en consecuencia, los tamaños de las
subunidades difieren entre las células bacterianas y euc~riontes. El ri­
bosoma ensamblado es de 70S en las bacterias y 80S en los vertebrados.
Actualmente se conocen las secuencias de los rRNA pequeño y
grande de varios miles de organismos. Aunque las secuencias pri­
marias de nucleótidos de estos rRNA varían considerablemente, las
mismas partes de cada tipo de rRNA, en teoría, pueden formar tallos­
bucles con bases aparead~s, que generarían una estructura tridimen­
sional similar para cada rRNA en todos los organismos. Las estruc­
turas tridimensionales de los rRNA bacterianos se han determinado
por cristalografía de rayos X para las subunidades aisladas 50S y 305,
Ypara los ribosomas completos 70S ( Fig. -1--23 ). Las múltiples proteí­
nas ribosómicas, mucho más pequeñas en casi todo, están asociadas
con los rRNA de superficie. Si bien el número de moléculas proteicas
de los ribosomas en gran medida excede el número de moléculas de
RNA , éste constituye aprox.imadamente el 60% de la masa de un ribo­
soma. Los sitios en los que los tRNA se unen a los ribosomas se cono­
cen como sitio A , sitio P y sitio E. Como veremos en breve, el tRNA se
mueve entre estos sitios a medida que se desarrolla la síntesis protei­
ca. Las estructuras cristalinas del ribosoma 80S de las levaduras, una
subunidad 40S de un protozoario y la microscopia crioelectrónica de
los ribosomas de plantas se han descrito hace poco tiempo. General­
mente, son similares a los ribosomas bacterianos, pero aprox.imada­
mente el 50% más grandes por las inserciones específicas, presentes
en los eucariontes, de segmentos de RNA en regiones de los rRNA
bacterianos, así como por la presencia de un número más grande de
 Ribosomas
rRNA Proteínas Subunidades ensamblados

~ + Total: 31

>-
;,
23S 5S
(2900 rNTs) (120 rNT) 50S
~
~ 16S
+ Total: 21 ~

(1 500 rNT)

,. 28S~ ;,8S + Total: 50 ~

:1 28S : 5,8S 5S
> (4 800 rNT, 160 rNT) (120 rNT)
.::

~
~

+ Total: 33
'"
~
;.u
18S 80S
(1 900 rNT) 40S

; 'GURA 4-22 Componentes de los ribosomas procariontes y eucarion­
tes.. En todas las células, cada ribosoma consiste e n una subunidad grande
5ubunidad pequeña Las dos subunidade s contienen rRNA (en rojo) de
:eentes long itudes, así como un conjunto de proteínas difere ntes. Todos los
momas contienen dos moléculas de rRNA principales (rRNA 235 y 165 en
las bacterias. rRNA 285 y 185 en los vertebrados) y un rRNA 55. la sub unidad
grande de los ribosomas de los ve rtebrad os contiene también un rRNA 5,85
apareado por sus bases al rRNA 285. El número eje ribonudeótidos (rNT) de
cada tipo de rRN A está indicado.

- :!ltc ínas (véase la hg. ,1-22 ). Se cree que los aspectos básicos de la
tesis proteica son semejantes, si bien la iniciación de la traducción
- - lo s eucariontes, que trataremos más adelante, es más compleja y
.:-; :.3 sujeta a mecanismos de regulación adicionales.
Durante la traducción, un ribosoma se mueve a lo largo de una
.:.sdena de mRNA, interactúa con varios factores proteicos y tRNA y
_:.J.fre grandes cambios de conformación. A pesar de la complejidad
..:eI ribosoma, se han hecho grandes progresos en la determinación de
estructura general de los ribosomas bacterianos y del modo en que
imcionan en la síntesis proteica. Más de 50 años después del descubri­
-..liento inicial de los ribosomas, finalmente están siendo esclarecidos
II estructura general y su funcionamiento durante la síntesis proteica.
El metionil-tRNA¡Met reconoce el codón
de iniciación AUG
Gamo se mencionó previamente, el codón AUG para metionina funcio­
- - corno el codón de iniciación para la gran mayoría de los mRl"JA. Un
pecto crítico de la iniciación de la traducción es comenzar la síntesis de
~ teínas en el codón de iniciación, estableciendo de este modo el marco
.3! lectura apropiado para todo el mRNA. Tanto los procariontes como
eucariontes contienen dos tRNA de metionina diferentes: el tRl"JAt f" ,
e puede iniciar la síntesis proteica, y el tRNAMe<, que puede incorporar
metionina solo a una cadena de proteina creciente. La misma aminoacil
tRNA sintetasa (MetRS) carga ambos tRNA con metionina. Pero solo la
Met-tRNA¡~!c' (es decir, la metionina activada unida al tRNA¡Me,) puede
unirse al sitio apropiado en la subunidad ribosómica pequeña, el sitio P,
para iniciar la sin tesis de una cadena polipeptídica . El Met-tRNA Met y
otros tRl"JA cargados se unen solamente al sitio A, como se describirá más
adelante. Los tRl"JA entran al sitio de salida o sitio E después de transferir
su aminoácido unido covalentemente a la cadena polipeptídica creciente.
La iniciación de la traducción en los eucariontes
generalmente ocurre en el primer AUG cercano
al extremo 5' de un mRNA
Durante la primera etapa de la traducción, las subunidades ribos6­
micas pequeña y grande se ensamblan alrededor de un mRNA que
tiene un tRNA iniciador activado, ubicado correctamente en el codón
de iniciación en el sitio ribosómico P. En los eucariontes, este proceso
está mediado por un conjunto especial de proteínas conocidas como
factores de iniciación de la traducción eucarionte (eIF). A medida
que cada componente individual se une al complejo, es guiado por
interacciones con eIF específico. Varios de estos factores de iniciación
unen GTP y la hidrólisis de GTP a GDP funciona corno un interrup­
tor de verificación de la lectura que solamente permite que los pasos
posteriores ocurran si el paso previo se desarrolló en forma correcta.

4.4 Síntesis escalonada de las proteínas en los ribosomas 137

~ VIDEO: Modelo 3D de ribosoma bacteriano
50S
30S
FIGURA 4-23 Estructura del ribosoma 70S de E. coli determinado por
cristalografía de rayos X. Modelo del ribosoma visto en la interface entre
la s subunidades grande (50S) y pequeña (305). El rRNA 165 y las proteínas de la
subunidad pequeña están coloreados en verde claro y verde oscuro, respecti ­
vamente; el rRNA 23 5 y las proteínas de la subunidad grande están coloreados
Antes de la hidrólisis del GTP, el complejo es inestable y permite un
segundo intento en la formación del complejo, hasta que se ensamble
el complejo correcto, lo que da como resultado la hidrólisis del GTP
y la estabilización del complejo apropiado. En los últimos años se
han hecho notables avances en la comprensión de la iniciación de la
traducción en los vertebrados.
138 CAPiTULO 4· Mecanismos genéticos moleculares
en claro y oscuro, respectivamente, y el rRNA SS está coloreado en azul
oscuro. Se indican las posiciones ribosómicas de los sitios A, P Y E. Note que las
proteínas ri bosómicas se localizan principalmente en la superficie del ribosoma
y los rRN A en el interior, cubriendo los sitios A, P Y E. (De B. S. Schuwirth y col$.. 2C05.
x ience 31 0:8 27.)
El modelo actual sobre iniciación de la traducción en los vertebra­
dos se representa en la Figura'¡ 2-1. Las subunidades ribosómica grande
y pequeña, liberadas de un ciclo previo de traducción, se mantienen
separadas por la unión de los eIF 1, lA Y 3 a la subunidad pequeña
405 ( Fig. '¡-2.,1" arriba). El primer paso de la iniciación de la traduc­
ción es la formación del complejo de preiniciación 435. Este complejo
 Met
Formación
del complejo Met
ternario elF2
40S
D Formación del
> @GTP:'F-comPlejO 435
@GTP
o
Complejo elF4 \ ~ ~e\ }
fÍ\GTP .
'él ~ Complejo de
preiniciación
@ Acti vación 43S
del mRNA

~ .J7-
(.1Fhl AUG

~ 11 Unión al mRNA
ATP
AA
~e\ ¡
~ @GTP
PABP

5'

~e\ 1m Barrido 5' a 3'

5'. < .f q.l:

>-
• ""·U RA 4-24lnidación de la traducción en los eucariontes.
~d~l o actual de iniciación eucarionte implica ocho pasos
- ~ n un comp lejo ternario elF 2 se forma cuando el eIF2-GTP
· 'O ._- tRNAiMet. Paso~: cua ndo un ribosoma se disocia al

mdereconocim ie nto
?"" ' -.aria traducción, la subunidad 405 se une al elFl , el elF1 A
::< =i Se forma un comp lejo de preiniciación 435 cua ndo este
· ~x;a con un complejo ternari o elF2 y elFs. Paso n un mRN A
1
Met
codones,
hidrólisis del
elF2 unido al GTP
y liberación de P
~ ;..~~ ,'O cuando un complejo elF4 de múltiples subunidades se
-" :. subunidad elF4E se une a la estructura del casquete s'y
· ' _ tt~ r¡idad elF4G se une a múltiples copias de la proteína que
:: ~ ~1i(A) (PABP) unida a la co la de poli(A) unida al mRI'JA La
5"...- - - -........~

-t
Complejo de
Jild de helicasa de la subunidad elF4A del RNA desenroll a iniciación 48S
}
_~ ] Jier estructura secundaria del RNA en el extremo 5' del
: "El eIF4B, que estimula la actividad de helica sa eIF4A, tam­
~- ,me este complejo circular en el cua l ta nto el casquete 5' del
I5B\GTP Unión de la subunidad y
como la cola de poli(A) están asociados con el complejo ~ desplazamiento del factor
0=· " 3S0 ril: el complejo de preiniciación 435 se une a un com ­

0@GDPG>~@
: -= - e,F4-m RNA Paso Ii): la helicasa de mRNA elF4A desenrolla
, ':';:"\Jctura secundaria del RNA a medida que el complejo 405
""en la dirección 5'--7 3'hasta que reconoce al codón de @
-::"oon. Paso 0 : el reconocimiento del codán de iniciación
- :e .::¡ue el elFs estimule la hidróli sis del GTP unido al e1F2. Esto
;:3 1a conformación del complejo de oarrido a un complejo
~ --=iación 485 con el anticodón del tRNAiMet apareado por
~:" e s al iniciador AUG en el sitio P 405. Paso flla subunidad 5' . H__ *
,_ :.e une a la subunidad 405, lo que conduce la liberación de

~
- 'oJOria de los elF de acción temprana, a medida que elFsB . Hidrólisis del GTP unido a elF5B
~-:: ;;: une al elFl A del sitio A del ri bosoma. El complejo elF4 • y liberación de elF5B y elF1A
7':;~ y el elF4B se asocian con el casque te y la PABR como
E: ~, .es tra en el paso~, para prepararse para la interacción con
@@GDP
__ : ::>mplejo de preiniciación de 435. Por simplicidad, esto no
,,- ~i?stra. Paso III: la correcta asociación de las subunidades 405
:.; 'esulta en la hidrólisis del GTP unido al elFsB, la liberación Complejo de
':' =SB-GOP y el elFl A y la formación del compl ejo de inicia­ iniciación 80S
80S con el tRNAiMet apareado por sus bases al codón de
: =: 16n del sitio Pdel ribosoma. (Mapacc cel Q 1. j "',~o nyco'~, 20i O.
iDl. Cell Biol. 10: 11 3.)

4,4 Síntesis escalonada de las proteínas en los ribosomas 139

de preiniciación se forma cuando la subunidad 405 con elF 1, lA Y 3 se
asocia con eIF5 y un complejo ternario formado por el Met-tRNAt k'
y eIF2 unido a GTP (Fig. 4-24, pasos D y D). El factor de inici<1ción
eIF2 alterna entre asociarse con GTP y GDP; solo puede unirse al Met­
tRNA¡Met cuando se encuentra asociado con GTP. Las células pueden
regular la síntesis proteica al fosforilar un residuo de serina en el eIF2
unido a GDP; el complejo fosforilado no puede intercambiar el GDP
unido por GTP y, de este modo, no puede unir Met-tRNA¡Met con lo
que inhibe la síntesis de proteínas.
El mRNA que debe traducirse se une al complejo eIF4 de múlti­
ples subunidades, que interactúa tanto con la estr uctura del casquete S'
como con la proteína que se une a poli(A) (PABP) en múltiples copias
a la cola de poli(A) del mRNA. Se requieren ambas interacciones para
la traducción de la mayoría de los mRNA. Esto resulta en la formación
d e un complejo circular (Fig. 4-2-1, paso D). El complejo eIF4 que se
une al casquete consiste en varias sub unidades con diferentes funcio­
nes. La subunidad eIF4E se une a la estructura del casquete 5' sobre los
mRNA (Fig. .j.- H ).. La subunidad grande eIF4G interactúa con la pro­
teína PABP unida a la cola de poli(A) del mRNA y forma de este modo
un andamiaje sobre el cual se unen las otras subunidades del eIF4. El
complejo mRNA-elF4 se asocia luego con el complejo de preiniciación
por medio de una interacción entre el eIF4G y el eIF3 (paso [1).
El complejo de iniciación luego se desliza o barre el mRNA asocia­
do, a medida que la actividad de helicasa del eIF4A, estimulada por e!
eIF4B, usa la energía de la hidrólisis del ATP para desenrollar la estruc­
tura secundaria del RNA (paso D). Este barrido se detiene cuando el
anticodón tRNA¡MeI reconoce al codón de iniciación qu e es el primer
AUG corriente abajo a partir del extremo S' terminal, en la mayoría
de los mRNA e ucariontes. El reconocimiento del codón de iniciación
lleva a la hidrólisis del GTP asociado con el eIF2, un paso irreversib le
que evita el barrido adicional, dando como resultado la formación del
complejo de iniciación 485 (pas o O). Este direccionamiento al codón
de iniciación correcto se ve facilitado por el elFS, una proteína eIF2
activadora de la GTPasa (GAP, véase la Fig . .3-32). La selección del AUG
iniciador se ve facilitada por los nucleótidos que lo rodean , específicos,
llamados secuencia de Kozak, por Marilyn Kozak, quien la definió: (5')
ACCAUGG (3'). La A que precede al AUG (en negritas) y la G inmedia­
tamente posterior a él son los nucleótidos más importantes que afectan
la eficiencia de la iniciación de la traducción.
La asociación de la subunidad grande (60S) está mediada por la
unión de eIF5B al GTP, y resulta en el desplazamiento de muchos de
los factores de iniciación (paso a). La asociación correcta entre las
subunidades del ribo soma resulta en la hidrólisis del eIF5B unido al
GTP, que se transforma en GDP y la liberación de eIFSB-GDP y de!
eIFiA (paso El), con lo qu e se completa la formación de un complejo
de iniciación 80S. El acoplamiento de la sub unidad ribosómica , al unir
la reacción a la hidrólisis de GTP por el eIF5B, permite que e! proceso
de iniciación continúe solo cuando ha ocurrido correctamente la inte­
racción de la subunidad. Esto también lo transform a en un paso irre­
versible, de tal modo que las sub unidades ribosómicas no se disocian
hasta que todo el mRNA se haya traducido y se haya terminado la sín­
tesis proteica. La maquinaria de síntesis proteica eucarionte comienza
la traducción de la mayoría de los mRNA celulares a una distancia de
aproximadamente 100 nucleótidos del extremo S' con casquete, como
se acaba de describir. Sin embargo, algunos mRNA celulares contienen
un sitio de entrada de ribosomas interno (IRES ), localizado corriente
abajo, lejos del extremo S' terminal. Se piensa que los IRES celulares
forman estructuras de RNA que interactúan con un complejo de eIF4A
140 cAPfTULO 4 • Mecanismos genéticos moleculares
y eIF4G que luego se asocia con el eIF3 unido a las subunidades 40S,
con eIF 1 y eIFIA. Este ensamble se une posteriormente a un complejo
ternario eIF2 para ensamblarse a un complejo de iniciación directa­
mente sobre un codón AUG vecino. Además, la traducción de algunos
RNA virales de cadena positiva, que carecen de casquete 5' terminal,
se inicia en secuencias IRES virales. Estas caen en clases diferentes, de­
pendiendo de cuántos eIF estándar se requieran para la iniciación. En
el caso del v irus de la parálisis d el grillo, iel IRES de '" 200-nt de largo
se pliega en una estructura co mpleja que interact úa en forma directa
con el ribosoma 405 y lleva a la iniciación sin los eIF e incluso sin el
iniciador Met-tRNAti<q
En las bacterias, la unión de la subunidad ribosómica pequeña a un
ciclo de iniciación ocurre mediante un mecanismo distinto que permi­
te la iniciación en sitios internos en el mRNA policistrónico transcripto
a partir de los operones. En los mRNA de las bacterias, una secuencia
de'" 6 bases, complementaria al eJl:tremo 3' term inal de rRNA peque­
ño, precede al codón de iniciación AUG en 4-7 nucleótidos. El apa­
rea miento de bases entre esta secuencia del mRNA, llamada secuencia
de Shine-Dalgarno, por sus descubridores, y el rRNA pequeño, ubican
a la subunidad ribosómica pequeña en la posición adecuada para la
iniciación. Los factores de iniciación comparables a elF1A, eIF2, eIF3,
f-Met-tRNAt let se asocian luego con la subunidad pequeña, seguida de
la asociación de la subunidad grande para formar el ribosoma bacte­
riano completo.
Durante la elongación de la cadena cada
aminoacil-tRNA entrante se mueve a través
de tres sitios ribosómicos
El co mplejo ribosoma-Met-tRNAt 1e' adecuadamente ubicado ahora
está listo para comenzar la tarea de la adición secuencial de aminoá­
cidos para la traducción del mRNA dentro del marco. Como en el
caso de la iniciac ión, un conjunto de proteínas especiales llamad as
factores de elongación (EF) son necesarias para llevar a cabo el pro­
ceso de elongación de la cadena. Los pasos clave en la elongaci ón so n
la entrada de cada amin oac il tRNA posterior con un tRN A comple­
ment ario al siguiente cod ón, la formación de un enlace peptídico yel
movimiento o translocación del ribosoma un codón por vez a lo largo
del mRNA.
Cuando se completa la iniciación de la traducci ón, como ya se in­
dicó , el Met-tRNA¡'ktse une al sit io P en el ribosoma 80S ensamblado
( Fig. -1-25, arriba). Esta región del ribosoma se llama sitio P porque el
tRNA químicamente unid o a la cadena polipeptídica se localiza allí.
El seglLl1do aminoacil-tRNA es llevado al ribosoma en forma de un
complejo ternario , asoc iado con EFlcx·GTP y se une al sitio A, lla­
mado de este mod o porque es donde el tRNA aminoacilado se une
a él ( paso D ). El EFlcx·GTP unido a varios aminoacil-tRNA difunde
al sitio A pero el siguiente paso en la traducción ocurre solo cuando
el anticod ón del tRNA aparea sus bases con el segundo codón d e la
región codifican te. Cuando eso ocurre adecuadamente, el GTP en el
EFI cx·GTP asociado se hidroliza. La hidróli sis de GTP promueve un
cambio de conformación en el EFlu que lleva a la liberación del com­
plejo EFla·GDP y la estrecha unión del aminoacil-tRNA en el sitio
A (paso D). Este cambio de conformación también ubica al extremo
aminoacilado 3' del tRt'\fA en el sitio A en la cercanía del extremo 3'
terminal del Met- tRNA¡Me, en el sitio P. La hidrólis is de GTP, y así la
unión estrecha, no ocurren si el anticodón del aminoacil-tRNA en­
tran te no puede aparear s us bases con el codón del sitio A. En este
 NIMACJÓN FOCALlZADA : Síntesis proteica

; r.U RA 4-25 Elongación de la cadena peptídica en los eucariontes. Met¡

~
XG) _~
e¡ que se ensambla el ri bosoma 80Scon Me¡·¡RI\l A;,lel en el sino P del
:na (arribo) , un com pl ejo ternar io que lieva el segundo aminoácido (aa,)
""....ado por el mRNA se une al sitio A (paso ()) Des¡)ués de un cambio de ­ ( " -" 0 --Jo :,
i:Ymación en el ribosoma inducido por la hidrolisi, de GTP en el EF 1o GTP : i
"

.i I
~, el rRNA grande cataliza la formación del enlace peptídico entre el
t ),_
~ ~
, /!
= , el aa 2 (paso ~). La hidrólisis del GTP en el EF 2·GTP causa otro cambio de
.:ormación en el ribosoma que resulta en su translocaclón un codón a lo lar­ 5 ..........
el mRNAy el corrimiento del tRNA,'·1et no aci la do al sitiO E. y el tRNA con el
~ ' ~I(!o unido al sitio r (paso f:]). El ciclo puede comenzar nuevamente con la
de un complejo ternari o que leva el aa, al sitio A ahora abierto. En el se - RibDO,ol~t'GTP ¿r'~
o ciclo de elongación y ciclos posteriotes. el tRNA en e sitio Ese expu lsa
3nte el paso f] como resultad o del cambio de conformación induc;do por
'drólisis del GTP en el EF1o·GTP lAOapl'o" oe K. H " l!~iho"s y m i,. 2000. e:' P ¡.., Ga,! e,r)
~ . [he Ril",~ome- 51f1.lLFUf( FrmCl! o.:n, Arlf'b:mK;' r¡ó rU úll J!d ' ¡'rl!t'ru :t_~M, "\'SM ~· · b~. p_ ~ 1~1
Entrada del
siguiente
aa-tRNA en
el sitio A
r6 ¿r'GTP

= 0, el complejo ternario difunde dejand o un sitio A vacío que pue­

:- asociarse con otros com plejos aminoacil-tRNA-EFla.·GTP has ta Hidró lisis del
.. ue se una un tRNA con bases que se apareen correctamente. Así, la GTP, cambio de
conformación
hidrólisis de GTP por EFlex es otro paso en la ve rifi cación de lec tura del ri bosoma
que permite que la síntesis proteica ava nce solo cuando el tRN A ami­
)oacilado correcto se una al sitio A. Este fenómeno co ntribuye a la
5delidad de la sí ntesis proteica.
Con el Met-tRNA,'vie, iniciado r en el sitio P y el seg undo aminoa ­
"il-tRNA fuertemente unido en el sitio A, el gru po ami no-ex del se ­
~u ndo aminoác ido reacciona con la metionina "activada" (con enlace
este r) del tRNA iniciador formando un enla ce peptídico (Fig. 4-25 ,
aso O; véase la FJg. 1-1 ; ). Esta reaccióll de peptidil transfe rasa está
:a talizada por el rRNA grande que orienta con precisión a los átomos
que interactúan , permitiendo que la rea cc ión avance. El 2' -hidroxilo
,j el A terminal del peptidil-tRNA del sitio P parti cipa tambi én en la
Formaci ón
del enlace
peptídico 01
·a tálisis. La capacidad catalítica del rRNA grande de las bacterias se
emostró elimin an do cuidadosamente la gran mayoría de las proteí­
'l as de las sub unidades ribosómicas grandes. El rRNA 235 bacteriano
.:.as i puro puede catalizar una reacción de peptidil transferasa entre
análogos de tRNA aminoacilados y el peptidil-tRNA. El apoyo adicio­

r
nal al papel cata lítico del rRNA grande en la sí ntesis proteica proviene
ue estudios cristalográfic os de alta reso lu ción que muestran que no Translocación
EF2·GTP

.,ay proteínas cerca del sitio de síntesis del enlace peptídico en la es­ del ribosoma El EF2'GDP + p¡
uctura cristalina de la subunidad gran de en las bac terias.
Después de la síntesis del enl ace peptídico, el ribosoma se ¡¡'anslo­
ca a lo largo delmRNA a una distancia equivalente a la de un codón.
Este paso de translocació n es tá con trolado por la hidróli sis de GT P en
complejo EF2· GTP en los eucariontes . Ya ocurrid a la translocac ión
:o rrec tamen te, el GTP unido se hidroliza , otro proceso irreversible
que evita qu e el ribosoma se mueva a 10 largo del RNA en la direcc ión
correcta o que se tr ansloque un número incorrecto de nucleóti­
dos. Com o res ultado de los cambios de conformación en el ribosoma ,
e acompañan a la translocación adecuada y la hidrólisis resultante
de GTP por el EF2, el tR N Ai ~'k', ahora sin la metionina activada, se
:nu eve al sitio E (sa lida, en in glés exit ) so bre el ribosoma; al mismo es tado en el cual el sitio A queda abierto y es ca paz de aceptar otro
üempo, un segu ndo tRNA unido ahora en form a covalente a un di­ tRNA aminoacilado que forma complejo con un EFlex·GTP, com en ­
do (un peptidil-tRNA) se mueve al sitio P (Fig. 4-25, paso D ). zando otro sitio de elongación de la cadena. La repetición del ciclo de
translocació n hace que el ribosoma retorn e su conformación a un elongación que se muestra en la Figura 4-25 añade un aminoácido

4.4 Síntesis escalonada de la s proteínas en lo s ribosomas 141

cada vez al extremo C-terminal de la cadena polipeptídica creciente
dirigida por la secuencia de mRNA, hasta que se encuentra un codón
de detención. En ciclos posteriores, el cambio de conformación que
ocurre en el paso El expulsa el tRNA no acilado del sitio E. A medi­
da que el polipéptido naciente se alarga, se inserta en un canal en la
unidad ribosómica grande y sale en una posición opuesta aliado que
interactúa con la subunidad ribosómica pequeña ( Fig. 4-26 ).
En ausencia del ribosoma, el híbrido de tres pares de bases RNA­
RNA entre los anticodones del tRNA y los codones del mRNA en los
sitios A y P no sería estable; los dúplex RNA-RNA entre las moléculas
separadas de RNA deberían ser considerablemente más largos para re­
sultar estables en condiciones fisiológicas. Sin embargo, múltiples inte­
racciones entre los rRNA grandes y pequeños y los dominios generales
de los tRNA (p. ej., los bucles D y TI'CG, véase la Fig. 4-.20) estabilizan
los tRNA en los sitios A y P, mientras que otras interacciones RNA­
RNA controlan el correcto apareamiento de bases codón-anticodón ,
asegurando la correcta lectura del código genético. Luego, las interac­
ciones entre los rRNA y los dominios generales de todos los tRNA dan
como resultado el movimiento de los tRNA entre los sitios A, P Y E a
medida que los ribosomas se translocan a lo largo del mRNA en grupos
de codones de tres nucleótidos a la vez.
La traducción se termina por factores de liberación
cuando se llega a un codón de terminación
Las etapas finales de la traducción , al igual que la iniciación y la elon­
gación, requieren señales moleculares de alta especificidad que de­
3'
FIGURA 4-26 Modelo del ribosoma 70S de E. colí unido a un mRNA con
una cadena polipeptídica naciente en el túnel de salida.
El modelo se basa en estudios de crio-ME. Los tres lRNA estan superpu estos en
los sitios A (rosado), P (verde) y E (amarillo) La cadena polipep ídica naciente
está ente rrada en un túnel en la subunidad ribosómica grande que comie nza a
cerrarse cerca del ta llo aceptar del tRI\j A en el sitio P. iW,.,~ 1 ~ . 1:;3b"hviliy coi~. 20':(.
CeU1 00:537: COrresíi! de J Flan k.)
142 CAPITULO 4' Mecanismos genéticos moleculares
ciden el destino del complejo mRNA-ribosoma-tRNA-peptidil. Se
han descubierto dos tipos de factores de liberación (RF). El eRFI
eucarionte, cuya forma es similar a la del tRNA, actúa uniéndose al
sitio A ribosómico y reconociendo los codones de terminación di­
rectamente. Al igual que algunos factores de iniciación y elongación
que se analizaron con anterioridad, el segundo factor de liberación
eucarionte, eRF3, es una proteína que une GTP. El eRF3·GTP actúa
en conjunto con el eRF 1 para promover la escisión del peptidil-tRNA,
liberando así la cadena polipeptídica completa ( Hg. 4-2 7) . Las bacte­
rias tienen dos factores de liberación (RFl y RF2), que son análogos
funcionales de eRF1 , y un factor que une GTP (RF3 ), que es análogo
a eRF3 . Nuevamente, la GTPasa eRF3 controla el reconocimiento co­
rrecto de un codón de detención por el eRFI. El peptidil-tRNA unido
al tRNA en el sitio P no se separa, terminando la traducción, hasta
que uno de los tres codones de detención sea reconocido correcta­
mente por el eRFI, otro ejemplo de un paso de verificación de lectura
en la síntesis proteica.
La liberación de la proteína completa deja un tRNA libre en el
sitio P y el mRNA aún asociado con el ribosoma 80S y eRFI yeRF3­
GDP unido en el sitio A. En los eucariontes ocurre un reciclado de
ribosomas cuando este complejo posterminación se une a una pro­
teína llamada ABCEI , que emplea energía procedente de la hidrólisis
del ATP para separar las subunidades y liberar al mRNA. Los factores
de iniciación e1Fl , eIFIA Y eIF3 también se requieren y se cargan en
la subunidad 405, dejándola lista para otra ronda de iniciación (Fig.
4-24 , arriba ). En realidad, nunca se libera un mRNA libre como se
representa en la Figura 4-2/ , por simplicidad . Más bien, el mRNA
tiene otros ribosomas asociados con él en varias etapas de elonga­
ción, PABP unidas a la cola de paliA y complejo eIF4 asociado con el
casquete 5', listo para unirse con otro complejo de preiniciación 435
( Fig. -1-24 ) .
Los polisomas y el reciclaje rápido de los ribosomas
incrementan la eficiencia de la traducción
La traducción de una molécula eucarionte de mRNA individual para
dar como resultado una proteína de tamaño típico toma entre uno y
dos minutos. Hay dos fenómenos que incrementan de modo significa­
tivo la tasa global a la cual las células pueden sintetizar una proteína: la
traducción simultánea de una molécula única de mRNA por múltiples
ribosomas y el rápido reciclado de subunidades ribosómicas después
que se sueltan del extremo 3' terminal de un mRNA. La traducción
simultánea de un mRNA por ribosomas múltiples es fácilmente obser­
vable en fotomicrografías electrónicas y por análisis de sedimentación
que muestran el mRNA unido a múltiples ribosomas que sostienen
cadenas polipeptídicas nacientes en crecimiento. Estas estructuras de­
nominadas poJirribosomas o polisomas tenían aspecto circular, en las
fotomicrografías electrónicas de algunos tejidos. Estudios posteriores
con factores de iniciación purificados explicaron la forma circular de
los polirribosomas y sugirieron los mecanismos por los cuales los ribo­
somas reciclan de manera eficiente.
Estos estudios revelaron que múltiples copias de la proteína que
se una a poli(A) (PABP ) interactúan tanto en la cola de poli(A ) del
mRNA como con la subunidad eIF4G del eIF4. Dado que la subuni­
dad eIF4E del eIF4 se une a la estructura de casquete del extremo 5'
terminal de un mRNA, los dos extremos de una molécula de mRNA
están unidos por un puente mediante las proteínas intervinientes,
formando un mRNA "circular" (Fig. 4 -28a). Dado que los do s extre­
 bunidad 405 Y sus factores de iniciación asociados con el eIF4 unido
al casquete 5', La forma circu lar que se muestra en la F igura 4- 28G
se piensa que incrementa el reciclado ribosómico y así aumenta la
eficiencia de la síntesis de proteínas.

La superfamilia de las proteínas GTPasa funciona

3' en varios pasos del control de calidad de la
traducción
1/ @ -GTP

r eRF1'
Vemos ahora que una o más proteínas que unen GTP participan en
cada etapa de la traducción. Estas proteínas pertenecen a la superfa­
milla de las GTPasa de proteínas interruptoras que ciclan entre una
forma activa unida a GTP y una forma inactiva unida a GDP (véa­
se la Fig. 3-32 ). La hidrólisis del GTP unido provoca un cambio de
conformación en la GTPasa y otras proteínas asociadas que resultan
críticas para varios procesos moleculares complejos. En la iniciación
de la traducción, por ejemplo, la hidrólisis del eIF2·GTP al eIF2-GDP
5' ~ 3' evita un barrido ulterior del mRNA una vez que se encuentra el sitio
de iniciación y permite la unión de la subunidad ribosómica grande a
la subunidad pequeña (véase la Fig. -! - ~-± , paso riJ), De modo si mil ar,

~P
la hidrólisis de EFla,GTP a EFlcx·GDP durante la elongación de la
Escisión del
peptidil-tRNA cadena ocurre solamente cuando el sitio A está ocupado por un tRNA
cargado con un anticodón que aparea sus bases con e! codón de! si tio
A, La hidrólisis del GTP provoca un cambio de conformación e n e!

.~
EFlcx que da como resultado la liberación de su tR.t\lA unido, permi­
tiendo que el extremo 3' terminal aminoacilado del tRNA cargado se

J~ 5' ~t...#...-.l 3'

Complejo de
posterminación
mueva a la posición requerida para la formación del enlace peptídico
(1 ig. -!-~b , paso D ). La hidrólisis de EF2·GTP a EF2·GDP lleva a la
correcta translocación del ribosoma a lo largo del mRNA (véase la
fig. -t 26, paso El) , y la hidrólisis de eRF3·GTP a eRF3·GDP asegura la
correcta terminac ión de la traducción ( Fi~ . 4-27 ). Dado que la hidró­
lisis del enlace fosfodiéster de alta energía p-y del GTP es irreversible,
el acoplamiento de estos pasos en la síntesis proteica a la hidrólisis del
GTP evita que avancen en la dirección inversa,
ATP
@-G DP
Las mutaciones sin sentido provocan la terminación
ABCE1 ADP + Pi
prematura de la síntesis proteica
eRFl
Un tipo de mutación que puede inactivar un gen en cualquier orga­
nismo es un cambio en un par de bases que convierte a un codón que
normalmente codifica para un aminoácido en un codón de detención,
p. ej" UAC (q ue codifica tirosina) -7 UAG (detención). Cuando esto
ocurre precozmen te en el marco de lectura, la proteína truncada re­
5' . 3' sultante habitualmente no es funcional. Estas mutaciones se llaman sin
sentido porque cuando el código genético que iguala cada triplete de
~ 'GURA 4-27 Terminación de la traducción en eucariontes, Cuando codones con un aminoácido fue descifrado por los investigadores, se
',DOsoma que lleva una cadena proteica naciente llega a un codó n de encontró que los tres codones de detención no codificaban aminoácido
_ -nación (UAA, UGA, UAG), el factor de libe ració n eR Fl emra al siri o A junto
alguno -no "tenían sentido"-.
'" eRFJGTP. La hidrólisis del GTP unido es acompañada por 13 escisión de
o :~:len a peptídica desde el tRNA de l si tio P y la expuls ión del rRNA del sitio E,
En estudios genéticos con la bacteria E. coli se descubrió que el
- .ando un complejo de posterminaciÓ n. Las 'iubun idades del ribosoma se efecto de una mutación sin sentido puede suprimirse por una segunda
, ...'a'an por acción de la ATPasa ABCE1 juma co n los elF 1, elF1A Ye!F3. l a su­ mutación en un gen de tRNA. Esto ocurre cuando la secuencia que
_ . ·:;ad 40S se libera unida a estos el F, li sta para iniciar ot ro ciclo de traducc ión codifica el anticodón en el gen de tRNA cambia a un triplete comple­
,~": la Frg. 4-',4).
mentario con el codón de detención original, p, ej., una mutación en el
tRNATyr que cambia su anticodón de GUA a CUA, que puede aparear
las bases con el codón de detención UAG, El tRNA mutante puede ser
- ' o de un polisoma están relativamente cercanos, las subunidades reconocido por la aminoacil sin teta sa de tirosina y acoplarse a la tiro­
,.,,,ómicas que se desprenden del extremo 3' se ubican cerca del sina. Las células que tiene tanto la mutación sin sentido original como
' ~ -emo 5', facilitando la reiniciación por la interacción con la su­ la segunda mutación en el anticodón del gen de tRNA Tyr en consecuen­

4.4 Síntesis escalonada de las proteínas en los ribosomas 143

TSC2, nombradas por estar involucradas en e! síndrome clínico com ­
plejo de esclerosis tuberosa (del inglés tuberous sclerosis complex),
corno se analizó anteriormente. En la conformación activa, el hetero­
dímero TSC1 /TSC2 funciona corno una proteína activadora GTPasa
para Rheb (Rheb-GAP ), causando la hidrólisis del GTP unido a Rheb
a GDP. Esto convierte a Rheb a su conformación con GDP unida, que
se une al complejo mTOR e inhibe su actividad cinasa. Finalmente, la
actividad de TSC1/TSC2 Rheb-GAP está regulada por diversas señales,
permitiendo a la célula integrarse en diferen tes vías de señalización ce­
lular para controlar la velocidad global de la síntesis proteica . La señali­
zación a partir de los receptores de superficie de factores de crecimiento
conduce a la fosfori.lación de TSC1 /TSC2 en sitios inhibitorios, causan­
do un in c remento en Rheb·GTP y la activación de la actividad cinasa
de mTOR. Este tipo de regulación a través de receptores de la superficie
celular conecta el control del crecimiento celular con los procesos de!
desarrollo controlados por las interacciones célula-célula.
La actividad de mTOR también es regulada en respuesta al estado
nutricional. Cuando la energía de los nutrientes no es suficiente para el
crecimiento, el descenso resultante en la relación de las concentracio­
nes de ATP respecto de A.lV1.P es detectado por la A.l\iIP cinasa (A.l\ilPK ).
La AMP cinasa fosforila a TSC1 /TSC2 en los sitios de activación, esti­
mulando su actividad Rheb-GAP y en consecuencia inhibiendo la ac ­
tividad mTOR cinasa y la velocidad global de traducción. La hipoxia y
otros estreses celulares también activan la Rheb-GAP del TSClITSC2.
Finalmente, la concentración de nutrientes en el espacio extracelular
también regula a Rheb, mediante un mecanismo desconocido que no
requiere del complejo TSC1/TSC2.
Además de regular la velocidad global de la síntesis de proteína
celular y la producción de ribosomas, los tRNA y los factores de tra­
ducción, mTOR regula al menos otro proceso involucrado en la res­
puesta a las bajas concentraciones de nutrientes: la macroautofagia (o
simplemente autofagia ). Las células privadas de nutrientes degradan
los constituyentes citoplasmáticos, incluyendo orgánulos enteros, para
suministrar energía y precursores a los procesos celulares esenciales.
Durante este proceso una estructura de membrana doble, grande, en­
gulle una región del citoplasma para formar un autofagosoma, que lue­
go se fusiona con un lisosoma donde las proteínas, los lípidos y otras
macromoléculas atrapadas son degradados, completando el proceso de
macroautofagia . mTOR activado inhibe la macroautofagia en las célu­
las en crecimiento cuando los nutrientes son abundantes. La macroau­
tofagia está estimulada cuando la ac tividad mTOR disminuye en las
células privadas de nutrientes.
Los genes que codifican los componentes de la vía mTOR están
mutados en muchos cánceres humanos, dand Q como resultado
en el crecimiento celular en la ausencia de señales de crecimiento
normales. TSCl y TSC2 (véase la fig . 8-30 ) fueron inicialmente iden­
tificados debido a que una u otra de las proteínas es mutante en un
síndrome genético humano raro: el complejo de esclerosis tuberculo­
sa. Los pacien tes con este trastorno desarrollan tumores benignos en
múltiples tejidos. La enfermedad resulta de la inactivación de TSCl o
TSC2 que elimina la actividad Rheb-GAP del heterodímero TSCl/
TSC2, dando corno resultado la concentración desregulada y anor­
malmente elevada de Rheb·GTP y la actividad desregulada y elevada
resultante de mTOR. Las mutaciones en los componentes de las vías
de transducción de señales a través de receptore s de la superficie celu­
lar que llevan a la inhibición de la actividad de Rheb-GAP del TSC1/
TSC2, también son comunes en los tumores humanos y contribuyen
378 CAPíTULO 8 • Control génico postraduccional
al crecimiento celular y a la replicación en ausencia de señales norm:­
les para el crecimiento y la proliferación.
La actividad proteincinasa elevada de mTOR en los tumores
correlaciona con un pronóstico clínico desfavorabl e. En consecuenc
en la actualidad se están evaluando inhibidores de mTOR en ensay'
clínicos a fin de probar su eficacia para tratar cánceres en conjunc i
con otros modos de terapia. La rapamicina y otros inhibidores : .
mTOR relacionados son supresores potentes de la respuesta inmur. .
taria , debido a que inhiben la activación y la replicación de linfo d l
T en respuesta a antígenos extraños (l.ap. 23 ). Diversos virus codific.z.·
proteínas que activan mTOR pronto después de la infección viral. ~
estimulación de la traducción resultante tiene una ventaja selectiva o
via para estos parásitos celulares . •
Cinasas elF2 Las cinasas también regulan la velocidad global de la
tesis de proteínas celulares. La Hg. 01-24 resume los pasos en la ini :.
ción de la traducción. El factor de iniciación de la traducción elF2 tr~_
el tRNA iniciador cargado hasta el sitio P de la subunidad ribosó lli... .
pequeña; elF2 es una proteína G trimérica y en consecuencia exi- ·
en su conformación con un GTP unido o con un GDP unido. Solo.
forma de elF2 con GTP unido es capaz de integrar el tRNA inicia·
cargado y asociarse con la subunidad ribosómi ca pequeña. La su _
nidad pequeña con el factor de iniciación unido y el tRNA iniciad
cargado, luego interactúa con el complejo elF4 unido a la caperuza ~
de un mRNA a través de su subunidad eIF4E. A continuación la =_
bunidad ribosómica pequeña se mueve rastreando en la direcció n ~
del mRNA en busca del codón de iniciación AUG, que puede for!'"
apareamiento de bases con el tRNA iniciador en su sitio P. Cua r. :
esto ocurre, el GTP unido por elF2 es hidrolizado a GDP y se liber.:. ::'
complejo eIF2·GDP resultante. La hidrólisis GTP da como resultado _
paso de "corrección de prueba" irreversible, que prepara la subuni¿ : _
ribosómica pequeña para asociarse con la subunidad grande solo cc.:-·
do un tRl"lA iniciador es adecuadamente unido al sitio P y se aparea·
manera correcta con el codón de inicio AUG. Antes de que elF2 pu
participar en otro ciclo de iniciación, su GDP unido debe ser reem r ~
zado con GTP. Este proceso está catalizado por el factor de iniciaciór.
la traducción elF2B, un factor de intercambio de nucleótido de gua!!!:
(GEF ) específico para e1F2.
Un mecanismo para la inhibición de la síntesis proteica en gen.::.
de las células estresadas involucra la fosforilación de la subunida<l
de elF2 en una serina específi ca. La fosforilación en este sitio no i m~ ­
fiere con la función elF2 en la síntesis de proteína directamente. En
lugar, el elF2 fosforilado tiene una muy alta afinidad para el facto r ~
intercambio de nucleótido guanina elF2, elF2B, que no puede libe.
el elF2 fosforilado y en consecuencia está bloqueado para cataliza: _
intercambio de GTP de factores adi cionales elF2. Puesto que existe _ ~
exceso de elF2 respecto de elF2B, la fosforilación de una fracció r, :
elF2 da como resultado la inhibición de todo el elF2B celular. El r
de elF2 se acumula en su forma de GDP unido, que no puede partia:
en la síntesis proteica, inhibiendo así casi toda la síntesis de prol ­
celular. Sin embargo, algunos mRNA tienen regiones 5' que pern:l __
la iniciación de la traducción a la concentración de elF2-GTP, qu.: ­
sulta de la fosforilación de elF2. Estos mRNA incluyen aquellos
proteínas chaperonas que funcionan para volver a plegar las prot· ..;
celulares desnaturalizadas como resultado del estrés celular, prot ~­
adicionales que ayudan a la célula a lidiar con el estrés y los facto r :
transcripción que activan la transcripción de los genes que codifica ~,
proteínas inducidas por estrés.
.....l5 células humanas contienen cuatro cinasas elF2 que fosforilan la
-.a serina de inhibitoria elF2o:. Cada una de estas está regulada por
f'ú diferente de estrés celular, inhibiendo la síntesis de proteína y
" jendo a las células repartir la gran fracción de recursos celulares
mente utilizados para la síntesis de proteína en las células en creo
~I o, para que sean usados en responder al estrés.
_" cinasa GCN2 elF2 (control general no desreprimible 2) es acti·
:>Q r la unión de los tRNA sin carga. La concentración de los tRNA
. !rga aumenta cuando las células están privadas de aminoácidos,
i.ldo la actividad cinasa de GCN2 elF2 e inhibiendo en gran me·
.." síntesis de proteína .
~ PEK (cinasa pancreática e1F2) se activa cuando las proteínas transo
:> al interior del retículo endoplasmático (RE) no se pliegan ade­
~ente, debido a anomalías en el ambiente del interior del RE. Los
::ores, incluyendo concentraciones elevadas de hidratos de carbono
. J que estos inhiben la glucosilación de muchas proteínas del RE y
- ,.1<!ciones inactivantes en una chaperona del RE, son necesarias para
:u ado plegamiento de muchas proteínas del RE (Laps. 13 y 14).
.,., in hibidor hemirregulado (HRI) es activado en los eritrocitos en
llo cuando el suministro del grupo prostético hemo es dema­
najo para acomodar la velocidad de la síntesis de la proteína glo·
:::;te ciclo de retroalimentación negativa disminuye la velocidad
~~sis de la proteína globina hasta que coincida con la velocidad
-:i'sis del grupo hemo. HRI también se activa en otros tipos de
e n respuesta al estrés Q),.idativo o al choque térmico.
: - almente, la proteincinasa activada por RNA (PKR) es activa­
- los RNA doble hebra más largos que - 30 pares de bases. En
• ·ancias normales en las células de mamífero, tales RNA doble
l o se producen durante una infección viral. Largas regiones de
_o ble hebra se generan en los intermediarios de replicación de
=e RNA o a partir de la hibridación de regiones complementa·
~ NA, que se transcriben a partir de ambas hebras de los geno­
- ~ \'lrus de DNA. La inhibición de la síntesis de proteína evita la
'.:ión de progenie de viriones, protegiendo células vecinas de la
n. De manera interesante, los adenovirus desarrollaron una de·
: '1 ntra la PKR: ellos expresan cantidades prodigiosas de un RNA
al virus (VA) de - 160 nucleótidos con regiones doble hebra
, :'1 horquillas. VA RNA es transcrito por la RNA polimerasa lJJ
n ado desde el núcleo por la exportina 5, la exportina para los
'A (véase la Fig. g-2 7). El VA RNA se une a la PKR con afinidad
". inhibiendo su actividad proteincinasa y evitando la inhibición
ntesis de proteína observada en las células infectadas con un
.rus mutante a partir del cual se eliminó el gen VA.
roteínas de unión al RNA de secuencia
ífica controlan la traducción del mRNA
í11co
~a ste a la regulación global del mRNA, los mecanismos también
lucionado para controlar la traducción de ciertos mRNA. Esto
~ realizar proteínas de unión a RNA de secuencia específica que
- a una secuencia particular o estructura de RNA en el mRNA.
, la unión es en la región S' no traducida (S' VTR) de un mRNA,
",ea la capacidad de un ribosoma de realizar una búsqueda para
; el primer codón de iniciación, inhibiendo la iniciación de la
-: lÓn. La unión en otras regiones puede promover o inhibir la
,ción del mRNA.
El control de la concentración de hierro intracelular por parte de
la proteína de unión a elementos de respuesta al hierro (IRE-BP) es un
ejemplo sofisticado de una única proteína que regula la traducción de
un mRNA y la degradación de otro. La regulación precisa de la concen­
tración del hierro celular es crucial para la célula. Múltiples enzimas
y proteínas contienen Fe 2 + como cofactor, tales como las enzimas del
ciclo de Krebs (véase la Fig. ) 2- lO ) Y las proteínas de transporte de
electrones involucradas en la generación de ATP en las mitocondrias y
cloroplastos (Cap. J 2). Por el otro lado, el exceso de Fe 2+ genera radica­
les libres que reaccionan con las macromoléculas celulares y las dañan .
Cuando los almacenamientos de hierro intracelular son bajos, funcio­
na un sistema de control dual para incrementar las concentraciones de
hierro celular; si hay hierro en exceso, el sistema funciona para evitar la
acumulación de niveles tóxicos de iones hierro libres.
Un componente en este sistema es la regulación de la producción
de ferritina, una proteína de unión a hierro intracelular que se une yal­
macena el exceso de hierro celular. La región S' no traducida de mRNA
ferritina contiene elementos de respuesta al hierro (IRE) que tienen
una estructura de tallo y bucle. La proteína de unión a lRE (IRE-BP)
reconoce cinco bases específicas en el bucle [RE y en la naturaleza dú­
plex del tallo. A concentraciones bajas de hierro, la lRE·BP se encuen­
tra en su conformación activa que se une a las IRE (ri g. i\-31 ól). La
unión de IRE·BP bloquea la subunidad pequeña del ribosoma para el
codón de inicio AUG (véase la hg. 4-2-1 ), inhibiendo así la iniciación
de la traducción. La disminución resultante en la ferritina significa que
hay menos hierro formando complejo con la ferritina y por ende, se
encuentra más hierro disponible para las enzimas que lo requieren.
A concentraciones elevadas de hierro, la IRE-BP se encuentra en una
conformación inactiva que no se une a los IRE S', por lo tanto puede
proceder la iniciación de la traducción. Las ferritinas recién sintetiza­
das luego se unen a los iones hierro libre, evitando su acumulación
hasta concentraciones perjudiciales.
La otra parte de este sistema regulador controla la importación del
hierro al interior de las células. En los vertebrados, la ingesta de hierro
es transportada a través del sistema circulatorio unido a una proteína
denominada transferrina. Después de la unión al receptor de transferri­
na (TfR) en la membrana plasmática. el complejo transferrina·hierro
es introducido al interior de las células mediante endocitosis mediada
por receptor (Cap. 14). La región 3' no traducida del mRNA TfR con·
tiene IRE cuyos tallos tienen secuencias desestabilizadoras ricas en AV
( Fig. f;-."Ib ). A concentraciones elevadas de hierro, cuando la IRE-BP
está en la conformación inactiva, no unida, estas secuencias ricas en AU
promueven la degradación del mRNA TfR por el mismo mecanismo
que lleva a la rápida degradación de otros mRNA de vida corta, como
se describió anteriormente. La disminución resultante en la produc­
ción del receptor transferrina rápidamente reduce la importación de
hierro, protegiendo así a la célula del exceso de hierro. A concentracio­
nes de hierro bajas, sin embargo, IRE- BP puede unirse a los IRE 3' en
el mRNA de TfR. La lRE·BP unida bloquea el reconocimiento de las
secuencias desestabilizadoras ricas en AV mediante las proteínas que de
otra manera podrían degradar rápidamente los mRNA. Como resulta­
do, se incrementa la producción del receptor transferrina y se lleva más
hierro al interior de la célula.
Otras proteínas de unión al RNA reguladas también pueden actuar
en el control de la traducción o la degradación del mRNA, al igual que
la lRE-BP de doble acción. Por ejemplo, una proteína de unión al RNA
sensible al hemo controla la traducción del mRNA que codifica la ami­
nolevulinato sin tasa (ALA), una enzima clave en la síntesis del hemo.
8.4 Mecanismos citoplasmaticos de control postranscripcional 379
(a) mRNA de ferritina Otro mecanismo llamado degradación mediada por mutacw"
IREs Región codificadora COOH sentido causa la degradación de los mRNA, en los cuales uno :

~ Hierro alto
5' ~ U ( -I"I¡iCMIlI.llllj'¡a.ilil.¡¡¡nmaGmiI+:'
I o An ------+
H NJ
2
sD
'@a
exones han sido cortados y empalmados de manera incorrecta. Ta. .
cesamiento incorrecto suele al terar el marco abierto de lectura ­
reg ión 3' de la unión exón inadecuada, dando como resultado L
troducción de una mutación con sentido alterado fuera de ma r~

IRE-BP 'o"tivo ("\ ~ Ferriti na

un codón de terminaci ón incorrecto. Para casi todos los mRNA ca

1
dos correctamente, el codón de terminación está en el exón final. ::
traducida
degradación mediada por mutaciones sin sen tido da como resu l: '
IRE-BP activ o l r la rápida degradación de los mRNA con los codones de termin al.
que se producen antes de la última unión cortada y em palmada er'

o O Hierro bajo
mRNA puesto que en la mayoría de los casos, tales mRNA surgen .

~ LJ L w¡t!ij}I!i3.!.h"dii.!fM- An -11--+
er rores en el proceso de corte y empalme del RNA. Sin embarg
5' No se inicia
degradación mediada por mutaciones sin sentido también tiene 1L.::
la traducción
a partir de una mutación que crea un codón de terminación dentr :
(b) mRNA de TfR

Hierro alto
.5ÚlLvIREs
Regi ó n rica en AU
" I_ ,
... " .
,~ ~~"'
un gen o una deleción o inserción con corrimiento del marco de le . .
ra. Este mecanismo de degradación se descubrió inicialmente dur ' ­
el estudio de pacientes con tal asemi a ~o, quienes producen una con -.
5' o&'¡'¡"i+n,rr.l4f An ------+ tración baja de proteína globina asociada con una concentración '
(.. .1,-,
1
, .... J

,. .......
I
Mononucleótidos
degradados
Hierro bajo
5' · .. , . An -11--+ Poca
degradación
FIGURA 8-31 Regulación dependiente de hierro de la traducción y
degradación de mRNA. La proteína de unión a los elementos de respuesta al
hierro (lRE-BP) controla (a) la traducción de mR NA ferritina y (b) la degradación
de mRN A del receptor de transferr ina (TfR). Una concentración de hierro intrace­
lular baja IRE-SP se une a los elementos de respuesta a hierro (IRE) en la fegión
5' o 3' no traducida de estos mRNA. A altas co ncentraciones de hierro, IRE-SP
sufre un cambio en la conformación y no puede uni r los mRNA. El control dual
por parte de IRE-SP regula precisamente la concentración de íones de hierro
libre dentro de las célu las. Véase el texto para mayor deta lle.
D e manera sim ilar, estudios in vitro han demostrado que el mRNA que
codifica la proteína de la leche caseína está estabilizada por la hormona
prolactina y rápidamente se degrada en su ausencia.
Mecanismos de vigilancia evitan la traducción
de los mRNA procesados inadecuadamente
La traducción de un mRNA procesado d e manera inadecuada podría
llevar a la producción de una proteína ano rmal , que interfiere con la
función normal del gen. Este efecto es equivalente al que resulta de
las mutaciones dominantes negativas, analizadas en el Capitulo 5 ( Hg.
5 ·44 ). Diversos mecanismos colectivamente denominad os vigilancia
del mRNA ayudan a la célula a evitar la traducción de las moléculas
de mRNA procesadas de manera inadecuada. Previamente se mencio­
naron dos de tales mecanismos de vigilancia: el reconocimiento de los
pre-mRNA procesados inadecuadamente en el núcleo y sus degrada­
ciones por el exosoma, y la restricción general contra la exportación
nuclear de los pre-mRNA procesados de forma incompleta que perma­
necen asociados con un espliceosoma.
de mRNA ~-globina (J·i g. -32a, b ).
Una búsqueda de posibles señales moleculares que podrían i
car las posiciones de las uniones empalmadas en un mRNA proce5.l.:
llevó al descubrimiento de los complejos de unión d e exones. Ce_
ya se mencionó, estos com plejos de diversas proteínas (incluye~._
Y14, Magoh, eIF4IlIA, UPF2, UPF3 y REF) , unen - 20 nucleótidos ~
una unión exón-exón a continuación del proceso de corte y emp a::-­
del RNA (Flg. !l -32c), estimulando la expor tación de los mRNP a:, .
de el núcleo mediante interacción con el mRNA exportador (véa
Fig. /'1-21 J. El análisis de mutantes de levadura indicó que una de
proteínas en los complejos de unión de exones (UPF3) funcion a,
la degradación mediada por mutaciones sin sentido. En el citopL
ma , este componente de complejos de unión de exones interactúa ~
una proteína (UPF1) y una proteincinasa (SMG1) qu e fosforila UPF
causando que el mRNA se asocie con los cuerpos P, reprimiendll
traducción del mRNA. Una proteína adicional (UPF2) asociada co • ~
complejo mRNP, se une a un cuerpo P asociado co n la desanilasa e _.
rápidamente elimina la cola de poli(A) de un mRNA asociado, llevan.::
a la rápida eliminación de la cape ruza S' y a la degradación del cuer.
P asociado a la exonucleasa 5' ~ 3' (véase la Fig. R- 29 ). En el casCl .:. .
los mRNA adecuadamente procesados, el complejo unión-exón se a,
cia con el complejo de unión a la caperuza nuclear (CBP80, CBP20
medida que el mRNP es transportado a través de un complejo del po;­
nucl ear, protegiendo así al mRNA de la degradación. Se cree que '
com plejos de unión de exones so n desprendidos del mRNA al pa, ..:;
por el primer ribosoma "pionero" para traducir el mRNA. Sin emba:­
go, para los mRNA con un codón de terminación antes de la unión -::. .
los exones finales, uno o más complejos de unión de exones permane.: ­
asociado con el mRNA , dando como resultado la degradación media _
por mutaciones sin sen tido ( rig. ¡l. 32 ).
localización de los mRNA que permiten la
producción de proteínas en regiones específicas
dentro del citoplasma
Muchos procesos celulares dependen de la localización de proteín.c. .
particulares en estructuras o regiones específic as de la célula. En L
últimos capítulos se analizará cómo algunas proteínas son transpor­

380 CAPITULO 8 • Control génico postraduccional


bmicrografía de Auorescencia de una célula de mamífero en cultivo (COS-7)
' muest ra la distribuc ión de l retículo endoplasmático (verde), el aparato de
~ i (rojo) y el núcleo (azul). Las proteínas de secreción recién sinte tizadas
[lero se dirigen hacia el RE, donde se pliegan y se mod if,can antes de ser
ortadas al Golgi, para su clasificación a destinos corriente abajo. (Co"esiade
:~ r Li pptncon-Schwartz y Prasanna Satpu:.eJ
Una célula de mamífero típica contiene hasta 10 000 tipos de pro ­
las diferentes; una levadura, ap roximadam ente 5 000. La gran ma­
:ía de estas proteínas son sintetizadas por ribosomas citosólicos, y
I( has permanecen dentro del citosol (Cap. 4 ). Sin embargo, hasta
rlitad de las diferentes clases de proteínas producidas en una célula
íca son enviadas a uno u otro de los diferentes orgánulos rodead os
r membrana dentro de la célula o a la superficie celular. Por ejem-
muchas proteínas receptoras y proteínas transportadoras deben
nviadas a la m embrana plasmática, algunas enzimas hidrosolubles,
110 las RNA y las DNA polimerasas, deben ser dirigidas al núcleo; y
¡w mponentes de la matriz extracelular, así como las enzimas diges­
ls y las moléculas de señalización poli peptídicas, deben dirigirse a
ilperficie celular para ser secretadas desde la célu la. Éstas y todas las
as proteínas producidas por una célula deberán alcanzar sus ubica­
!les correctas para que la célul a funcione adecuadamente.
El envío de proteínas recién si ntetizadas a sus destinos celulares
tcuados, habitualmente conocida como direccionamiento o clasifica­
rle proteínas, comprende dos tipos de procesos muy distintos: un
ccionamiento basado en señales y un tránsito basado en vesículas.
NTENIDO
1 Direccionamiento de las proteínas hacia
la membrana del RE y a través de ésta 579
2 Inserción de las proteínas de la membrana
dentro del RE 587
3 Modificaciones, plegamiento y control de calidad
de las proteínas en el' RE 594
CAPiTULO
El movimiento
de proteínas en
membranas y orgánulos
El primer proceso general inlplica el direccionamiento de una proteína
recién sintetizada desde el citoplasma a un orgánulo intracelular. Esto
puede ocurrir durante la traducción o poco después de que se haya
completado la síntesis de la proteína. Para las pro teínas de membrana,
el direccionamiento conduce a la inserción de la proteína dentro de
la bicapa lipídica de la membrana, mientras que en las proteínas hi­
drosolubles el direccionamiento lleva a la translocación de la proteína
completa a través de la membrana al interior acuoso de l orgánulo. Las
proteínas son clasificadas al retículo endoplasmático (RE), las mito­
condrias, los cloroplastos, los peroxisomas y el núcleo mediante este
proceso general (rig. J .~ - l ) .
El segundo proceso general de clasificación se conoce como la
vía secreto ra e implica el transporte de pro teínas desde el RE a s u
destino final , dentro de las vesículas rodeadas por membrana . Para
muchas proteínas, incluso las que co nstituyen la matriz extracelul ar,
el destino final es el exterio r de la célula (de allí el nombre); las pro­
teínas integrales de la membrana también son transportada s al Golgi,
los lisosomas y la membrana plasmática m ed iante este proceso. La
vía secre tora comienza en el RE; así, todas las proteínas que han sido
13.4 Direccionamiento de las proteínas
hacia las mitocondrias y los cloroplastos 601
13.5 Direccionamiento de ,las proteínas a los peroxisomas 612
13.6 Transporte hacia el interior y el exterior del núcleo 615
o ANIMACiÓN GENERAL: Clasificación de las proteínas
Membrana
nuclear externa

Membrana
-jf
nuclear interna Núcleo

/
mRNA "-....
D\ Poro
nuclear

Citosol

~ Secuencia de
señalizaci ón RE 7)0"\
Prote!~a ~ /
Q)
cltosollca Secuencia ~
Retículo endoplásmíco direccionadora ~ Peroxisoma

Espacio
intermembranoso
Membrana externa

Matriz __~~=\;:::=~~::::::--::..:¡:;

interna Mitocondria

Cloroplasto

m ) \ mi
Memb~na ~
plasmática
~,Llsosoma
VíA SECRETORA
Figura 13-1 Resumen de las principales vías de clasificación de las
proteínas en los eucariontes. Todos los mRNA codificados en el núcleo se
traducen en ribosomas citosólicos, Derecha (vías no secretoras): la síntesis de
proteínas que carecen de una secuencia de seña lización RE se completa en
los ribosoma s libres (paso i1) , Las proteínas que no contienen secuencia de
direccionamiento son liberad as en el citosol y permanecen allí (paso ~ , Las
proteínas co n una sec uencia específi ca para orgánulo (rosa do) primero son
liberadas al citoso l (paso ~ y luego son importadas a las mitocon'drias, cloro­
plastos, peroxisomas o el núcleo (pasos~, La s proteínas de las mitocondrias
y de los cloroplastos típicamente atrav iesa n las membranas externa e interna
para ingresar en la matriz o en el espacio del estroma, respectivamente, Otras
prote'nas son seleccionadas para otros subcompartimentos de estos Oi _
nulos por pasos adicionales de clasificació n Las proteínas nucleares enlf?
y salen a través de poros visibles en la envoltu ra nuclear. Izquierda (vía de
secreción): Los ribosomas que si ntetizan proteínas nacien tes en la vía Sff' ;;,-­
ra se dirigen hacia el retícu lo endoplasmático (RE) rugoso por una secue- ' ­
de señalización (rosado; pasos O, ~ , Después de que se ha completado ';
traducción sobre el RE. estas proteínas pueden desplazarse por medio de
vesícu las de transporte hacia el complejo de Golgi (paso 6), La clasificac': ­
adicional envía proteínas a la membrana plasmática o a los lisosomas (pas ­
rn,ffil), Los procesos que emplea n vesículas corresponden a la vía seere :r
(pasos ~. O, recuadro sombreado) y se ana lizan en el CaJ'- '1ulc 1,l ,

seleccionadas para ingresar en la vía secretora, inicialmente, están di­
reccionadas ha cia ese orgá nul o,
El direccionamiento hacia el RE, por lo general, incluye las proteí­
nas nacientes aún en proceso de síntesis, en un ribosoma, Las proteí­
nas recién sintetizadas son expulsadas desde el ribosoma directamente
al interior de la membrana del RE, Una vez translocadas a través de
la membrana del RE, las proteínas se ensamblan en su conformación
nativa mediante los catalizadores del plegamiento proteico pre5t'!
en la luz del RE, De hecho, el RE es la localización en la que ap ~
madamente un tercio de las proteínas de un a célu la típi ca se p lt ~
sus co nformaciones nativas, y la mayoría de las proteínas residente< _
RE -de un modo direc to o indirecto- contribuyen al proceso de ;
garnien to, Corno parte de dicho proceso, las proteínas también S ~
mod ificacio nes postraduccionales específicas en el RE, Estos prOOl'

578 CAPiTULO 13 • El movimiento de proteínas en membranas y orgánulos

 _, cuidadosamente controlados y solo después de que se han comple­
''':'-:0 el plegamiento y el ensamblaje, las proteínas son transportadas
exterior del RE hacia otros destinos. Aquellas cuyo destino final es
Golgi, los lisosomas, la membrana plasmática o el exterior celular
11 transportadas a lo largo de la vía secretora mediante la acción de
· _'queñas vesículas que brotan desde la membrana de un orgánulo y,
- ~o, se fusionan con la membrana de otro (véase la Fig. 13-1, recuadro
'lI breado). En el siguiente capítulo, analizaremos el tránsito de proteí­
-l: mediante vesículas porque su mecánica difiere significativamente
:-.; direccionamiento de proteínas que no depende de vesículas al inte­
r de los orgánulos intracelulares.
En este capítulo, examinamos el modo en que las proteLnas se di­
-= ~ ci onan hacia cinco orgánulos intracelulares: el RE, las mitocondrias,
~ doroplastos, los peroxisomas y el núcleo. Dos características de este
-Qceso de direccionamiento de las proteínas, inicialmente, fueron bas­
"lte desconcertantes: de qué manera una proteína determinada podía
-igirse solo a una membrana específica y de qué modo las moléculas
-meicas hidrófilas relativamente grandes podían ser translocadas a
- ~·..és de una membrana hidrofóbica sin romper la bicapa como barre­
- para los iones y las moléculas pequeñas. Empleando una combina-
de métodos bioquímicos de purificación y técnicas de detección
_: ::dica para identificar mutantes incapaces de ejecutar pasos de trans­
. : l ción particulares, los biólogos celulares han identificado muchos
:-= :os componentes celulares necesarios para la translocación a través
:-'! : ada una de las diferentes membranas intracelulares. Además, nu­
-~rosos procesos de translocación centrales de la célula se han recons­
do con el empleo de componentes proteicos purificados incorpo­
.los a bicapas lipídicas artificiales. Estos sistemas in vitro pueden ser
- o;:¡ ipulados experimentalmente con libertad.
Estos estudios han mostrado que, a pesar de ciertas variaciones, los
- ;ffiOS mecanismos básicos rigen la clasificación de todas las proteínas
.- :odos los orgánulos intracelulares. Sabemos ahora, por ejemplo, que
,formación para dirigir una proteína a un destino particular en un
-; m ulo está codificada en la secuencia de aminoácidos de la propia
· --;¡eÍna, por lo general, dentro de las secuencias de aproximadamente
.l.iU inoácidos, conocidas genéricamente como secuencias señal (véa­
:a Fig. 13- 1); éstas también se denominan secuencias de captación­
<:_-cionamiento o péptido señal. Estas secuencias de direccionamiento
;>Ílualmente se presentan en el extremo N -terminal de una proteína,
· - ~ es la primera parte de una proteína en ser sintetizada. Más raramen­
- :as secuencias de direccionamiento pueden presentarse en el extremo
- ~mlinal o en el interior de una secuencia proteica. Cada orgánulo
-.: a un conjunto de proteínas receptoras que se unen solamente ti­
• · 0 específicos de secuencias señal, lo que asegura que la información
:.:.jificada en la secuencia señal gobierna la especificidad del direccio­
- ·Z1iento. Una vez que una proteína que contiene una secuencia señal
· . ~t eractuado con el receptor correspondiente, la cadena proteica es
.rall5ferida a cierto tipo de canal de translocaci6n que permite que la
::1lleina pase hacia el interior o a través de la bicapa de la membrana. La
' - ::.r.,ferencia unidireccional de una proteína al interior de un orgánulo,
. ' 'Olver al citoplasma, habitualmente se logra al acoplar la transloca­
_ ;-. a un proceso energéticamente favorable , como la hidrólisis del GTP
.:e! ATP. Después, algunas proteínas se clasifican adicionalmente para
~_lfl zar un subcompartimento dentro del orgánuJo diana; esta clasifi­
n depende también de otras secuencias señal y de otras proteínas
-~71O ras. Finalmente, las secuencias señal, con frecuencia, son eJimi­
-desde la proteína madura por proteasas específicas, una ve z que se
:':;¡jl pletado la translocación a través de la membrana.
13.1 Direccionamiento de las proteínas hacia la membrana del RE y a través de ésta
Para cada uno de los eventos de direccionamiento de las proteínas
analizados en este capítulo, buscaremos una respuesta a cuatro pregun­
ta s fundamentales :
l. ¿Cuál es la naturaleza de la secuencia señal y qué la distingue de otros
tipos de secuencias señal?
2. ¿Cuál es el receptor para la secuencia señal?
3. ¿Cuál es la estructura del canal de translocaci6n que permite la transfe­
rencia de las proteínas a través de la bicapa de la membrana? En particu­
lar, ¿el canal es tan estrecho que las proteínas pueden pasar a través de éste
solo en estado no plegado o acomoda dominios de proteínas plegadas?
4. ¿Cuál es la fuente de la energía que impulsa la transferencia unidirec­
cional a través de la membrana?
En la primera parte del capítulo, cubrimos el direccionamiento de
las proteinas al RE, incluidas las modificaciones postraduccionales que
experimentan las proteínas a medida que ingresan en la vía secretora.
El direccionamiento de las proteínas hacia el RE es el ejemplo mejor
comprendido de direccionamiento proteico y servirá como patrón del
proceso en general. Luego, describiremos el direccionamiento de las
proteínas hacia las mitocondrias, cloroplastos y peroxisomas. Final­
mente, cubriremos el transporte de las proteínas hacia el interior y al
e:>,.1:erior del núcleo a través de los poros nucleares.
13.1 Direccionamiento de las proteínas hacia
la membrana del RE y a través de ésta
Todas las células eucariónticas poseen un retículo endoplasmático. El
RE es un orgánulo grande, con convoluciones, constituido por túbulos
y sacos aplanados, cuya membrana se continúa con la membrana nu­
clear. La membrana del RE es el lugar de síntesis de los lípidos celulares
(Cap. 10), y el RE es el sitio en el que se ensamblan la mayoría de las
proteínas de la membrana, incluso las de la membrana plasmática y las
de la membrana de los lisosomas, el RE y el Golgi. Además, todas las
proteínas solubles que finalmente serán secretadas por la célula -así
como aquellas destinadas a la luz del RE, el Golgi o los lisosomas- son
inicialmente enviadas a la luz del RE (véase la fig . 13- 1). Como el RE
desempeña una función tan importante en la secreción de las proteí­
nas, nos referimos a la vía del tránsito de proteínas que fluye a través
del RE como la "vía secretora". Para simplificar, nos referiremos a todas
las proteínas inicialmente direccionadas hacia el RE como "proteínas
de secreción", pero tendremos en mente que, en realidad, no todas las
proteínas direccionadas hacia el RE son secretadas desde la célula.
En esta primera sección, analizaremos el modo en el que las pro­
teínas son inicialmente identificadas como proteínas de secreción, y de
qué forma estas proteínas son translocadas a través de la membrana del
RE. Nos ocuparemos primero de las proteínas solubles -aquellas que
recorren el camino a través de la membrana del RE, dentro de la luz de
éste-o En la siguiente sección, analizaremos las proteínas integrales de
membrana, aquellas que se insertan en la membrana del RE.
Los experimentos de marcado con pulsos con
membranas purificadas del RE demostraron que las
proteínas secretadas atraviesan la membrana del RE
Aunque todas las células secretan una diversidad de proteínas (p. ej., las
proteínas de la matriz extracelular), ciertos tipos de células están espe­
cializadas para secretar grandes cantidades de proteínas específicas. Las
579
 I1ACIÓN FOCALlZADA: Sfntesis de las proteínas secretadas un idas a la membrana
=' .A SRP
a
D
:lecuencia
r::
~E señalización
El
Translocón Translocón
(cerrado) (abierto)
- =iA 13-6 Translocación cotraduccional. Pasos D, fl una vez que la
;; de señalización RE emerge del ribosoma, se une por una pa rtícula de
-niento de la señal (PRSl Paso~: la PRS entrega el com plejo ribosoma/
10 nacien te al receptor PRS, en la membrana del RE. Esta interacción
- ::C"Zilda por la unión de GTP tanto a la PRS como a su receptor Paso n
;:"da del ribosoma/polipéptido naciente al translocón, que conduce a la
: CJe su canal de translocación e inserción de la secuencia de seña lización
' ~en to adyacente del polipéptido creciente al poro central. Ta nto la
-:- el receptor de PRS. una vez disociados del translocón, hidrolizan su
• - y luego están listos para iniciar la inserción de otra cadena polipeptí­
-:gura 13-6 resume nuestro conocimiento actual acerca de la sín­
~_~ proteínas que serán secretadas, así como la función de la partícula
-': nocimiento de señal y de su receptor, en este proceso. La hidrólisis
-:-;-P unido acompaña el desensamblaje de la partícula de reconoci­
. -. de señal y del receptor de esta y, en un modo que aún no se com­
-~. inicia la transferencia de la cadena naciente y del ribosoma a un
: : la membrana del RE, donde puede producirse la translocación.
- .~s de disociarse una de la otra, la partícula de reconocimiento de
u receptor liberan -cada uno- su GDP unido, la partícula de
- )(imiento de señal se recicla en el citosol y ambas están listas para
- otro ciclo de interacción entre los ribosomas que sintetizan pro-
nacientes -que serán secretadas- y la membrana del RE.
aso de los polipéptidos crecientes a través
translocón es impulsado por la traducción
tZ que la partícula de reconocimiento de señal y su receptor han
..;:jonado un ribosoma que sintetiza una proteína secretora hacia
13.1 Direccionamiento de las proteínas hacia la membrana del RE y a través de ésta
~GDP.P;
!L3
-
"'­
Secuencia de
señalización
cortada Proteína
plegada
dica. Paso 0 : a medida que la cadena polipeptídica se alarga, pasa a través del
canal del trans locón hacia la luz del RE, donde la secuencia de señalización es
cortada por la peptidasa señal y rápidamente degradada. Paso rilla cadena
peptídica contin úa alargándose a medida que el mRNA se traduce hacia el
extremo 3' terminal. Como el ribosoma está unido al translocón, la cadena
creciente es expulsada a través del translocón hacia la luz del RE. Pasos fl, m:
una vez que se ha completado la traducción. el ribosoma se libera, el resto de
la proteína es extraída a la luz del RE, el translocón se cierra y la proteína asume
la conformac ión plegada nativa .
la membrana del RE, el ribosoma y la cadena naciente rápidamente
son transferidos al translocón, un complejo de proteínas que forma un
canal embebido dentro de la membrana del RE. A medida que conti­
núa la traducción, la cadena en crecimiento pasa directamente desde la
subunidad ribosómica grande al poro central del translocón. La subu­
nidad ribosómica 60S está alineada con el poro del translocón de modo
tal que la cadena creciente nunca queda expuesta al citoplasma y se
evita que se pliegue hasta que alcance la luz del RE (véase la ¡: ig. 13-6).
El translocón fue identificado inicialmente por mutaciones en el
gen de la levadura que codifica la Sec61a, que causan un bloqueo en
la translocación de las proteínas secretoras al lnterior de la luz del RE.
Posteriormente, se encontró que tres proteínas denominadas complejo
Sec61 formaban el translocón de los mamíferos: Sec61a, una proteí­
na integral de la membrana con 10 hélices a que se expandían en la
membrana, y dos proteínas más pequeñas llamadas Sec61~ y Sec61y.
Experimentos de entrecruzamiento químico -en los cuales las cadenas
laterales de los aminoácidos de proteínas nacientes, por ser secretadas,
podían unirse mediante enlaces covalentes a la subunidad Sec61a- de­
583
 Inserción de las proteínas de la membrana
o del RE
· j los anteriores, hemos descrito numerosos aspectos acerca de
-idad de configuraciones de las proteínas integrales (que atra­
membrana) presentes en toda la célula. Cada una de estas pro­
' . o:le una orientación única con respecto a la bicapa fosfolipídica
.- c-mbrana. Las proteínas integrales de la membrana localizadas
- .E. el Golgi y los lisosomas, así como las proteínas de la membra­
:l'!z tica -todas sintetizadas en el RE rugoso- permanecen embe­
.;-. la membrana, en su orientación única, a medida que se mue­
_-;a sus destinos finales a lo largo de la misma vía que siguen las
's solubles que serán secretadas (véase la Fig. 13- 1, izquierda ).
· .este transporte, la orientación de una proteína de membrana
- >:;1; es decir, los mismos segmentos de la proteína siempre en­
d citosol, mientras que otros segmentos siempre enfrentan la
~. opuesta. De este modo, la orientación final de estas proteínas
--~ brana está establecida duran te su biosíntesis sobre la mem­
:.; . RE. En esta sección, en primer lugar, veremos de qué manera
~ ,as integrales pueden interactuar con las membranas; a con-
n. examinaremos cómo diferentes tipos de secuencias, conoci­
· ~ :j vamente como secuencias topogénicas, dirigen la inserción
~1t ación en la membrana de varias clases de proteínas integrales.
~ -o ( esos se llevan a cabo mediante modificaciones de los meca­
oásicos empleados para translocar las proteínas de membrana
:l secretadas a través de la membrana del RE.
co:)
encia
de señalización
j' \ segmentada
• NH
celular) !
Tipo I Tipo 11 Tipo 111 Proteína anclada
por la cola
Receptor LDL Receptor de Citocromo
Proteína HA de asia log lucoproteína P450
la influenza Receptor de transferrina
Receptor de Galactosi Itra nsfe rasa
insulina de Golgi
Receptor de la Sialiltransferasa de
hormona del Golgi
crecimiento
3-10 Proteínas de la membrana del RE. (inco clases topológicas
- - 3S integrales de la membrana se sintetizan en el RE rugoso, como
. un sexto tipo unido a la membrana por un ancl a fosfollpidica. La s
." la membrana se clasifican por su orientación en ésta y los tipos de
_~ contienen para di rig irlas hacia allí. Para la s proteínas integrales de la
, ::lS segmentos hidrófobos de la cadena proteica forme n hélices (j
·-=. : :,n la bicapa de la membra na; las regiones que se encuentran fu era
Varias clases topológicas de proteínas integrales
de la membrana se sintetizan en el RE
La topología de una proteína de membrana se refiere al número de veces
que su cadena polipeptídica se expande en la membrana y a la orien­
tación de estos segmentos que se expanden en la membrana dentro de
ésta. Los elementos clave que determinan la topología de una proteína
son los segmentos que se expanden en el interior de la membrana; ha­
bitualmente, son hélices u. que contienen entre 20 y 25 aminoácidos hi­
drófobos que contribuyen a interacciones energéticamente favorables
en el interior hidrófobo de la bicapa fosfolipídica.
La mayoría de las proteínas integrales de la membrana se encuen­
tran dentro 'de una de las cinco clases topológicas que se ilustran en la
Fí¡rura 13-1 (J . Las clases topológicas 1, IJ, III Ylas proteínas ancladas por
la cola comprenden las proteínas de un pase único que poseen solo un
segmento de hélice u. que se expande en la membrana. Las proteínas
tipo 1 tienen una secuencia de señalización RE N-terminal cortada y
están ancladas en la membrana con su región N-terminal hidrófila en
la cara luminal (conocida también como cara exoplasmática) y su re­
gión hidrófila C-terminal sobre la cara citosólica. Las proteínas tipo II
no contienen una secuencia de señalización RE cortada y están orien­
tadas por su región N-terminal hidrófila sobre la cara citosólica y, por
su región C-terminal hidrófila, en la cara exoplasmática (opuesta a las
proteínas tipo 1) . Las proteínas tipo IIJ poseen un segmento hidrófobo
que se expande en la membrana en su N-terminal y, de este modo, tie­
nen la misma orientación que las proteínas tipo 1, pero no contienen
/ cno
coo
NH 1
Tipo IV Proteína unida a GPI
v-SNARE y Receptores acoplados a la Receptor del activador
t-SNARE proteína G de plasminógeno
Transportadores de glucosa Fasciclina II
Canales con compuerta
regulados por Ca 2+
Bombas moleculares
pequeñas ABC
Canal de (CI-) CFTR
Sec61
de ésta son hidrófilas y se pliegan en varias confo rmaciones. Todas las proteínas
tipo IVtienen múlti ples hél ices (j transmembrana. La topología tipo IV mostrada
aquí corresponde al de los receptores acoplados a proteína G: siete hélices (j, el
\l-terminal en el lado exoplásmico de la membrana y el (-terminal del lado ci­
tosóli co. Otras proteínas tipo IV pueden poseer un número diferente de hélices
y va rias orientaciones del extremo N-terminal y (-terminal. (Véase E. Hartmann y cols.
·9f;. p,x. i.ar·IACll.:l. Sél. US A 865786 yc. P llro'Nl1 y 5. D. Block. 1989. J. 8101. ehem. 264:444 2.)
13.2 Inserción de las proteínas de la membrana dentro del RE 587
 Cadena
polipeptídica en
translocación

COmPI'jO )
Sec63 \
~m. IDn~
Luz del RE
~ p 0-P..~¡
Secuencia
de señalización El
cortada

~..,-- ........
Figura 13-9 Translocación postraduccional. Este mecan ismo es bastante
común en las levaduras y, probablemen te, se produzca en ciertas ocasiones
en los eucariontes superiores. Las pequeñas Aechas dentro del tran slocón
re prese ntan el deslizamiento al aza r del poli pép tido en translocaci ón hacia e l
interior y hacia el exterior. La unión su cesiva de BiP·ADP a los segmentos que
ingresan del polipéptido evita que la cadena se deslice hacia afuera, hacia el
citoso l. (Véase K. E. Matlack y cols., 1997. Science 277:938)

ADP

CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCiÓN 13,1 ción de la PRS (véanse las Figs . 13 -5 y 13-6). A medida que el n'ho
unido al translocón continúa la traducción, la cadena proteica ~
Direccionamiento de las proteínas hacia de la gada es expulsada hacia la luz del RE. No se requiere energía ad .
membrana del RE y a través de esta para la translocación.

• La síntesis de las proteínas secretadas, las proteínas integrales de la
membrana plasmática y las destinadas al RE, el complejo de Golgi o
los lisosomas se inicia sobre los lisosomas del citoso l, que se unen a
la membrana del RE y constituyen el RE rugoso (véase la Fig. 13 - 1,
izquierda).
' El translocón contiene un canal central, tapizado con residu "
fobos, que permite el tránsito de una cadena de proteína no __ ~
mientras que permanece sellado para los iones y pequeñas 1110 _: .
hidrófilas. Además, el canal tiene una compuerta, de modo tal : _
abre solo cuando está siendo translocado un polipéptido.

• La secuencia señal de RE sobre una proteína de secreción naciente
consiste en un segmento de aminoácidos hidrófobos localizados en el
extremo N-terminal.
• En la translocación cotraduccional, la partícula de reconocimiento
de la señal (PRS) reconoce inicialmente la señal RE de una proteína de
secreción naciente; se une a ésta y, a su vez, es unida por un receptor de
PRS a la membrana del RE; de este modo, se dirige el complejo riboso ­
ma/cadena naciente hacia el RE.
• Luego, la PRS y el receptor de PRS median la inserción de la proteína
secretora naciente dentro de translocón (complejo Sec61) . La hidrólisis
de dos moléculas de GTP por la PRS y su receptor provocan la diso cia­
• En la translocación postraduccional, una proteína secretora co;:- :
es direccionada hacia la membrana del RE por la interacción de
cuencia de señalización con el translo cón. Después, la cadena po i: _
dica es dirigida hacia el RE por un m ecanismo de trinquete que r '. _
la hidrólisis de ATP por la chaperona BiP, que estabiliza el poli. ~
entrante (véase la Fig. 13-9). En las bacterias, la fuerza impulsora ¡: ­
translocación postraduccional proviene de la SecA, una ATPasa ei: .
ca que empuja los polipéptidos a través del canal del translocón.
• Tanto en la translocación cotraduccional como postraducciona. _­
peptidasa señal de la membrana del RE corta la secuencia de se-.~
ción del RE de una proteína secretora, poco después de que el en: :
N-terminal ingresa en la luz.

586 CAPITULO 13 • El movimiento de proteínas en membranas y orgánulos

una secuencia de señalización que pueda ser escindida. Finalmente, las
proteínas ancladas por su cola tienen un segmento hidrófobo en su C ­
terminal, que se expande en la membrana. Estas diferentes topologías
reflejan distintos mecanismos empleados por la célula para establecer
la orientación de los segmentos transmembrana en la membrana, se­
gún se analizará en la siguiente sección.
Las proteínas que forman la clase topológica IV contienen dos o
más segmentos que se expanden en la membrana y, en ciertas ocasio­
nes, se denominan proteínas multipaso (o de paso múltiple). Por ejem­
plo, muchas de las proteínas de transporte analizadas en el Cap It ulo 11
y los numerosos receptores acoplados a la proteína G expuestos en el
apltuln 15 pertenecen a esta clase. Un tipo final de proteína de mem­
brana carece de un segmento hidrófobo que se expanda en la membra­
na; en lugar de ello, estas proteinas están ligadas a un ancla fosfolipídi­
ca anfipática que se encuentra embebida en la membrana ( Fig. [5 - \O,
derecha).
las secuencias internas de detención de la
transferencia y señalización-anclaje determinan
la topología de las proteínas de paso único
Comenzamos nuestro an álisis acerca del modo en que se determina
la topología de las membranas con la inserción de las proteínas inte­
grales de membrana que contienen un segmento hidrófobo único que
se expande en la membrana. Hay dos secuencias involucradas en el
direccionamiento y la orientación de las proteínas tipo I en la mem­
brana del RE, mientras que las proteínas tipo II y tipo III contienen
Citosol
5'
Translocón
abierto , .. ~
Peptidasa
señal
?1lJ ~ NH,
~
C,deo,
polipeptídica
naciente
Secuencia de
detención de la
transferencia anclaje
Secuencia
Luz del RE de señalización
cortada
Figura 13-11 Posicionamiento de las proteínas tipo I de paso único.
Paso U: después de que el complejo ribosoma/cadena nacien e se asoci a con
un tra nslocón en la me mb rana del RE, la secuencia de se'ial : za~;6n N-ter Inal
se segmenca. Este proceso se produce po r el mismo mec nisn1 0 que el oe las
proteínas solubles secretoras (véase la Flg. 13-6) Pa sos ~, El: la cadena se a arga
hasta que se sintetiza la secuencia de detención de la transferer.cia anclaje
hidrófoba e ingresa en el ranslocón.lugar en el Que evita que la ade a na­
ciente salga más allá, ha da la luz del RE. Paso ril: la secuencia de e¡ene ló', Je
588 CAPfTULO 13 • El movimiento de proteínas en membranas y orgánulos
un a secuencia topogénica interna única . Como veremos, existen trec~
tipos principales de secuencias topogénicas empleadas para direccio­
nar las proteínas hacia la membran a del RE y para orientarlas dent
de éste. Ya hemos presentado una de ellas, la secuencia de señalizaci 6 ~.
N-terminal. Las otras dos analizadas aquí son las secuencias inter ~
conocidas como secuencias de detención de la transferencia-anclaje y S<' ­
cuencias de señalización- anclaje. A diferencia de las secuencias de se ñ.l ­
lización , los dos tipos de secuencias topogénicas internas terminan ~
la proteína madura como segmentos que se expanden en la membra nc...
Sin embargo, los dos tipos de secuencias topogénicas internas difie r<,c
en su orientación final en la membrana.
Proteínas tipo I Todas las proteínas transmembrana de tipo 1 pos ec­
una secuencia de señalización N-terminal que las direcciona hacia :..
RE, así como una secuencia hidrófoba interna que se transforma _­
la hélice a, que atraviesa la membrana. La secuencia de señalizaci
N-terminal de una proteína naciente tipo 1, como el de una prote=-­
soluble que será secretada, inicia la translocación cotraduccional d.:
proteína mediante la acción combinada de la partícula de reco n , ­
miento de señal y el receptor de dicha partícula. Una vez que el extre:-:
N -terminal del polipéptido creciente in gresa en la luz del RE, la secu~ .
cia de señalización se segmenta y la cadena creciente continúa sie r.::.
expulsada a través de la membrana del RE. Sin embargo, a diferencíz -.: .
lo que sucede con las proteínas so lubles que serán secretadas, CU 2:-::
la secuencia de aproximadamente 22 aminoácidos hidrófobos q u
transformará en el dominio que se encuentra dentro de la membr ­ .
de esta cadena naciente ingresa en el translocón, detiene la transfe:- ,-·
cia de la proteína a través del canal (fig . 13-11 ). El complejo '~-
NH
la transferencia cl' claje se desplaza en direcc ión latera l, entre la s su' Uf' ~_
oel ranslocón, y se ancla a la bicapa de fosfolipidos. Probablemente, e- ­
mome nto, el t'a nsl ocón se c erre. Paso 0 : a medioa que la síntesis co n- ­
I¿, cadena qu e esra alargándose pu ede for mar un asa hacia el citosol,,, - _
de un pequeño espacio en re el ri oosoma y ei translocón. Paso [11: cua- ­
sí resis se ha co, pletado, las sub unidades ri bosómicas se liberan en'?' :
y también se ibera la oroteíl' a para ou e difunda en la membrana. (W.",­
: :- ":iS : ;%, : ¿- 85 : :~9 y -:.' ;\'O: ¡"~!· y _ols.. 19; 7 ':t' 89:52 3 \
:,:",tonces, puede abrirse como la valva de una almeja y permitir que el
.puento hidrófobo del interior de la membrana de es te péptido que
_transloca se mueva en dirección latera l entre los dominios proteicos
- _e constituyen la pared del translocón (véase la hg. 1.3-8). Cuando el
_;:l! ido sale del translocón de esta manera, se ancla en la bicapa fosfoli­
¿ica de la membrana. Dada la doble función de una secuencia de este
: .: '0, que consiste en detener el paso de la cadena polipeptídica a través
. ,!,_ translocón yen transformarse en el segmento hidrófobo inserto en
:-~Ie mbrana dentro, de la bicapa de ésta , se la denomina secuencia de
.-"llción de la transferencia-anclaje.
e na vez que se ha interrumpido la translocación, la traducción
-.ü núa en el ribosoma, que aún se encuentra anclado al translocón
_~_ en ese momento, está desocupado y cerrado. A medida que se sin­
el extremo C-terminal de la cadena pro teica, esta forma un asa en
..:do citosólico de la membrana. Cuando se ha completado la traduc­
- -el ribosoma se libera del translocón, y el extremo C-terminal de la
.cina tipo I recién sintetizada permanece en el citoso l.
~5t udios segú n los cuales los cDNA que cod ifican va rios receptores
-:4ntes de la hormona de crecimiento humana (HG H) se exp resan
- : =Iu]as de mamífero en cultivo dan sustento a este tipo de mecanis­
:::1 receptor silvestre de la HGH , un a proteína típica tipo 1, normal­
-·· e. se transporta hacia la membrana plasmática. Sin embargo, un
-'- ~ .Jr mutante que tiene residuos cargados insertos en el segmento
EJ o (bl
Cadena
polipeptídica
naciente
~
RE
13-12 Posicionamiento de las proteínas de paso único tipo 11
al Proteínas tipo 11. Paso U después de que se ha sintetiZado la
, ',terna seña li zación-an claje en un ribosoma citosólico, es unida por
-} se muestra), que dirige el complejo ribosoma/cadena nac iente
. ~'-nb rana del RE. Esto es similar al direcciona miento de las proteínas
:~-::'e toras, excepto por el hecho de que la secuencia de se ñalización
- -o se localiza en el extremo f+ terminal y no es posteriormente
-o cadena nac ie nte se orienta en el translocón, con su porción
_ r acia el citosol. Se cree que esta orientación estiÍ medi ada por los
: ¡:¡ivamente ca rgados que se muest'an en posición N-termin al
- --:) a la secuencia de señalización-anclaJe. Paso ~: a medida que la
=¿, 3iga y se expulsa hacia la luz, la secuencia señalización-anc laje
de a-hélice de la membrana o bien falta o bien se transloca por com­
pleto hacia la luz del RE y, finalmente, se secreta desde la célula como si
fuese un a proteína soluble. Estos tipos de experimentos establecen que
la hélice a transmembrana hidrófoba del receptor de HGH y de otras
proteínas tipo I funciona como secuencia de detención de la transfe­
rencia y como ancla de membrana que evita que el extremo C-terminal
de la proteína atraviese la mem brana del RE.
Proteínas tipo 11 y tipo 111 A diferencia de las proteínas tipo 1, las pro­
teínas tipo II y tipo III carecen de una secuencia de señalización N­
terminal RE escindible. En lugar de ello, ambas poseen una sola secuen­
cia de señalización-anclaje interna hidrófoba que funciona, al mismo
tiempo, como secuencia de señalización al RE y como una secuencia
de anclaje a la membrana. Recordemos que las proteínas tipo Il y tipo
III tienen orientaciones opuestas en la membrana (véase la Fig. 13-1 0) ;
esta diferencia depende de la orientación que sus respectivas secuencias
de señalización -anclaje adquieran dentro del translocón. La secuencia
de seña lización -anclaje interna en las pro teínas tipo II dirige la inser­
ción de la cadena naciente en la membrana del RE, de modo tal que
el ext remo N-terminal de la cadena enfrente al citosol, con el uso del
mismo meca nismo dependiente de la partícula de reconocimiento de
señal descrito para las secuen cias de señal (Fig. 13-1 2a). Sin embargo, la
secuencia de señalización-anclaje interna no es escindida y se mueve en
o El EJ coo
interna se desplaza en dirección lateral, sale del translocón y ancla la cadena
a la bicapa de fos folíp idos. Paso~: una vez que se ha completado la síntesis
pro tei ca, el extremo (-ter minal del polipéptido se li bera hacia la luz. y las
subunidades ribosómicas se libera r¡ al citosol. (bl Proteínas tipo 111. Paso D: el
ensamblaje se realiza por una vía similar a las de las proteínas tipo 11, excepto
qu e los residuos positivamente cargados en el lado (- ter minal de la secuencia
de seña lización-anclaje hacen que el segmento transmembrana se oriente
dent ro de! translocón, con su porción (-te rmi na l orientada hacia el citosolyel
lado ¡\J-tE 'minal de ia proteína en la luz de l RE. Pa sos ~, U la elongación de la
cadena de la porción C-te'mi nal de la proteína se completa en el citosol, y se
liberan las subun idades ribosó micas. (Vé~se M. Splesl Y H". Lodlsh. 1986. Cel: 44:177 y H. Do
y m is, ' .g%, Ü:,f 85 3 c;_~
13.2 Inserción de las proteínas de la membrana dentro del RE 589
sentido lateral entre los dominios proteicos de la pared del translocón,
en la bicapa fosfolipídica, donde funciona como un ancla de membra­
na. A medida que procede la elongación, la región e-terminal de la
cadena creciente sale a través del translocón hacia el interior de la luz
del RE mediante translocación cotraduccional.
En el caso de las proteínas tipo 111, la secuencia de señalización ­
anclaje que se localiza cerca del N-terminal inserta la cadena naciente
en la membrana del RE con su extremo N-terminal enfrentado a la
luz, en la orientación opuesta de la señalización-anclaje de las proteínas
tipo JI. La secuencia de señalización-anclaje de las proteínas tipo III
también funciona como una secuencia de detención de la transferen­
cia y evita la salida posterior de la cadena naciente hacia la luz del RE
(Fíg. 13- 12b). La elongación continua de la cadena e-terminal hasta la
secuencia de señalización-anclaje/detención de la transferencia se pro­
duce como en las proteínas tipo 1, en las que la secuencia hidrófoba se
desplaza en dirección lateral entre las subunidades del translocón para
anclar el polipéptido a la membrana del RE (véase la I-Ig. J3-l t ).
Una de las características de la secuencia de señalización-anclaje,
que parece determinar su orientación de inserción, es una elevada con­
centración de aminoácidos con carga positiva adyacentes a un extremo
del segmento hidrófobo. Estos residuos de carga positiva tienden a per­
manecer en el lado citosólico de la membrana, sin atravesar la membra­
na hacia la luz del RE. De este modo, la posición de los residuos cargados
dicta la orientación de la secuencia de señalización-anclaje dentro del
translocón y determina si el resto de la cadena polipeptídica continúa
pasando hacia la luz del RE: las proteínas tipo Ir tienden a presentar
residuos con carga positiva en el lado N-terminal de su secuencia de
señalización-anclaje, lo que orienta el extremo N-terminal en el citosol
y permite el paso del lado e-terminal hacia el RE (Fig. 15- 12.1), mientras
que las proteínas tipo III tienden a tenerlos en el lado del e-terminal de
su secuencia de señalización-anclaje. Su extremo N-terminal se inserta
en el translocón y el lado e-terminal se restringe al citosol (lig. 1-'-I .2 b ).
Una demostración experimental sorprendente de la importancia
de la carga lateral en la determinación de la orientación de la membra­
na la proporciona la neuraminidasa, una proteína tipo II presente en la
cubierta superficial del virus de la influenza. Hay tres residuos de argi­
nina localizados exactamente en la posición N-terminal con respecto a
la secuencia de señalización-anclaje de la neuraminidasa. La mutación
de estos tres residuos cargados positivamente a residuos de glutamato
Figura 13-13 Inserción de proteínas ancladas por la cola. Para
las proteínas ancladas por la cola (-ter mi nal, el extremo (-terminal
hidrófobo no está dispon ible pa ra la inserción en la membrana hasta
que se haya completado la síntesis proteica y la proteína se haya liberado
del ribosoma. Paso n la Get3, un ida al ATp, se une a la cola hidrofó ca
(-terminal. Esta reacción de unión es facilitada por un cu n plejo de tres
proteínas, 5g t2, Get4 y GetS, que secuestran la cola (-terminal hid rófoba
antes de transferirla a la GeGATP (no se muestra) Paso El: el complejo
ternario Get3ATP unido a la cola (-terminal ancla I s proteínas Getl y
Get2, que están embebidas en la membrana del RE. Paso n sucesiva­
men te, el ATP se hidroliza y se libera ADP desde la Get3. Al mi smo tiem­
po, la cola hidrófoba (-terminal se libera desde la Get3 y qu eoa inserta
en la membrana del RE, Paso tl: la Get3 se une al ATp, y se libera Get3ATP
desde el com plejo de Getl y Get2 en fo rma soluble, lista para otro ciclo
de unión a la cola (-terminal hidrófoba.
590 CAPITULO 13 • El movimiento de proteínas en membranas y orgánulos
con carga negativa hace que la neuraminidasa adquiera la orienta..
inversa. Experimentos similares han mostrado que otras proteína"
orientación tipo 11 o tipo IlI, pueden "saltar" a la orientación inver' _
la membrana del RE, al mutar los residuos cargados que flanqu
segmento interno de señalización-anclaje interno.
Proteínas ancladas por la cola Para todas las clases topológica;
proteínas que hemos considerado hasta el momento, la inserción
membrana comienza cuando la partícula de reconocimiento de se­
reconoce un péptido topogénico hidrófobo, a medida que surge
ribosoma. El reconocimiento de las proteínas ancladas por la cola, .
poseen una sola secuencia topogénica hidrófoba en el e-terminal"
senta un desafío único, ya que el e-terminal solamente está dispor,
para su reconocimiento después de que se ha completado la tradu <x
y la proteína se ha liberado desde el ribosoma. La inserción de las ­
teínas ancladas por la cola a la membrana del RE no emplea la part í ~.
de reconocimiento de señal, el receptor de dicha partícula o el tr ­
locón; en lugar de ello, depende de una vía dedicada a este propó,­
como se muestra en la fi gurJ 15- U . El direccionamiento de las F
teínas ancladas por la cola involucra una ATPasa conocida como G
que se une al segmento hidrófobo e-terminal de las proteínas ancl ~:...
por la cola. El complejo de Get3 unido a una proteína anclada po.
cola es reclutado hacia el RE por un receptor de membrana intev
dimérico conocido como Getl/Get2, y la proteína anclada por la e
se libera desde Get3 para su inserción en la membrana. La inserción _
la proteína anclada por la cola en las membranas del RE por las pro::
nas Get comparte similitudes fundamentales, en cuanto al mecanis::­
con el direccionamiento de las proteínas que llevan secuencias de . :
ñalización hacia el RE, por parte de la partícula de reconocimient :...
señal y su receptor. Dos diferencias principales entre los dos proc~
de direccionamiento consisten en lo siguiente: después de la liberae:
desde Get3, las proteínas ancladas por la cola pueden ser inserta :..
directamente en la bicapa de la membrana mientras que la partíc
de reconocimiento de señal transfiere una secuencia de señalizaciÓr.
translocón y la Get3 acopla el direccionamiento y la transferencia:
las proteínas ancladas por la cola a la hidrólisis del ATP, mientras qu
partícula de reconocimiento de señal acopla el direccionamiento de _
proteína que será secretada ex la hidrólisis del GTP.
f D
"-
~
\ coo- ~ Get3
~ ----,
Cola hidrófoba -_o, ..,¡~_ _ _ _ _ _ _ __
C-terminal ~ ,~!!.) '--­
~ATP
fJ(
Citosol
Luz del RE Get1 Get2
 gosacárido preformado N-ligado se agrega
as proteínas en el RE rugoso
~;esis de todos los oligosacáridos N-ligados se inicia en el RE
: L'n la adición de un precursor de oligosacárido preformado
- ¡jeae 14 residuos (rig. 13-17). La estructura de este precursor
n la en los vegetales, animales y eucariontes unicelulares: un
~.L-¡ do ramificado que contiene 3 moléculas de glucosa (Glc) ,
';-.osa (Ma n) y 2 de N-acetilglucosamina (GlcNAc), que puede
.-~' como Glc,Man 9 (GJcNAc),. Una vez que se ha agregado a la
- .: esta estructura de carbohidrato ramificada se modifica por
.. ;:¡ e.liminación de los monosacáridos en los compartimentos del
: 'lm plejo de Golgi. Las modificaciones a las cadenas N-ligadas
- ':e una glucoproteína a otra y entre diferentes organismos,
:onserva un núcleo de 5 de los 14 residuos en las estructuras
~ los oligosacáridos N-ligados en las proteínas secretoras y las
~nr ana .
. ,,~ ::; de la transferencia a una cadena naciente en la lu z del RE, el
.::!rido precursor se ensambla en un ancla unida a la membrana
- ~ da dolieal fosfato , un lípido poliisoprenoide de cadena larga
. Después de que el primer azúcar, GlcNAc, se une al dolicol
"!'Iediante un enlace pirofosfato, los otros azúcares se agregan
- .di.o de enlaces glucosídicos a un conjunto complejo de reaccio­
.ilizado por enzimas unidas a las caras citosólica o luminal de
- . m ana del RE rugoso (Fil'. J 3-1 :O ). El oligosacárido pirofosforil
3 ~ oqueado
tunicamicina Citosol
_:p I UDP 5 GDP
• Ó
IMP \ 4 GDP
,
\
Dj /if" ~ /EI
JA
"O'
T(:
r ~ >-<
t ~ ~
11 = N-acetilglucosamina
0= Manosa
A = Glucosa
Luz del RE
13-17 Biosíntesis del precursor de oligosacáridos. El dolicol
;os un lípido fuertemente hidrófobo que contiene 75-95 áto mos de
y está em bebido en la membra na del RE. Se añaden dos residuos
-¿,¡ilglucosam ina (GlcNAc) y cinco residuos de manosa. uno a la vez. al
'mfato de la cara citosólica de la membrana del RE(pasos O-D). Los
=5 de nucleótido-azúcar, en estas reacciones y otras posteriores, se
21 en el citosol. Nótese que el pri mer residuo de azúcar está unido al
'Tlediante un enlace pirofosfato de alta energía. La tun icamici na, que
~ ; la primera enzima de esta vía, inhi be la síntesis de todos los oligo­
13.3 Modificaciones, plegamiento y control de calidad de las proteínas en el RE
dolicol resultante está orientado de modo tal que la porción del oligo­
sacárido enfrenta la luz del RE.
Todo el precursor de 14 residuos es transferido desde el portador
dolicol a un residuo de asparagina en un polipéptido naciente a medida
que emerge hacia la luz del RE ([,ig. 13-18, paso D). Solo los residuos de
asparagina en las secuencias del tripéptido Asn-X-Ser y Asn-X-Thr (en
los que X es cualquier aminoácido, excepto prolina ) son sustratos de la
oligosacaril tral1sferasa, la enzima que cataliza esta reacción. Dos de las
tres subunidades de esta enzima son proteínas de membrana del RE cu­
yos dominios citosólicos se unen al ribosoma, lo que ubica una tercera
subunidad de la transferasa, la catalítica, cerca de la cadena de polipép­
tido creciente en la luz del RE. No todas las secuencias Asn-X-Ser/Thr se
glucosilan, y no es posible predecir -a partir de la secuencia de aminoá­
cidos exclusivamente- cuáles son los sitios de potencial glucosilación
N-ligada que se modificarán ; por ejemplo, el rápido plegamiento de un
segmento de una proteína que con tiene una secuencia Asn-X-Ser/Thr
puede evitar la transferencia del oligosacárido precursor a ese segmento.
Inmediatamente después de que el precursor completo,
GJc)Man 9 (GJcNAc),se transfiere a un polipéptido naciente, tres en­
zimas diferentes, denominadas glucosidasas, eliminan los tres resi­
duos de glucosa y un residuo de manosa en particular (Fig. j 3- 1R,
pasos O-O). Los tres residuos de glucosa, que son los últimos residuos
agre gados durante la síntesis del precursor en el portador de dolicol'
parecen actuar como una señal de que el oligosacárido está completo y
listo para ser transferido a una proteína.
4 GDP 3 UDP
Ó 3 UDP A
>-<
~
f: :j ~
sacáridos N-iigados de las células. Después de que el intermediar io dolicol
pirofosforilo de siete residuos cambia a la ca ra luminal (paso tiI), los cuatro
residuos de manosa y los tres residuos de glucosa restantes se añaden uno
por vez (pasos 0,0). En las últi mas reacciones, el azúcar que será añadido se
tra nsfiere, primero, desde un nucleótido-azúcar a un transportador dolicol­
fosfato en la cara citosólica del RE; luego, el transportador se vuelve hacia
la cara lu mi nal, donde el azúcar es transferido al oligosacárido creciente;
despué s, el transportador "vacío" se vuelve nuevamente a la cara citosólica.
fTorr·ado de C Abeijon y C. 6. Hi',mo.rg. 1992. írend, Biochem. So 17:32.)
595
 001
\.. ~ ~
D fJ El
'V
Luz del RE
Dol = Dolicol
• = N-acetilglucosamina
FIGURA 13-18 Adición y procesamiento inicial de oligosacáridos
N-ligados. En el RErugoso de las células de los vertebrados. el precursor
Glc,Man 9(GlcNAc), es transferido desde el t'cl1s portado r oo:icol hada un
residuo de asparagina susceptible, en un protelna raciente, an pr::mto cOmo
la asparagina atraviesa aliado luminal del RE (paso (J), En tres reacciones sepa­
radas, en primer lugar un residuo de glucosa (paso fl); luego, dos resiouos de
glucosa (paso ~ y, fi nalmente, un residuo de manosa (paso ~ son elimin -ocs.
Las cadenas laterales de los oligosacáridos
pueden promover el plegamiento y la estabilidad
de las glucoproteínas
Los oligosacáridos unidos a las glucoproteínas cumplen varias funcio­
nes. Por ejemplo, algunas proteínas requieren los oligosacáridos N­
ligados para plegarse adecuadamente en el RE. Esta función ha sido
demostrada en estudios realizados con el antibiótico tunicamicina , que
bloq uea el primer paso de la formación del precursor ligado a dolicol y,
por lo tanto, inhibe la síntesis de todos los oligosacáridos N-ligados en
las células (véase la Fig. 1.3-1 7, arriba, a la izquierda). Por ejemplo, en
presencia de tunicamicina, el polipéptido precursor de la hemaglutini­
na del virus de la influenza (HAo) se sintetiza, pero no puede plegarse
adecuadamente y formar un trímero normal; en este caso, la proteína
permanece mal plegada en el RE rugoso. Más aún, la mutación de una
asparagina en particular en la secuencia de la HA a un residuo de gluta­
mina evita la adición de un oligosacárido N-ligado a ese sitio y hace que
la proteína se acumule en el RE en un estado desplegado.
Además de promover el plegamiento adecuado, los oligosacáridos
N-ligados también confieren estabilidad a muchas glucoproteínas se­
cretadas. Numerosas proteínas secretoras se pliegan adecuadamente
y son transportadas hacia su destino final, aunque esté bloqueada la
adición de todos los oligosacáridos N-ligados, por ejemplo, por la tu­
nicamicina. Sin embargo, estas proteínas no glucosiladas mostraron ser
menos estables que las formas glucosiladas. Por ejemplo, la fibronec­
tina glucosilada, un componente normal de la matriz extracelular, se
degrada mucho más lentamente por acción de las proteasas tisulares
que la fibronectina no glucosilada.
Los oligosacáridos de ciertas glucoproteínas de la superficie celular
también desempeñan una función en la adhesión intercelular. Por ejem­
plo, la membrana plasmática de los glóbulos blancos (leucocitos) contie­
ne moléculas de adhesión celular (CAi'vf) , que están extensamente gluco­
siladas. Los oligosacáridos de estas moléculas interactúan con el dominio
596 CAPITULO 13 • El movimiento de proteínas en membranas y orgánulos
m
~
+-­ Al
~
El
(Man)s(GlcNAC)2
0 = Manosa
L = Glucosa
La ad'ció osterior de un resi:iuo de glucosa (paso ÉE) cumple un papel er ­
plega miento correcto de muchas proteínas en el olegamiento del RE. com
anali zará des pués, El proceso de glucosilación N-ligada de una proteína soC
secretora se uestrc aquí. pero las porciones lumi nales de una proteína jr -,:­
gra: de ia memb"a03 pueden ser modi' cadas sobre los residuos de aspa rf.,!
por el mismo mec a ni s mv. \/~~F Korn"'oyS Kcmfelu. 1985.Ar.n Re'IB /lem 45:6;1
~ :;;:;:i3y a .i ¡;arooi, ·~S,E, l,lb..;). 14 :"¡i%.l
que une azúcares en ciertas CAM presentes en las células endoteliale' :: ,
revisten los vasos sanguíneos. Esta interacción une los leucocitos al
dotelio y ayuda en su movimiento hacia el interior de los tejidos dL!T
una respuesta inflamatoria a la infección (véase la Fig. 20-39 ). Otr~:c .
coproteínas de la superficie celular poseen cadenas laterales de olig
ridos que pueden inducir una respuesta inmunitaria. Un ejemplo co .. _
está representado por los antígenos de los grupos sanguíneos A. '"
que son oligosacáridos O-ligados unidos a glucoproteínas y glucolij: ~
de la superficie de los eritrocitos y de otros tipos celulares (Fig. I -_
En ambos casos, los oligosacáridos se agregan a la superficie lum!.!'L _
estas proteinas de la membrana de modo similar a lo que se mue ~ _
la figura U-Ji; para las proteínas solubles. La cara luminal de es tas _
teínas de membrana es topológicamente equivalente a la cara exter; - ,
la membrana plasmática en la que, finalmente, terminan estas prOL
Los enlaces disulfuro son formados y reordenad05
por proteínas de la luz del RE
En el Capítulo j aprendimos que tanto los enlaces disulfuro (-5­
intramoleculares como intermoleculares ayudan a estabilizar la ~ ,'
tura terciaria y cuaternaria de muchas proteínas. Estos enlaces co'
tes se forman por la unión oxidativa de los grupos sulfhidrilo -_
conocidos también como grupos tio/, sobre dos residuos de cist
la misma cadena polipeptídica o en cadenas polipeptídicas dis- '
Esta reacción puede producirse de forma espontánea solo cuan;:..
presente un oxidante adecuado. En las células eucariónticas, se [-­
enlaces disulfuro solo en la luz del RE rugoso. De modo que los.-.
disulfuro se encuentran solamente en las proteínas de secrecio.
bIes y en los dominios exoplasmáticos de las proteínas de la merr~
Las proteínas citosólicas y de los orgánulos sintetizadas sobre I
somas libres (las destinadas a las mitocondrias, cloroplastos, ~
mas, etc.) habitualmente carecen de enlaces disulfuro.
 ::>rmación eficiente de los enlaces disulfuro en la luz del RE de­
:~ la enzima proteína disulfuro isomerasa (PDI), que está pre­
~ - to das las células eucariÓnticas. Esta enzima abunda especial-
n el RE de las células secretoras en órganos como el hígado y el
. -:!.S-. en las que se producen grandes cantidades de proteínas que
~- :-il enlaces disulfuro. Como se muestra en la Figura 13-1%, el
_..)ulfuro en el sitio activo de la POI puede transferirse fácilmen­
- . proteína a través de dos acciones de transferencia tiol-disulfuro
- :íales. La PDr reducida, generada por esta reacción, vuelve a una
,xidada por acción de una proteína residente en el RE, denomi­
:;- -j. que lleva un enlace disulfuro que puede ser transferido a la
propia Erol se oxida por una reacción con el oxígeno molecu­
.la difundido en el RE.
15 proteínas que contienen más de un enlace disulfuro, el apa­
; ';:; ;0 adecuado de los residuos de cisteína es esencial para la es­
. -:l l' actividades normales. Los enlaces disulfuro, por lo general,
1 entre cisteínas que aparecen secuencialmente en las secuen­
(a) Formación de un enlace disulfuro
~
...-S
POI
oxidada 'S .... SH
'S ---'
~
SH
Proteína
SH
L ~
sustrato
reducida
(b) Reordenamiento de los enlaces disulfuro
POI .... SH .... SH
reducida
'S­ 'S --3
~ L
Proteína con enlaces
disulfuro incorrectos
13-19 Acción de la proteína disulfuro isomerasa (POI). La POI
-:¿-:omoda enlaces disulfu ro por medio de un sitio activo con dos
.:.~ cisteína cercanos, que fác il mente se interconvierten entre la forma
.. _:ida y la forma disulfuro oxidada. Las flechas nu-neradas en rojo
" ;ecuencia de las transferencias electrónicas. Las barras en ama rillo
-:.~ los enlaces disulfuro. (a) En la form ación de los enlaces disu!fu ­
- , 'oniza da (-5-) de una cisteína de un tiol. en la proteína sustrato,
. :¡ -Jil el enlace disulfuro (S-S) en una POI oxidada para formar un
. ;,río POI, con enlace disu lfuro-proteína sustrato. Luego, un segundo
13.3 Modificaciones, plegamiento y control de calidad de las proteínas en el RE
cias de aminoácidos, mientras que un polipéptido aún se encuentra
creciendo sobre el ribosoma. Sin embargo, esta formación secuencial
en ciertas ocasiones produce enlaces disulfuro entre las cisteínas equi­
vocadas. Por ejemplo, la proinsulina, un precursor de la hormona pep­
tídica insulina, tiene tres enlaces disulfuro que unen las cisteínas 1)' 4,2
Y6, Y3 Y 5. En este caso, un enlace disulfuro que inicialmente se formó
secuencialmente (p. ej., entre las cisteínas I y 2) no se hubiera reorde­
nado para que la proteína alcanzara su conformación plegada adecua­
da. En las células, el reordenamiento de los enlaces disulfuro también se
ve acelerado por la PDl, que actúa en un amplio espectro de sustratos
proteicos)' les permite a éstos alcanzar sus conformaciones termodiná­
micamente más estables (Fig. 13- 19b ). Los enlaces disulfuro, en gene­
ral, se forman en un orden específico; en primer término, estabilizan
pequeños dominios de un polipéptido )' luego, las interacciones entre
segmentos más distantes; este fenómeno se ilustra en el plegamiento de
la proteína hemaglutinina (HA) de la influenza, que se analizará en la
siguiente sección.
S S
PDI .... SH
reducida ____ S H
L
2
::----- S­
Proteína
sustrato
oxidada
PDI ...-SH
reducida 'SH
-S S
• S S
Proteína con enlaces
disulfuro correctos
:iol ionizado en el sustrato reacciona con este intermediario; fo rma un enlace
disulfuro con a proteína sustrato y li bera la POIreducida. A su vez, la POI
transfie re electrones a un enlace disulfuro en la proteína lu mi nal Ero1,Io que
regenera J¡¡ forma oxidada de la POI. (b) La POI reducida puede catalizar el
reacomoda miento de enlaces di sulfuro incorrec tamente formados mediante
reacciones de transfere nd a similares tiol-disulfuro. En este caso, la POI reducida
se inicia y se regenera en la vía de reacción. Estas reacciones se repi ten hasta
que se logra la conformación más estable de la proteína. (Véase M. M Lyles yH. F.
~ I ""~ . '¡>9I .BJochemiw;30:619.l
597
Las chaperonas y otras proteínas del RE facilitan
el plegamiento y el ensamblaje de las proteínas
Si bien muchas proteinas desnaturalizadas pueden volver a plegarse
en forma espontánea a su estado nativo in vitro, este repliegue habi­
tualmente requiere horas para completarse. En lugar de ello, nuevas
proteínas solubles y de membrana producidas en el RE, en general , se
pliegan a su conformación adecuada en el lapso de minutos después de
la síntesis. El rápido plegamiento de estas proteínas recién sintetizadas
en las células depende de la acción secuencial de varias proteínas pre­
sentes dentro de la luz del RE. Hemos visto ya de qué modo la chape­
rona molecular BiP puede conducir la translocación postraduccional
en las levaduras, al unirse a polipéptidos completamente sintetizados, a
medida que ingresan en el RE (véase la FiE!. U-Y). La BiP también pue­
de unirse de manera transitoria a cadenas na cientes, a medida que
gresan en el RE durante la translocación cotraduccional. Se cree qL,
BiP unida evita que los segmentos de una cadena naciente se plie _ ~ ­
incorrectamente o formen agregados, lo que promovería el plegalT_:
to del polipéptido completo en la conformación adecuada. La prou
disulfuro isomerasa contribuye también al plegamiento adecuado :
que la conformación 3-D estabiliza por medio de enlaces disulfur '
muchas proteínas.
Como se ilustró en la Figura 13-20, otras dos proteínas del Rl
lectinas homólogas (proteínas que unen hidratos de carbono) cal"
y calreticulina, se unen selectivamente a ciertos oligosacáridos N-l.i __
en cadenas nacientes. El ligando para estas dos lectinas, que se ase=
al precursor oligosacárido N-ligado pero que tiene solo un residt:
glucosa (Glc¡Man 9 [ GlcNAc l,l, es generado por una glucosiltransi.. ._

(a) Oligosacaril
transferasa
Oolicol
oligosacárido (X-hélice que se (X-hélice
extiende en la membrana luminal
Citosol

POI -s
1
SH
Trímero HAo

Monómero
HAo completo

(b)

FIGURA 13-20 Plegamiento y ensamblaje de la hemaglutini­

na. (a) Mecanismo de en samblaje de los rí eros de (HA). La unión
transitoria de la chaperona SiP (paso il!) a la cadena naciente yde dos
lectinas, la calnexina y la calreticulina, a ciertas cadenas de oligosacá­
ridos (paso ml) promueve el plegamiento adecuado de segmentos
ad yacentes. Se agrega un total de siete cadenas de oligosacáridos
N-ligados a la porción luminal de la cadena naciente durante la trans­
locación cotraduccional. y la PDI cataliza la form ación de seis enlaces
disulfu ro por monóme ro. Los monómeros de HAo completos se ancian
a la membrana por una hélice (X simple que abarca la membrana
con su extremo N-terminal en la luz (paso ~ La interacción de las
tres cadenas HAo entre sí, inicialmente por medio de sus hélices a
transmembrana, aparentemente desencadena la formaci ón de un
largo tallo que contiene una hélice (X desde la parte lu minal de cada
polipéptido HAo' Finalmente, se produce n interacciones entre las tres
cabezas globulares y se genera un trímero HA , estable (pa so~. (b)
Fotomicrografía electrónica de un virión de la influenza completo, que
muestra los trimeros de la proteína HA, que sobresalen co mo espigas
desde la superfiCie de la membrana viral. (La Darle la). ',,"a!eu. Tó!u ·' ' 1 ·~ 5 .
EMBOJ. 14:1340 y D. Herben el , 1, 199 7, 1. e,1I 8101 139:613.• • parte .b; Ch ,',8jornoerg i
PhOto Re searchers, Inc.)

598 CAP[rULO 13 • El movimiento de proteínas en membranas y orgánulos

 :~ la luz del RE (véase la fig . U-H!, paso m). Esta enzima
.d las cadenas polipeptídicas no plegadas o mal plegadas y, en
s,l ucosiltransferasa actúa como uno de los mecanismos de
:--..;:narios para asegurar el control de calidad del plegamiento
,.- ~i RE, pero el mecanismo por el cual la glucosiltransferasa
:-- ,leínas plegadas de no plegadas aún no se conoce. La unión
- :::-.ma y la calreticulina a las cadenas nacientes no plegadas,
:-"n oligosacáridos N-ligados glucosilados, evita la agregación
",,~t:'nt os adyacentes de una proteína, a medida que está siendo
~ ~'l el RE. Así, la calnexina y la calreticulina, al igual que la
:: ü que se produzca el plegamiento prematuro incorrecto de
~ e una proteína recién sintetizada.
:-:nalizadores importantes del plegamiento proteico en la luz
- las peptidil-prolil isomerasas, una familia de enzimas que
-,)13ción alrededor de los enlaces peptidil-prolil en los resi­
- -..tina en segmentos no plegados de un polipéptido:
"
O", /NH
C"
O HC- CH 2 O HC 2-CH 2
"'~ I " ~ '" I Prolil
/.,S-.N CH 2 ~ / C-N / CH 2
' CH 2 'CH
Prolil I Tanto las células de mamífero como las levaduras responden a la
,1C
O{/ " NH
cis trans " y otros catalizadores del plegamiento. Un participante clave en esta
Qcasiones, estas isomerizaciones constituyen el paso limitan­
~.&lcidad en el plegamiento de los dominios proteicos. Muchas
''''' ~olil isomerasas pueden catalizar la rotación de enlaces ex­
~ :ptidil-prolil indiscriminadamente en numerosas proteínas,
tienen sustratos proteicos muy específicos.
. . n antes proteínas secretoras solubles y de membrana, sinte­
_ ~ el RE, están construidas por dos o más subunidades poli­
._ En todos los casos, el ensamblaje de las subunidades que
En estas proteínas de múltiples subunidades (multiméricas)
~:? en el RE. Una clase importante de proteínas multiméri­
, -Jdas son las inmunoglobulinas, que contienen dos cadenas
:-í ) y dos cadenas ligeras (L) , todas unidas mediante enlaces
_ntracatenarios. La HA es otra proteína multimérica que
na un buen ejemplo de plegamiento y ensamblaje de subu­
"?ase la Fig. 13 - 20 ). Esta proteína trimérica forma las espigas
_,~ ien de la superficie de la partícula del virus de la influenza.
HA se forma dentro del RE de una célula huésped infecta­
-:.ir de tres copias de un precursor de la proteína, denominado
_c ?osee una sola hélice a. que se inserta en la membrana. En
de Golgi, cada una de las tres proteínas HAo es escindida
-, ar dos polipéptidos, HA¡ y HA,: así, cada molécula HA que
-~~ se encuentra en la superficie del virus contiene tres copias
. ~r es de HA, (véase la Fig. 3-10). El trímero está estabilizado
: cciones entre los dominios exoplasmáticos grandes de los
. Jos constituyentes, que se extienden hacia el interior de la
:' t; después de que la HA se ha transportado a la superfi­
.T. estos dominios se extienden hacia el espacio extracelu­
:-:!eracciones entre las porciones citosólicas más pequeñas
-~io nes integradas a la membrana de las sub unidades de la
-: ;én ayudan a estabilizar la proteína trimérica. Los estudios
13.3
han mostrado que se requieren 10 minutos, exactamente, para que
los polipéptidos HAo se plieguen y ensamblen en su conformación
trimérica adecuada.
Las proteínas plegadas inadecuadamente en
el RE inducen la expresión de catalizadores del
plegamiento proteico
Las proteínas silvestres sintetizadas en el RE rugoso no pueden salir de
este compartimento, a menos que logren su conformación completa­
mente plegada. De forma similar, casi cualquier mutación que evite el
plegamiento adecuado de una proteína en el RE bloquea, además, el
movimiento del poiipéptido de la luz de éste o su membrana hacia el
complejo de Golgi. Los mecanismos destinados a retener las proteínas
no plegadas o plegadas de modo incompleto dentro del RE, probable­
mente, incrementen la eficiencia global del plegamiento al mantener
formas intermedias en la vecindad de los catalizadores de plegamiento,
que son más abundantes en el RE. Las proteínas inadecuadamente ple­
gadas retenidas dentro del RE, por lo general, se encuentran unidas a
las chaperonas BiP y a la calnexina . De este modo, estos catalizadores
del plegamiento luminal desempeñan dos funciones relacionadas: ayu­
dar al plegamiento de las proteínas normales, evitando su agregación, y
unirse a las proteínas mal plegadas para retenerlas en el RE.
presencia de proteínas no plegadas en el RE rugoso con el aumento
de la transcripción de varios genes que codifican chaperonas del RE
respuesta a la proteína no plegada es la Irel, una proteína de la mem­
brana del RE que se encuentra como monómero y como dímero. La
forma dimérica, no la monomérica, promueve la formación de Hacl,
un factor de transcripción de las levaduras que activa la expresión de
los genes, inducida en respuesta a la proteína no plegada. Como se
muestra en la Figura J3-2 1, la unión de la BiP al dominio luminal de
la Ire I monomérica evita la formación del dímero Ire 1. Así, la can­
tidad de BiP libre en la luz del RE determina la proporción relativa
de Ire I monomérica y dimérica. La acumulación de proteínas no
plegadas dentro de la luz del RE secuestra las moléculas de BiP y las
torna no disponibles para su unión al Irel. Como resultado, aumen­
tan los niveles de la Ire I dimérica, lo que conduce a un incremento
en el nivel de Hacl y de la producción de proteínas que ayudan el
plegamiento proteico.
Las células de mamífero contienen una vía regulatoria adicional
que opera en respuesta a las proteínas no plegadas en el RE. En esta
vía, la acumulación de proteínas no plegadas en el RE desencadena
la proteólisis de la ATF6, una proteína transmembrana de la mem­
brana del RE, en un sitio dentro del segmento que está inserto en la
membrana. El dominio citosólico de ATF6, liberado por proteólisis,
se desplaza luego hacia el núcleo, donde estimula la transcripción de
los genes que codifican las chaperonas RE, La activación de un factor
de transcripción por medio de esta proteólisis regulada intramembra­
na se produce también en la vía de señalización Notch y durante la
activación del factor de transcripción SREBP en respuesta al coleste­
rol (véanse las Figs 16- .,5 y ló-37) .
Una forma hereditaria de enfisema ilustra los efectos dañinos que
pueden resultar del plegamiento inadecuado de las proteínas en
el RE. Esta enfermedad es provocada por una mutación puntual en la
antitripsina (XI' que normalmente es secretada por los hepatocitos y los
Modificaciones, plegamiento y control de calidad de las proteínas en el RE 599
FIGURA 13-21 la respuesta de proteína no plegada. La Irel . una pro­ Factor de
teína transmembrana de la membrana del RE. tiene un sitio de unión para transcripción
la BiP en su dominio lu minal; el do ¡nío citosólico contie ne una endonu­ El ~ Hac1
cleasa de RN A específica. Paso iI: la acumulación de pro eínas no plegadas mRNA Hac1 (Traducción
en la luz del RE une moléculas BiP lo que las libera de la Ire 1 monomérica.
cortado y '" j
La dimerización de la Ire l genera, entonces, su actividad de endonucleasa.
empalmado "--"""" ~EI

"dO,"d"'~\
Pasos 111, 1!1: el prec'u rsor de mRNA, no segme ntado ni e mpa lmado, que
codifica el factor de transcripción Hac l es eSCindido por la Ire l dimérica, y
los dos exones son unidos para formar un mRNA fu ncional de Hac l . La evi­
dencia actual indica que este procesamienlo sucede en el citoso l, aunque mRNA d, H"l oort,do pO'
el procesamiento del pre-mRNA generalmente se produzca en el núcleo.
Paso ril: el Hacl se traduce a la proteína Hacl , q ue luego vuel ve al núcleo mRNA Hac1 sin
'-/
y activa la transcripción de los genes que codifi can varios ca talizadores de l cortar ni empalmar~
plegamiento de las proteínas. (W" . U R,.egsegger ., dI., 2C·Y. ( , 11 107:1 3, ~ 3~'tO' ol"!
coll.. 2000, Nor. e.rre,ol 2'326 y C. Sldrauski y P. W.;ter. 1997, Ce1/ 90.1 0jl ; Monómero
Ire1

Citosol

r
macrófagos. La proteína silvestre se une a la tripsina, a la que inhibe, y Luz Dímero Ire1
también a la proteasa sanguínea elastasa. En ausencia de antitripsina del RE D
a, ,la elastasa degrada el tejido fino del pulmón que participa en la ab­
sorción del oxígeno, lo que produce finalmente los síntomas del enfise­ BiP C3'
G
SL
ma. Si bien la antitripsina <Xl mutante es sintetizada en el RE rugoso, no
se pliega adecuadamente y forma un agregado casi cristalino que no se
exporta desde el RE. En los hepatocitos, la secreción de otras proteínas
Proteínas no plegadas Proteínas no plegadas
también se ve afectada, a medida que el RE rugoso se va llenando con la con BiP unida
antitripsina a, agregada . •

Las proteínas no ensambladas o mal plegadas del

RE con frecuencia son transportadas hacia el citosol
para su degradación
Las proteínas solubles secretoras y las proteínas de membrana, así
como las subunidades no ensambladas de las proteínas multiméricas,
con frecuencia se degradan en un lapso de aproximadamente una hora
o dos, después de su síntesis en el RE rugoso. Durante muchos años, los
investigadores consideraron que las enzimas proteoUticas presentes en
la luz del RE catalizaban la degradación de los polipéptidos mal ple­
gados o no ensamblados, pero estas proteasas nunca fueron halladas.
Estudios más recientes han mostrado que las proteínas de secreción
mal plegadas son reconocidas por proteínas de membrana específicas
del RE y son direccionadas para su transporte desde la luz del RE hacia
el citosol, en un proceso conocido como dislocación.
La dislocación de las proteínas mal plegadas al exterior del RE de­
pende de un conjunto de proteínas localizadas en la membrana de éste y
en el citosol, que llevan a cabo tres funciones básicas. La primera de éstas
es el reconocimiento de las proteínas mal plegadas que serán sustra­
tos para la reacción de dislocación. Un mecanismo de reconocimiento
implica el recorte de las cadenas de hidrato de carbono N-ligadas por
la enzima <x-manosidasa 1 ([ig. 13-22 ). Los glucanos recortados de la
estructura Man 8 (GlcNAc), son reconocidos por la proteína lectinoide
conocida como EDEM, y los glucanos que adicionalmente se recortan a
Man,( GlcNAc), son reconocidos por la proteína lectinoide 05-9. Tanto
la EDEM como la 05-9 direccionan la glucoproteína recortada hacia
el complejo de dislocación para su degradación. Se desconoce el me­
canismo preciso por el cual la a-manosidasa 1 distingue proteínas que
no pueden plegarse adecuadamente y, de este modo, son legítimos sus­
tratos para el proceso de dislocación, durante el cual presentan estados
transitorios parcialmente plegados hasta que adquieren su conforma­
ción completamente plegada. Es probable que el recorte de las cadenas
de hidratos de carbono N-ligadas por las a-manosidasa 1 se prod
lentamente, de modo tal que solo las glucoproteínas que perman e: ~­
mal plegadas en la luz del RE durante un período lo suficiente me::.:..:
prolongado son recortadas y, por lo tanto, direccionadas para su deg:r-:.­
dación. Las proteínas luminales que carecen de cadenas de hidrato: :­
carbono también pueden ser direccionadas para su degradación, lo _'
indica que deben existir, además, otros procesos para el reconoci mi.o::-·
de las proteínas no plegadas. Otros mecanismos destinados a rec
cer proteínas no plegadas que no involucran el recorte de cade!l6ó : ;
hidratos de carbono N-ligados deberían existir porque las proteína<, :...
membrana que carecen de cadenas de hidratos de carbono N-liga . ;.,
otra manera, no podrían ser direccionadas para su degradación,
Una vez que una proteína no plegada ha sido identificada, es ¿.~ ~.
cionada para la dislocación a través de la membrana del RE. De t .
ber algún tipo de canal para la dislocación de las proteínas mal pI...:
a través de la membrana del RE, y existe un complejo de, al menos :-.­
tro proteínas integrales de la membrana, conocido como el COl-:-.:
ERAD (degradación asociada al RE). La estructura del canal d ~ ­
cación y el mecanismo por el cual las proteínas mal plegadas atrz'
la membrana del RE aún no se conocen.
A medida que segmentos del polipéptido dislocado son ex-r .:.
al citosol, éstos encuentran enzimas citosólicas que impulsa n i-­
locación. Una de estas enzimas es una ATPasa denominada --;: -­
miembro de una familia de proteínas conocida como la fa.mi:.­
ATPasa AAA, que acopla la energía de la hidrólisis del ATP al ~ =
samblaje de los complejos proteicos. En la retrotranslocación : ~­
lisis del ATP por la p97 puede proporcio nar la fuerza impuls..:: _
dirigir las proteínas mal plegadas desde la membrana del RE '-­
citosol. A medida que las proteínas mal plegadas reingresan e:-. _
sol, enzimas que son ligasas de ubicuitina -específicas de la m:- '

600 CAPITULO 13 • El movimiento de proteínas en membranas y orgánulos

 FIGURA EXPERIMENTAL 13-23 Importación

~
e
de las proteínas precursoras mitocondriales

~~
~ Tripsina
c~: ensayada en un sistema libre de células. Los
precursores de las prote ínas mitocondriales con
señales de captación-direccionamiento unidas
~ "- • @ eJ.'" '" pueden ser sintetizada s en ribosomas en una reac­

"
='Ina . ~ Adición de
c;ón libre de células. Cuando las mitocondrias que
. - ::ondrtal _ ~ mitocondrias de

~
levaduras
energizadas ~ c{}: están respirando se ag regan a los precursores de
las proteínas mitocondriales (arriba), las proteínas
son cap tadas por las mitocondrias. Dentro de estos
organulos, las proteínas son protegidas de la ac­
"'roteínas mitocondriales Proteínas captadas por las Proteínas ción de las proteasas, como la tripsina. Cuando no
d e las levaduras sintetizadas mitocondrias; eliminación y secuestradas
hay rnitocondrias presentes (abajo), las proteínas
por los ribosomas citoplasmáticos degradación de la secuencia dentro de las
i;n sistema libre de células de direccionamiento de la mitocondrias, mitocondr iales se degradan, al agregar proteasa. La
captación resistentes a la captación proteica se produce solo con mito­
tripsina condrias energizadas (que están respirando), que
tienen un gradiente electroquímico de protones
• C • e (fu erza protomotriz), a través de la membrana
in terna. La proteína im portada debe contener una
Tripsina ..
.,
C'
~
.c
e
. sec ue ncia captación-direccionamiento adecuada .
. ,,' c _ La captación requiere también ATP y un extracto
tc. •• • - c. cltosólico que contenga proteínas chaperonas
Secuencia de e oC que mantengan las proteínas precursoras en una
captación-direccionamiento · c· : c . i: conformación no plegada. Este ensayo ha sido
y degradación de las proteínas . e ':c empleado para estudiar secuencias de direccio­
mitocondriales .c: ' C na miento y otras características del proceso de
translocac ión.

acción secuencial de dos secuencias de direccionamiento y dos
po- ~ d e translocación unidos a la membrana: uno para dirigir la
, hacia el orgánulo y otro para dirigirla hacia el compartimento
.- · r o a la membrana adecuada del orgánulo. Como veremos, los
-:)1 0 Spara seleccionar distintas proteínas para su envío hacia las
-::.rias y los cloroplastos están relacionados con algunos de los
' :nos que analizamos con anterioridad .
cuencias de señalización N-terminales
~ticas dirigen las proteínas hacia la matriz
L;':"~nd ria l
s proteínas que se desplazan desde el citosol hasta el mismo
-rutocondrial tienen señales de direccionamiento que compar­
'os en común, aunque las secuencias de señalización, por lo
~o son idénticas. De este modo, los receptores que reconocen
,,:"'.al es son capaces de unir un número de secuencias diferentes,
- .-"-d onadas. Las secuencias más ampliamente estudiadas para
zación de proteínas en las mitocondrias son las secuencias de
:lI miento hacia la matriz. Estas secuencias, localizadas en el N­
. . habitualmente tienen 20-50 aminoácidos en su longitud. Son
~ minoácidos hidrófobos, aminoácidos básicos de carga posi­
~iniJ1a y lisina) y otros hidroxilados (serina y treonina ), pero
a carecer de residuos acídicos cargados negativamente (aspar­
: utamato).
J pone que las secuencias de direccionamiento hacia la matriz
- .:ocondria adquieren una conformación cx-heLicoidal en la cual
o ácidos cargados positivamente predominan a un lado de la
los aminoácidos hidrófobos, del otro lado. Las secuencias de
-' . que contienen regiones hidrófobas e hidrófilas simultánea­
conocen como antipáticas. Las mutaciones que alteran este
,"-- anfipático, en general, evitan que se direccionen hacia la ma­
- 'q ue muchas otras sustituciones de aminoácidos no provocan
este efecto. Estos hallazgos indican que el carácter anfipático de las se­
cuencias de direccionamiento hacia la matriz es crítica para su función.
El ensayo libre de células que se resume en la FigLl ra J:>-13 ha sido
ampliamente utilizado en estudios destinados a definir los pasos bio­
qu ímicos de la importación de proteínas precursoras a la mitocondria.
En este sistema , las mitocondrias que están respirando (energizadas)
extraídas de las células pueden incorporar proteínas precursoras mi­
tocondrial es que llevan las secuencias de captación-direccionamiento
adecuadas que han sido sintetizadas en ausencia de mitocondrias. La
incorporación exitosa de los precursores al orgánulo puede ser ensaya­
da por resistencia a la digestión mediante una proteasa agregada, como
la tripsina. En otros ensayos, la importación exitosa de una proteína
precursora puede mostrarse por la rotura adecuada de las secuencias
de direccionamiento N-terminales por proteasas mitocondriales espe­
cíficas. La captación de las proteínas precursoras mitocondriales com­
pletas, presintetizadas por el orgánulo, en este sistema contrasta con la
translocación cotrad uccionallibre de células de las proteínas secretoras
hacia el interior del RE, que se produce generalmente solo cuando las
membrana s microsomales (derivadas del RE) se encuentran presentes
durante la síntesis (véase la Fig. J3--i ).
La importación de las proteínas hacia la
mitocondria requiere receptores en la membrana
externa y translocones en ambas membranas
La Figur;1 13-2-1 presenta un panorama de la importación de una proteí­
na desde el citosol hasta la matriz de la mitocondria, la ruta dentro de la
mitocondria seguida por la mayoría de las proteínas importadas. Anali­
zaremos en detalle cada paso del transporte de proteínas hacia la matriz
y consideraremos el modo en el que algunas proteínas, posteriormente,
son direccionadas hacia otros compartimentos de la mitocondria.
Después de la slntesis en el citosol, los precursores solubles en las
proteínas mitocondriales (incluso las proteínas integrales hidrófobas

13.4 Direccionamiento de las proteínas hacia las mitocondrias y los cloroplastos 603
FIGURA 13-24 Importación de proteínas a la coo
matriz de la mitocondria. Las proteínas precur­ Proteína
soras sintetizadas en los ribosomas citosólicos se precu rsora
mantienen en un estado no plegado o parc Ial­
mente plegado por chaperonas unidas, como la
Hsc70 (paso D). Después de que una proteína pre­
cursora se une a un receptor de im portación cerca
de un sitio de contacto con la membra na Interna
(paso fl), se transfiere al poro de importación Hsc70
general (paso~ . La proteína en translocac ión se ATP citosólica
desplaza, entonces, a través de este canal y de un
canal adyacente en la membrana interna (pasos ADP + Pi
rJ, 0). Nótese que la translocación se produce e n Secuencia de
raros "sitios de contacto"en los cual es s membra­ ----- direccionamiento
nas interna y externa parecen tocarse. La unión de

/.
hacia la matriz
la proteína de translocaciór¡ por la chapero a de la NH 3­
matriz Hsc70 y la posterior hidrólisis del ATP po la
Hsc70 ayuda a impulsar la im portación a la matriz

~/
Una vez que la secuencia de direccio na mien o de
la captación ha sido retirada por una oroteasa de
la matriz y la Hsc70 se ha li berado de la proteína
Receptor Poro de
recién importada (pa so cm, se pliega a la confor­ de importación fJ
mación madura, act iva dentro de la matriz (paso (Tom20/22)
fA). El plegamiento de algunas proteínas depende
de las chaperoninas de la matriz. {'Jéa¡."- Schatz. 19% Citosol
1. 8jo[ Chem. 271 :3 1763 'J ~J . Pf.arv"\ ~ ( '! c.c \.s 1 9~ 7 , Ar"l R::-/ Cel!
Devel B /. 13:2S)

Espacio
intermembranas

Hsc70
de la matriz
~w;.~ ;::9¡,'\.. ,~W;; 7íf' .~.
Procesa m-"
l Membrana interna " ~.,.,,­ de la ma ':
.cc('iX.c~tCi o-:Jj:r:. ·L'- por protea;.?
Matriz de la mitocondria
\
proteína~
actIva c.v Secuencia de
direccionamie-' :
segmentada

de la membrana) interactúan en forma directa con la membrana mito­
condrial. En general, pueden importarse solo las proteínas no plegadas
a la mitocondria. Las proteinas chaperonas, como la Hsc70 citosólica,
mantienen las proteínas nacientes y recién sintetizadas en un estado
no plegado, de modo tal que pueden ser captadas por la mitocondria.
Este proceso requiere la hidrólisis de ATP. La importación de precurso­
res mitocondriales no plegados se inicia por la unión de una secuencia
de direccionamiento hacia la mitocondria a un receptor de importación
presente en la membrana externa de la mitocondria. Estos receptores se
identificaron, inicialmente, mediante experimentos en los cuales se mos­
traba que anticuerpos dirigidos contra proteínas específicas de la mem­
brana externa de las mitocondrias inhibían la importación de proteínas
hacia mitocondrias aisladas. Experimentos genéticos posteriores, en los
cuales los genes para proteínas de las membranas eA1:ernas de las mito­
condrias específicas se encontraban mutados, mostraron que receptores
proteicos específicos eran los causantes de la importación de diferentes
clases de proteínas mitocondriales. Por ejemplo, las secuencias N-termi­
nales de direccionamiento hacia la matriz son reconocidas como Th:;- ~
y Tomn. (Las proteínas que se encuentran en la membrana extem.: :
la mitocondria, implicadas en el direccionamiento y la importació
denominan proteínas Tom, por su nombre en inglés, translocón el .
membrana externa, translocon of the outer membrane.)
Los receptores de importación, posteriormente, transfieren las r ­
teinas precursoras a un canal de importación de la membrana ext __­
Este canal, compuesto principalmente por la proteína Tom40, se e ­
ce como poro de importación general porque todas las proteínas pfee~_­
soras de la mitocondria conocidas acceden a los compartimentos := :
riores del orgánulo a través de este canal. Cuando la Tom40 se p w-: ­
e incorpora a liposomas, forma un canal que atraviesa la membr=
con un poro de la suficiente amplitud como para acomodar una c: '
na polipeptídica no plegada . El poro de importación general forOl ;'! _ .
canal, en gran medida pasivo, a través de la membrana externa de la ,
tocondria, y la fuerza impulsora para el transporte unidireccional h..:...
el interior de la mitocondria proviene del interior de este orgán ula. =.

604 CAPITULO 13 • El movimiento de proteínas en membran as y orgánulos

 .; .: ;os precursores destinados a la matriz mitocondrial, la trans­
::. :ravés de la membrana externa se produce simultáneamente
-~D sferencia, a través de un canal de la membrana interna com­
:-or las proteínas Tim23 y Tim 17. (Tim proviene del nombre en
~ ~ translocón de la membrana interna, n'anslocón of the inner
c!le.) La translocación al interior de la matriz se produce, de este
! ~! "sitios de contacto" en los que se encuentran muy próximas
_. :;.:¡ ~ana externa y la interna.
: 0 después de que la secuencia N-terminal de direccionamiento
_:l1atriz de una proteína ingresa en la matriz de la mitocondria,
-:mada por una proteasa que reside dentro de la matriz. La pro­
r-.ergente también es unida por la Hsc70 de la matriz, una cha­
- -: que se localiza en los canales de translocación de la membrana
-:.: d e la mitocondria, por su interacción con la proteína trans­
:": ~ J!1 a Tim44. Esta interacción estimula la hidrólisis de ATP por la
- ~e la matriz, y se cree que estas dos proteínas juntas impulsan la
~ac ión de las proteínas al interior de la matriz.
-.!Zle de las proteínas importadas pueden plegarse a su conforma-
- -'-;¡al activa sin ayuda posterior. El plegamiento final de numerosas
""::,1s de la matriz requiere, sin embargo, una chaperonina. Como
~ ó en el Capítu lo 3, las proteínas chaperoninas fa cilitan acti­
~ : e el plegamiento proteico, en un proceso dependiente de ATP.
coa (b) Inhibidor
/
DHFR
no plegada
~
( plegada
DHFR
. 'U\ EXPERIMENTAL 13-25 Experimentos con proteínas quiméricas
iten dilucidar la importación de proteínas a las mitocondrias. Estos
-­ '":l entos muestran que una sola secuencia direccionadora a la matriz
¿ a s proteínas hacia la matriz de la mitocondria y que solo las proteínas
=-:¡.adas son translocadas a través de ambas me mbranas. La proteína qui­
-" de estos experimentos contiene una seña lde direccionami en to hacia la
L en su extremo N-terminal (rojo), seg uida de una secuencia espac ia oora
'n.:iÓn particular (negro) y lu ego, por la dihidrofol ato reductasa (DHm),
~~2i ma normalmente presente solo en el citosol. (a) Cuar1do el seg mento
= JHFR se despliega, la proteína quimérica se desplaza a través de ambas
_.:cranas hacia la matriz de la mitocondria energizada, y la seña lde direc­
-.:.cniento hacia la matriz se elimina. (b) Cuando el extremo C-termina lde la
. ~ na quimérica queda fijo en el estado plegado por la uniÓn del metotrexa­
13.4 Direccionamiento de las proteínas hacia las mitocondrias y los cloroplastos
Por ejemplo, los mutantes de las levaduras defectuosas en Hsc60, una
chaperonina de la matriz mitocondrial, pueden importar proteínas
de la matriz y segmentar la secuencia de captación-direccionam iento
normalmente, pero los polipéptidos importados no podrán plegarse ni
ensamblarse en las estructuras terciaria y cuaternaria nativas.
los estudios con proteínas quiméricas demuestran
características importantes de la importación
mitocondrial
Una evidencia notable de la capacidad de las secuencias de direcciona­
miento hacia la matriz mitocondrial para dirigir la importación provino
de las proteínas quiméricas producidas por técnicas de DNA recombi­
nante. Por ejemplo, la secuencia de direccionamiento hacia la matriz de
la deshidrogenasa alcohólica puede fusionarse con el extremo N-termi­
nal de la dihidrofolato reductasa (DHFR), que normalmente reside en el
citosol. En presencia de las chaperonas, que evitan que el segmento C­
termínal de la DHFR se pliegue en el citosol, los ensayos de translocación
libres de células muestran que la proteÚla quimérica se transporta hacia
la matriz (foig. 13-2Sa). El inhibidor metotrexato, que se une estrecha­
mente al sitio activo de la DHFR y estabiliza en gran medida su confor­
mación plegada, hace que la proteína quimérica se torne resistente al des-
(e)
";('0 · Citosol
Intermediario de
la translocación
Matriz
mitocondrial
Secuencia de
direccionamiento O,21J.m
segmentada
tO, la translocación se bloquea. Si la secuencia espaciadora tiene la longitud
sufi cien te como pa ra ex tenderse a través de ambos canales de transporte,
se genera un in termediario de translocación estable, se escinde la secuencia_
direccionadora, generad a en presenc ia de metotrexato, como se muestra aquí
(cl El extremo C-terrnin al del intermediari o de translocación en (b) puede de­
tectarse al in cubar las mitocon drlas con anti cuerpos que se unen al segmento
OHFR, seg uid o por partículas de oro cubiertas con la proteína bacteriana A,
que se une de rnodo no especííico a noléculas de anticuerpo (véase la nq.
~ : ~). Una fotornicrografía elew ónica de un corte muestra partículas de oro
(pu nta de flecha roja) unida al intermediario de translocación, en un sitio de
contacto entre las meMbranas externa e interna. Son evidentes, también, otros
siti os de contaCto (fl echas negras). (la; panes [a! y lb! ada p.adasde J. Rassow y cols.. 1990,
=¿.B5 _eu 27S : ~ ~) L3 P¿!( : ~ {e} de M. $ch'::€ ger y ccls., 1987,) CeU Hio/. 105:235. cortesia de W. NeupeH.)
605
 -­ , Se cree que las repeticiones FG hidrófobas se presentan en
_H adenas polipeptídicas extendidas, por lo demás hidrófilas,
-, ~l centro del canal transportador. Las nucleoporinas FG son
para la función del CPN; sin embargo, el CPN sigue siendo
aún si hasta la mitad de las repeticiones FG han sido dele­
-e considera que las nucleoporinas FG forman una matriz
l1exible, con propiedades generales que permiten la difusión
::-~la s pequeñas y excluyen las proteínas hidrófilas no chapero­
_:- r riores a 40 kDa (véase la fig. 13-330).
....eptores de transporte nuclear escoltan a las
'-=:emas que contienen señales de localización
~¡;¡:¡r hacia el interior del núcleo
,;-m as que se encuentran en el núcleo -como las histonas, los
~e transcripción y las DNA y RNA polimerasas- se sintetizan
. plasma y se incorporan en el interior del núcleo a través de
- _s: de poro nucleares. Estas proteínas contienen una señal de
: .--:611 nuclear (SLN) que dirige su transporte selectivo hacia el
':"as SLN fueron descubiertas mediante el análisis de mutantes
_. ?ara el antígeno T grande, localizado en el virus 40 de los si­
-40). La forma silvestre del antígeno T grande está localizada
- _-:leo de la s células infectadas por virus, mientras que algunas
::lutadas del antígeno T grande se acumulan en el citoplasma
-01 ). Todas las mutaciones causantes de esta localización celular
, se producen en una secuencia específica de 7 residuos, rica
- oácidos básicos, cercana al extremo C-terminal de la proteína:
'3 -Lys -Lys-Arg-Lys-Val. Los experimentos con proteínas híbridas
(b)
. '
O
'A EXPERIMENTAL 13-34 l a señal de localización nuclear (SlN)
las proteínas hacia el núcleo de la célula. Las proteínas citoplas­
,;S pueden ser dirigidas hacia el núcleo cuando se han fus ionado a una
¿ loca lización nuclear. (a) La piru vato cinasa normal. vista por ¡nmu­
~sce ncia después de que las célu las en cu ltivo ha n sido tratadas con
";:uerpo específico (amarill o). se loca liza en el Citoplasma, Esta proteína
: o muy grande actúa en el metabolismo de los hidratos de carbono,
~n do se expresó una pir uva to cinasa quimérica que conten ía la SLI--J del
7'l su extremo N-terminal en las células. se localizó en el núc leo. La pro-
e 1ui mérica se expresó a partir de un gen transfectado mediante ingen iería
~- t<l. producido al fusionar un fragmento génico vira l que cod ificaba SLN
.::o al gen de piruvato cinasa. (To'naao de D, K,lderon ywl,,, 1984,(eI/39:499, COHesfa
programadas mediante ingeniería genética, en los cuales esta secuen­
cia se fusionó con una proteína citosólica , demostraron que esta dirige
el transporte hacia el interior del núcleo y, en consecuencia, funciona
como una SLN, Posteriormente, las secuencias SLN se identificaron en
muchas otras proteínas incorporadas al núcleo. Muchas de éstas son
similares a la SLN básica del an tígeno T grande del SV40, mientras que
otras SLN son bastante diferentes, desde el punto de vista químico. Por
ejemplo, una SLN en la proteína que une RNA, hnRNP Al, es hidrófo­
ba. De modo que debe haber múltiples mecanismos para el reconoci­
miento de estas secuencias tan distintas,
Los trabajos iniciales sobre el mecanismo de importación nuclear
mostraron que las proteínas que contienen una SLN básica, similar a
la presente en el antígeno T grande de SV40, serán transportadas con
eficiencia hacia los núcleos aislados, siempre que se les proporcione
un extracto citosólico CFig, 13-35), Empleando este sistema de ensayo,
los investigadores purificaron dos compo nentes citosólicos requeridos:
Ran y un receptor del transportador nuclear. La Ran es una proteína
(a) Efecto de la digitonina
- Digitonina + Digitonina
(b) Importación nuclear por células permeabilizadas
- Lisado + Lisado
FIGURA EXPERIMENTAL 13-35 Se requieren proteínas citosólicas para
el transporte hacia el núcleo. El fracaso del transporte nuclear en células
cultivadas. pe rmea bilizadas en ausencia de un lisado, demuestra el compromi­
so de componentes citosóli cos solubles en el proceso, (a) Fotomicrografías de
contraste de fase de células HeLa no tra tadas y permeabilizadas con digitonina,
E! tratamiento de las monocapas de células cultivadas con el detergente suave
no iónico digitonina permeabiliza la membra na plasmática. de modo tal que
los consrituyentes citosólicos se pierden. pero permite que la envoltura nuclear
y el CPN pe rmanezca n intactos, (b) Fotomicrografías de fl uorescencia de las
células HeLa pe rmeabll izadas con digitonina. incubadas con una proteína
fluorescente aco plada químicamente al péptido SLN contra el antígeno Tdel
SV40 sintético, en presencia y ausencia de citosol (Iisado), La acumulación de
esta sustancia de tran sporte en el núcl eo solo se produce cuando el citosol
se incluye en la incu bación (derecho) , (jamado de S. Adam ycols, 1990, ), ( 0118;01.111807,
corteii-a .:3e Dr Laf ry Gerac.eJ
13,6 Transporte hacia el interior y el exterior del núcleo 617
FIGURA 13-36Importadón nuclear. Meca nismo
para la importación nuclear de proteínas "carga'~ En el
citoplasma (arriba), un receptor de transpor te nu clear
libre (importina) se un e a la SLN de una proteína
carga y forma un complejo de carga bi moiecula r. El
complejo de carga difunde a través del CPN media nte
la interacción trans itoria con las nucleoporinas FG.
En el nucleoplasma, la Ran·GTP se une a la impor ina,
lo que produce un cam bi o de conformación que
dism inuye su afi nidad por la SL y libera la carga. Para
dar sustento a otro ciclo de Im portación, el complejo
Complejo
de carga
exportina-Ran ·GTP se transporta nueva mente hacia
el citoplasma. Una proteína que acelera la GTPasa
(GAP), asociada con los fi la mentos ci toplasmáticos del
CPN, estimula la Ran para hidrolizar el GTP unido. Esto
genera un ca mbio de conformación que provoca la
disociación desde el receptor de transporte nuclea r, Citoplasma
que puede entonces iniciar otro ciclo de im portación .
La Ran·GDP vuelve al nucleoplasma, donde el factor CPN
de intercambio de guanina nucleótido (GEF) provoca
la liberación del GDP y la nueva unión de GTP Nucleoplasma
G monomérica, pequeña, que existe en conformaciones unidas a GTP
o GDP (véase la Fig. 13-32 ). El receptor de transporte nuclear se une
tanto a la SLN de una proteína carga que será transportada al interior
del núcleo como a las repeticiones FG de las nucleoporinas. Mediante
un proceso físico que aún no se conoce con certeza, uniéndose transi­
toriamente a las repeticiones FG, los receptores de transporte nuclear
tienen la capacidad de atravesar con rapidez la matriz que contiene las
repeticiones FG en el canal central del poro nuclear, mientras que las
proteínas de tamaño similar que carecen de esta propiedad son exclui­
das del canal central. Los receptores de transporte nuclear pueden ser
monoméricos, con un solo polipéptido que puede unirse tanto a las
SLN como a las repeticiones FG, o diméricos, con una subunidad que
se une a las SLN, y la otra a las repeticiones FG.
El mecanismo de importación de proteínas carga citoplasmáti­
cas, mediado por un receptor de importación nuclear, se muestra en
la Figu ra 13-36. Receptores libres de transporte nuclear, presentes en
el citoplasma, se unen a sus SLN semejantes en una proteína carga y
forman un complejo importina-carga. Luego, el complejo de carga se
transloca a través del canal de l CPN cuando el receptor de transporte
nuclear interactúa con las repeticiones FG. El complejo carga rápida­
mente llega al nucleoplasma y, allí, el receptor del transportador nuclear
interactúa con Ran·GTP, lo que provoca un cambio de conformación
en el receptor del transportador nuclear que desplaza la SLN y libera la
proteína carga al nucleoplasma. El complejo receptor de transportador
nuclear-Ran·GTP difunde nuevamente a través del CPN. Una vez que
e! complejo receptor del transportador nuclear-Ran·GTP llega alIado
citoplasmático del CPN, la Ran interactúa con una proteína activado-
618 CAPITULO 13 • El movimiento de proteínas en membranas y orgánulos
Ran·GDP Ran·GTP Importina Carga
Ca)
o
G
T
p p
::
w o
P
~GAP
Nucleoporinas FG
fV'\ GEF
\.rcvl ~(~\l
~ GTP GDP
ra de la GTPasa (Ran-GAP), que es un componente de los ~
citoplasmáticos del CPN. Esto estimula la Ran para que hic-'
GTP unido a GDP, lo que produce la conversión a una coni ­
con baja afinidad por el receptor de transporte nuclear, de :-, _
que el receptor de transporte nuclear libre se libera al citopla S-.~ _
de puede participar de otro ciclo de importación. El Ran · G D~
plaza nuevamente a través de! poro hacia el nucleoplasma, d.
encuentra con un fador de intercambio-guanina nucle6tido (
que hace que la Ran libere su GDP unido en favor del GTP. El ._
neto de esta serie de reacciones es el acoplamiento de la hidT\:
GTP a la transferencia de una proteína que lleva SLN desde el .
ma hacia el interior del núcleo y proporciona, de este modo, u­
conductora para el transporte nuclear.
Aunque el complejo receptor de transporte nuclear-car _
plaza a través del poro por difusión al azar, el proceso cotr~
transporte de la carga hacia el interior del núcleo es unidi r. : :­
Dada la rápida disociación del complejo de importación cuar _ .
al nucleoplasma, hay un gradiente de concentración del re _;
trans porte n uelear-carga a través del CPN: elevado en el cit :
donde el complejo se ensambla, y bajo en el nucleoplasma,
disocia. El gradiente de concentración es causante de la r: ~ _
unidireccional de la importación nuclear. Un gradiente de ­
tración similar impulsa el receptor de transporte nuclear dt ­
nuevamente al citoplasma. La concentración del complejo rcCtt'
transporte nuclear-Ran·GTP es más elevada en el nucleoplas ~
se ensambla, que en el lado cito plasmático del CPN, donde ~ .:
Finalmente, la dirección del proceso de transporte depende de
 - asimétrica de la Ran-GEF y de la Ran-GAP. La Ran-GEF del nu­
5ma mantiene la Ran en el estado Ran·GTP, en el que promueve
:iJción del complejo carga. La Ran-GAP del lado citoplasmático
- convierte Ran·GTP en Ran·GDP, por disociación el receptor
;:.:.porte nuclear-Ran·GTP y liberación del receptor de transporte
-. hacia el ci tosol.
5egu ndo tipo de receptores de transporte
ear escoltan las proteínas que contienen
- les nucleares de exportación hacia el exterior
úcleo
'!Z3 un mecanismo muy semejante para exportar proteínas,
;ubunidades ribosómicas desde el núcleo hacia el citoplasma.
-¡en te, este mecanismo fue descubierto en estudios de com­
~u cleicos ribonucleares que "se trasladan" entre el núcleo y
: :Llsma. Estas proteínas "de traslado" contienen una señal de
_:lón nuclear (SEN) que estimula su exportación desde el nú­
_.:i a el citoplasma a través de los poros nucleares, además de
; que es captada por el núcleo. Los experimentos con genes
- ; . programados mediante ingeniería genética, que codifican
:-c ína restringida al núcleo, fusionada en varios segmentos de
:d na que transporta hacia el interior y el exterior del núcleo,
-'¿-']l itido identificar tres clases diferentes de SEN: una secuencia
~ l! c ina que se encuentra en el PKI (un inhibidor de la proteí­
A) yen la proteína Rev del virus de la inmunodeficiencia
_ VIH), así como dos secuencias identificadas en dos partí­
. ...)t)l1ucleoproteicas heterogéneas (hnRNP). Las características
..rales significativas, desde el punto de vista funcional, que
: :.a n la exportación desde el núcleo aún son poco conocidas.
~ ~canismo por el cual las proteínas de traslado se exportan
n úcleo se comprende mejor en los casos de aquellas que con­
:iEN rica en leucina. De acuerdo con el modelo actual, que
. ,..J'a en la FiglJl'3 13-37a, un receptor de transporte nuclear
- : J en el núcleo, denominado exportina 1, primero forma un
con la Ran·GTP; luego, se une a la SEN en una proteína
unión de la exportina I al Ran·GTP causa un cambio de
~--.ac ión en la exportina 1, que incrementa su afinidad por la
- :nodo tal que se forma un complejo carga trimolecular. Como
:o n otros receptores de transporte nuclear, la exportina I inte­
. -ansitoriamente con las repeticiones FG en las nucleoporinas
:1 de a través del CPN. El complejo de carga se disocia cuan-
m tra el Ran-GAP en los filamentos citoplasmáticos del CPN,
tim ula la Ran a hidrolizar el GTP unido, y produce a la Ran
,jo de conformación con baja afinidad por la exportina l. La
- 1 I liberada cambia la conformación en una estructlJl'a que
,d afinidad por la SEN, lo que libera la carga en el cito sol. La
~¡ del proceso de exportación es impulsada por la disociación
-",3 desde la exportina I hacia el citoplasma, lo que genera un
-:: de concentración desde el complejo de carga a través del
_~ es alta en el nucleoplasma y baja en el citoplasma. Luego, la
..:;..c. I Y la Ran·GDP se transportan nuevamente hacia el núcleo
~e un CPN.
-: parando este modelo de exportación nuclear con el de la Fi­
ó para la importación nuclear, podemos observar una di­
o bvia: la Ran·GTP es parte del complejo de carga durante
-:lC ión, pero no durante la importación. Fuera de esta dife­
rencia, los dos procesos de transporte son notablemente similares.
En ambos, la asociación de un receptor de transporte nuclear con
Ran·GTP en el nucleoplasma provoca un cambio de conformación
que afecta su afinidad por la señal de transporte. Durante la impor­
tación, la interacción provoca la liberación de la carga; durante la ex­
portación, la interacción promueve la asociación con ésta. Tanto en la
exportación como en la importación, la estimulación de la hidrólisis
Ran·GTP en el citoplasma, por el Ran-GAP, produce un cambio de
conformación en la Ran que libera el receptor de sei'íal de transporte.
En el transcurso de la exportación nuclear, la carga también se libera.
La localización de la Ran-GAP y Ran-GEF en el citoplasma y el nú­
cleo, respectivamente, constituye la base del transporte unidireccio­
nal de proteínas de carga a través del CPN.
De un modo paralelo con su similitud de función, ambos tipos
de receptores de transporte nuclear son homólogos en secuencia y
estructura. La familia de receptores de transporte nuclear tiene 14
miembros en las levaduras y más de 20, en las células de mamífero.
Las SEN o SLN, a las cuales se unen, han sido determinadas solo para
una parte del proceso. Algunos receptores de transporte nuclear fun­
cionan tanto en la importación como en la exportación.
Un mecanismo de transporte similar se ha mostrado para la ex­
portación de otras cargas desde el núcleo. Por ejemplo, la exportina-t
funciona para exportar los tRl\lA. La exportina-t se une a tRNA com­
pletamente procesado en un complejo con la Ran·GTP que difunde a
través del CPN y se disocia cuando interactúa con Ran-GAP en los fila­
mentos citoplasmáticos del CPN; esto produce la liberación del tRNA
en el citosol. También se requiere un proceso dependiente de Ran para
la exportación nuclear de las subunidades ribosómicas a través del
CPN, una vez que los componentes RNA y proteína se han ensamblado
de manera adecuada en el nucléolo. De modo similar, ciertos mRNA
específicos, que se asocian con proteínas hnRNP particulares, pueden
ser exportados por un mecanismo dependiente de Ran.
La mayoría de los mRNA se exportan desde el
núcleo por un mecan ismo independiente de Ran
Una vez que el procesamiento de un mRNA se ha completado en el
núcleo, permanece asociado con proteínas específicas hnRNP en un
complejo mensajero proteína ribonuclear o mRNP. El principal trans­
portador de mRNP hacia el exterior del núcleo es el exportador de
rnRNP, una proteína heterodimérica compuesta por una subuni­
dad grande denominada factor 1 de exportación nuclear (F lXN) y
una subunidad pequeña, el transportador 1 de exportación nuclear
(TIXN). Múltiples dímeros FIXN/TlXN se unen a las mRNP nu­
cleares a través de interacciones cooperativas con el RNA y otras
mRNP adaptadoras, que se asocian con los pre mRNA nacientes du­
rante la elongación de la transcripción y el procesamiento del pre
mRNA. En muchos aspectos, la FIXN/ TIXN actúa como un recep­
tor de transportador nuclear que se une a una SLN o a una SEN, en
el sentido en que ambas subunidades interactúan con los dominios
FG de las nucleoporinas FG y les permiten difundir a través del canal
central del CPN .
El proceso de exportación de las mRNP no requiere Ran; de este
modo, para el transporte unidireccional de mRNA hacia el exterior
del núcleo, es necesaria una fuente de energía distinta de la hidrólisis
del GTP por la Ran. Una vez que el complejo mRNP-FIXN/ TlXN
llega a la cara citoplasmática del CPN, FIXN y TlXN se disocia de
13.6 Transporte hacia el interior y el exterior del núcleo 619