Malaria

Diagnóstico de laboratorio
Dalila Martínez Medina, MD, MSPH
Ana Quispe Del Castillo, Lab. Tec.
Grupo de Estudios de Leishmaniasis y Malaria - IMTAvH

11/23/2017
 Características según especie
infectante
P. vivax P. falciparum P. malariae
Periodo de
incubación (días) 9 - 15 8 - 17 30 – 40

Hematíes Hematíes Cualquier Hematíes

parasitados jóvenes hematíe maduros
Etapa exo-
eritrocítica Persistente Limitada Persistente

Máxima
3 años 9 meses a 1 año > 20 años
duración

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 Diagnóstico de Malaria
LABORATORIO

Parasitológico Inmunológico Molecular

Gota Inmunocromatografia
PCR
Gruesa/Frotis IFI, ELISA

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 Parasitológico Directo
Objetivo:
• Identificar parásitos sanguíneos: Plasmodium spp.,
Leishmania spp., Tripanozoma cruzi, Toxoplasma
Gondii y Micro filarias
• Se basa en la demostración d la presencia y
definición de la especie de parásito

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 Tipos de extensiones en sangre
• Gota Gruesa
• Extensión lámina fina/Frotis

• El examen en ambos casos se realiza con aumento

de 1000x con aceite de inmersión.

• Sensibilidad: 92 – 98%
• Especificidad: 85 – 99%

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 Frotis sanguíneo Gota gruesa

Calidad:
o Una sola capa de elementos formes oDiámetro: 1 – 1.5 cm
separados entre sí oNo se deben observar GR ni restos de Hb
oFondo claro
oConcentración adecuada: 10 – 20
leucocitos/campo
Características Gota Gruesa Frotis
Capas de eritrocitos Numerosas Un solo plano
Formas identificables Parásitos y glóbulos Eritrocitos, parásitos y
blancos algunos glóbulos blancos
y plaquetas
Distribución parasitaria No uniforme, depende
Uniforme
(en la muestra) de los GR parasitados
Tiempo de diagnóstico Rápido Lento
Utilidad en parasitemias Sí. Permite detectar hasta No. Permite detectar
bajas 10 – 50 trofozoitos/µL hasta 200 trofozoitos/µL

Utilidad Permite la cuantificación Permite diferenciar la

de Densidad parasitaria especie de Plasmodium
Requiere fijar la muestra
No Si
con metanol

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 Extensiones en sangre

• Ventaja: Permite evaluar la carga parasitaria

(correlaciona con severidad y pronóstico)

• Limitación: No refleja agudamente la carga

parasitaria total

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 Materiales para la toma de muestra
• Laminas porta-objetos limpias
• Torundas de algodón
• Alcohol 70%
• Lancetas estériles
• Guantes de latex sin talco
• Lápiz/Plumón indeleble
• Contenedor de objetos corto-
punzantes
• Caja/bandeja portaobjetos
para secado horizontal y
protección de moscas/polvo
• Formularios de registro

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 Preparación de material
• Portaobjetos de cristal – calidad “superior”, con cantos
pulidos y banda mate
• Los portaobjetos deben lavarse, secarse y envolverse antes
de ser utilizados:
o Remojar en solución de detergente neutro de 4 – 8 horas
o Limpiar por ambos lados con un trapo de algodón o esponja
entre pulgar e índice
o Eliminar el agua del portaobjetos antes de meterlos en un bote
con alcohol y guardar alejado de la luz solar
o Para usar, saque el portaobjetos y secarlo con un paño de
algodón limpio que no deje pelusas.
o Sostener el portaobjeto por los cantos

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Toma de
muestra

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Fijado con
metanol

Frotis
Frotis de buena calidad:
o Delgado
o Partes: Cabeza, cuerpo y cola
o Ausencia de coágulos, restos de grasa
o partículas
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http://www.lab.anhb.uwa.edu.au/mb140/CorePages/Blood/blood.htm
Gota
Gruesa

o Diámetro: 1 – 1.5 cm
o Se debe poder visualizar una redacción
debajo de la lámina, sin distinguir
exactamente lo que dice.

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Fallos frecuentes en la
preparación de sangre
Extensiones mal situadas

Demasiada sangre

Poca sangre

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Fallos frecuentes en la
preparación de sangre

Extensor con canto astillado

Portaobjetos gracientos

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 Coloración de Giemsa
• Eosina (rojo/fucsia)
o Cromatina

• Azul de metileno
o Citoplasma y Glóbulos blancos

• Frotis – Fijación previa con metanol

Técnicas Coloración Rápida Lenta

Concentración C.Giemsa 10% 3%
Uso Diagnóstico Investigación
Tiempo 8 – 10 min 45 – 60 min

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Partes del Plasmodium spp. dentro
del glóbulo rojo

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Plamodium falciparum
• Invade GR de
cualquier edad

• Poliparasitismo

• GR no tienen
agrandamiento

• Se observan trofozoitos
jóvenes y gametocitos

• Cuadros graves:
Esquizonte y trofozoitos
adultos

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Plasmodium vivax

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 Diferenciación de las especies en Frotis
Glóbulo rojo
(huésped)

No aumentado de Aumentado de
tamaño tamaño

Muy Ligero
A veces con aumentado y aumento y
No distorsión
distorsión redondo distorsión

P. falciparum P. malarie P. vivax P. ovale

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Artefactos y contaminantes

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Resultados de laboratorio expresados e
cruces (Método semi-cuantitativo)

Resultado en Interpretación
cruces
Una cruz (+) De 1 a 10 parásitos en 100 campos

Dos cruces (++) De 11 a 100 parásitos en 100 campos

Tres cruces (+++) De 1 a 10 parásitos en 1 campo

Cuatro cruces (++++) Más de 10 parásitos en un campo

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 Fórmula para el cálculo de densidad
parasitaria

Cálculo del número de parásitos por micro-litro de

sangre en gota gruesa
Número de parásitos asexuados * 6,000 = Parásitos por µL de sangre
Número de leucocitos

Cálculo como porcentaje de eritrocitos infectados

conteo en frotis, impreciso – no recomendable
Número de eritrocitos parasitados
Número total de eritrocitos

Imprecisos en presencia de parasitemias muy altas o muy bajas

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Gota Gruesa Frotis

Parasitos por µL Porcentaje de GR infectados

50.000/µl = 1% GR
100/µL = 0.002% GR

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 Diagnóstico inmunológico
• Evalúan:
o Inmunidad humoral
o Inmunidad celular

• Ventajas:
o Detectar las infecciones cuando la parasitemia es baja* (suficientemente
sensible y específica)
o Ayudar a diferenciar infecciones pasadas de la actual.

• Técnicas:
o Inmuno-fluorescencia indirecta (IFI), buena Sp y Sb
o ELISA:
• no es de mucha utilidad en el dx individual
• Útil en estudios epidemiológicos)
• Presentan reacciones cruzadas
o Pruebas inmuno-cromatográficas (Dipstick)

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 Pruebas de Diagnóstico Rápido de Malaria
• Pruebas inmunocromatográficas (ICT)
• Detección de antígenos: Ag/AB
• Sb y Sp > 90%
• Efectivo:
o Zonas donde el laboratorio no garantiza el dx oportuno y
de calidad
o Zonas donde no existen servicios de diagnóstico
o Regiones sin personal capacitado en el dx microscópico
de malaria
o Emplea poco tiempo de proceso

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 Pruebas de Diagnóstico Rápido de Malaria
• Ab anti-P. falciparum (HRP2): Parasight tes, Malar-
Check Pf, Paracheck, ICT AMRAD P f/P, etc
o HRP2: Ag parasitario que puede seguir circulando 72hs
post-Gg negativa, periodo de antigenemia
o Sensibilidad: 88 – 99% (parasitemia >100µL mejor que pLDH)

• Ab anti-isoenzima Lactato deshidrogenasa:

P.falciparum & P. vivax: OptiMAL-IT*, CareS tare, etc
o PLDH: se expresa en estadio eritrocítico ~ parásito vivo
o No persistencia/Permite el seguimiento
o Sensibilidad: 70 – 95% (> con parasitemia >500/uL)

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 Pruebas de Diagnóstico Rápido de Malaria
• Limitaciones:
o Ab anti-P. falciparum (HRP2): especifica
o No permite diferenciar infecciones mixtas
o No permite cuantificar la densidad parasitaria
o Problemas con la detección de parasitemias bajas,
especialmente en casos asintomáticos†
o Fenómeno de zona (HRP2)
o No permite realizar el seguimiento y evolución de
enfermedad con la instauración del tratamiento
(HRP2)

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 Pruebas de Diagnóstico Rápido de
Malaria
Falsos positivos Falsos negativos
1. Factor reumatoideo 1. Exceso de antigeno
(HRP2) 2. Afecta HRP-2, no LDH
2. Leishmaniasis (LDH) 3. Problemas con el
3. Persistencia post volumen de sangre
tratamiento
4. Problemas con el
diluyente
5. Retardo en la lectura

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PDR

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Optimal

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Gracias

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