“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
ESCUELA DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

CURSO: Microbiología General

GRUPO: 04

APELLIDO Y NOMBRE:
● Lujan Vasquez Luis Angel

CODIGO DE MATRICULA : 1052401022

PROFESORA:
● Prof. Torres Chiclayo, Keyla Mirely

PRACTICA: Bioseguridad, Microscopia: Manejo del microscopio óptico.

Observación en fresco. Coloración Gram.Observación de espora y cápsula

02/09/2023
TRUJILLO - PERÚ
 PRÁCTICA 1
Bioseguridad, Microscopia: Manejo del microscopio óptico. Observación
en fresco. Coloración Gram.Observación de espora y cápsula

I. INTRODUCCION:
Desde que se inventó el primer microscopio, existe la noción de que existen
organismos muy pequeños, pero con el paso del tiempo han surgido otros más
sofisticados. electrónico =. Ahora es posible visualizar la forma real de
subestructuras, líquidos e incluso objetos observados. Algo que en el pasado no
se podía determinar con verdadera precisión. Sin embargo, este dispositivo por
sí solo no es útil para visualizar los muy pequeños elementos. Para poder
proyectar mejor la imagen en la lente del microscopio, fue necesario utilizar un
método específico. Uno de ellos vendría a ser <los preparados=, ya sea en fresco
o en seco, y que iban a jugar, por separado, un papel preponderante en una
investigación microscópica (Martinez, 2015).
Si no se realizó ninguna antes de ver el elemento bajo el microscopio, el objeto
en cuestión no sería completamente visible. Los portaobjetos secos requieren
que el material a observar esté inmovilizado en el portaobjetos. Este proceso de
fijación consta de pasos de extensión, frotis, fijación real y tinción, mientras que
las preparaciones nuevas incluyen pasos de extensión, frotis, fijación y tinción
simple. Antes de colocar una preparación (fresca o seca) en un portaobjetos,
puede estar contaminada y debe limpiarse con alcohol.(Martinez, 2015).
La tinción es el proceso de colorear un objeto usando uno o tintes diferentes.
Según el objetivo que se persigue, los métodos de tinción se dividen en las
siguientes categorías: a) Tinción simple: cuando se utiliza una única tinción y se
puede observar la morfología y el tamaño celular. b) Tinción múltiple o tinción
diferencial: cuando se utilizan múltiples soluciones de tinción que permiten
observar diferencias entre células o partes de una misma célula. (López-Jácome
et al., 2014).
La tinción microbiológica es la primera herramienta utilizada para diagnosticar
enfermedades infecciosas en el laboratorio . Durante más de un siglo, han
ayudado a resolver problemas de etiología microbiana. Existen diferentes
tinciones desarrolladas para detectar diferentes agentes infecciosos como
bacterias, parásitos y hongos. La tinción de Gram se considera la base para la
evaluación inicial de muestras para análisis bacteriológicos, mientras que la
tinción de Wright se utiliza para diagnosticar enfermedades muy específicas en
el campo de la parasitología. (López-Jácome et al., 2014).
Por consiguiente y no menos importante nosotros debemos acatar las normas
de bioseguridad en el laboratorio para poder tener un desempeño adecuado y
seguro a la hora de realizar nuestras prácticas de laboratorio.
II. OBJETVOS
• Observar las preparaciones en fresco y en seco de bacterias, algas, hongos y
parásitos.
• Observar la tinción de esporas mediante la técnica de wirtz
• Observar bacterias Gram (+) y Gram (-) mediante la coloración compuesta.
• Observar esporas y cápsulas mediante coloraciones especiales.
• Llevar siempre los elementos de bioseguridad para el laboratorio de
microbiología, y seguir las normas.

III. PROCEDIMIENTO
PREPARACION EN FRESCO DE AGUA ESTANCADA
TINCION DE CAPSULA- TÉCNICA DE MANEVAL

TINCION DE ESPORAS-TÉCNICA DE WIRTZ

PROCESO DE TINCION SIMPLE DE PREPARADO EN SECO
IV. FUNDAMENTO
4.1. PREPARADO EN FRESCO
Permiten observar los organismos suspendidos en un líquido en condiciones de
vida normal, sin sufrir alteraciones ocasionadas por calor y algunos colorantes;
permite apreciar la movilidad, los cambios citológicos durante el proceso de
división celular y en la formación de esporas.
Observación en fresco sin colorante: en una lámina portaobjeto se añade una
gota de la muestra bacteriana, se coloca encima una laminilla y se lleva a
observar al microscopio con aumento de 10x y 40x.
Observación en fresco con colorante: en una lámina portaobjeto se añade
una gota de azul de lactofenol, luego con el asa esterilizada se extrae una
muestra de cultivo de hongo, seguido se coloca sobre la gota de azul de
lactofenol, se cubre con una laminilla y se lleva a observar al microscopio.
4.2. PREPARADO EN SECO

Son aquellos que sufren un procesamiento previo (toma de la muestra, extensión

o frotis, fijación y coloración), fijación y tinción) y se caracterizan por sustancias
de prueba adheridas a la superficie del portaobjetos. El frotis es una extensión
que se realiza para aislar tantos organismos como sea posible en una muestra
o portaobjetos de cultivo. Esto se debe a que es muy difícil obtener imágenes
claras y nítidas cuando los microorganismos parecen estar agrupados durante la
preparación de la muestra. La inmovilización del hisopo bacteriano permite que
las bacterias se adhieran al vidrio en estado inactivo, minimizando así los
cambios en la morfología bacteriana y los posibles grupos celulares.

4.3. COLORACION SIMPLE

La tinción única es cuando la muestra expandida se tiñe con una única tinción
.La tinción de la muestra con safranina tiñe las bacterias de rojo, el uso de azul
de metileno las tiñe de azul, mientras que la tinción con Cristal Violeta hace que
las bacterias aparezcan de color púrpura. Utiliza tinte único . Este método
permite distinguir la morfología y la estructura interna de las células bacterianas,
por ejemplo, la presencia de endosporas bacterianas.

4.4. COLORACION ESPECIAL

a) Coloración de esporas (método de Wirtz)

Algunos géneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus,

producen en su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se
producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables formándose
una espora por cada forma vegetativa. Las endosporas poseen unas cubiertas
exclusivas que las hacen resistentes a los factores ambientales adversos.
Además, estas cubiertas hacen que las esporas aparecen en el microscopio
óptico como estructuras refringentes y de difícil tinción. Las esporas, tras la
primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo harán las
formas vegetativas que quedarán teñidas con el segundo colorante.
b) Coloración de cápsula (método de Maneval)
La cápsula es una estructura fuerte de naturaleza polisacárida. Esta protege a
los microorganismos de la fagocitosis, y por tanto es una estructura difícil de
penetrar. Es por ello que las tinciones de cápsulas se fundamentan en el
contraste. Los colorantes tiñen el fondo de la preparación mientras que la
cápsula queda incolora.
VI. RESULTADOS
6.1. OBSERVACION EN FRESCO
a) Sin tinción
Se logra observar el preparado en fresco sin tinción de la Stylonychia sp,lo cual
encontramos huevos de paracitos.

b) Con tinción
La Penicillium sp y Saccharomyces cereviseae son hongos filamentoso hialino
saprofico. Presente hifas hialinas septadas, los conidióforos tienen ramas
secundarias denominadas metulas. Estas son de formas cilíndricas de las cuales
surgen largas cadenas sin ramificar de esporas o conidios formados en el
penacho o pincel. Las levaduras se reproducen por gemación.
6.2. COLORACIONES ESPECIALES
a) Coloración de esporas (método de wirtz)
En microscopio pudimos observar tanto endosporas como exosporas. También
pudimos apreciar bien los microorganismos gracias al colorante de contraste
donde se aprecian los bacilos, teñidos de color rosado debido a la safranina, y
sus esporas, teñidas de color azul oscuro o verde azulado debido a la verde
malaquita.

b) Coloración de cápsula (método de Maneval)

Las capsulas no se tiñen normalmente con colorantes como el cristal violeta o
la safranina. Se observa con una tinción negativa, solamente se tiñe el medio
circundante.
VII. COMENTARIOS E INDICACIONES
La práctica que se realizó fue muy interesante y de gran aprendizaje, nos ayudó
a recordar las partes de un microscopio y su importancia en la observación de
muestras que no son visibles frente al ojo humano como los microorganismos
y/o parásitos que se encuentran en casi todas las partes de la tierra.
También se realizó las observaciones tanto en fresco que permite observar la
movilidad de microorganismo y/o parásitos como en seco donde los
microorganismos y/o parásitos se encuentran muertos y fijados en laminas; las
clases son de modalidad presencial se pudo tener un acercamiento con lo cual
se trabajó de una manera eficaz, visualizaron en la presentación de la practica
1, nos mostraron los materiales de laboratorio de los que en su mayoría si
conocíamos a excepción del asa bacteriológica que es un instrumento que
permite transportar, arrastrar y transvasar inóculos.
Para cada observación se nos mostró el respectivo procedimiento con sus
respectivas imágenes lo cual nos ayudó a aun mejor aprendizaje, al igual que los
resultados de cada observación los cuales mostraron imágenes que
observaríamos en el microscopio.

VII. Bibliografía
Corrales Ramírez, L. C., & Caycedo Lozano, L. (2020). Principios
físicoquímicos de los colorantes utilizados en microbiología. Nova, 18(33).
https://doi.org/10.22490/24629448.3701

López-Jácome, L. E., Hernández-Durán, M., Colín-Castro, C. A., Ortega-Peña,

S., CerónGonzález, G., & Franco-Cendejas, R. (2014). Las tinciones básicas en
el laboratorio de microbiología. Medigraohic, 3(1), 10–18.
https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir2014/ir141b.pdf

Martinez, C. (2015). Descubriendo el microscopio. Cio.Mx.

https://www.cio.mx/talleres/tmcmf/archivos/CJMC_Mantenimiento.pdf

Bionica. (s.f.). Técnicas de tinción: fundamentos.

http://www.bionica.info/biblioteca/TincionBacterias.pdf

Gil M. (19 de junio de 2019). Tinción de cápsula: fundamento y técnicas.

Lifeder. https://www.lifeder.com/tincion-de-capsula/