Laboratorio N°11

Inhibición enzimatica
Yaiseth Gaitán 4-823-571, John Cedeño 4-817-1385 Curso de Bioquímica I
(QM-380), Escuela de Química, Facultad de Ciencias Naturales y Exactas,
Universidad Autónoma de Chiriquí. David, Chiriquí, República de Panamá e-mail:
john.cedeno1@unachi.ac.pa,yaiseth.gaitan@unachi.ac.pa

I. Resumen
El objetivo de esta experiencia de laboratorio consistio en investigar el impacto de la
variación del pH y la concentración en la actividad enzimática, así como diseñar un
experimento para determinar los parámetros cinéticos de la descarboxilasa. Para
llevar a cabo esta tarea, se utilizó un simulador Biomodel y la aplicación EnzyLab.
Inicialmente, se utilizó la aplicación EnzyLab para seleccionar la enzima
descarboxilasa y se realizaron pruebas tanto con inhibidor como sin inhibidor. Los
resultados obtenidos revelaron que, en ausencia de inhibidor, la velocidad de
reacción aumentó gradualmente a medida que se incrementó la concentración del
sustrato, alcanzando finalmente Vmax a concentraciones muy altas de sustrato. Por
otro lado, en presencia de inhibidor, la concentración de éste fue tan elevada que no
pudo ser superada por la concentración de sustrato, lo que ocasionó una
disminución en la actividad enzimática.

II. Objetivos multiplicando sus velocidad por un

● Determinar cómo afecta la
variación de pH y la
concentración en la actividad
enzimática.
● Diseñar un experimento para
obtener los parámetros
cinéticos de la descarboxilasa.
III. Introducción
(Según Robert Murray, 2010) Las
enzimas son proteínas que catalizan
reacciones químicas en los sistemas
biológicos. Aceleran las reacciones
millón de ves o más; estas al igual que
otros catalizadores influyen en la
velocidad alcanzando rápidamente el
equilibrio final de la reacción. Facilitan
la reacción proporcionando una ruta
con menor energía libre de activación
para transformar el sustrato en
producto, en comparación con las
reacciones no catalizadas. Las
enzimas son altamente especificas
tanto en la reacción que catalizan
como en la elección de las sustancias
re accionantes denominadas sustratos
y solo requieren pequeñas cantidades
de enzimas para efectuar la
transformación de un gran numero de
moléculas de sustrato.

IV. Metodología
I. Efecto de la concentración
del sustrato
● Se utilizó un volumen de 5
micrilitros a pH=7 con
concentraciones de 2, 5, 10, 15,
20, 25mM
● Se observó el gráfico de
Michaels y Menten.
Imagen N° gráfico para determinar
II. Efecto del pH el pH óptimo de la descarboxilasa.
● Se mantuvo fijo un valor de
enzima y sustrato. En primer lugar, a un pH de 5.8, se
● Se trabajó a 5 micrilitros de obtuvo una velocidad inicial de 0.46.
enzima y 20mM de sustrato. Este resultado indica que a un pH
● Se varió el pH desde 5,8 hasta ligeramente ácido, la actividad de la
8,4. descarboxilasa es moderada. A
● Se obsrvó el gráfico. medida que se incrementó el pH a 6.5,
se observó un aumento considerable
en la velocidad inicial, alcanzando un
V. Resultados y cálculos valor de 0.89. Esto sugiere que la
01. Efecto de la concentración enzima es más activa en un ambiente
del sustrato ligeramente básico.

02. Efecto del pH Continuando con el incremento del pH,

a 7.2 se obtuvo una velocidad inicial
de 0.98, mostrando un incremento
adicional en la actividad enzimática.
Esto indica que la descarboxilasa
alcanza su máxima actividad a un pH
cercano a la neutralidad.

Sin embargo, a pH 8.0, la velocidad

Imagen N° Variación de pH de la
descarboxilasa.
inicial disminuyó a 0.61. Este
descenso en la actividad enzimática
sugiere que la descarboxilasa puede
ser sensible a un ambiente
ligeramente alcalino. A pH 8.4, la
velocidad inicial fue aún más baja,
alcanzando un valor de 0.35. Esto
indica una disminución significativa en
la actividad enzimática a un pH más
alto.

Estos resultados indican que la

descarboxilasa exhibe una actividad
óptima en un rango de pH cercano a la
neutralidad, alrededor de 6.5 a 7.2. A
medida que el pH se desvió de este
rango óptimo, la actividad enzimática
disminuyó. Esto sugiere que el pH
juega un papel crucial en la
modulación de la actividad de la
descarboxilasa.

Es importante tener en cuenta que

estas mediciones se realizaron
utilizando un volumen constante de
enzima y una concentración de
sustrato de 20 mM. Sin embargo, para
una comprensión más completa de la
cinética enzimática de la
descarboxilasa, sería necesario
realizar experimentos adicionales con
diferentes concentraciones de sustrato
y volumen de enzima, así como
explorar otros parámetros cinéticos
como la constante de
Michaelis-Menten y la constante de
velocidad máxima (Vmax).

VI. Conclusiones

VII. Referencias bibliográficas

Marco teórico.Las enzimas. (2014,
abril 25). Clubensayos.com.
https://www.clubensayos.com/Ciencia/
Marco-te%C3%B3ricoLas-enzimas/16
51939.html