Prácticas de Bioquímica Soledad Bornás Acosta

PRÁCTICA 8

OXIDACIONES BIOLOGICAS

1. INTRODUCCION

La formación de ATP por fosforilación ADP ocurre al mismo tiempo que la combustión de
grasas, carbohidratos e incluso proteínas. Las modificaciones de reacciones que se realizan
en las células permiten la fosforilación de una gran cantidad de moléculas de ATP por
moléculas de combustible consumido; cada uno de estos procesos representa la suma de
muchas reacciones individuales.
Mas del 85% de los fosfatos de alta energía consumidos durante el día por todo el organismo
son producidos por fosforilación oxidativa; esto es, la generación de enlaces de alta energía
acoplados a la reducción del oxígeno, el cual se realiza a nivel de la membrana interna
mitocondrial. Un menor porcentaje de reacciones redox también se llevan a cabo en el
citosol a nivel de otras vías metabólicas.
Existen diferentes formas de evidenciar las oxidaciones biológicas, una de ellas es mediante
el uso de aceptores artificiales de electrones, los cuales se decoloran cuando se reducen.
También se puede estimar estas reacciones mediante el consumo de oxígeno utilizando un
respirómetro de Warburg o mediante la determinación de la oxihemoglobina (hemoglobina
oxigenada) por espectrofotometría.

2. OBJETIVOS
 Verificar la actividad de la xantino deshidrogenasa de la leche cruda y hervida,
usando como sustrato artificial el aldehído fórmico.
 Estimar la oxidación del aldehído fórmico por medio de un aceptor artificial de
hidrógenos (azul de metileno) que al reducirse se decolora.
 Verificar la acción inhibidora del cianuro y alopurinol sobre la actividad enzimática
de la xantino deshidrogenasa.

3. MATERIAL Y METODOS
3.1. MATERIALES
3.1.1. Materiales biológicos
 Leche cruda de vaca
 Leche hervida de vaca

3.1.2. Materiales de vidrio

 Tubos de ensayo
 Pipetas
 Matraces o vasos de precipitación

3.1.3. Reactivos
 Azul de metileno 0,1%
 Aldehido fórmico hidratado 0,1M
 Alopurinol
 Cianuro de Sodio 0,1M
 Agua destilada
 Aceite o parafina líquida

3.1.4. Equipos y otros

 Piseta
 Cocina
 Guantes

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3.2. METODOS
Mediante la observación y exploración se aplicará el método de aceptores artificiales de
electrones con la finalidad de verificar las reacciones de óxido-reducción.

4. PROCEDIMIENTO
4.1. Acción de la Xantino Deshidrogenasa de la leche.
 Rotular 4 tubos de ensayo y medir lo siguiente:
1 2 3 4
Leche cruda 5mL 5mL 5mL
Leche hervida 5mL
Alopurinol 1mL
Cianuro de sodio 1mL
Aldehido fórmico 0,8mL 0,8mL 0,8mL 0,8mL
Azul de metileno 0,4mL 0,4mL 0,4mL 0,4mL
 Mezclar y agregar inmediatamente a cada tubo 1 mL de aceite o parafina líquida.
 Incubar los tubos a 37°C por 5 minutos. Luego observar la decoloración del azul de
metileno a los tubos que corresponda.

5. RESULTADOS
 Esquematizar el procedimiento de los experimentos. Luego interpretar sus
resultados.
 En el experimento 4.1. estructurar la siguiente tabla:
1 2 3 4
Decoloración 0-5 minutos
Decoloración 5-10 minutos
Decoloración10-15 minutos
 Interpretar por qué en algunos tubos se da la decoloración y en otros no.

6. CONCLUSIONES

7. CUESTIONARIO
7.1. ¿Qué papel cumple el cianuro y el alopurinol en la acción de la Xantino deshidrogenasa?
7.2. ¿Explique cómo demostramos la acción catalítica de la xantino deshidrogenasa en el
experimento?
7.3. ¿Qué es la oxihemoglobina y qué importancia tiene en las reacciones redox?
7.4. ¿Qué otros métodos podemos utilizar para demostrar las oxidaciones biológicas?

8. BIBLIOGRAFIA