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Revista  de  
Sensorial,
J  Comp  Physiol  A  (1984)  155:197  208 Comparación  y  Neural'
Fisiología  A conductual
Fisiología
9  Springer­Veflag  1  984

Bases  iónicas  de  potenciales  de  acción  en  neuronas  de  platelmintos  identificadas

Larry  Keenan  y  Harold  Koopowitz
Departamento  de  Biología  Celular  y  del  Desarrollo,  Universidad  de  California,  Irvine,  California  92717,  EE.  UU.

Aceptado  el  24  de  abril  de  1984

Resumen.  Se  estudiaron  las  bases  iónicas  para  la   que  el  propuesto  originalmente  por  Hodgkin  y  Huxley  
generación  de  potenciales  de  acción  en  tres  tipos  de   (1952).  Actualmente  se  conocen  al  menos  dos  canales  
neuronas  multimodales  identificadas  en  el  cerebro  de   de  Na+  (Matsuda  et  al.  1978;  Crill  y  Schwindt  1983)  y  se  
Notoplana  acticola,  un  platelminto  polivestido.  Los   han  demostrado  al  menos  tres  canales  de  K  en  moluscos  
potenciales  de  acción  se  generaron  espontáneamente,   (ver  Adams  et  al.  1980,  para  una  revisión)  y  más  
en  respuesta  a  vibraciones  transmitidas  por  el  agua,  o   recientemente  en  vertebrados  ( Adams  1982).
mediante  pulsos  de  corriente  inyectados  intracelularmente.   Además,  ahora  se  aprecia  la  importancia  del  Ca++  como  
Al  menos  tres  componentes  comprenden  la  fase  excitable   portador  de  corriente  y  como  activador  de  otros  canales  
despolarizante  de  los  potenciales  de  acción:  (a)  un   iónicos  (Meech  1978).
componente  Na  +  sensible  a  TTX  que  se  inactiva   La  evolución  de  esta  plétora  de  canales  no  se  
rápidamente  (Fig.  2);  (b)  un  componente  de  Ca++  que  es   comprende  bien,  pero  el  examen  de  los  canales  iónicos  
desenmascarado  por  TEA+  intracelular  (Figs.  4,  6,  7);   en  los  filos  inferiores  podría  dar  pistas  sobre  la  evolución  
(c)un  componente  Na+  resistente  a  TTX  (Fig.  8).  Dos   temprana  de  las  membranas  electrogénicas.  En  los  
corrientes  de  K  +  parecen  explicar  la  fase  de  repolarización  
celentéreos,  por  ejemplo,  los  canales  rápidos  de  Na+  
de  los  potenciales  de  acción:  (a)  una  corriente  rápida  de   sensibles  a  la  tetrodotoxina  (TTX)  no  parecen  ocurrir  en  
K  +  que  es  bloqueada  por  TEA  +  intracelular  (Figs.  4,  7,  las  neuronas  (Anderson  1979),  aunque  los  influjos  de  
8)  y  (b)  una  corriente  de  K  +  +  activada  por  Ca  +  +.   Na+  constituyen  una  gran  proporción  del  potencial  de  
Conductancia  de  K+  que  está  bloqueada  por  Ca++  y   acción.  Sin  embargo,  en  el  músculo  celenterado  están  
Ba§+  (Fig.  6).  Los  mecanismos  iónicos  en  la  generación   presentes  canales  tanto  TTX  como  insensibles  a  TTX;  
de  potenciales  de  acción  en  las  neuronas  multimodales   también  hay  componentes  de  Ca++  y  dos  canales  de  K+  
centrales  de  Notoplana  se  parecen  farmacológicamente  a  los  d(Spencer  
e  los  metazoos   superiores.
y  Satterlie  
1981).  En  el  gusano  plano  Notoplana  
acticola  hemos  descrito  tanto
canales  de  Na+  rápidos  sensibles  a  TTX  e  insensibles  
a  TTX  (Keenan  y  Koopowitz  1981).  En  otro  platelminto  
policlado,  Alleoplana  californica,  se  observó  un  canal  de  
Introducción K+  que  sólo  podía  bloquearse  mediante  inyección  de  
El  aislamiento  y  la  identificación  de  canales  iónicos  en   tetraetilamonio  (TEA+)  y  EGTA  en  tipos  similares  de  
membranas  excitables  se  ha  visto  facilitado  en  las  últimas   células  (Solon  y  Koo  powitz  1982).  Nunca  antes  se  
décadas  por  el  descubrimiento  y  uso  de  varias  toxinas  y   había  intentado  una  investigación  sistemática  de  clases  
compuestos  que  bloquean  los  canales  de  conducta  en   de  diversos  canales  iónicos  en  los  platelmintos  primitivos.  
las  neuronas.  En  consecuencia,  hemos  aprendido  que  el   En  este  estudio  se  investigó  la  base  de  la  excitabilidad  
evento  iónico  subyacente  a  la  acción  y  otros  potenciales   de  la  membrana  en  terneuronas  multimodales  
de  membrana  es  mucho  más  complejo. identificadas  del  cerebro  de  Notoplana .

Abreviaturas:  tetrodotoxina  TTX;  TEA  +  ion  tetraetilamonio;  LY  amarillo  lucifer;  HRP  
peroxidasa  de  rábano  picante;  BRA  neuronas  dispuestas  bilateralmente  y  
recíprocamente;  SC  únicas  que  se  proyectan  contralateralmente,  SIC  únicas  
Materiales  y  métodos
neuronas  que  se  proyectan  ipsilateral  y  contralateralmente;  HAP  hiperpolarizándose  
después  del  potencial;  AHP  después  de  la  hiperpolarización;  EGTA  Ácido   Preparación  de  animales.  Se  obtuvieron  y  mantuvieron  especímenes  de  Notoplana  
etilenglicol­bis­(fl­amino­etil  éster)  N,N'­tetraacético actiola  de  la  misma  manera  que  se  informó  anteriormente  (Bernardo  et  al.  1977).  
Los  animales  fueron  anestesiados  en  iguales
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198 L.  Keenan  y  H.  Koopowitz:  potenciales  de  acción  en  neuronas  de  platelmintos

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B I

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Figuras  1A­D.  Morfología  y  posición  de  interneuronas  multimodales  en  el  cerebro  de  Notoplana .  Todos  los  dibujos  son  de  rellenos  LY  y  HRP.  par  de  células  
AwBRA;  par  de  células  BbBRA;  célula  C  SC;  Techo  D  SIC.  El  recuadro  entre  C  y  D  muestra  las  posiciones  relativas  de  las  células  (AD)  y  los  principales  
cordones  nerviosos  emparejados  bilateralmente  (I­VI)  que  salen  del  cerebro.  Las  líneas  medias  del  cerebro  en  las  que  se  rellenaron  y  posteriormente  se  
dibujaron  las  células  están  indicadas  por  las  M.

partes  de  MgC12  isosmótico  y  agua  de  mar  natural  (NSW).  Luego,  el   en  sus  respuestas  a  los  diversos  agentes  bloqueadores  o  sustituciones  de  
cerebro  fue  expuesto  y  estabilizado  con  espinas  de  cactus  sobre  una  base   iones.  Al  finalizar  los  experimentos,  las  células  se  llenaron  con  amarillo  de  
de  resina  Sylgard  en  una  placa  de  Petri. Lucifer  (LY)  o  peroxidasa  de  rábano  picante  (HRP)  para  poder  verificar  
Las  células  a  estudiar  se  eligieron  y  se  penetraron  con  microelectrodos   morfológicamente  la  identidad  celular.
de  vidrio.  Las  neuronas  multimodales  identificadas  se  seleccionaron  en   Todos  los  experimentos  se  realizaron  a  temperatura  ambiente  y
función  de  su  ubicación  en  el  cerebro  y  sus  respuestas  a  la  vibración  y  la   Las  temperaturas  medidas  del  agua  oscilaron  entre  17  ~  y  20  ~
estimulación  fótica  (Keenan  y  Koopowitz  1983  a,  b).  Los  datos  se  obtuvieron  
de  células  acopladas  por  tinte  dispuestas  bilateral  y  recíprocamente  (BRA)   Electrofisiología.  La  cámara  de  grabación  y  los  aparatos  de  estimulación  y  
(Fig.  1  A  y  B),  dos  tipos  que  pueden  diferenciarse  según  la  morfología  y  la   grabación  se  han  descrito  en  detalle  (Keenan  y  Koopowitz  1983a).  Se  
electrofisiología  (Keenan  y  Koopowitz  1983a,  b),  pero  que  se  consideraron   utilizaron  técnicas  de  registro  intracelular  convencionales.  Las  células  se  
como  un  solo  grupo  en  este  estudio.  Además,  se  estudiaron  otros  dos  tipos   empalaron  con  microelectrodos  de  vidrio  individuales  llenos  con  3,0  mol/1  
de  células  (Fig.  1  C  y  D). KC1,  5  %  de  LY  en  la  punta  con  3,0  herramienta/1  LiC1  como  electrolito  del  
cilindro,  o  HRP  (20  mg/ml  en  0,15  herramienta/1  KCI  tamponado  a  pH  7,6).  
Estas  células  normalmente  no  se  observan  eléctricamente  ni  acopladas   con  tampón  Tris).  Los  electrodos  de  vidrio  de  paredes  delgadas  utilizados  
mediante  tintes  entre  sí.  Son  células  únicas,  que  se  proyectan   normalmente  produjeron  resistencias  de  2  a  40  MOhms  cuando  se  llenaron  
contralateralmente  (SC)  y  únicas  ipsi  y  contralateralmente  (SIC). con  LY  o  HRP.  Los  electrodos  KC1  tenían  resistencias  de  aproximadamente  
Hay  un  solo  par  de  cada  uno  en  el  cerebro.  Otros  criterios  de  aceptabilidad   1/5  de  las  resistencias  de  los  electrodos  rellenos  de  tinte.  Se  utilizaron  
para  el  análisis  incluyeron  un  potencial  de  membrana  en  reposo  estable   amplificadores  Getting  Model  5  para  amplificar  las  respuestas  celulares.
por  debajo  de  ­32,0  mV  y  potenciales  de  acción  excesivos  que  normalmente  
oscilaban  entre  60  y  90  mV  de  amplitud  y  entre  0,75  y  1,5  ms  de  duración   Las  respuestas  de  las  células  a  la  vibración,  el  paso  de  la  corriente  y  
a  media  amplitud  cuando  se  registraron  en  Nueva  Gales  del  Sur.  Los   el  encendido  y  apagado  de  la  luz  se  registraron  y  almacenaron  
potenciales  en  reposo  que  eran  más  positivos  que  ­32,0  mV  normalmente   permanentemente  en  una  cinta  magnética  utilizando  una  grabadora  
indicaban  una  lesión  celular  que  normalmente  daba  como  resultado  un   Hewlett  Packard  3964A.  Posteriormente  los  datos  fueron  recuperados,  
mayor  deterioro  hasta  potenciales  aún  más  positivos. fotografiados  y  analizados.  Los  voltajes  en  línea  provenientes  de  un  
Los  análisis  no  mostraron  diferencias  obvias  entre  estos  tipos  de  células. fototransductor  que  monitorea  la  luz,  del  estimulador  que  acciona  el  altavoz  y  la  sonda  de  vibraci
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L.  Keenan  y  H.  Koopowitz:  potenciales  de  acción  en  neuronas  de  platelmintos

Tabla  1.  Composición  de  las  soluciones  utilizadas  en  experimentos  de  sustitución  de  iones.

Agua  de  mar  artificial Concentración  de  sal  (mmol/1)
(ASW)  soluciones
NaC1 KC1 CaC1  z  MgCl  2  MgSO  4  NaHCO  3  Tris" CdC12  BaC1  z

ASW  normal  460 10   10   23   27   2   0   0   0  

ASW  libre  de  Na+  0 10   10   23   27   0   462   0   0  
Ca  +  +  libre  ASW  470 10   0   23   27   2   0   0   0  

Na  +­,  Ca  +  +­libre  ASW  0 10   0   23   27   0   480   0   0  

Cd  +  +­,  0  Ca  +  +  ASW  460 10   0   23   27   2   0   10   0  

Ba  +  +­,  0  Ca  +  +  ASW  b  460 10   0   34   0   0   18   0   10  

Mg++­,  bajo  Na+,  Ca++  ASW  340 5 5 180 14 1 0 0 0

"Tris  se  preparó  a  partir  de  soluciones  isosmóticas  del  ácido  y  la  base  de  Trizma  (Sigma)  en  una  proporción  de  6:1  (ácido  a  base)  y  se  tituló.
hasta  un  pH  final  de  7,6  
b  No  se  utilizaron  aniones  divalentes  debido  al  precipitado  pesado  que  se  forma  con  Ba  ++

También  se  registraron  los  circuitos  de  corriente  a  voltaje.  Se  anotaron  las   medido  de  la  misma  manera  usando  un  compactador  de  Ca  +  +/Mg  +  +,  con  
observaciones  y  se  registró  la  actividad  celular  en  un  registrador  gráfico  Gould   corriente  ajustada  a  4  mA.  La  longitud  de  onda  de  emisión  fue  de  422,7  nm  con  
Brush.  La  actividad  se  mostró  en  un  osciloscopio  de  almacenamiento  de  4  canales   un  paso  de  banda  espectral  de  0,5  nm.  Se  utilizó  carbonato  de  calcio  como  
Tektronix. estándar,  la  solución  preparada  con  ácido  nítrico  diluido  1:4  en  agua.  La  
ionización  se  suprimió  mediante  la  adición  de  lantano  (10  mg/ml).  Las  
Soluciones  y  farmacología.  Los  experimentos  se  llevaron  a  cabo  con   concentraciones  de  la  solución  estándar  de  carbonato  de  calcio  fueron  0,  100  y  
los  platelmintos  completamente  sumergidos  en  2,0  a  5,0  ml  de  agua   200  gmol/1.
de  mar  natural  (NSW),  el  medio  de  control.  Durante  los  experimentos  
de  sustitución  o  adición  de  iones,  la  composición  se  modificó  
utilizando  las  soluciones  de  agua  de  mar  artificial  (ASW)  enumeradas  
Resultados
en  la  Tabla  1.  El  ion  tris  (hidroximetil)  aminometano  (TRIZMA,  
Sigma)  que  no  puede  permear  en  los  canales  se  usó  como  sustituto  
iónico  de  Na+  y/o  Ca++.  Se  utilizó  un  sistema  de  flujo  asistido  por   Supuestos  experimentales  y  farmacológicos.
gravedad  (velocidad  de  5  ml/min)  para  llenar  y  evacuar  la  cámara  
de  grabación  al  principio  y  al  final  de  cada  período  que  requería  un   En  general,  los  potenciales  de  acción  de  los  tres  tipos  de  células  investigadas  
ASW  con  iones  sustituidos  o  aplicaciones  de  TTX  o  TEA+.  La  ASW   (Fig.  1  A)  (BRA,  SC  y  SIC)  fueron  alterados  de  manera  similar  por  los  distintos  
se  preparó  según  fuera  necesario  con  concentraciones  variables  
tratamientos.  Se  estudiaron  un  total  de  81  techos  pero
de  Na+,  Ca++,  Cd++  y  Ba++.  La  osmolalidad  de  NSW  varió  entre  
940  y  1050  mosmoles  y  las  osmolalidades  de  las  soluciones  de  
ASW  se  mantuvieron  dentro  de  estos  rangos.  El  pH  de  todas  las   sólo  55  cumplieron  los  criterios  para  el  análisis  (ver  Materiales  y  métodos).  De  
soluciones  se  mantuvo  entre  6,9  y  7,4,  el  rango  normal  para  el   los  55,  22  eran  células  BRA,  18  eran  células  SC  y  el  resto  células  SIC.  En  Nueva  
intermareal  de  Nueva  Gales  del  Sur  recolectado  del  hábitat  de  Notoplana  acticola.
Gales  del  Sur,  cada  tipo  de  célula  tiene  respuestas  electrofisiológicas  
En  muchos  de  los  experimentos  se  utilizaron  agentes  bloqueadores  de  
características  a  la  vibración  y  a  los  estímulos  fóticos  (Keenan  y  Koopowitz  
canales  TTX  (tetrodotoxina,  Sigma)  y  TEA+  (K&K  Laboratories).  Se  añadió  TTX  
mediante  una  jeringa  a  través  de  un  tubo  de  polietileno  de  poros  pequeños   1982b),  pero  no  se  observaron  diferencias  obvias  entre  los  tres  grupos  en  los  
directamente  en  la  cámara  del  baño.  La  concentración  final  de  TTX  fue  de  10   cambios  manifestados  durante  los  experimentos  de  sustitución  y/o  bloqueo  de  
nmol/1.  En  aquellos  experimentos  que  requirieron  el  uso  de  TEA+,  los  electrodos   iones.  En  consecuencia,  las  células  analizadas  serán  tratadas  como  un  solo  
, en  5%  LY  y  el  agente  se  inyectó  en  la  célula  
se  llenaron  con  100  mmol/1  de  TEA+  
grupo.  Las  mediciones  de  los  componentes  del  potencial  de  acción  incluyeron  la  
con  pequeños  pulsos  despolarizantes  (1  a  2  hA).  Se  desconoce  la  concentración  
real  de  TEA+  que  pasó  a  las  células,  pero  el  fármaco  generalmente  tuvo  efecto   amplitud  absoluta  de  la  fase  rápida  inicial  del  pico  desde  el  umbral  de  activación  

dentro  de  1  minuto  desde  el  comienzo  de  la  inyección  actual. hasta  el  pico,  la  duración  del  potencial  de  acción  a  la  mitad  de  la  amplitud  y  la  
duración  y  amplitud  del  potencial  pospotencial  hiperpolarizante  (HAP).  El  HAP,  
tal  como  se  utiliza  en  el  contexto  de  este  informe,  se  define  como  la  porción  del  
Las  concentraciones  de  Na  +  y  Ca  +  +,  cuando  se  indican  específicamente  
potencial  pospotencial  que  es  más  negativa  que  el  potencial  sobre  el  cual  se  
en  las  figuras  o  en  el  texto,  se  determinaron  a  partir  de  mediciones  realizadas  en  
alícuotas  de  medio  a  3  ml  tomadas  de  la  cámara  de  grabación  al  final  de  un   superpone  el  potencial  de  acción,  ya  sea  el  nivel  de  reposo  de  la  célula  o  un  
segmento  experimental  en  el  que  se  introdujo  un  volumen  predefinido.  de   evento  sináptico.
composición  conocida.
Las  muestras  se  diluyeron  de  1.000  a  3.000  veces  en  una  solución  estándar  
micromolar  cero  y  se  midieron  frente  a  soluciones  estándar  de  concentración  
conocida  utilizando  un  espectrofotómetro  Varian  de  absorción  atómica  modelo  
275  en  el  modo  de  absorción.
Las  mediciones  de  Na+  se  realizaron  utilizando  una  configuración  de  longitud  de  
onda  de  589  nm  y  un  paso  de  banda  espectral  de  1,0  nm.  Se  utilizó  una  corriente  
de  lámpara  de  5  mA  con  acetileno  soportado  por  aire  como  combustible  para  la  
La  acción  bloqueadora  del  Cd  +§  y  Mg  §247  en
espectrofotometría  de  llama.  Las  concentraciones  de  los  estándares  fueron  0,  
100  y  200  gmol/1  de  NaC1  y  se  agregaron  3,824  g/l  de  KC1  para  suprimir  la   Conductancias  de  Ca  +§,  de  TEA  §  sobre  conductancias  de  K  §  y  de  TTX  
ionización.  Las  concentraciones  de  calcio  fueron sobre  conductancias  rápidas  de  Na  §
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200
L.  Keenan  y  H.  Koopowitz:  potenciales  de  acción  en  neuronas  de  platelmintos

A B C

oh 50  ms

. _~L~_~­____

1200  urnas 110  na

Nueva  Gales  del  Sur
Nueva  Gales  del  Sur,TTX 230  mM  NOTA
Figuras  2A­C.  Los  efectos  de  TTX  y  Na  +  externo  reducido  en  las  respuestas  de  las  células  wBRA.  El  estímulo  de  vibración  AA  (5,0  ms,  desplazamiento  de  la  
sonda  de  120  g)  en  Nueva  Gales  del  Sur  evocó  cuatro  potenciales  de  acción  superpuestos  a  un  EPSP.  El  estímulo  BA  con  los  mismos  parámetros  provocó  una  
explosión  de  nueve  potenciales  de  acción  15  minutos  después  de  que  se  agregaron  10  nmol/1  de  TTX  al  baño.  Obsérvese  la  disminución  en  la  amplitud  del  pico  y  
el  aumento  en  la  duración  de  cada  pico  en  comparación  con  las  características  del  pico  de  la  respuesta  en  A.  Después  de  que  el  Na+  externo  se  redujo  de  450  
mmol/l  a  230  mmol/1,  la  vibración  no  pudo  provocar  respuestas.  estímulos  (no  mostrados).
C  La  inyección  de  corriente  de  4,6  nA  dio  como  resultado  un  potencial  de  acción  único  con  la  misma  amplitud  desde  el  umbral  de  activación  que  los  picos  
observados  en  B,  a  pesar  de  que  el  Na+  externo  se  había  reducido  en  un  50%.  En  esta  y  las  siguientes  figuras,  los  rastros  debajo  de  todas  las  respuestas  muestran  
el  desplazamiento  de  la  sonda  de  vibración  (gin)  o  la  inyección  de  corriente  (nA)  utilizada  para  evocar  las  respuestas.

Se  supuso  que  eran  similares  y  tenían  el  mismo  tipo  de   cayó  por  debajo  de  9,0  mmol/1,  probablemente  debido  a  
acción  que  la  reportada  en  células  de  moluscos  (Ste  vens   que  el  Na+  intersticial  no  se  pudo  eliminar  completamente  
1980).  También  se  supuso  que  Ba++  podría  transportar   (incluso  después  de  cambiar  el  volumen  del  baño  de  5  ml  
corriente  a  través  de  los  canales  de  Ca++  y  sustituir  la   cinco  veces  con  perfusiones  continuas  de  ASW  libre  de  
liberación  del  transmisor  promovida  por  Ca++,  pero  bloquear   Na+).  Si  la  concentración  externa  de  iones  Na+  se  reduce  
la  activación  de  las  corrientes  de  Ca+  §  K  §  (McLachlan   a  niveles  bajos  y  se  obtienen  valores  absolutos  para  las  
1977;  Thompson  y  Al  drich  1980). . amplitudes  de  los  picos,  midiendo  la  amplitud  de  los  
potenciales  desde  el  umbral  hasta  el  pico  (los  potenciales  
en  reposo  permanecieron  en  los  niveles  previos  al  
tratamiento  para  todas  las  células  analizadas  de  esta  
Sensibilidad  de  los  potenciales  de  
acción  a  TTX  y  Na  bajo. manera),  la  los  picos  disminuyen  a  25  o  35  mV  en  amplitud  
y  permanecen  dentro  de  ese  rango  (Fig.  3  C).
Las  amplitudes  del  potencial  de  acción  de  las  células   TEA+,  que  retrasa  la  repolarización  de  muchas  células  
multimodales  de  Notoplana  disminuyen  al  30­50  %  de  las   mediante  el  bloqueo  de  los  canales  de  K+  dependientes  
amplitudes  de  control  cuando  se  añade  TTX  extracelular   del  voltaje  (Armstrong  y  Binstock  1965),  no  tiene  efectos  
(10  nmol/1)  al  baño  (Fig.  2).  Sin  embargo,  los  picos  no  se   observables  sobre  los  potenciales  de  acción  de  las  células  
eliminan  por  completo,  incluso  cuando,  además  de  TTX,  el   multimodales  de  Notoplana  cuando  se  aplica  en  el  medio  
Na+  extracelular  se  reduce  en  un  50%  (Fig.  2C).  La   extracelular  en  concentraciones  de  50  mmol. /1  durante  1  
amplitud  no  disminuye  más  que  cuando  se  usa  TTX  solo,   hora  como  máximo.  Si  se  inyecta  iontoforéticamente  en  la  
pero  el  tiempo  de  aumento  y  la  duración  son  más  largos.   célula,  a  través  del  electrodo  de  registro  (pulsos  de  corriente  
TTX  también  afecta  la  frecuencia  de  disparo  en  las  células.   de  1,0  a  2,0  nA,  250  ms  de  duración  a  4  Hz  durante  1  a  2  
Tanto  las  respuestas  provocadas  por  vibraciones  como  la   minutos),  el  agente  prolonga  la  duración  de  los  potenciales  
actividad  espontánea  normalmente  no  están  marcadas  por   de  acción  y,  en  ocasiones,  produce  un  aumento.  en  la  
estallidos  de  actividad;  sin  embargo,  la  apariencia  de   amplitud  del  pico  inicial  del  potencial.  TEA+  no  afecta  el  
estallido  de  la  respuesta  provocada  por  vibración  en  la  Fig.   tiempo  de  subida  aparente  de  la  fase  ascendente  inicial  del  
2  B  después  del  tratamiento  con  TTX  es  común.  Con  la   pico  (Fig.  4A,  B).  Los  componentes  rápidos  del  potencial  de  
disminución  del  Na+  externo  (Fig.  3  A)  o  la  introducción   acción  prolongado  de  TEA+­  se  reducen  en  amplitud  
de  TTX  en  el  baño  (Fig.  3B)  también  se  observa  estallido   cuando  se  utiliza  Na+  bajo  (Fig.  4  B)  o  cuando  se  aplica  
espontáneo.  En  ambos  casos  las  amplitudes  de  los   TTX  (Fig.  4A).
potenciales  de  acción  se  reducen.
Se  llevó  a  cabo  una  serie  de  experimentos  para  
examinar  más  de  cerca  los  componentes  de  Na  de  los  
Componente  Ca++  dependiente  del  voltaje  
potenciales  de  acción.  La  concentración  de  Na  se  varió  en  
del  potencial  de  acción
concentraciones  ascendentes  y  descendentes  en  el  rango  
de  0  a  460  mmol/l.  La  concentración  real  de  Na+  (medida   Los  efectos  de  niveles  altos  de  Mg  ++  y  altos  de  Cd  ++  
mediante  espectroscopia  atómica)  nunca sobre  la  generación  y  forma  de  los  potenciales  de  acción  fueron
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L.  Keenan  y  H.  Koopowitz:  potenciales  de  acción  en  neuronas  de  platelmintos 201

250  ms

mV  
~
­entonces Nueva  Gales  del  Sur Na  180  mM

t ]200  ttm
B

mV

­5€ Nueva  Gales  del  Sur
TTX  de  10  nM

S
100

>
SL

"0

mi  <

~4o
(3­ =*

2O

0  
10 !  50 yo  100 yo  200 yo  400

Concentración  externa  de  Na  (raM)
Figuras  3A­C.  Efectos  del  Na+  y  TTX  externos  bajos  sobre  la  actividad  espontánea  en  células  multimodales.  Respuesta  provocada  por  vibración  AA  en  una  célula  
que  no  mostró  actividad  espontánea  en  Nueva  Gales  del  Sur.  Cinco  minutos  después  de  la  perfusión  continua  con  130  retool/1  Na+­ASW,  se  observaron  
estallidos  espontáneos  de  potenciales  de  acción.  Los  potenciales  en  las  explosiones  tenían  amplitudes  reducidas  en  comparación  con  los  picos  provocados  por  
vibraciones  en  Nueva  Gales  del  Sur  (A).  El  potencial  de  reposo  se  mantuvo  en  ­39  mV  durante  todo  el  experimento.  B  Actividad  espontánea  en  otra  célula  antes  y  
15  minutos  después  de  la  adición  de  10  nmol/1  de  TTX  al  baño.  El  potencial  de  reposo  en  esta  celda  se  mantuvo  en  ­43  inV.
C  Gráfico  de  amplitudes  del  potencial  de  acción  en  función  del  registro  de  concentraciones  externas  de  Na+.  Las  amplitudes  de  los  picos  se  midieron  desde  el  
umbral  de  activación  hasta  el  pico  y  los  datos  se  representaron  para  cuatro  celdas.  Los  potenciales  de  membrana  de  las  células  individuales  permanecieron  
aproximadamente  en  ­37  mV  para  cada  experimento  completo  y  los  puntos  son  medias  de  tres  mediciones  tomadas  10  minutos  después  del  final  de  tres  enjuagues  
con  Na+­ASW  reducido.  Si  se  considera  que  el  nivel  medio  en  reposo  es  ­35  mV,  los  potenciales  máximos  en  Nueva  Gales  del  Sur  fueron  55  mV  por  encima  de  0.  
Si  se  supone  una  concentración  interna  de  Na  +  de  40  mmot/1,  la  pendiente  entre  100  mmol/1  y  400  retool/1  Na+  (externo)  es  aproximadamente  58  mV/década  
de  disminución  en  la  concentración  externa  de  Na+.  Esto  concuerda  bastante  con  lo  que  uno  podría  predecir  a  partir  de  la  relación  de  Nernst.  El  recuadro  muestra  
los  potenciales  de  acción  registrados  que  dieron  como  resultado  los  puntos  trazados  como  triángulos  abiertos.  Las  coordenadas  de  los  puntos  representados  por  
los  potenciales  de  acción  son  de  arriba  a  abajo:  450  retool/l,  90  mV;  280  mmol/1,  61  mV;  180  retool/l,  42  inV.  Consulte  el  texto  para  obtener  detalles  sobre  las  
mediciones  de  concentración  de  Na+.  Corriente  0,1  nA

investigado.  En  180  mmol/1  MgC12  de  agua  de  mar  o   (73  mV  frente  a  85  mV)  y  duraron  más  (0,9  ms  frente  a  
10  retool/1  CdC12  ASW,  los  potenciales  de  reposo   1,3  ms)  que  los  observados  en  Nueva  Gales  del  Sur  
fueron  de  5  a  10  mV  más  negativos  y  el  ruido  de  fondo   (P>0,01  para  amplitud  y  duración).  Se  necesitaba  hasta  
disminuyó.  En  estas  condiciones  no  se  podían  provocar   tres  veces  la  corriente  para  evocar  potenciales  en  agua  
potenciales  de  acción  mediante  vibración  o   de  mar  de  180  retool/1  Mg++.  Sin  embargo,  la  
fotoestimulación.  Fue  necesario  el  paso  de  pulsos  de   disminución  en  la  amplitud,  así  como  el  aumento  en  la  
corriente  al  interior  de  las  células  para  evocar  potenciales   corriente  umbral  necesaria  para  evocar  potenciales  de  
de  acción  en  agua  de  mar  con  alto  contenido  de  Mg  ++   acción,  probablemente  se  debieron  a  la  disminución  de  
(180  mmol/1)  o  10  retool/1  Cd  ++  (Fig.  5).  Los  potenciales   las  concentraciones  de  Na+  y  Ca++  en  el  medio  ASW  
de  acción  en  180  retool/1  MgC12  tenían  amplitudes  medias  disminuidas.
de  180  retool/1  Mg+  +,  lo  que  reduciría  la  potencial  de  equilibrio
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202 L.  Keenan  y  H.  Koopowitz:  potenciales  de  acción  en  neuronas  de  platelmintos

A
A ._...1 ­­.

­50

Nueva  Gales  del  Sur
Nueva  Gales  del  Sur,TTX L__
Nueva  Gales  del  Sur
magnesio  180  mm
10  ms

m  ~
j~
.50  84

Nueva  Gales  del  Sur,TTX,TÉ

B ­70 ~ ,

Nueva  Gales  del  Sur CD  de  10  mm
50  ms
0
Fig.  5A,  B.  Efectos  de  Mg++  alto  y  Cd++  alto  sobre  las  amplitudes  de  los  
mV
potenciales  de  acción  de  células  multimodales.  A  La  amplitud  de  un  potencial  
­50
de  acción  provocado  por  una  corriente  en  180  mmol/1  Mg  +  +­ASW  (trazado  
derecho)  es  12  mV  menor  que  el  pico  provocado  en  Nueva  Gales  del  Sur  
TÉ, ]200  um por  un  pulso  de  corriente  despolarizante  de  1,0  nA.  La  corriente  utilizada  
NSW  NSW,  TÉ  370  mM  Na para  provocar  la  respuesta  en  Mg++­ASW  fue  de  2,5  hA.  La  duración  del  
pico  en  Mg  ++  es  ligeramente  más  larga  que  el  pico  registrado  en  Nueva  
Fig.  4A,  B.  Efectos  de  TTX,  TEA+  y  Na+  externo  reducido  sobre  las  formas  
Gales  del  Sur,  probablemente  debido  a  la  disminución  de  Na  +  y  Ca  ++  
de  los  potenciales  de  acción  en  células  multimodales.  A  Forma  de  un  
externos  en  Mg  +  +  ­ASW.  B  El  potencial  de  acción  evocado  por  la  corriente  
potencial  de  acción  de  una  célula  BRA  en  Nueva  Gales  del  Sur,  luego  de  la  
en  una  célula  bBRA  tiene  una  amplitud  en  0­Ca  ++,  10  mmol/1  Cd++­ASW  
adición  de  10  nmol/1  de  TTX  y  después  de  la  inyección  de  TEA  +  en  la  célula.
(trazo  derecho)  que  es  prácticamente  la  misma  que  la  registrada  en  NSW  
El  tratamiento  con  TEA+  aumenta  la  duración  del  potencial  en  más  de  un  
(trazo  izquierdo).  Barras  de  calibración:  40  mV/10  hA;  12,5  ms  para  A.  40  
factor  de  60  en  comparación  con  el  pico  en  Nueva  Gales  del  Sur  y  demuestra  
mV/  5  nA;  6,25  ms  para  B
los  pequeños  picos  oscilatorios  que  aparecen  en  las  mesetas  de  picos  
registrados  en  las  células  tratadas  con  TEA+.  B  La  vibración  provocó  
respuestas  en  una  celda  SC  en  Nueva  Gales  del  Sur,  15  días  después  de  
inyectar  la  celda  con  TEA+  y,  luego  se  registró  después  de  la  reducción  de   en  frecuencias  de  80  a  100  Hz.  Los  picos  de  la  meseta  varían  
Na+  externo  de  450  mmol/1  a  270  mmol/l.  Las  amplitudes  de  los  potenciales   en  amplitud  desde  la  línea  base  de  la  meseta.  Las  amplitudes  
rápidos  iniciales  al  comienzo  del  pico  prolongado  de  TEA+  disminuyen   máximas  medidas  desde  el  umbral  de  disparo,  en  promedio,  
aproximadamente  un  30  %  después  de  la  reducción  de  Na+  en  comparación  
permanecen  en  el  65%  del  valor  absoluto  de  la  amplitud  del  pico  
con  los  picos  de  TEA+  de  NSW.
rápido  inicial  (medida  desde  el  umbral).  Las  mesetas  
disminuyeron  gradualmente  en  amplitud,  variando  las  tasas  de  
disminución  entre  0,55  mV/ms  para  potenciales  de  acción  con  
Los  reactivos  para  Na  +  y  Ca  +  +,  filtran  las  cargas  superficiales   una  duración  promedio  de  30  ms  y  0,21  mV/ms  para  potenciales  
negativas  y  conducen  a  un  cambio  despolarizante  en  los   >  60  ms  de  duración.  El  último  potencial  en  la  meseta  siempre  
parámetros  de  activación  (Frankenhaeuser  y  Huxley,  1964).  En   tuvo  un  hombro  pequeño  pero  notable  en  la  fase  de  caída  
ASW  con  alto  contenido  de  Cd  ++,  los  potenciales  de  acción   cuando  se  produjo  una  repolarización  rápida  (Fig.  4A,  trazo  
parecen  muy  similares  a  los  observados  en  Nueva  Gales  del  Sur. inferior).  Por  lo  general,  le  sigue  un  HAP  (Fig.  6  B)  de  2  a  10  mV.
El  cloruro  de  cobalto  (Co++)  fue  sustituido  por  Ca++  en  varias  
ocasiones  y  dio  resultados  similares  a  los  obtenidos  con  Cd++­
ASW.  Otras  diferencias  no  fueron  evidentes.  Según  estos   La  adición  de  Cd++­ASW  altera  los  potenciales  de  acción  
resultados,  no  se  podría  sospechar  que  exista  un  componente   de  las  neuronas  de  varias  maneras,  lo  que  indica  que  el  Cd++  
Ca++  en  la  producción  de  potenciales  de  acción. está  bloqueando  un  componente  de  Ca++.
El  efecto  de  2,0  mmol/1  Cd  ++  en  Nueva  Gales  del  Sur  con  TEA  
El  componente  Ca++  se  puede  desenmascarar  más   +  dentro  de  la  celda  se  ilustra  en  la  Fig.  6  C.  La  amplitud  
completamente  si  se  introduce  TEA+  en  las  células. aparente  del  potencial  es  mayor  que  la  observada  en  Nueva  
Las  neuronas  responden  a  vibraciones  o  inyecciones  de   Gales  del  Sur  con  TEA  +  en  la  celda.  Esto  posiblemente  se  
corriente  con  potenciales  de  acción  que  no  se  repolarizan   deba  a  una  hiperpolarización  de  7  a  10  mV  del  potencial  de  
durante  varios  cientos  de  milisegundos  (Fig.  6).  Las  mesetas  de   membrana  tras  la  adición  de  CdC12.  Esto  se  ve  corroborado  
los  potenciales  prolongados  persisten  a  un  voltaje  que  promedia   además  por  la  observación  de  que  las  amplitudes  de  los  
0,6  del  valor  absoluto  de  la  amplitud  máxima  inicial.  Pequeños   potenciales  de  acción  en  las  Figs.  6  B  y  C  son  iguales  medidos  
picos  regenerativos  aparecen  superpuestos  a  las  mesetas  de   desde  el  punto  del  umbral  de  disparo.  Independientemente,  la  
disparo. duración
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L.  Keenan  y  H.  Koopowitz:  potenciales  de  acción  en  neuronas  de  platelmintos 203

A C

"Así  que  v]  ~.'2­. ..............  ~..

notario  público ­­1~

200  micras]
Nueva  Gales  del  Sur
TÉ,  CD  2  mM
B D

100  ms

metro

­50
I 10  na ]

Nueva  Gales  del  Sur,  TÉ TÉ,  CD  10  mM
Figuras  6A­D.  Efectos  de  TEA+  y  Cd++  sobre  los  potenciales  de  acción  de  una  célula  BRA.  Una  respuesta  a  una  vibración  en  Nueva  Gales  del  Sur.  B  La  vibración  de  la  
misma  magnitud  da  como  resultado  una  latencia  más  larga  hasta  la  activación  del  potencial  de  acción  después  del  tratamiento  con  TEA  §,  aunque  la  latencia  hasta  el  
comienzo  del  EPSP  no  cambia.  El  potencial  de  acción  es  muy  prolongado  en  comparación  con  los  observados  en  Nueva  Gales  del  Sur  (1,2  ms  a  268  ms).  El  HAP  tiene  
una  amplitud  y  duración  mayores  en  comparación  con  el  primer  potencial  de  acción  registrado  en  Nueva  Gales  del  Sur  (A).  C  Tras  la  adición  de  ASW  que  contiene  2  mmol/
1  Cd  §  §,  la  amplitud  del  potencial  de  acción  parece  mayor  que  la  observada  en  NSW  con  TEA  +  (B).  Esto  probablemente  se  debe  al  potencial  de  membrana  en  reposo  
más  negativo  que  se  registra  cuando  se  utilizan  Mg  +§  o  Cd++  para  bloquear  los  canales  de  Ca  §.  Las  amplitudes  absolutas  de  los  picos  desde  el  umbral  son  las  mismas  
para  A  hasta  C.  El  HAP  ya  no  está  presente  y  se  produce  una  posdespolarización  prolongada.  D  En  I0  mmol/1  Cd  +  +­ASW  no  se  pueden  evocar  potenciales  de  acción  
mediante  vibración,  pero  un  potencial  evocado  de  corriente  muestra  una  duración  prolongada  y  una  pérdida  sustancial  de  amplitud  en  los  pequeños  picos  de  meseta  en  
comparación  con  los  observados  en  A,  y  una  ausencia  total  de  HAP

Las  duraciones  de  los  potenciales  de  acción  después  de  la  adición  de   el  potencial  en  la  Fig.  6C.  Nuevamente  observe  la  falta  de  un  HAP.  La  
Cd++  fueron  más  largas  que  las  de  los  potenciales  en  Nueva  Gales  del  Sur. posdespolarización  que  se  ve  en  la  Fig.  6  C  también  está  ausente.  Estos  
Las  otras  diferencias  notables  después  de  la  adición  de  2,0  mmol/1  Cd+ resultados  se  observaron  en  todos  los  experimentos  utilizando  Cd  §  +  
+  son  la  disminución  en  el  número  de  pequeños  picos  de  meseta,  la   sustituido  por  Ca  ++.
disminución  en  la  amplitud  de  los  picos  de  meseta  y  un  aumento  en  la   El  papel  del  Ca++  se  investigó  más  a  fondo  con  ASW  libre  de  Ca§+.  
duración  de  la  meseta  a  pesar  de  una  recuperación.  Un  período  de  3   Los  resultados  se  compararon  con  los  obtenidos  de  experimentos  con  
minutos  precedió  a  cada  estímulo  de  vibración  (Fig.  6  B  y  C).  Una   Ba++­ASW  sustituido  por  Ca++.  La  actividad  provocada  por  vibraciones  
diferencia  especialmente  notable  en  el  potencial  después  de  la  aplicación   en  las  células  BRA  produjo  aluviones  de  picos  en  ambos  casos.  En  
de  Cd++  es  la  posdespolarización  y  la  falta  de  un  HAP.  La  amplitud   comparación  con  los  potenciales  de  acción  en  Nueva  Gales  del  Sur,  los  
absoluta  de  la  fase  de  repolarización  del  potencial  en  Cd++­ASW,  ya  sea   picos  tenían  amplitudes  significativamente  reducidas  y  duraciones  
medida  desde  el  pico  del  último  pico  pequeño  de  la  meseta  o  del  valle   aumentadas.  La  actividad  provocada  por  la  vibración,  así  como  la  
que  lo  precede,  es  menor  que  los  potenciales  evocados  en  TEA  §  El   actividad  espontánea  en  estas  células  antes  y  después  de  agregar  el  
papel  del  Ca  +  §  fue  incluso  más  evidente  tras  la  adición  de  10  mmol/l  Cd   medio  libre  de  Ca  +  +,  muestran  que  la  frecuencia  de  disparo  fue  mayor  
§  +,  0  Ca  §  +­  ASW  (Fig.  6D).  La  vibración  no  pudo  provocar  ninguna   en  el  ASW  con  concentraciones  reducidas  de  Ca  +  +  (2  a  3,7  mmol/1  Ca  
respuesta  en  estas  condiciones,  pero,  en  el  ejemplo  ilustrado,  un  pulso   +§  en  las  células  ilustradas  medidas  con  espectroscopia  de  absorción  
de  corriente  de  22  nA  y  3  ms  provocó   células  en  Nueva  Gales  del  Sur.
atómica)  que  la  observada  en  Nueva  Gales  del  Sur  con  aproximadamente  
un  potencial  de  acción  duradero  (280  ms).  La  duración  se  prolongó   10  mmol/1  Ca  §  +  (Fig.  7A,  B).  Además,  los  HAP  son  pequeños  en  
a  más  del  doble  de  lo  que  era  en  2  mmol/1  Cd  +  §  y  las  amplitudes  de  los   comparación  con  los  mismos  en  Nueva  Gales  del  Sur  y  las  ráfagas  
pequeños  picos  de  meseta  disminuyeron  en  comparación  con terminan  con  hiperpolarizaciones  ligeramente  más  grandes  que  las  que  
siguen  a  cada  potencial  de  acción  en  la  ráfaga.  El  tratamiento  con  10  
mmol/1  Ba++  sustituido  por  Ca++  muestra  similitud  con  las  respuestas
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204 L.  Keenan  y  H.  Koopowitz:  potenciales  de  acción  en  neuronas  de  platelmintos

A B C i i
125  ms

mV

­50
l
Nueva  Gales  del  Sur Nueva  Gales  del  Sur Nueva  Gales  del  Sur

0  Ca­ASW 0  Ca­ASW 10  mM  Ba­ASW

Figuras  7A­C.  Una  comparación  de  ASW  libre  de  Ca  +  +  y  Ba  +  +  ­ASW  sobre  la  actividad  en  células  multimodales.  Una  respuesta  provocada  por  
vibración  en  Nueva  Gales  del  Sur  da  como  resultado  cuatro  potenciales  de  acción  y  un  EPSP  largo  (trazo  superior).  Después  de  10  minutos  en  ASW  
libre  de  Ca  +  +,  la  misma  vibración  provocó  un  tren  de  ráfagas  (trazo  inferior).  Los  potenciales  de  acción  tienen  amplitudes  reducidas  y  duraciones  más  
largas  en  comparación  con  los  potenciales  en  Nueva  Gales  del  Sur.  Muy  pocos  HAP  aparecen  después  de  cada  pico.  Tenga  en  cuenta  también  el  
aumento  de  la  frecuencia  de  disparo.  B  Disparo  espontáneo  en  una  celda  BRA  en  una  preparación  diferente  antes  en  NSW  (trazo  superior)  y  20  minutos  
después  de  agregar  0  retool/1  Ca  +  +­ASW  (trazo  inferior).  Los  efectos  del  ASW  libre  de  Ca  +  +  son  similares  a  los  observados  en  A,  excepto  que  la  
actividad  es  espontánea  en  lugar  de  evocarse  por  vibración.  C  Actividad  espontánea  en  una  célula  wBRA  en  Nueva  Gales  del  Sur  (trazo  superior)  y  
después  de  la  adición  de  10  mmol/1  Ba++­ASW  sin  Ca  ++  (trazo  inferior).  Obsérvese  la  falta  de  HAP  y  la  falta  de  ráfagas  discretas  que  fueron  evidentes  en  ASW  sin  Ca++  (A
La  frecuencia  de  disparo  nunca  fue  tan  alta  en  Ba  +  +­ASW  como  ocurrió  en  Ca  +  +­ASW  libre.  Barras  de  calibración:  20  mV  para  A,  25  
mV  para  B;  125  ms,  A  y  B

registrado  en  ASW  libre  de  Ca  +  +,  excepto  que  la  frecuencia   Na  +  externo,  responden  a  la  inyección  actual  con  potenciales  
de  disparo  espontáneo  es  menor  y  tiende  a  ser  más  constante   de  acción  prolongados  que  tienen  muy  pocos  picos  de  
con  menos  ráfagas  en  Ba  §  §  ASW  (Fig.  7C). meseta  y  ningún  HAP  (Fig.  8  A).  Las  inyecciones  de  
corriente  repetitivas  dan  como  resultado  una  disminución  en  
la  duración  de  cada  potencial  de  acción  sucesivo,  pero  un  
ligero  aumento  en  el  intervalo  entre  estímulos  permite  una  
Componentes  K  +  del  potencial  de  acción.
recuperación  parcial  a  una  duración  más  larga  del  pico.  La  
Los  potenciales  de  acción  prolongados  que  resultan  de  la   adición  de  10  nmol/1  de  TTX  revela  que  las  células  
inyección  de  TEA+  en  las  células  cerebrales  de  los   permanecen  excitables  y  disparan  potenciales  de  acción  
platelmintos  indican  que  los  canales  de  K+  dependientes   regenerativos  cuando  se  estimulan  mediante  inyecciones  
del  voltaje  son  los  principales  responsables  de  la  rápida   de  corriente  cortas  (20  nA,  2­3  ms  de  duración)  a  través  del  
repolarización  de  los  picos  rápidos  (<2,0  ms  de  duración)   electrodo  de  registro.  Los  potenciales  tienen  una  amplitud  
que  ocurren  en  condiciones  normales  en  Nueva  Gales  del   reducida  en  comparación  con  los  valores  de  control,  pero  aún  pueden  repolari
Sur. .  La  naturaleza  de  los  canales  de  K+  es  difícil  de   Los  potenciales  tienen  una  duración  más  corta  que  los  
determinar  mediante  métodos  distintos  al  de  fijación  de   observados  en  Nueva  Gales  del  Sur  con  solo  TEA  +  presente  
voltaje.  Sin  embargo,  la  rápida  activación  de  los  canales   en  la  célula,  pero  si  se  permite  un  período  interestímulo  
sensibles  al  voltaje  está  implícita  en  la  rápida  repolarización   largo,  el  potencial  evocado  tiene  una  duración  de  muchos  
de  las  células  y  la  consiguiente  capacidad  de  disparar  a   milisegundos  (Fig.  8  B,  respuesta  al  primer  estímulo).  Hay  
velocidades  de  hasta  100  Hz  en  condiciones  normales. un  componente  rápido  inicial  seguido  de  un  segundo  pico  
de  meseta  comparativamente  más  lento  que  desaparece  
con  estímulos  sucesivos  rápidos  (Fig.  8  B).  La  reducción  
Componente  Na+  resistente  a  TTX  
del  Na  §  externo  a  100  mmol/1  da  como  resultado  una  
de  los  potenciales  de  
disminución  adicional  en  la  amplitud  del  potencial  provocado  
acción  Se  realizaron  varios  experimentos  para  examinar  más   por  la  corriente  y  la  desaparición  de  todos  los  picos  de  
a  fondo  los  componentes  resistentes  a  TTX  de  los   meseta  (Fig.  8  D).
potenciales  de  acción  de  las  neuronas  de  Notoplana .  El  
componente  Na+  resistente  a  TTX  se  reveló  mediante  la  
aplicación  intracelular  de  TEA+,  la  aplicación  en  baño   Discusión
externo  de  Cd++,  TTX  y  alteraciones  en  las  concentraciones  
de  Na+  (ver  arriba).  Si  las  células  a  las  que  se  les  ha   Uno  de  los  resultados  más  significativos  de  este  estudio  fue  
inyectado  TEA+  intracelularmente  se  examinan  en  10  mmol/ el  descubrimiento  de  un  componente  de  Ca++  en  los  
1  Cd++,  0  Ca++­ASW  con  ex  normal potenciales  de  acción  de  corta  duración  de  los  somas  celulares.  C.A­
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L.  Keenan  y  H.  Koopowitz:  potenciales  de  acción  en  neuronas  de  platelmintos 205

A C

__1

Cd  10  mM,  TÉ CD,  TÉ,  TTX

B D

i 1

CD,  TÉ,  TTX Na  100  mM
CD,  TÉ,  TTX
Figuras  8A­D.  Efectos  del  Cd­ASW  en  células  tratadas  con  TEA+  y  TTX  antes  y  después  del  agotamiento  externo  de  Na+.  Una  inyección  de  corriente  
repetida  en  una  célula  BRA  llena  de  TEA  +  y  bañada  en  10  mmol/l  de  Cd­ASW  da  como  resultado  potenciales  de  acción  sucesivos  con  muy  pocos  picos  de  
meseta,  cierta  prolongación  en  comparación  con  las  células  no  tratadas  en  Nueva  Gales  del  Sur  y  sin  HAP.  La  duración  de  cada  pico  sucesivo  disminuye.  
B  Aproximadamente  20  minutos  después  de  añadir  10  nmol/1  de  TTX  al  baño,  se  produce  una  reducción  en  la  amplitud  de  los  potenciales  de  acción  
provocados  por  la  inyección  de  corriente.  El  primero  de  cinco  estímulos  consecutivos  (4  Hz,  2  nA  y  3  ms/pulso)  da  como  resultado  los  potenciales  
superpuestos  que  se  muestran,  el  potencial  de  acción  más  largo  resultante  del  primer  estímulo  y  el  más  corto  del  último.  C  Los  últimos  doce  pulsos  
consecutivos  dados  en  un  tren  de  20  (2  Hz,  7  nA  y  4,5  ms/pulso)  dan  como  resultado  potenciales  de  acción  de  forma  casi  idéntica  después  de  
aproximadamente  1  h  en  TTX.  D  Después  de  la  reducción  del  Na  externo  de  450  mmol/1  a  100  mmol/1,  los  potenciales  de  acción  evocados  por  pulsos  
despolarizantes  de  3  hA  y  3  ms  tienen  una  amplitud  de  15  mV.  Barras  de  calibración:  20  mV  o  5  nA  para  AD;  125  ms  A  y  25  ms  BD

Los  potenciales  de  unión  en  las  células  multimodales   fue  disminuido.  La  eliminación  tanto  del  Ca  ++  como  del  Na  
identificadas  de  Notoplana  rara  vez  tienen  una  duración   +  externos  resultó  en  la  pérdida  de  la  capacidad  de  las  
superior  a  1,0  ms  a  media  amplitud.  En  presencia  de   células  para  soportar  potenciales  de  acción.  Hasta  donde  
agentes  bloqueadores  de  Ca  §  +­  como  Cd  +  4,  Mg++  y  Co   sabemos  y  respaldados  por  las  observaciones  de  otros  
+  4,  solo  se  observan  ligeros  cambios  en  la  amplitud  o   (Hille  1977),  la  mayoría  de  los  potenciales  de  acción  del  
duración  de  los  potenciales  de  acción  en  comparación  con   soma  con  componentes  tanto  de  sodio  como  de  calcio  
los  observados  en  Nueva  Gales  del  Sur.  Aunque  Solon  y   generalmente  tienen  potenciales  de  duración  >2,0  ms  y  a  
Koopowitz  (I  982)  sugirieron  la  existencia  de  un  componente   menudo  tienen  un  hombro  en  la  fase  de  repolarización  
Ca  §  +  en  las  células  multimodales  de  Alloeoplana,  otro   descendente  del  potencial.  Los  potenciales  de  acción  de  
policlado,  la  presencia  de  TTX  sola  abolió  completamente   las  células  que  estudiamos  no  tienen  una  duración  tan  
los  potenciales  de  acción  en  esa  preparación.  Se  sabe   larga  ni  normalmente  se  ven  hombros  en  las  fases  
que  algunas  neuronas  de  Notoplana  son  resistentes  a  TTX,   descendentes  de  los  potenciales  de  acción.  Estas  
mientras  que  algunas  células  cerebrales  ventrales  que   observaciones  sugieren  que  la  entrada  de  Ca  +  §  a  las  
responden  a  la  vibración  tienen  potenciales  de  acción  que   células  durante  la  actividad  normal  debe  ocurrir  en  un  período  de  tiempo  mu
son  completamente  abolidos  por  concentraciones   Esto  implica  una  entrada  muy  pequeña,  incluso  si  el  
micromolares  de  TTX  (Keenan  y  Koopowitz  1981).  Antes   aumento  de  la  capacidad  de  permeabilidad  es  grande,  y  
de  esta  investigación,  los  potenciales  de  acción  en  las   sugiere  que  Ca  r  §  no  funciona  significativamente  como  un  
neuronas  multimodales  identificadas  de  No  toplana  acticola   portador  de  corriente  importante  durante  la  generación  de  
no  se  habían  analizado  en  detalle  para  determinar  si   picos,  al  menos  en  la  soma.  Sin  embargo,  esto  no  excluye  
existen  flujos  internos  de  cationes  resistentes  a  TTX.  Estas   otras  funciones  de  las  corrientes  de  calcio  en  estas  
permeabilidades  podrían  deberse  a  Ca++  o  Na  §  o  a  ambos   neuronas  como,  por  ejemplo,  la  producción  de  puntas  
(Hille  1977).  En  Noto  plana,  10  nmol/1  de  TTX  abolió  una   dendríticas,  como  lo  demostraron  Llinfis  y  Sugimori  (1978)  
parte  del  potencial  de  acción  de  las  neuronas  multimodales   en  células  Pur  kinje  de  mamíferos.  La  morfología  de  estas  
en  la  región  dorsal  posterior  del  cerebro,  pero  dejó  un  pico,   neuronas  de  platelmintos  plantea  la  posibilidad  de  que  los  
incluso  después  de  la  concentración  externa  de  Na+. potenciales  sinápticos  que  surgen  en  dendritas  distantes  
puedan  verse  aumentados  por  grandes  flujos  de  Ca  r  §  dependientes  del  vo
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206 L.  Keenan  y  H.  Koopowitz:  potenciales  de  acción  en  neuronas  de  platelmintos

que  son  regenerativos  y  dan  lugar  a  picos  de  meseta  de   ASW,  y  esto  se  logró  mejor  mediante  estimulación  repetitiva  
pequeña  amplitud  que  se  observan  cuando  TEA  §  está  en   (Fig.  8A­C).  La  exposición  prolongada  de  células  TEA  §  a  
las  células.  Nuestros  hallazgos  de  que  Cd  ++  bloquea   10  mmol/1  Cd  §  §  con  concentraciones  normales  de  Na  §  
estos  mini  picos  respaldan  una  dependencia  de  Ca  §  +. (Fig.  8A)  no  da  como  resultado  una  duración  reducida  de  
las  mesetas  del  potencial  de  acción  en  comparación  con  
Trabajos  anteriores  han  demostrado  que  TEA  §,  ya   las  de  las  células  inyectadas  con  TEA  +  en  Nueva  Gales  
sea  dentro  o  fuera  de  las  celdas,  bloqueará  los  componentes   del  Sur,  y  hay  No  hay  una  disminución  notable  en  la  
de  la  conductancia  K  +  dependiendo  del  tipo  de  celda  y  las   amplitud  de  la  meseta.  Sin  embargo,  un  efecto  muy  
magnitudes,  dirección  y  frecuencias  de  los  cambios  de   evidente  del  Cd++  es  la  reducción  de  los  picos  superpuestos  
voltaje  que  ocurren  en  las  celdas  (Herman  y  Gorman   en  la  meseta  de  las  células  inyectadas  con  TEA.  Tanto  la  
1981). .  La  identificación  de  los  componentes  K  §   amplitud  como  el  número  de  picos  de  meseta  disminuyen  
bloqueados  por  TEA  §  en  este  estudio  no  se  estableció,   en  Cd  §  §  alto  en  comparación  con  la  aparición  y  amplitud  
pero  los  datos  sugieren  que  probablemente  la  corriente   de  esos  picos  en  Nueva  Gales  del  Sur.  Estos  datos  
retardada  hacia  afuera  o  'K'  fue  bloqueada,  aunque  una   sugieren  una  competencia  entre  Ca++  y  Cd  §  en  la  
corriente  transitoria  temprana  'A'  también  puede  haber   generación  de  picos  de  meseta,  pero  el  componente  Ca  §  
tenido  lugar.  sido  bloqueado.  La  rápida  repolarización  de   no  parece  contribuir  significativamente  a  la  amplitud  y  
TEA  +:  potenciales  de  acción  prolongados,  duraciones   duración  de  la  meseta  prolongada  de  TEA+.
más  cortas  de  picos  sucesivos  y  HAP  grandes  sugieren  
que  TEA  +  intracelular  es  menos  efectivo  o  no  es  efectivo   En  cambio,  esto  parece  deberse  al  componente  Na  §  que  
en  absoluto  para  bloquear  un  Ca  +  § K  +  corriente. es  resistente  a  bajas  concentraciones  de  TTX  (Fig.  8B­D).  
Un  efecto  marcado  del  TEA  §  intracelular  en  las  células   En  varios  experimentos  observamos  que  el  TTX  en  
investigadas  fue  la  aparición  de  potenciales  de  acción   concentraciones  aún  mayores  (10,5  mol/1)  no  bloquea  
excesivos,  de  meseta  larga,  que  podían  evocarse  mediante   completamente  el  componente  Na+  aparente,  por  lo  que  
vibración  o  inyección  de  corriente.  La  evidencia  directa   no  parece  que  las  dosis  de  TTX  utilizadas  en  estos  
que  muestra  que  el  TEA+  desenmascara  y  aumenta  los   experimentos  fueran  demasiado  bajas.
influjos  de  Ca++  hacia  las  neuronas  de  los  moluscos   Las  bajas  concentraciones  de  Ca++  o  Ba++  sustituido  
(mediante  el  bloqueo  de  las  diversas  conductancias  del   por  Ca§§  dan  como  resultado  estallidos  inusuales  de  
K+)  se  ha  ilustrado  mediante  el  uso  de  colorantes  sensibles   potenciales  de  acción  que  son  diferentes  de  los  estallidos  
al  Ca  §  +  así  como  técnicas  de  fijación  de  voltaje  (Gorman   registrados  en  estas  células  en  Nueva  Gales  del  Sur.  Los  
y  Thomas  1980;  Gorman  y  otros,  1980;  Adams  y  otros. potenciales  de  acción  en  las  ráfagas,  en  comparación  con  
1980).  En  las  células  de  Notoplana ,  los  potenciales   los  observados  en  Nueva  Gales  del  Sur,  tienen  una  
prolongados  sugieren  que  las  corrientes  de  Ca  +  §  hacia   amplitud  reducida  en  ambos  casos,  por  lo  que  es  difícil  
el  interior,  dependientes  del  voltaje,  quedan   conciliar  la  falta  de  disminución  de  la  amplitud  que  se  
desenmascaradas  por  la  introducción  intracelular  de  TEA.   observa  en  soluciones  con  alto  contenido  de  Cd  §  §.  Si  
Sin  embargo,  el  catión  divalente  Cd  §  §  9  en  una   Ba++  es  tan  permeable  a  través  de  los  canales  de  Ca++  
concentración  de  2  mmol/1,  que  presumiblemente  debería   como  se  informa  en  otras  preparaciones  (Meech ]978;  
disminuir  las  amplitudes  y  las  duraciones  de  los  potenciales   Adams  et  al.  1980),  uno  esperaría  poca  o  ninguna  
de  acción  con  componentes  Ca  ++,  bloqueando  la  entrada   atenuación  de  las  amplitudes  en  Ba++­ASW  en  
de  Ca  §  §  (Adams  et  al.  1980 ),  tuvo  sólo  un  efecto  mínimo   comparación  con  NSW.  En  la  medusa  Polyorchis  los  
sobre  las  células  TEA  §  investigadas  (Fig.  6).  En  todo  caso,   potenciales  de  acción  ocurren  en  ráfagas  en  presencia  de  
la  acción  de  2,0  mmol/1  y  10  mmol/1  Cd  §  fue  aumentar   Ba  +  §  y  Ca  +  +  bajo,  pero  las  amplitudes  no  disminuyen  
la  duración  de  los  potenciales  de  acción  en  comparación   en  comparación  con  los  controles  (Anderson  1979).  La  
con  las  duraciones  registradas  en  las  células  inyectadas   única   explicación  plausible  es  que  el  Ca+§  externo  
con  TEA+  en  Nueva  Gales  del  Sur.  Las  duraciones   reducido   tiende  a  desestabilizar  la  actividad  de  la  
prolongadas  del  potencial  de  acción  en  Cd  §  §  pueden   membrana,  provocando  hiperexcitabilidad  a  medida  que  el  
explicarse  parcialmente  por  el  siguiente  razonamiento.  Si   umbral  se  acerca  al  potencial  de  reposo  (Cahalan  1980).  
suponemos  que  el  potencial  de  acción  prolongado  se  debe   La  desestabilización  y  la  activación  continua  de  la  célula  
también  a  un  componente  Na  §  lentamente  inactivado   podrían  conducir  posiblemente  a  la  inactivación  de  una  
(evidencia  en  la  Fig.  8),  entonces  la  incapacidad  del  Ca  §   gran  proporción  de  los  canales  de  Na.  Esto  se  demostraría  
§  para  entrar  y  activar  la  corriente  'C'  daría  como  resultado   por  potenciales  de  acción  de  amplitud  reducida  cuyas  
un  retraso  en  repolarización  de  la  célula  hasta  el  nivel  de   corrientes  internas  son  transportadas  por  Na+  a  través  de  
reposo.  Este  retraso  sería  evidente  en  un  potencial  de   canales  que  se  inactivan  más  lentamente  y  por  Ca  residual  
acción  prolongado  como  el  descrito.  Se  observaron   §247  Nuestros  resultados  sugieren  que  esta  explicación  
disminuciones  significativas  en  la  amplitud  de  la  meseta  en   está  parcialmente  justificada  hasta  que  los  experimentos  
de  dfijación  
comparación  con  las  células  en  Nueva  Gales  del  Sur  solo  después   de  voltaje  
e  la  adición   puedan  
de  TTX  o  Na  p§roporcionar  
  bajo. evidencia  para  verificar  o  rechaza
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L.  Keenan  y  H.  Koopowitz:  potenciales  de  acción  en  neuronas  de  platelmintos 207

Los  experimentos  utilizando  TEA+  y  Cd++­ASW  revelaron   Referencias
que  Ca++  aparentemente  activa  una  corriente  K+  ('C').  Los  
Adams  P  (1982)  Conductancias  dependientes  de  voltaje  de  neuronas  de  
potenciales  de  acción  de  las  células  en  Nueva  Gales  del  Sur   vertebrados.  LATAS  5 :  116­119
tienen  un  HAP  distinto.  Introducción  del  TEA  en
Adams  DJ,  Smith  SJ,  Thompson  SH  (1980)  Corrientes  iónicas  en  el  soma  de  
las  células,  que  normalmente  bloquean  las  corrientes  de  K  +   moluscos.  Annu  Rev  Neurosci  3:141­165  Anderson  PAV  (1979)  

dependientes  del  voltaje  'K'  y  'A'  aparentemente,  no  bloquean   Base  iónica  de  los  potenciales  de  acción  y  actividad  de  estallido  en  la  medusa  

la  corriente  de  K  +  activada  por  Ca  +  +  en  muchas  células  de   hidromedusa,  Polyorchis  penicillatus.  J  Exp  Biol  78:85%872

moluscos  (Adams  et  al.  1980;  Meech  1978).
Armstrong  CN,  Binstock  L  (1965)  Rectificación  anómala  en  el  axón  gigante  del  
El  bloqueo  de  la  corriente  de  K  +  activada  por  Ca  +  +  mediante   calamar  inyectado  con  cloruro  de  tetraetilamonio.  J  Gen  Physiol  48:859  872  
otros  métodos  da  como  resultado  una  disminución  o  abolición   Bernardo  KG,  Stone  G,  Koopowitz  H  (1977)  
completa  de  las  post­hiperpolarizaciones  de  pico  mediadas   Sistemas  nerviosos  primitivos:  habituaton  periférico  en  gusanos  planos  policiados  
descerebrados.  J  Neurobiol  8:141­150
por  la  corriente  'C'.  La  presencia  de  la  corriente  ~  en  esta  
preparación  se  sugiere  por  el  gran  HAP  que  queda  después  del  
Byte  JH,  Koester  J  (i  980)  Mecanismos  neuronales  que  subyacen  al  control  de  
tratamiento  con  TEA.  La  participación  de  la  corriente  prolongada   estímulo  de  la  liberación  de  tinta  en  Aplysia.  En:  Koester  J,  Byrne  JH  (eds)  
de  Ca  +  +  debida  al  TEA  +  inyectado  en  las  células  es  evidencia   Las  células  nerviosas  de  los  moluscos  desde  la  biofísica  hasta  el  comportamiento.
de  que  está  presente  una  corriente  de  K  +  activada  por  Ca  +  +.   Cold  Spring  Harbor  Symp  Quant  Biol  1,  págs.  157­167  Cahalan  MD  
(1980)  Propiedades  moleculares  de  los  canales  de  sodio  en  membranas  
Los  aumentos  resultantes  en  la  entrada  de  Ca++  (a  través  de  
excitables.  En:  Cotman  CW,  Poste  G,  Nichol  son  GL  (eds)  The  cell  and  
la  prolongación  de  picos)  también  mejoran  la  corriente  activada   neuronal  function,  Elvesier/North  Holland  and  Biomedical  Press,  Nueva  York,  
por  Ca++,  lo  que  aumenta  la  amplitud  y  duración  de  los  HAP. págs.  1­47  Connor  JA,  Stevens  CF  (1971  a)  Corrientes  de  
membrana  internas  y  externas  retardadas  en  somas  neurales  aislados  bajo  
tensión  de  pinza.  J  Physiol  (Londres)  213:21­30  Connor  JA,  Stevens  CF  
Los  HAP  de  los  potenciales  de  acción  en  las  células  estudiadas  
(1971b)  Estudios  de  fijación  de  voltaje  de  una  
se  eliminaron  posteriormente  mediante  la  adición  de  2,0  retool/
corriente  transitoria  de  membrana  externa  en  somas  neurales  de  gasterópodos.  J  
1  y  10  mmol/1  Cd++,  aunque  en  realidad  también  puede   Physiol  (Londres)  213:21­30  Crill  WE,  Schwindt  PC  (1983)  Corrientes  activas  
producirse  el  bloqueo  de  una  corriente  de  fuga  y  la   en  mamíferos
hiperpolarización  de  la  célula,  lo  que  da  lugar  a  una  aparente  
neuronas  centrales.  LATAS  6:236­240
desaparición  del  HAP.  La  ausencia  de  HAP  después  de  cada  
Eckert  R,  Lux  HD  (1976)  Una  conducción  de  calcio  persistente  sensible  al  voltaje  
potencial  de  acción  en  ráfagas  registradas  en  las  células   en  somas  neuronales  de  Helix.  J  Physiol  (Londres)  254:129­151  
después  de  la  adición  de  0Ca++­ASW  o  Ba++­ASW  proporciona   Frankenhaeuser  

evidencia  adicional  de  una  corriente  'C'. B,  Huxley  AF  (1964)  El  potencial  de  acción  en  la  fibra  nerviosa  mielinizada  de  
Los  estallidos  en  el  bajo  Ca++­ASW  terminaron  con   Xenopus  laevis  calculado  sobre  la  base  de  datos  de  pinza  de  voltaje.  J  Physiol  
(Londres)  171:302­315  Geduldig  D,  Gruener  R  (1970)  Abrazadera  de  voltaje  
hiperpolarizaciones;  la  corriente  responsable  probablemente  se   de  la  neurona  
activó  como  consecuencia  de  la  entrada  de  Ca++  residual  sobre   gigante  ApIysia :  corriente  temprana  de  sodio  y  calcio.  J  Physiol  (Londres)  211:  
el  estallido  prolongado  de  potenciales.  El  Ba++  en  el  Ba+++­ 217­244  Goodman  CS,  Spitzer  NC  (1981)  Las  propiedades  eléctricas  maduras  
ASW  era  aparentemente  suficiente  para  transportar  la  corriente   de  las  neuronas  identificadas  
en  embriones  de  saltamontes.  J  Physiol  (Londres)  313:369­384  Gorrnan  ALF,  
normalmente  transportada  por  el  Ca++,  pero  la  falta  de  
Thomas  MV  (1981)  Conductancia  de  potasio  y  acumulación  interna  de  calcio  
terminaciones  de  ráfagas  distintivas  por  hiperpolarizaciones   en  una  neurona  de  moluscos.  
fue  un  efecto  claro  del  Ba++.  La  incapacidad  del  Ba++  para   J  Physiol  (Londres)  308:  287­313
activar  las  corrientes  'C'  en  las  neuronas  de  los  moluscos  está  
bien  documentada  (Adams  et  al.  1980;  Thompson  y  Aldrich  
Gorman  ALF,  Hermann  A,  Thomas  MV  (1980)  El  ciclo  del  marcapasos  neuronal.  
1980).
En:  Koester  J,  Byrne  JH  (eds)  Células  nerviosas  de  los  moluscos:  de  la  
Creemos  que  esto  tiene  el  efecto  de  prevenir  la  terminación  del   biofísica  al  comportamiento.  Cold  Spring  Harbor  Symp  Quant  Biol  1,  págs.  
estallido  como  se  observa  en  las  células  de  Notoplana  tratadas 169  180  Hagiwara  S  (1975)  Potencial  de  acción  
con  Ba++­ASW  o  bajo  Ca++­ASW. dependiente  de  Ca.  En:  Eisen  mann  G  (ed)  Membranas  ­  Una  serie  de  avances,  
vol  3.
En  resumen,  Notoplana  posee  canales  de  Na+  sensibles  
Dekker,  Nueva  York,  págs.  35%  382
y  resistentes  a  TTX,  hay  una  corriente  de  Ca++  y  al  menos  dos  
Herman  A,  Gorman  ALF  (1981)  Efectos  del  tetraetilamonio  sobre  las  corrientes  
canales  de  K+,  uno  de  los  cuales  parece  estar  activado  por  Ca+ de  potasio  en  las  neuronas  de  los  moluscos.  J  Gen  Physiol  78:8%110  Heyer  
+.  La  coexistencia  de  estos  canales  en  una  sola  neurona  de   CD,  Lux  HD  (1976)  
un  platelminto  adulto  primitivo  sugiere  que  la  multiplicidad  de   Propiedades  de  una  corriente  facilitadora  de  calcio  en  las  neuronas  marcapasos  
del  caracol,  Helix  pomatia.
canales  iónicos  fue  una  invención  muy  temprana  en  los  
J  Physiol  (Londres)  262:319­348
sistemas  nerviosos  de  los  metazoos  o  que  los  canales   Hille  B  (1977)  Base  iónica  de  los  potenciales  de  acción  y  de  reposo.  En:  Kandel  
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Reconocimiento.  Este  trabajo  fue  apoyado  por  NS  13713­06  de  PHS.  Agradecemos   Una  descripción  cuantitativa  de  la  corriente  de  membrana  y  su  aplicación  a  la  
al  Dr.  T.  Bradley  por  el  uso  de  su  espectrofotómetro. conducción  y  excitación  en  los  nervios.  J  Physiol  (Londres)  117:500­544
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208 L.  Keenan  y  H.  Koopowitz:  potenciales  de  acción  en  neuronas  de  platelmintos

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