Guía de Actividades de Microbiología Veterinaria

GUÍA DE ACTIVIDADES de LABORATORIO

OBJETIVOS:

• Emplear correctamente materiales y elementos de trabajo de un Laboratorio

Microbiológico (LM).
• Conocer las condiciones que debe reunir el material microbiológico.
• Respetar el ciclo del material en el laboratorio.
• Reconocer forma, tamaño, agrupación y afinidad tintorial de los microorganismos
(m.o), según criterios taxonómicos, presentes en la muestra clínica.
• Aplicar los conocimientos teóricos sobre clasificación de medios de cultivo en la
elección de medios adecuados para la siembra.
• Realizar técnicas de siembra para aislamiento.
• Desarrollar las diferentes habilidades manuales de aplicación en el LM.
• Reconocer situaciones de riesgo de las actividades realizadas.

CONTENIDOS:

Unidad 1: Laboratorio microbiológico (LM). Principios de bioseguridad: Normas generales de

trabajo en un LM. Preparación de materiales. Ciclo del material.

Unidad 2: Morfología y composición química de los m.o.

Unidad 3: Métodos de observación. Coloraciones: fundamentos y técnicas.

Unidad 4: Medios de cultivo: clasificación, preparación y conservación. Requerimientos,

metabolismo y nutrición de los microorganismos. Clasificación de medios de
cultivo.

Unidad 5: Reproducción. Técnicas de siembra y aislamiento de bacterias. Concepto de

cultivo puro.

Unidad 7: Acción de los agentes físicos y químicos sobre los m.o.

Unidad 8: Microbiota residente normal bacteriana.

Unidad 9: Criterios taxonómicos (fenotípicos).

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TP Nº 1

Unidad 1: LM. Principios de bioseguridad: Normas generales de trabajo en un LM.

Preparación de materiales. Ciclo del material.

ACTIVIDADES:

1 A. Reconocimiento de un LM, sus riesgos y contenciones.

1 B. Preparación de materiales y seguimiento del ciclo del material.

- Acondicionar material de vidrio (pipetas, tubos y placas) e hisopos.
- Fraccionar 4,5 ml de solución fisiológica (SF) en 8 tubos medianos.

1 C. Realizar una siembra de microbiota residente de la mano en medio sólido

denominada “D2”.

1 D. Lavarse las manos

TP Nº 2

Unidad 2 (primera parte): Morfología y composición química de bacterias.

ACTIVIDADES:

2 A. Observaciones macroscópicas:
- Desarrollo de la placa D2

2 B. Desinfectar la mesada

2 C. Realizar observaciones microscópicas:

- Reconocer normas de bioseguridad. Realizar observación entre porta y cubre:
a) Suspender colonias D2 y homogeneizar el material.
b) Montar en fresco.
- Observación de preparados bacteriológicos.

2 D. Desinfectar la mesada

2 E. Lavarse las manos.

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TP Nº 3

Unidad 2 (segunda parte): Morfología y composición química de hongos y virus.

Unidad 3: Métodos de observación. Coloración de Gram: fundamento y técnica.

ACTIVIDADES:

3 A. Realizar observaciones microscópicas de preparados micológicos.

3 B. Desinfectar la mesada.

3 C. Colorear suspensiones de m.o. obtenidos de cultivos previos.

a) Suspender colonias D2 y homogeneizar el material en agua destilada estéril.
b) Hacer 3 extendidos y fijarlos.
c) Colorear con: Azul de Metileno (AZM), Gram y Wirtz.
AZM: AZM 5’ lavar, secar
Gram: Cristal violeta 1’, lavar con agua, Lugol 1’, lavar, decolorar con alcohol 20",
lavar, Safranina 1’, lavar, secar.
Wirtz: Verde de malaquita 5’ aplicando calor (hasta emisión de vapores blancos),
lavar con agua, Safranina 1’ lavar, secar.
d) Observar las tinciones con objetivo 100x (agregar 1 gota de aceite de inmersión).

3 D. Desinfectar la mesada.

3 E. Lavarse las manos.

TP Nº 4

Unidad 4: Medios de cultivo: clasificación, preparación y conservación. Requerimientos,

metabolismo y nutrición de los m.o. Clasificación de medios de cultivo.

ACTIVIDADES:

4 A. Preparación de medio de cultivo bacteriológico (pesar, hidratar, homogenizar).

4 B. Desinfectar la mesa de trabajo.

4 C. Fraccionar al abrigo de la llama un medio líquido (caldo en frasco con tapa a rosca):
- Dispensar aproximadamente 2,5 ml del caldo en tubos.
- Reunir los tubos en canastos, cubrir con papel madera, rotular contenido, grupo y
comisión. Llevar al autoclave.

4 D. Plaquear medios sólidos.

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4 E. Desinfectar la mesa de trabajo.

4 F. Observar medios de cultivo bacteriológicos y analizar su clasificación.

4 G. Observar medios de cultivo para m.o. parásitos obligados. Cultivos hísticos.

4 H. Analizar métodos para asegurar los requerimientos atmosféricos.

4 I. Determinar el metabolismo bacteriano a partir de cultivos puros (OF).

4 J. Lavarse las manos.

TP Nº 5

Unidad 5: Reproducción. Técnicas de siembra y aislamiento de bacterias. Concepto de

cultivo puro.

ACTIVIDADES:

5 A. Desinfectar la mesa de trabajo.

5 B. Sembrar a partir de la placa D2 en medios líquidos y sólidos.

Sembrar 3 caldos y una placa de Agar. Incubar para el práctico número 6.

5 C. Observación de desarrollo microbiano en diversos medios de cultivo para bacterias,

hongos y virus. Interpretar las modificaciones respecto al medio sin sembrar.

5 D. Realizar una Cuenta Viable (utilizar los tubos preparados en 1 B)

5 E. Lectura e interpretación de:

- Cuenta viable: Número más probable (NMP)
- Cuenta total: Nefelómetro de Mc Farland.

5 E. Desinfectar la mesa de trabajo.

5 F. Lavarse las manos.

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TP Nº 6

Unidad 7: Acción de los agentes físicos sobre los m.o.

ACTIVIDADES:

6 A. Desinfectar la mesada de trabajo.

6 B. Lectura de actividad 5 D.

6 C. Aplicar técnicas de eliminación de m.o. (cultivo microbiano de actividad 5 B y solución

de glucosa):
- filtros de membrana (para filtrar la solución de glucosa).
- calor a presión (a cargo del docente).
- ebullición por 10’ (baño térmico a 100ºC).

6 D. Sembrar en medios de cultivo las suspensiones tratadas y sin tratar de la actividad 6 C

e incubar a 37ºC hasta el próximo TP.

6 E. Analizar el manejo de la autoclave como método de esterilización. Controles.

6 F. Desinfectar la mesada de trabajo.

6 G. Lavarse las manos.

TP Nº 7

Unidad 7: Acción de los agentes químicos sobre los m.o.

ACTIVIDADES:

7 A. Desinfectar la mesada de trabajo.

7 B. Interpretar los cultivos obtenidos del TP 6 D.

7 C. Leer e interpretar antibiogramas por difusión (material provisto por los docentes).

7 D. Mostración prueba de susceptibilidad a Antimicrobianos (AM) in vitro por dilución

según recomendaciones del CLSI (Ver anexo). Interpretación

7 E. Desinfectar las superficies de trabajo.

7 F. Lavarse las manos.

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TP Nº 8

Unidad 8: Mecanismos de agresión microbiana. Animales de laboratorio.

Unidad 9: Taxonomía microbiana. (Criterios fenotípicos, genotípicos). Algoritmos de
identificación.

ACTIVIDADES:

8 A. Desinfectar la mesada de trabajo.

A partir de cultivos en pureza (provistos por el docente) realizar pruebas de habilidades

fisiológicas e interpretar pruebas bioquímicas, significativas para la identificación de taxones
gram positivos y gram negativos, de importancia veterinaria.

8 B. Realizar la prueba de oxidasa.

8 C. Realizar la prueba de catalasa.

8 D. Mostraciones a cargo del docente de pruebas bioquímicas: Oxido-fermentación de la

glucosa (OF), fermentación de hidratos de carbono, Rojo de Metilo, Voges Proskauer,
utilización de citrato, producción de Indol, lipasa, lecitinasa, hidrólisis de la urea, de la
esculina, producción de coagulasa, hemólisis, CAMP.

8 E. Detectar posibles errores de interpretación.

8 F. Desinfectar la mesada de trabajo

8 G. Lavarse las manos