UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO

GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

PERÍODO ACADÉMICO 2022-2S
ASIGNATURA Química SEMESTRE: PARALELO
1° A
NOMBRE DEL DOCENTE Dr. Wilson Moncayo
FECHA 28/01/2023
NÚMERO DE PRÁCTICA 5 HORA: 15H00 – 18H00 DURACIÓN: 3
horas

CHACHA BAUTISTA CARLA

NOMBRES DE LOS CHICAIZA ROJAS JAIRO
INTEGRANTES DEL GUAMAN ILBAY KATYA
GRUPO MENDEZ OROZCO NEREA
RODRIGUEZ AUNQUI ELSA
TAPIA HERRERA JENNIFER

LUGAR DE LA PRÁCTICA Laboratorio De Química.

TEMA DE LA PRÁCTICA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

OBJETIVO GENERAL Determinar alcaloides mediante capa fina.

1. Entender y analizar la cuba cromatográfica como tambien

OBJETIVOS ESPECÍFICOS cada una de sus fases.
2. Determinar los alcaloides mediante la cromatografía en
capa fina.

FUNDAMENTO TEÓRICO:
INTRODUCCIÓN
Es importante definir el proceso realizado en la práctica, es decir, la cromatografía en capa fina. (TLC) es un
método de afinidad que se utiliza para separar los compuestos de una mezcla. En esta práctica llevaremos a cabo
este proceso siguiendo al pie de la letra el proceso planteado para que de esta forma podamos obtener los resultados
deseados. Describe un procedimiento químico en el que se separa una mezcla en su sus componentes individuales
mediante una fase móvil y una fase estacionaria. La fase estacionaria consta, según el procedimiento, de materia
sólida o un líquido, y la fase móvil de un líquido o gas. La cromatografia usa diferentes procedimientos, que según
el campo de aplicación tiene sus ventajas y desventajas. Los procedimientos más importantes son la cromatografía
en papel cromatografía en capa fina, la cromatografía en columna y la cromatografía de gases (encontrará una
breve descripción al final de la página). Las aplicaciones prácticas de la cromatografia se encuentran por ejemplo
en la producción, donde se usa la cromatografía para la limpieza y aislamiento de sustancias. Por otro lado, en la
analítica química se usa la cromatografía para separar mezclas en compuestos homogéneos. La cromatografia juega
un papel importante en muchos sectores, como la química orgánica, la bioquímica, la química inorgánica, la
química ambiental y la química alimenticia. Encontrará equipos y componentes adicionales de la cromatografía
próximamente en esta página. En caso que tenga más consultas sobre la cromatografia le pedimos que consulta las
siguientes fichas técnicas o que use nuestro formulario de contacto o puede llamarnos a nuestro número de teléfono
+34 967 543 548. Nuestros técnicos e ingenieros le asesoran sobre la cromatografia y sobre cualquier producto de
laboratorio, sistemas de regulación y control, medidores o balanzas de PCE Ibérica S.L.
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MARCO TEÓRICO

ALCALOIDES
Los alcaloides son metabolitos secundarios de vegetales que se sintetizan mediante aminoácidos. Un alcaloide, por
lo tanto, es un compuesto químico que cuenta con nitrógeno que proviene del proceso metabólico de un
aminoácido. Cuando su origen es otro, se habla de pseudoalcaloides.
La mayoría de los alcaloides contienen oxígeno en su estructuramolecular, los compuestos son por lo general forma d
e cristales incoloros en condiciones ambientales.: alcaloides libres de oxígeno, tales como la nicotina, son
típicamente líquidos volátiles, incoloras, oleosas: algunos alcaloides son de color, al igual que la berberina y
sanguinaria.
La mayoría de los alcaloides son bases débiles, pero algunas, como la teobromina y la teofilina, son anfóteros. -
muchos alcaloides se disuelven mal en agua, pero se disuelven fácilmente en disolventes orgánicos, tales como ter
dietílico, cloroformo o diclorometano. La cafeína, cocaína,
codeína y la nicotina son solubles en agua, mientras que otros, incluyendo la morfina y la yohimbina son altamente
soluble en agua.: alcaloides y ácidos forman sales de varias fuerzas.
Estas sales son generalmente solubles en agua y alcoholes y fácilmente solubles en la mayoría de los solventes
orgánicos. Las excepciones son el bromhidrato de escopolamina, que es soluble en solventes orgánicos, y el sulfato
de quinina, que es soluble en agua.
La cromatografía en capa fina (TLC) es un método de afinidad para separar compuestos de mezclas. TLC es un
método de separación muy versátil ampliamente utilizado para el análisis cualitativo y cuantitativo de muestras. La
TLC se puede utilizar para analizar prácticamente cualquier clase de sustancia: pesticidas, esteroides, alcaloides,
lípidos, nucleótidos, glucósidos, carbohidratos y ácidos grasos. Es un método cualitativo para determinar todo tipo
de sustancias en estado sólido como las drogas, medicamentos y analgésicos y todo tipo de plaguicidas
(organoclorado, venenos).
Cualitativo es determinista: porque interviene entre las fases móvil y estacionaria.
La fase móvil es una mezcla de disolventes como por ejemplo: ciclohexano, tolueno y dimetilamina, su función
móvil es llevar muestras.
La fase estacionaria es blanca, gel de silicio o sicagel, y su trabajo es retener la muestra. (forences, 2017)
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METODOLOGÍA Y MATERIALES
METODOLOGÍA
Las metodologías son técnicas que nos sirven para generar eficiencia en una investigación o trabajo y así
poder obtener buenos resultados y conocimientos, es por ello que en la práctica titulada “Cromatografía
en capa fina”, utilizamos las siguientes metodologías:
• Metodología de la enseñanza: El Dr. Wilson Moncayo, catedrático de la materia de Química nos
enseñó el procedimiento debido para poder realizar con eficacia y exactitud la determinación de
alcaloides.
• Metodología explicativa: El docente explicó con exactitud cada una de las fases de la cuva
cromatográfica y que se realiza en cada una de estas.
Metodología del estudio: Los estudiantes de la carrera de Laboratorio clínico, posterior a la explicación
procedieron a realizar la práctica y a su vez defendarla para después adquirir una calificación.
MATERIALES

NOMBRE DEL IMAGEN USO Y DESCRIPCIÓN

MATERIAL

Nicotina La encontramos en el tabaco pero en

bajas cantidades.

Micropipetas Se utilizo para poner las

medidasexactas de alcohol,agua,
suero y reactivo.

Puntas Azules Las puntas para micropipeta se

utilizan paratomar una pequeña
muestra de líquido o solución,
utilizadas principalmente en
investigación.

Cuba cromatografíca La cuba cromatográfica fondo plano

con 20 x 20 cm tapa de vidrio permite
desarrollar el cromatograma en
condiciones de saturación parcial o
completa de la atmósfera del tanque
con vapores de disolvente.
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Dragendorff Revelador de sustancias.

Gel de silici La placa de gel de sílice de

cromatografía de capa fina está
hecha de gel de sílice de alta pureza
(polvo) de capa fina mezclado con
una cierta cantidad de aglutinante.

Vasos de El vaso de precipitados es un

recipiente de laboratorio,
precipitación generalmente de vidrio, de forma
cilíndrica con un pico en el borde
para facilitar el vertido de su
contenido, se emplea para procesos
de precipitación, para calentar o
agitar líquidos, preparar
disoluciones, etc.

Acetona La acetona es una sustancia química

que se puede encontrar naturalmente
en el medio ambiente y también se
puede producir artificialmente.

Capilares Es un material usado en laboratorios

que, en principio, en cuanto a su
estructura se puede apreciar que es
un tubo sumamente delgado, que
generalmente tiene unas marcas
representando la unidad de medidas.
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Cloroformo El balón aforado es un instrumento

de medición para determinar con
precisión el volumen de un líquido.
Se denomina aforado debido a que
cuenta en torno al cuello una
marcación que asegura la precisión
del volumen.

Cafeína pura La cafeína es un antioxidante

alcaloide del grupo de las xantinas,
sólido cristalino, blanco y de sabor
amargo, que actúa como una droga
psicoactiva, estimulante del sistema
nervioso central, por su acción
antagonista no selectiva de los
receptores de adenosina.

Cafeína pura La obtuvimos del café.

Alcohol El etanol, también llamado alcohol

etílico, es un compuesto químico
orgánico alifático con un grupo
funcional hidroxilo, formando parte
de la familia de los alcoholes, de
fórmula empírica C₂H₆O. Su fórmula
química semidesarrollada es CH₃-
CH₂-OH, y peso molecular de
46.0684.

REACTIVOS

• Acetona

C3H6O, CH3COCH3

• Cloroformo

CHCl₃
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PROCEDIMIENTO
1. Como primer punto debemos dividir la placa de silicagel de 20 centímetros en 8 partes iguales, con una
regla medimos horizontalmente 5 centímetros para obtener 4 partes iguales; seguido de esto,
verticalmente medimos 10 centímetros para obtener 2 partes exactas, estas las recortamos y dividimos
para cada uno de los grupos que conforma la clase.

2. Como segundo punto colocamos los solventes dentro de la cuba cromatográfica con la cantidad de 25
mililitros de cloroformo y 25 mililitros de acetona en una proporción 1 – 1.

3. Por consiguiente, dentro de 4 tubos de ensayo colocamos una pequeña muestra de cada una de las
sustancias que vamos a utilizar y las titulamos de la siguiente manera:
• Cafeína Pura. (C.P 1)
• Cocaína. (Cocaína 2)
• Nicotina. (Nicotina 3)
En el caso de la Nicotina debemos triturarla bien antes de colocar dentro del tubo de ensayo.
• Cafeína Impura. (C. Imp 4)

4. Como siguiente punto. Dentro del tubo de ensayo N°2 que contiene el sólido (cocaína), colocamos 0,5
mililitros o 500 microlitros de cloroformo para de esta forma poder diluir la cocaína.
5. Dentro del tubo de ensayo N°3 que contiene la Nicotina, colocamos 1 mililitro de Etanol o Metanol para
diluirlo.
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6. Dentro del tubo de ensayo N°3 que contiene la Cafeína Impura, colocamos 1 mililitro de Etanol o
Metanol para diluirla.

7. El siguiente paso que debemos realizar es preparar los capilares. Tomamos 2 capilares y con ayuda de
fuego, dividimos estos para poder obtener cuatro puntas ya tratamos de realizar un orificio el cual nos
facilitara la toma de cantidad de cada solución.

8. Por consiguiente, en la placa de cilicagel, realizamos 4 puntos de referencia que tengan un mínimo de 0,5
centímetros de distancia cada uno para colocar 3 gotas mínimas de cada muestra en un intervalo de 20 a
30 segundos.

9. Después, colocamos la placa dentro del interior de la cuba cromatográfica.

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10. Al pasar unos minutos la placa dentro de la Cuba cromatográfica, la retiramos y la dejamos secar.
11. Como último punto, con ayuda del reactivo Dragendorff y un gotero, revelamos la placa, y si esta resulta
de color NARANJA es porque el resultado es positivo.

RESULTADO

DETERMINACIÓN DE ALCALOIDES
▪ MUESTRAS
Para recolectar muestras y determinar alcaloides, se
empieza colocando en cuatro tubos de ensayo, cafeína
pura, cocaína agregándole 0,5 ml de cloroformo,
nicotina con 1 ml de etanol o metanol y cafeína impura
con 1 ml de etanol o metanol respectivamente, luego al
dividir en 8 partes la placa cromatográfica y trabajar
con una de 10 cm, la misma que se le divide en 1.5 cm
de altura y su ancho lo dividimos en 4 partes, en cada
parte con los capilares se ira colocando una pequeña
muestra que será recogida de los tubos de ensayo, es
así que como resultado obtenemos 4 muestras que
servirán para determinar los alcaloides.

▪ Reactivo Dragendorff
Una vez que tengamos las muestras colocadas con
ayuda de los capilares en la placa cromatográfica
llevamos la misma a una cuba cromatográfica la cual
está llena de 25 ml de cloroformo y 25 ml de acetona,
dicha muestra colocamos en la cuba y la dejamos ahí
por un tiempo, después de este tiempo, sacamos la
placa y la secamos para luego colocarle un reactivo
llamado ‘Reactivo Dragendorff’ donde procederá la
placa a tornarse de un color naranja dando como
resultado positivo para la determinación de alcaloides.

OBSERVACIONES
Se agradece al Dr. Wilson Moncayo por las enseñanzas impartidas en clase y todos los conocimientos que
adquirimos al momento de realizar la práctica.
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CONCLUSIONES
▪ Finalmente, después de la practica se pudo determinar los alcaloides, teniendo en cuenta que es
positivo par alcaloide si la muestra en la placa se pinta de naranja.
▪ Ahora sabemos que en la cuba cromatográfica existes dos fases: la fase móvil donde interviene los
solventes acetona y formol, la fase estacionaria donde se encuentra la placa silicagel que es de parte
blanca donde se pone la muestra.
▪ En conclusión, a diario, en cualquier momento tenemos la presencia de alcaloides y este método
cualitativo es muy eficaz para saber si una sustancia que estamos manipulando es alcaloide.
BIBLIOGRAFÍA
• forences, C. (12 de Octubre de 2017). Ciencias forences. Obtenido de Ciencias forences:
https://www.cienciasforenses.gob.ec/wp-
content/uploads/2019/07/8_Alcaloides_drogas_alcalinas.pdf

FIRMA DEL DOCENTE

Dr. Wilson Moncayo

• NOTA OBTENIDA