Cuaderno Reme

CICLO FORMATIVO GRADO SUPERIOR: ANATOMIA PATOLOGICA Y CITODIAGNOSTICO
AUTORES: SONIA CARMONA, SEILA GÓMEZ FERNÁNDEZ Y JAVIER ROS

INDICE
1. TINCIÓN HEMATOXILINA-EOXINA
2. TINCIÓN GIEMSA
3. TINCIÓN DE AZUL DE TOULIDINA
4. TINCIÓN TRICRÓMICOS: MALLORY Y MASSON
5. TINCIÓN DE NISSL
6. TINCIÓN PAS Y PAS-DIASTASA
7. TINCION AZUL ALCIAN Y AZUL ALCIAN - PAS
Practica de laboratorio N.º: 1

FECHA:
Tinción de Hematoxilina - eosina 16/01/2023
02/02/2023
1. OBJETIVOS:
 Preparar las cubetas de tinción y los reactivos para la tinción de la Hematoxilina-Eosina.
 Teñir diferentes cortes histológicos con esta tinción y observarlos al microscopio.
2. FUNDAMENTO:
La técnica Hematoxilina-Eosina es una tinción de conjunto o topográfica, es decir, diversas tinciones
que colorean de forma conjunta, con dos o más tipos de colorantes los tejidos.
En general siempre consta de una primera fase en la que se colorean los núcleos celulares de color
azul-lila con la hematoxilina de Harris o de Mayer, y otra fase posterior de contraste citoplasmática
y componentes extracelulares con la eosina.
La hematoxilina es un colorante nuclear, por lo que va cargado positivamente, por lo tanto, tiene
carácter básico. Se deposita en los grupos fosfato ácidos del ADN de los núcleos celulares que
poseen carga negativa, aunque también pueden incorporarse a las proteínas nucleares cuando
estas adquieren carga negativa.
La eosina es un colorante citoplasmático ya que tiene carácter ácido por lo que interacciona con las
proteínas básicas del citoplasma. H-E nos permite teñir tanto sustancias ácidas como básicas.
3. MATERIALES:
 MATERIALES:
- Epi
- Portaobjetos con muestras del año pasado y de este año (procesadas por nosotros)
- Embudos
- Papel de filtro
- Pipeta graduada
- Pipetas Pasteur
- Probeta
- Bandeja de desparafinado e hidratación
- Bandeja de tinción H-E
- Bandeja de deshidratación (con sus cubetas y cestillos de tinción).
- Cubreobjetos
- Campana extractora de gases
 REACTIVOS:
- Agua destilada
- Agua corriente
- Agua amoniacal
- Alcohol ácido (HCl 1% en alcohol 70º)
- Hematoxilina
- Eosina
- Xileno
- Alcohol 100º y 80º
- Eukitt
 MUESTRAS:
- Tiroides - Intestino delgado
- Recto - Higado
4. PROCEDIMIENTO:
PREPARACIÓN DE REACTIVOS PARA LAS BANDEJAS DE DESPARAFINADO Y DE DESHIDRATACIÓN:

Este procedimiento lo realicemos el día 12/01/2023.
 REACTIVOS Y MATERIALES QUE SE HTILIZARON:

- Cubetas, embudos
- Papel, tijeras y celo
- Bolígrafo o rotulador fino.
- Probetas, pipetas Pasteur y graduadas.
- Vasos de precipitado.
- Xilol, alcohol absoluto.
- Agua destilada.
Para la escala de alcoholes utilizamos la tabla de Gay-Lussac

 LAVAR Y PREPARAR LAS CUBETAS DE TINCIÓN

Se necesitan mínimo 9 cubetas donde etiquetar (tanto en la tapa como en el lateral ancho
y en el estrecho, que siempre esté visible por lo menos una etiqueta) el número de orden
de cada reactivo, el tiempo o los pases que indique el protocolo. Además, se necesitan 2
cubetas adicionales (y específicas para ello) para el filtrado de los colorantes hematoxilina
y eosina y otras cubetas para el agua.
 PREPARACION DE LOS REACTIVOS:

Alcohol de 80º a partir de alcohol absoluto, utilizando la tabla de dilución de alcoholes de
Gay-Lussac.
Para 500ml de alcohol absoluto:
- 28,59 ml de agua destilada y 100ml de alcohol absoluto
- X ml se necesitan de agua destilada para preparar 500 ml de alcohol absoluto
- 28,59 x 500 ÷ 100 = 142,95 ml de H2O destilada.
Alcohol 70º a partir de alcohol absoluto:

Para 500 ml de alcohol absoluto:
- 47,75 ml de H2O destilada y 100ml de alcohol absoluto
- X ml se necesitan de H2O destilada para preparar 500 ml de alcohol absoluto
- 47,75 x 500 ÷ 100 = 238,75 ml de H2O destilada
- Se realiza el mismo procedimiento que para el alcohol 80º.
Disolución Azuleamiento (Agua amoniacal).

- Añadir 10 gotas de amoniaco con una pipeta Pasteur a 300 ml de H2O destilada.
- Para preparar otras cantidades, hacer una regla de tres.
Disolución de alcohol-ácido al 1% de HCl en 100 ml de alcohol 70º.

- Trabajar en campana de extracción de gases:
- Verter una cantidad de HCl en un vaso de precipitados y con una pipeta graduada
pipetear 1 ml.
- Dejar caer gota a gota, resbalando por la pared de una duquesita que contenga 99 ml
de EtOH 70º.
 PREPARACION DE LAS BANDEJAS DE HIDRATACION Y DESHIDRATACION: (EN ESTE ORDEN)

HIDRATACION:
- 3 cubetas de xilol
- 3 cubetas de alcohol absoluto.
- 1 cubeta de alcohol al 80%.
- 1 cubeta con H2O destilada.
DESHIDRATACIÓN:
- 3 cubetas de alcohol absoluto
- 3 cubetas de xilol
PROCEDIMIENTO DE LA TINCION HEMATOXILINA-EOSINA: Los colorantes han sido filtrados

previamente. Antes de comenzar con la tinción, se han identificado el nombre de las muestras de
cortes histológicos que vamos a teñir.
 Desparafinado e hidratación (en campana de extracción):

Pases a realizar:
- 3 baños Xilol de 2 minutos cada uno
- 3 baños de alcohol 100% 1 minuto cada uno.
- 1 baño de alcohol 80º 1 minuto
- 1 baño con agua 1 minuto cada uno.
 Tinción:
Bandeja preparada de hematoxilina-eosina
- HemaLast baño de 30 segundos.

- Hematoxilina, baño de 5 min.
- Aclarado con agua corriente, baño de 2 min.
- Alcohol ácido (diferenciador), baño de 45
segundos.
- Aclarado con agua destilada, baño de 1 min.
- Agua amoniacal (Bluing Agent), baño de 1
min.
- Aclarado con agua destilada, baño de 1 min.
- Alcohol 80º, baño de 1 min.
- Eosina, baño de 1 min.
 Deshidratación y aclarado:
- 3 baños de alcohol 100% 1 minuto cada uno
- 3 baños de xilol 1 minuto cada uno.
 MONTAJE Y VISUALIZACIÓN AL MICROSCOPIO:

- Para el montaje usaremos el EUKITT.
- Añadir una gota encima de la muestra y depositar el cubreobjetos encima, esparciendo
el medio de montaje.
- Dejar secar al lado de la ventana y pronto estará listo para ser observado al
microscopio.
5.RESULTADOS, CONCLUSIONES Y FOTOGRAFÍAS:
RESULTADOS DE LA TINCION HEMATOXILINA-EOSINA:

Muestra de intestino delgado 40x

Muestra de recto 10x

Muestra de recto 40x
Muestra de hígado 40x

CONCLUSIONES:
Realizamos el procedimiento de preparación de las bandejas de hidratación y deshidratación el día

12/01/2023 para dejarlo todo listo el día de la práctica y que nos diera tiempo a realizarla.
Como muchos colorantes son solubles en agua para que la práctica se pueda realizar correctamente
debemos desparafinar en la estufa e hidratar la muestra antes. Al terminar tenemos que
deshidratarla de nuevo para conservar el tejido.
El xilol siempre se guardará en un táper hermético para que no se evapore. Debemos llevar
precaución al trabajar con colorantes y poner papel de filtro en las bancadas ya que esta puede
mancharse.
La muestra teñida con la tinción Hematoxilina-Eosina se visualizaba correctamente y por tanto el

protocolo se llevó a cabo adecuadamente.
TABLA DE ACTIVIDADES REALIZADO POR
Identificación de las cubetas Lucía, Javi y Seila
Revisión de las cubetas Paula, Luna, Laura, Lucía.
Preparación Alcoholes de 80º Lucía y Sonia.
Preparación: Agua amoniacal y Alcohol-ácido Laura y Lucía.
Rellenado de las cubetas/ mantenimiento Paula, Luna, Laura, Lucía.
Filtración de los colorantes Javi, Sonia, Seila y Paula.


FECHA:
TINCIÓN DE GIEMSA 16/01/2023
1.OBJETIVOS:
 Prepara las cubetas de tinción y los reactivos para la tinción de Giemsa.
 Teñir diferentes cortes histológicos con esta tinción, observarlos al microscopio y comparar
esta tinción con la coloración de Hematoxilina -Eosina
2. FUNDAMENTO:
La técnica de Giemsa es una tinción policromática que utiliza como colorantes fundamentales una
mezcla de colorantes: el azur A, azur B y azul de metileno, estos están destinados a teñir los
núcleos celulares y la eosina como colorante citoplasmático aniónico. La eosina colorea el
componente extracelular y determinadas estructuras acidófilas y los derivados de azur colorean
las estructuras basófilas. Es importante usar tampones para estabilizar el pH.
3. MATERIALES Y REACTIVOS:
 MATERIALES:
- Epi
- Portaobjetos
- Jarra Koplin
- Embudos
- Papel de filtro
- Pipeta graduada, prepipeta
- Pipetas Pasteur
- Probetas de 50 ml y de 100ml
- Cubetas y cestillos
- Cubreobjetos
- Varillas de vidrio
- Campana de extracción de gases.
 REACTIVOS:
- Agua destilada
- Alcohol 100º, 60º y 80º
- Agua acética
- Giemsa
- Xileno
- Eukitt
 MUESTRA: Intestino delgado y trompa de falopio
4. PROCEDIMIENTO:
PREPARAR LA SOLUCION DE TRABAJO DE GIEMSA AL 20%, 50 ML.

- Para 50ml de Giemsa al 20%:
C1 x V1 = C2 x V2
100 x V1= 20% x 50ml
20 x 50 ÷ 100 = 10ml del reactivo concentrado puro y 50 ml con H2O destilada.
PREPARAR LA DISOLUCION DE AGUA ACETICA AL 0,3%, 100 ML.

- Para 100ml de agua acética al 0,3%
C1 x V1 = C2 x V2
100 x V1 = 0,3% x 100ml 
0,3% x 100ml ÷ 100 = 0,3ml del reactivo puro y el resto hasta 100 de H2O destilada.
PROCEDIMIENTO DE TINCION:
 Desparafinar e hidratar
- 3 baños de xilol 2 minutos cada uno
- 3 baños de alcohol 100% 1 minuto cada uno
- 1 baño de alcohol 80% 1 minuto
- 1 baño de agua 1 minuto
 Tinción: (Colorante previamente filtrado)

- Tinción con solución de Giemsa al 20% en agua durante 1 hora recién preparada.
- Lavar ligeramente en H2O destilada.
- Pasar por agua acética 5 segundos.

- Diferenciación con baños de alcohol de 96º (hasta que deje de desprender color azul).
 Deshidratación:
- 2 baño de alcohol 100% de 5 min. cada uno.
- 2 baños de xilol 5 min. cado uno
- Montar.
5. RESULATDOS, CONCLUSIONES Y FOTOGRAFIAS
Resultados de la tinción de Giemsa:
Muestra de intestino delgado
Muestra de intestino delgado

Muestra de trompa de Falopio 40x
Muestra de trompa de Falopio 40x

Observaciones:
- Calculamos mal los ml de reactivos y las muestras se tiñeron solo hasta la mitad.
- La hidratación se hizo fuera de la campana de extracción de gases ya que, esta estaba
ocupada.
- El tejido debe teñirse con el colorante Giemsa 1 hora, pero, lo dejamos 30 minutos por
falta de tiempo.
PRÁCTICA DE LABORATORIO Nº: 3
FECHA:
TINCIÓN DE AZUL DE TOULUIDINA
25/01/2023
AUTORES: Seila Gómez Fernández, Javier Ros Zaragoza y Sonia Carmona López
1. OBJETIVO:
➔ Identificar las características histológicas del corazón, teñido con Azul de Touluidina.
➔ Aprender a realizar la tinción metacromática de Azul de Touluidina sobre un corte de

corazón.
➔ Comparar el resultado de las diferentes tinciones metacromáticas.
➔ Trabajo en equipo.
2. FUNDAMENTO
El azul de toluidina es un colorante acidofílico y metacromático que pertenece al grupo de

las tiacidas. Su característica principal es que tiñe selectivamente componentes ácidos
de los tejidos, tales como sulfatos y radicales fosfatos incorporados en el ADN y ARN de
las células.
El compuesto es un derivado del aminotolueno, compuesto homólogo de la anilina

derivada del toluol. Se encuentra químicamente emparentado con el Azur A, Azur B y
Azur C.
PROPIEDADES
En general se produce color rojo cuando el colorante se une a grupos ácidos de

sustancias de alto peso molecular por lo general carbohidratos. Para tinciones
metacromáticas teñiría el tejido conjuntivo, mucosidades, sustancias básicas de
cartilagos, gránulos de mastocitos, muchas sustancias mucínicas epiteliales.
Se utiliza para la tinción rápida en biopsias intraoperatorias. También se utiliza para teñir
cortes de 1 micra en microscopía electrónica y también para teñir glúcidos complejos.
En este último caso tiñe según el pH del glúcido en colores como azul, verde, y rojo.
También se usa frecuentemente como colorante ortocromático para teñir tejido nervioso,
donde tiene la heterocromatina y (acúmulos de cisternas de retículo endoplasmático
rugoso de los somas neuronales, así como las fibras nerviosas amielínicas y células
gliales
● MATERIALES:
- Cubetas de tinción y carros para la hidratación y deshidratación.

- Bateas de plástico
- Paralelas para la tinción
- Vasos de precipitados
- Cubreobjetos y portaobjetos.
- Papel de filtro
- Varilla de vidrio.
- Pipetas Pasteur
- EPI (bata, guantes y mascarilla)
● TEJIDOS:
- Corte histológico de Corazón
● APARATOS: Campana de extracción de gases.
● REACTIVOS:
- Azul de Touluidina
4. PROCEDIMIENTO TINCIÓN DE AZUL DE TOULUIDINA
● Hidratación: Los cortes se meten en el carro para su hidratación, esta parte se

hace en la campana de extracción de gases. Se utiliza Xilol y una escala de
alcoholes decreciente. Pasos:
- 3 baños de Xilol durante 2 minutos cada uno.

- 2 baños de alcohol 100% durante 1 minuto cada uno.
- 1 baño de alcohol 80% durante 1 minuto.
- 1 baño con agua destilada durante 1 minuto.
TINCIÓN DE AZUL DE TOULUIDINA
Se preparan las bateas y las paralelas para proceder a la tinción.
Pasos:
- Diluimos el Azul de touluidina 10% en 60 ml de alcohol.
SOLUCIÓN DE AZUL DE TOULUIDINA AL 10%, VOLUMEN FINAL DE 60ML
Co x Vo = Cf x Vf
100% x Vo = 10% x 60 ml
Vo = 6 ml
Cogemos 6 ml de la solución Azul de Touluidina y lo diluimos con 52 ml de alcohol en una

probeta
- Depositamos una pequeña cantidad de tinte a la muestra, cubriendo toda la

superficie.
- Se lava con agua destilada hasta retirar todo el exceso de tinte.
● Deshidratación: Se meten los portas en los carros y en la campana de gases se

procede a la deshidratación. Pasos.

- 3 baños de xilol 1 minuto cada uno.
● Montaje de los portas:
- Tras sacarlo del xilol se añade al porta 3 gotas de pegamento EUKITT.

- Se deja caer el cubreobjetos, despacio para no crear burbujas.
RESULTADOS
Tras la realización de la práctica, no realizamos la dilución del azul de touluidina, por ello
presenta una coloración más clara a la original.
Podemos presenciar la pigmentación de las fibras musculares del corazón en una

tonalidad en azul claro pálido y en una coloración más oscura las células, que conforman
dichas fibras musculares.
Ha sido una práctica interesante, ya que nos ha permitido a todos conocer la estructura
del corazón.

FECHA:
TINCIÓN TRICRÓMICA DE MANSON Y 02/02/2023
MALLORY
AUTORES: Sonia Carmona López, Seila Gómez Fernández y Javier Ros Zaragoza
1. OBJETIVOS:
 Aprender a realizar las tinciones tricrómicas de Masson y Mallory utilizando dos kits de
reactivos comerciales.
 Comparar el resultado de ambos tipos de tinción.
2. FUNDAMENTO:
Las tinciones tricrómicas, son tinciones especiales que se utilizan para poder diferenciar entre fibras
musculares y fibras de colágeno, para ello se utilizan tres colorantes: dos citoplasmáticos y uno
nuclear. Este método fue inventado por Mallory en 1900 para colorear tejidos conectivos, su
fórmula contenía: azul de metileno, Orange G, ácido oxálico, fucsina acida y ácidofosfomolibdico,
más tarde en 1912 su método fue modificado por Masson reemplazando el ácido fosfomolibdico
por ácido fosfotungstico, elimina el ácido oxálico y utiliza azul de anilina en vez de azul de metileno.
La tinción depende de varios factores:

 Permeabilidad: Los elementos acidófilos como el colágeno tienen diferentes grados de
permeabilidad al paso del colorante que va a depender del grado de dispersión de la
disolución, la agregación iónica del colorante en la misma y el tamaño de la molécula. Cada
colorante genera un gradiente de penetración diferente al interactuar con la estructura,
siendo esta la responsable de las diferentes coloraciones que puedan tomar. Los
colorantes utilizados para las tinciones tricrómicas se clasifican en:
 Colorantes nucleares: Laca de hematoxilina férrica

 Colorantes citoplasmáticos: naranja G, ácido pícrico, ponceau de
xilidina naranja de metilo, escarlata Biebrich, azofloxina.
 Colorantes del tejido conectivo: Derivados del anillo trifenilmetano:
fucsina ácida, azul de anilina, verde luz SF.
 Afinidad: Los aminoácidos que componen la cadena polipeptídica, contienen grupos

catiónicos presentes en sus estructuras por ejemplo el colágenoreticulina las
cuales van a tener afinidad por colorantes ácidos cargados negativamente.
 PH del medio: El medio acido tiñe con más afinidad las fibras colágenas
específicamente en torno a 1.5 de la escala de pH.
 Poder de mordiente: El uso de alcohol acidificado como agente decolorante mejora los
detalles morfológicos de las estructuras parasitarias, es decir va a permitir diferenciar la
unión especifica entre el colorante y la estructura.
 MATERIALES:
- Cubetas de tinción y carros para la hidratación y deshidratación.
- Bateas de plástico
- Paralelas para la tinción
- Papel de filtro
- Pipetas Pasteur
- Epi (bata, guantes y mascarilla)
 TEJIDOS:
- Corte histológico de riñón
 APARATOS: Campana de extracción de gases.
 REACTIVOS:
- Kit de Mallory
 Solución A: Carblofucsina
 solución B: tampón de diferenciación acido
 Solución C: ácido fosfomolibdico
 Solución D: Solución policrómica según Mallory
- Kit de Masson:
 solución A: Hematoxilina férrica de Weigert
 solución B: Hematoxilina férrica de Weigert
 solución alcohólica de ácido pícrico
 Fucsina ácida ponceau según Mallory
 Ácido fosfomolibdico
 Anilina azul de Masson
4. PROCEDIMIENTO TINCION DE MALLORY
 Hidratación: Los cortes se meten en el carro para su hidratación, esta parte se hace en la
campana de extracción de gases. Se utiliza Xilol y una escala de alcoholes decreciente.
Pasos:
- 3 baños de Xilol durante 2 minutos cada uno.
- 2 baños de alcohol 100% durante 1 minuto cada uno.
- 1 baño de alcohol 80% durante 1 minuto.
- 1 baño con agua destilada durante 1 minuto.
 Tinción de Mallory: Se preparan las bateas y las paralelas para proceder a la tinción.
Pasos:
- Se cubre el corte con reactivo A y se deja actuar 10 minutos
- Se lava con agua destilada (con pipeta Pasteur).
- Se cubre el corte con el reactivo B y se deja actuar 2 minutos.

- Se lava con agua del grifo (2-3 segundos).
- Se cubre el corte el reactivo C y se deja actuar 5 minutos.
- Sin lavar, escurrir el portaobjetos y cubrir el corte con el reactivo D y se deja

actuar 1 minuto.
- Se lava con agua destilada.
 Deshidratación: Se meten los portas en los carros y en la campana de gases se procede a

la deshidratación. Pasos.
 Montaje de los portas:

- Tras sacarlo del xilol se añade al porta 3 gotas de pegamento EUKITT
5. PROCEDIMIENTO DE MASSON
 Hidratación: Esta parte se hace en la campana de extracción de gases. Se utiliza Xilol y una
escala de alcoholes decreciente. Pasos:

 Tinción de Masson: Se preparan las bateas y las paralelas para proceder a la tinción.
- En un tubo de ensayo se mezclan 6 gotas de solución A y solución B, se cubre el

tejido con la mezcla y se deja actuar 10 minutos
- Sin lavar se escurre el portaobjetos y se cubre el tejido con la solución C, se deja

actuar 4 minutos.
- Lavar con agua destilada 3-4 segundos y cubrir el tejido con la solución D, dejar
actuar 4 minutos
- Sin lavar, escurrir el portaobjetos y cubrir el tejido con el reactivo E, dejar actuar 5
minutos. Lavar en agua destilada.
 Deshidratación:
- 3 baños de alcohol 100%, 1 minuto cada baño
- 3 baños de Xilol, 1 minuto cada uno
 Montaje de los portas:

- Tras sacarlo del xilol se añade al porta 3 gotas de pegamento EUKITT
6. RESUALTADOS Y CONCLUSIONES
 Resultados tinción de Mallory
Muestra de Riñón. Se observan glomérulos y túbulos: El colágeno se ha teñido de azul
Túbulo
Glomérulo
 Resultados tinción de Masson
Muestra de riñón
Glomérulo
6. CONCLUSIONES Y COMPARACIONES DE LAS TINCIONES
 Tinción de Mallory: Se utiliza para tratar la muestra microscópica utilizando tres tinciones
diferentes con contratinción diferencial de dos partes básicas del tejido: músculo y fibras
de colágeno. Al teñir la muestra con el colorante ácido fucsina los núcleos y los músculos
se tiñen de rojo a rosa. La molécula de ácido fosfomolíbdico excluye las moléculas de
colorante de ácido fucsina del colágeno y permite así la unión del azul de anilina, lo que
hace que el colágeno se tiña de azul (contraste) en relación con el colorante rojo utilizado
anteriormente. El naranja G (molécula de menor masa molar) tiñe los eritrocitos.
 Tinción de Masson: Está indicado para la tinción de tejido conjuntivo. Colorea gametos,
núcleos, neurofibras, neuroglias, colágeno y queratina. Núcleo y gametos de color negro
citoplasma, queratina, fibras musculares, granulaciones acidófilas de color rojo, el
colágeno, mucus, granulaciones basófilas de hipófisis azul, los gránulos de células delta
hipófisis Azul-violeta y los eritrocitos de color amarillo.
FECHA:
TINCIÓN DE NISSL
02/02/2023
1. OBJETIVO:
➔ Aprender a realizar la tinción metacromática de Nissl sobre un corte de cerebro.
➔ Identificar las características histológicas del cerebro, teñido a través de la tinción de

Nissl.
2. FUNDAMENTO
El violeta de cresilo es un colorante acidófilo, que tiñe el núcleo celular y el retículo

endoplasmático rugoso (sustancia de Nissl), por lo que se emplea para las tinciones
generales del sistema nervioso.
Los cuerpos de Nissl son unas pequeñas estructuras en forma de corpúsculos o gránulos
presentes en las neuronas del sistema nervioso. Estas estructuras se encuentran en el
citoplasma.
Se consideran acúmulos de retículo endoplasmático rugoso, son estructuras basófilas.

Los cuerpos de Nissl pueden ser dañados por posibles lesiones o patologías, como los
daños neuronales provocados por traumatismos y enfermedades (Alzheimer).
Para teñir los grumos de Nissl se utilizan, en general, colorantes básicos como el violeta
de cresilo y el azul de toluidina. Estos colorantes se unen también a los ácidos nucleicos.
Generalmente el tejido nervioso tiene baja celularidad. La elección de la zona a tallar es

tan importante como el método de tinción. La inclusión se hará tanto en celoidina como
en parafina.
La finalidad es poner de manifiesto los tres elementos constitutivos del sistema nervioso:
➢ Coloraciones para neuronas o grumos de Nissl.
➢ Coloraciones para la glía.
➢ Coloraciones para vainas de mielina.
Incluyen coloraciones y métodos de impregnación metálica para el tejido nervioso.
● MATERIALES:

- Papel de filtro
- Pipetas Pasteur
- Epi (bata, guantes y mascarilla)
- Eukitt
● TEJIDOS:
- Corte histológico de Cerebro
● APARATOS:
- Campana de extracción de gases.
● REACTIVOS:
- Violeta de cresilo
4. PROCEDIMIENTO TINCIÓN DE NISSL (VIOLETA DE CRESILO Y GENCIANA)

● Hidratación: Los cortes se meten en el carro para su hidratación, esta parte se

hace en la campana de extracción de gases. Se utiliza Xilol y una escala de
alcoholes decreciente.
Pasos:
- 3 baños de Xilol durante 2 minutos cada uno.
- 1 baño de alcohol 80% durante 1 minuto.
- 1 baño con agua destilada durante 1 minuto.
TINCIÓN DE NISSL (VIOLETA DE CRESILO Y GENCIANA)
Pasos:
- Depositamos una pequeña cantidad de tinte a la muestra, cubriendo toda la

superficie durante 30 min.
- Se diferencia con alcohol 96% y posteriormente se procede a la deshidratación.


procede a la deshidratación.
Pasos:
- 3 baños de xilol 1 minuto cada uno.

RESULTADOS
VIOLETA DE GENCIANA
A la hora de realizar la tinción de violeta de cresilo, teníamos poca cantidad de colorante

por ello optamos utilizar el violeta de genciana, ya que contiene las misma características
a la hora de teñir cada estructura que el violeta de cresilo.
En la primera imagen nos ha permitido teñir los cuerpos de Nissl en una coloración
morada respecto a las diferentes estructuras que se han teñido en una coloración más
azulada que se encuentra en la preparación y también se puede localizar las neuronas
del cerebro en la segunda imagen en una tonalidad morada-azulada, donde se ve
delimitada la estructura de la neurona.
VIOLETA DE CRESILO
En este caso la muestra de cerebro, teñida con violeta de cresilo presenta las mismas
estructuras que las imágenes anteriores, pero presenta una coloración más clara
respecto al violeta de genciana. Podemos ver las neuronas en una coloración morada
respecto otras estructuras que se encuentran teñidas en una coloración más rosada.
Ha sido una práctica entretenida, ya que nos ha permitido diferenciar ambos tintes a la
hora de teñir estructuras, pero con diferente coloración

FECHA:
Tinciones PAS y PAS-Diastasa 15/02/2023
1. OBJETIVOS:
 Aprender a realizar las tinciones de PAS utilizando un kit de reactivos comercial.
 Comprobar el estado de los reactivos del armario de seguridad para comprobar si podemos
preparar la tinción con los reactivos disponibles y el protocolo de clase.
 Observar al microscopio y comparar el resultado de ambos tipos de tinción y con las
tinciones de Hematoxilina-Eosina que ya tenemos.
2. FUNDAMENTO:
La tinción de PAS (Periodic Acid-Schiff) es una de las tinciones más comúnmente utilizada en
histología y se utiliza para evidenciar la presencia de grupos aldehídos formados por oxidación
previa de los hidratos de carbono. El fundamento de la reacción consiste en oxidar los tejidos
mediante el ácido peryódico para incrementar el número de grupos carbonilos (aldehídos o
cetonas) presentes en ellos. Posteriormente, se trata la muestra con el reactivo de Schiff que
reacciona con dos grupos aldehídicos contiguos dando lugar a una coloración rojo-púrpura
característica.
Una modificación de esta técnica es un procedimiento llamado PAS D. Esto se lleva a cabo
mediante la adición de amilasa al comienzo del procedimiento para digerir el glucógeno que está
presente en el tejido. Los actos de la enzima diastasa por escindir la A-glucosídico 1-4 vínculos de
glucógeno que conducen a la formación de maltosa y dextrosa, que es soluble en agua y es
fácilmente arrastrado por lo que no interfiere en la reacción.
La etapa de la digestión de glucógeno sería aumentar la especificidad de la técnica de tinción, por
ejemplo, el análisis de los depósitos de glucógeno en el hígado para detectar la cantidad de
glucógeno está presente, para hacer más fácil la detección de infecciones fúngicas. También la
eliminación de glucógeno hace que sea más fácil identificar las mucinas neutras que también se
tiñeron por la técnica de PAS, y es útil para el diagnóstico de adenocarcinoma.
 MATERIALES TINCION PAS:

- Ácido Peryódico 1%
- Reactivo de Schiff
- Agua templada (en el kit comercial es Potasio
Metabisulfito en solución)
- Hematoxilina de Harris (en el kit comercial con
Hematoxilina de Mayer)
- Alcohol clorhídrico
 MATERIALES TINCION PAS-DIASTASA:

- Amilasa 1%
- Mismos reactivos que tinción PAS
- Control positivo y negativo
 REACTIVOS PARA LA DESHIDRATACION E HIDRATACIÓN:

- Xilol
- Alcohol 100% - 80%
- Agua destilada
 MUESTRAS:
- Hígado
- Digestivo
 MATERIALES:
- Bateas
- Paralelas
- Cubreobjetos y portaobjetos
- Varilla de vidrio
- EUKITT
- Cubetas de tinción
- Papel de filtro
- Campana de extracción de gases
- Microscopio
4. PROCEDIMIENTO:
Procedimiento de Tinción Pas:

 Hidratación: Los cortes se meten en el carro para su hidratación, esta parte se hace en la
campana de extracción de gases. Se utiliza Xilol y una escala de alcoholes decreciente.
 Técnica PAS:
- Cubrir los tejidos con reactivo Acido Peryódico 1% durante 5 minutos.
- Lavar en 2 cubetas con agua destilada, 15 pases cada una.
- Añadir al tejido el Reactivo de Schiff durante 15 minutos.

- Meter el tejido en una cubeta de agua templada (sin cambiar el agua de la cubeta)
durante 10 minutos. (También puede usarse baños de acido sulfuroso, agua sulfurosa
o metabisulfito potásico).
- Se lava en agua corriente durante 3 minutos.
- Se tiñe con hematoxilina de Harris durante 3 minutos.

- Lavamos en agua corriente.
- Diferenciamos el tejido con alcohol clorhídrico 1%.

- Se lava con agua corriente durante 5 minutos.
 Deshidratación: Se meten los portas en los carros y en la campana de gases se procede a

la deshidratación.
 Montaje de los portas: Tras sacarlo del xilol se añade al porta 3 gotas de pegamento
EUKITT. Se deja caer el cubreobjetos, despacio para no crear burbujas.
Procedimiento para la tinción de PAS-DIASTAS:
- Desparafinar e hidratar el tejido.

- Se hace un control positivo y negativo
- Añadir a los tejidos Amilasa al 1% durante 30 minutos.
- Se la va con agua destilada 15 pases
- Se realiza la técnica PAS.

- Deshidratamos los tejidos. Montamos con EUKITT.
5. RESULTADOS:
Resultados de la tinción PAS:
Muestra de Digestivo PAS positivo

Muestra de digestivo PAS positivo
Resultados de la tinción PAS-DIASTASA
Control 1: Hígado
Control 2: Hígado
6. CONCLUSIONES:
 Los controles no salieron bien, ya que se puso amilasa en los dos y solo debía de llevar
amilasa uno de ellos.
 No seguimos el protocolo del Kit comercial, seguimos otro cedido por la profesora.
 Los resultados obtenidos en la tinción son PAS positivo.
 El PAS tiñe:
- Para PAS positivo: glucógeno, mucopolisacáridos neutros, mucina, glucoproteínas,
membrana basal y glucolípidos de color rojo o purpura
- Núcleos de color azul.
FECHA:
TINCIÓN DE AZUL DE ALCIÁN Y ALCIÁN PAS 16/02/2023
1. OBJETIVO:
➔ Identificar las características histológicas del pulmón y digestivo, teñido con Azul de
Alcián y Alcián PAS.
➔ Aprender a realizar la tinción metacromática de Azul de Alcián y Alcián PAS sobre un

corte digestivo y pulmón.
2. FUNDAMENTO
El azul alcián es un compuesto químico derivado del grupo de las ftalocianinas, es decir
tiene una molécula de cobre central rodeándolo cuatro anillos aromáticos nitrogenados.
Son sustancias básicas y se unen a grupos ácidos. Para permitir esta unión es
fundamental el pH del medio. Determina mucopolisacáridos ácidos (carboxílicos y
sulfatos). El pH debe estar en torno a 2,4 y 2,6 y de esta forma se teñirán de azul. Si se
usa un pH inferior a 1 o a 0,5 sólo se teñirán de azul los mucopolisacáridos ácidos
sulfatados.
➔ Fijación: formalina tamponada al 10%.

Las mucosubstancias ácidas son teñidas de forma selectiva en el tejido, y la

contratinción se realiza con rojo nuclear sólido.
Para la tinción se utiliza una solución de ácido acético y azul alcian, tiñéndose de forma
selectiva con un valor del pH de 2,5 los proteoglicanos carboxilados y sulfatados. La
diferenciación entre los grupos de carboxilo y sulfato sólo se hace posible con un valor
del pH de 1. Como contratinción se utiliza una solución de rojo nuclear sólido - sulfato de
aluminio.
La tinción de azul alcian es combinada con frecuencia con la reacción de ácido

peryódico-Schiff (PAS). En combinación con la reacción PAS, se pueden visualizar
además polisacáridos no sustituidos, mucopolisacáridos neutros, muco y glicoproteínas,
glicol y fosfolípidos.
PRECAUCIONES CON EL REACTIVO DE SCHIFF
➔ El tiempo en reactivo de Schiff depende de la temperatura y de las condiciones

en las que se encuentre el propio reactivo. Incluso se puede teñir en microondas
durante menos de un minuto.
➔ El reactivo de Schiff puede reutilizarse pero ha de conservarse en nevera y

llevarlo a la temperatura deseada antes de su uso.
➔ El reactivo de Schiff debe conservar un color amarillento y hay que descartarlo si

se vuelve de color rosado. Si aparece precipitado blanco en el fondo del bote de
reactivo se puede disolver de nuevo
● MATERIALES:
- Papel de filtro
- Pipetas Pasteur
- EPI (bata, guantes y mascarilla)

● TEJIDOS:
- Corte histológico de Pulmón
- Corte histológico de Digestivo
● APARATOS:
- Campana de extracción de gases.
● REACTIVOS:
- Azul Alcián pH 2,5.

- Reactivo de Schiff
- Ácido Peryódico al 1%
- Agua destilada
- Agua templada
- Hematoxilina de Harris
- Alcohol-ácido
4. PROCEDIMIENTO TINCIÓN DE AZUL ALCIÁN Y ALCIÁN PAS
● HIDRATACIÓN: Los cortes se meten en el carro para su hidratación, esta

parte se hace en la campana de extracción de gases. Se utiliza Xilol y una
escala de alcoholes decreciente.
➔ PASOS:
- 3 x Baños de Xilol durante 2 minutos cada uno.
- 2 x Baños de alcohol 100% durante 1 minuto cada uno.
- 1 x Baño de alcohol 80% durante 1 minuto.
- 1 x Baño con agua destilada durante 1 minuto.
TINCIÓN DE AZUL DE ACÍAN 2,5 pH
➔ PASOS:
- Depositamos una pequeña cantidad de “Reactivo A” a la muestra de

pulmón, cubriendo toda la superficie del corte histológico. Durante 30
minutos.
- Escurrir el portaobjetos sin lavar y poner sobre la sección 10 gotas de

“Reactivo B”: dejar actuar 10 minutos.
- Lavar con agua destilada.
- Poner sobre la sección 10 gotas de “Reactivo C”: dejar actuar 5 minutos.

TINCIÓN DE AZUL DE ACÍAN PAS 2,5 pH
➔ PASOS:
- Depositamos una pequeña cantidad de “Reactivo A” a la muestra de

pulmón, cubriendo toda la superficie del corte histológico. Durante 30
minutos.
- Lavar con agua destilada.
- Depositamos una pequeña cantidad de Ácido peryódico al 1%, recubriendo

toda la superficie del corte digestivo durante 5 min.
- Lavar en varias cubetas con agua destilada.
- Depositamos el Reactivo de Schiff durante 15 minutos.
- Colocamos los portas en el agua corriente templada (sin cambiar el agua

de la cubeta) durante 10 min.
➔ También puede usarse baños de ácido sulfuroso o agua sulfurosa o

metabisulfito potásico.
- Lavar en agua corriente durante 3 min.
- Colocamos los portas en Hematoxilina de Harris otros 3 min.
- Lavar en agua corriente.
- Diferenciar en alcohol clorhídrico. (DIFERENCIACIÓN)
- Lavar en agua corriente durante 5 min.


procede a la deshidratación. Pasos.
- 3 x Baños de alcohol 100% durante 1 minuto cada uno.

- 3 x Baños de xilol 1 minuto cada uno.

RESULTADOS
TINCIÓN DE AZUL DE ALCIÁN PAS 2,5 pH / DIGESTIVO x20 AUMENTOS
TINCIÓN DE AZUL DE ALCIÁN 2,5 pH / PULMÓN x20 AUMENTOS

Resultados
➔ Azul alcián pH 2,5 se tiñen la mayor parte de mucopolisacáridos en azul.

➔ PAS Negativo: Azul brillante
➔ PAS Positivo: Rojo
➔ Núcleos: Azul

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CICLO FORMATIVO GRADO SUPERIOR: ANATOMIA PATOLOGICA Y CITODIAGNOSTICO

AUTORES: SONIA CARMONA, SEILA GÓMEZ FERNÁNDEZ Y JAVIER ROS

Practica de laboratorio N.º: 1

PREPARACIÓN DE REACTIVOS PARA LAS BANDEJAS DE DESPARAFINADO Y DE DESHIDRATACIÓN:

 REACTIVOS Y MATERIALES QUE SE HTILIZARON:

Para la escala de alcoholes utilizamos la tabla de Gay-Lussac

 LAVAR Y PREPARAR LAS CUBETAS DE TINCIÓN

 PREPARACION DE LOS REACTIVOS:

Alcohol 70º a partir de alcohol absoluto:

Disolución Azuleamiento (Agua amoniacal).

Disolución de alcohol-ácido al 1% de HCl en 100 ml de alcohol 70º.

 PREPARACION DE LAS BANDEJAS DE HIDRATACION Y DESHIDRATACION: (EN ESTE ORDEN)

PROCEDIMIENTO DE LA TINCION HEMATOXILINA-EOSINA: Los colorantes han sido filtrados

 Desparafinado e hidratación (en campana de extracción):

- HemaLast baño de 30 segundos.

 MONTAJE Y VISUALIZACIÓN AL MICROSCOPIO:

5.RESULTADOS, CONCLUSIONES Y FOTOGRAFÍAS:

RESULTADOS DE LA TINCION HEMATOXILINA-EOSINA:

Muestra de intestino delgado 40x

Muestra de intestino delgado 40x

Muestra de intestino delgado 40x

Muestra de recto 10x

Muestra de recto 40x

Muestra de hígado 40x

Realizamos el procedimiento de preparación de las bandejas de hidratación y deshidratación el día

La muestra teñida con la tinción Hematoxilina-Eosina se visualizaba correctamente y por tanto el

TABLA DE ACTIVIDADES REALIZADO POR

Identificación de las cubetas Lucía, Javi y Seila

Revisión de las cubetas Paula, Luna, Laura, Lucía.

Preparación Alcoholes de 80º Lucía y Sonia.

Preparación: Agua amoniacal y Alcohol-ácido Laura y Lucía.

Rellenado de las cubetas/ mantenimiento Paula, Luna, Laura, Lucía.

Filtración de los colorantes Javi, Sonia, Seila y Paula.

Practica de laboratorio N.º: 2

 MUESTRA: Intestino delgado y trompa de falopio

PREPARAR LA SOLUCION DE TRABAJO DE GIEMSA AL 20%, 50 ML.

PREPARAR LA DISOLUCION DE AGUA ACETICA AL 0,3%, 100 ML.

 Tinción: (Colorante previamente filtrado)

- Pasar por agua acética 5 segundos.

5. RESULATDOS, CONCLUSIONES Y FOTOGRAFIAS

Resultados de la tinción de Giemsa:

Muestra de intestino delgado

Muestra de intestino delgado

Muestra de trompa de Falopio 40x

Muestra de trompa de Falopio 40x

PRÁCTICA DE LABORATORIO Nº: 3

➔ Aprender a realizar la tinción metacromática de Azul de Touluidina sobre un corte de

➔ Comparar el resultado de las diferentes tinciones metacromáticas.

El azul de toluidina es un colorante acidofílico y metacromático que pertenece al grupo de

El compuesto es un derivado del aminotolueno, compuesto homólogo de la anilina

En general se produce color rojo cuando el colorante se une a grupos ácidos de

​ - Cubetas de tinción y carros para la hidratación y deshidratación.

- Corte histológico de Corazón

● APARATOS: Campana de extracción de gases.

4. PROCEDIMIENTO TINCIÓN DE AZUL DE TOULUIDINA

● Hidratación: Los cortes se meten en el carro para su hidratación, esta parte se

- 3 baños de Xilol durante 2 minutos cada uno.

TINCIÓN DE AZUL DE TOULUIDINA

Se preparan las bateas y las paralelas para proceder a la tinción.

- Diluimos el Azul de touluidina 10% en 60 ml de alcohol.

SOLUCIÓN DE AZUL DE TOULUIDINA AL 10%, VOLUMEN FINAL DE 60ML

Cogemos 6 ml de la solución Azul de Touluidina y lo diluimos con 52 ml de alcohol en una

- Depositamos una pequeña cantidad de tinte a la muestra, cubriendo toda la

- Cubetas de tinción y carros para la hidratación y deshidratación.

- Cubetas de tinción y carros para la hidratación y deshidratación.

- 2 baños de alcohol 100% durante 1 minuto cada uno.

- 1 baño de alcohol 80% durante 1 minuto.

- 1 baño con agua destilada durante 1 minuto.