Universidad Arturo Michelena

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Patología Médica
Licenciatura en Histotecnología
Cátedra de Histotecnología II

MANUAL DE
PROCEDIMIENTOS: BATERÍA
DE COLORACIÓN Y ÁREA DE
MONTAJE

AUTORES:
Laura Ochoa
Angélica García

San Diego, Marzo del 2020.

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS: BATERÍA DE COLORACIÓN Y ÁREA DE MONTAJE
 BATERÍA DE COLORACIÓN

La coloración de rutina, hematoxilina-eosina (H-E) es empleada como coloración estándar

ya que es compatible con prácticamente todas las fijaciones tisulares y tiñe todas las
estructuras del tejido debido a la acción acidófila de la hematoxilina (colorante básico) y
basófila de la eosina (colorante ácido)

Existen diversos tipos de H-E en función de la hematoxilina y el mordiente utilizado, por lo

que cada laboratorio emplea protocolos diferentes. La hematoxilina de Ehrlich y de
Heidenhain emplean en su protocolo la oxidación natural al exponer la hematoxilina al aire.
En cambio, la hematoxilina de Harris y Mayer requieren un oxidante químico: óxido de
mercurio para Harris y yodato de sodio para Mayer.

En el protocolo de rutina se emplea la hematoxilina de Mayer, que consiste en un método

de tinción progresiva que tiñe únicamente los núcleos y se diferencia posteriormente con
agua corriente.

Preparación de la solución matriz de hematoxilina de mayer

● Alumbre de amonio o potasio 50 g

● Agua destilada 1000 ml
● Cristales de hematoxilina 1g
● Yodato de sodio 0.2 g
● Acido cítrico 1g
● Hidrato de cloral 50 g

PROCEDIMIENTO PARA LA COLORACIÓN DE RUTINA

1- Preparación de la gradilla

Se deben colocar las láminas previamente identificadas con lápiz de diamante en la gradilla,
con la cara que contiene la muestra orientadas en una misma dirección para facilitar la
tinción.

2- Desparafinado o Aclaramiento

● Xilol durante 5 min o 50 deeps.

● Xilol durante 5 min o 50 deeps.

3- Hidratación: serie de alcoholes decrecientes

● Alcohol al 100% durante 3 min o 30 deeps.

● Alcohol al 95% durante 3 min o 30 deeps.
● Alcohol al 80% durante 3 min o 30 deeps.
● Agua destilada.
4- Tinción nuclear

● Solución de hematoxilina de Mayer de 2 a 6 min.

5- Diferenciación

● Lavar en agua corriente

Para acelerar la diferenciación se puede emplear agua tibia.

6- Coloración citoplasmática o de contraste

● Eosina de 2 a 3 deeps.

7- Deshidratar: serie de alcoholes crecientes.

● Alcohol 80% durante 3 min o 30 deeps.

● Alcohol 95% durante 3 min o 30 deeps.
● Alcohol 100% durante 3 min o 30 deeps.

8- Aclaramiento

● Xilol durante 5 min o 50 deeps.

● Xilol durante 5 min o 50 deeps.

ÁREA DE MONTAJE

El paso final en la preparación de una lámina histológica es el montaje. Consiste en cubrir la

sección de tejido, previamente coloreado, con una laminilla cubreobjetos, empleando para
ello una sustancia capaz de conservar y proteger la muestra a través del tiempo, así como
facilitar su observación al microscopio, denominada medio de montaje. Los medios de
montaje son de tres tipos, resinas naturales, resinas sintéticas (las más utilizadas en el
procesamiento de rutina) y los medios acuosos. Estos últimos se emplean cuando la
coloración o estructuras a observar se pueden alterar o perder durante el procesamiento o
fijación.

Materiales a utilizar

● Medio de montaje previamente diluido (en xilol en caso de las resinas

sintéticas)
● Laminillas cubreobjetos
● Gasas
● Pinzas
● Aplicador
● Contenedor con xilol para limpiar el exceso de resina y muestra (se puede
utilizar el de la batería de coloración)

PROCEDIMIENTO PARA EL MONTAJE

La colocación de la laminilla cubreobjetos requiere una técnica cuidadosa para evitar la
formación de artefactos que dificultan la observación de la muestra.

1. Limpiar el exceso de xilol en la parte posterior de lámina con una gasa.

2. Eliminar los fragmentos de tejidos sobrantes, dañados o mal posicionados en la
lámina portaobjetos, empleando una gasa humedecida xilol.
3. Elegir una laminilla cubreobjetos de tamaño adecuado según el tamaño de la
sección de tejido.
4. Colocar una gota de resina diluida sobre la sección de tejido.
5. Extender la laminilla, dejando caer la misma desde un extremo para expulsar el aire
atrapado.
6. En caso de que se generen burbujas se puede aplicar algo de presión sobre la
laminilla con una pinza o aplicador, expulsando el aire a los extremos de la lámina.

ANEXOS