DETERMINACIÓN DE ACETAMINOFÉN EN UN FÁRMACO POR

ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ULTRAVIOLETA

Marcelo Echeverry (1640126)1, Zulma Moari Martínez (1643929)2
stiven.echeverry@correounivalle.edu.co1, zulma.moari@correounivalle.edu.co2
Departamento de Química – Universidad del Valle.

Resumen: Se trabajó con una muestra de medicamento (acetaminofén), donde se determinó el contenido de
acetaminofén por espectrofotometría de absorción ultravioleta evaluando dos métodos analíticos para su
determinación, patrón externo y adición de estándar. En los dos métodos se empleó un espectrofotómetro UV-
1700 Pharma Spec de doble haz marca Shimadzu, el cual se programó en una la longitud de onda máxima de
absorción de 243.0 nm donde se realizó las medidas absorciométricas de las soluciones estándar. En el primer
método se utilizó acetaminofén grado analítico para preparar una solución patrón de (200.0 ± 1.0) mg/L,
posteriormente se preparó 5 soluciones estándar de distintas concentraciones a las cuales se les realizó el análisis,
se obtuvo una concentración de acetaminofén en la muestra de 490.0 ± 27,3 mg con un error relativo de 2,0 %.
En el segundo método se preparó 5 soluciones estándar, donde se adicionó igual volumen de la muestra y diferente
volumen de solución patrón a los estándares, se obtuvo una concentración de acetaminofén en la muestra de 1.8
± 10.9 mg con un error relativo del 99,6 %.

DATOS CÁLCULOS Y RESULTADOS

Solución Patrón de acetaminofén 𝑆𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛 = 1.0

Para preparar la solución patrón, donde se pesó en
una balanza analítica 0.0200 g de acetaminofén
analítico posteriormente se adicionó 5.00 mL de
metanol grado espectroscópico y se llevó a un matraz
de 100.0 mL, se realizó el cálculo para determinar la
concentración de la solución patrón de acetaminofén.
[𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛] = (200.0 ± 1.0) 𝑚𝑔/𝐿
Curva de calibración por el método patrón
externo.
Preparación de soluciones Estándar.

0.0200 𝑔 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛 1000 𝑚𝐿 Se realizó el cálculo del volumen teórico necesario

∗ = 200
100 𝑚𝐿 1𝐿 de la solución patrón, para preparar 5 soluciones
estándar en matraz de 25.00 mL con concentraciones
𝑚𝑔 de 4.00, 8.00, 12.00, 16.00 y 24.00 mg/L,
200 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛
𝐿
Teniendo en cuenta las desviaciones de los factores Estándar 1 concentración 4.00 ppm
implicados en la determinación de la concentración
de la solución patrón, se procedió a realizar el cálculo 4.00 𝑚𝑔 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛
para su respectiva desviación, se utilizó ecuación 1. 25.00 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 ×
1000 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛
1000 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 𝑝𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛
×
𝑺[𝒚] 𝑺𝒂 𝟐 𝑺𝒃 𝟐 𝑺𝒄 𝟐 200.0 𝑚𝑔 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛
= √ ( ) + ( ) + ( ) 𝑬𝒄𝒖. 𝟏
[𝒚] 𝒂 𝒃 𝒄 = 0.500 𝑚𝐿

0.500 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛

2 2
𝑆 0.0001 0.1
= √( ) + ( ) De manera análoga se calculó el volumen necesario
[200] 0.0200 100.0
de solución patrón para las soluciones restantes. Los
resultados se muestran en la columna 3 de la Tabla 1.
Tabla 1. Datos teóricos del volumen necesario de Preparación del blanco
solución patrón para soluciones estándar, método
patrón externo. A un matraz aforado de 10.0 mL, se adicionaron
C. Acetaminofén Volumen de sln 0.500 mL de metanol grado espectroscópico, se
Estándar Teórica patrón Teórico enraso con agua destilada, seguidamente de esta
(mg/L) (mL) disolución se tomó una alícuota de 3.00 mL, se llevó
1 4,00 ± 0,05 0,500 ± 0,005 a un matraz de 50.00 mL y se enraso con agua
destilada.
2 8,00 ± 0,06 1,00± 0,005
3 12,00 ± 0,08 1,50± 0,0015 Longitud de onda máxima absorción
4 16,0 ± 0,1 2,00 ± 0,01 Para las medidas absorciométricas y trazado de la
5 3,00 ± 0,01 curva espectral ultravioleta, se utilizó un
24,0 ± 0,1
espectrofotómetro UV-1700 Pharma Spec marca
Shimadzu equipo de doble haz, donde se realizó el
Preparación de las muestras barrido espectral a la solución de acetaminofén con
la concentración de 12,00 mg/L en el rango de 200 y
Muestra solida 700 nm, para determinar la longitud de onda en la
que se observa máxima absorción.
Se pesó en balanza analítica una tableta de la muestra Al representar la absorbancia en función de la
del medicamento acetaminofén; que reporta un longitud de onda, se obtuvo una gráfica en forma de
contenido de 500 mg de acetaminofén por tableta, curva, donde el punto más alto de absorbancia
posteriormente se pulverizaron y se realizó el cálculo corresponde a la longitud de onda máxima de
para conocer la cantidad de muestra en 23.1 mg de absorción que es 243.0 nm, tal como se muestra en el
tableta pesada. Gráfico 1.
500 𝑚𝑔 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛
23,1 𝑚𝑔 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎 ×
561.4 𝑚𝑔 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎

muestra = 18,97 ± 0.09 mg acetaminofen

Tabla 2. Datos teóricos y reales de para la muestra

de pastilla de acetaminofén.
Tableta Peso (mg) ±0.1
1 568.3
2 554.4
Promedio 561.4
Muestra (tableta) 23.1 Figura 1. Barrido de absorción recibida por el
Muestra (acetaminofén) 18,97 ± 0.09 analito

Determinación espectrofotométrica
Disolución de la muestra
Seguidamente, se ajustó el espectrofotómetro en la
Una vez se obtuvieron las cantidades se pasaron a
longitud de onda máxima de absorción 243.0 nm,
matraces de 100.0 mL, se adicionaron 5.00 mL de
después se midió la absorbancia para cada estándar
metanol grado espectroscópico y se enrasaron con
donde se estableció el 0.000 de absorbancia con el
agua destilada (solución 1), de esta disolución se
blanco. Los valores obtenidos experimentalmente en
tomaron alícuotas de 3.00 mL, se transfirieron a
la medición de absorbancia a cada estándar y la
matraces de 50.00 mL y se enraso con agua destilada
muestra se encuentran tabulados en la Tabla 3.
(solución 2).
Tabla 3. Datos experimentales, medición de
absorbancia en la solución estándares y la muestra 𝑡𝑐𝑟í𝑡𝑖𝑐𝑜 = 3.18
por patrón externo.
Estándar Concentración Absorbancia 5. 𝐷𝑒𝑠𝑖𝑐𝑖ó𝑛:
(mg/L) (A)
𝑠𝑖 𝑡𝑐𝑎𝑙𝑐𝑢𝑙𝑎𝑑𝑜 > 𝑡𝑐𝑟í𝑡𝑖𝑐𝑜 → 𝑅𝑒𝑐ℎ𝑎𝑧𝑜 𝐻0
1 4,00 ± 0,05 0,244 𝑠𝑖 24,6 > 3.18
2 8,00 ± 0,06 0,518
3 12,00 ± 0,08 0,798 6. 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑙𝑢𝑠𝑖ó𝑛:
4 16,0 ± 0,1 1,102 Existe una fuerte relación lineal entre la señal
5 24,0 ± 0,1 1,535 analítica y la concentración. El método es lineal.
Muestra --- 0.835 Partiendo de este análisis se procedió a realizar los
datos estadísticos.

Con estos datos se realizó la siguiente gráfica: Datos estadísticos; Método mínimos cuadrados

1.6 Sxx = Σ(xi − x̅)2 𝑬𝒄𝒖. 𝟐

1.4 y = 0.0652x + 0.0045
Syy = Σ(yi − y̅)2 𝑬𝒄𝒖. 𝟑
Absorbancia (A)

1.2 R² = 0.9953
1
Sxy = Σ(xi − x̅ )(yi − y̅ ) 𝑬𝒄𝒖. 𝟒
0.8
0.6
a = y̅ − bx̅ 𝑬𝒄𝒖. 𝟓
0.4
0.2
0 1 x̅ 2
Sa = SR√ + 𝑬𝒄𝒖. 𝟔
3 8 13 18
Concentracion (mg/L)
23 n Sxx

Sxy
Figura 2. Curva de calibración de las soluciones b= 𝑬𝒄𝒖. 𝟕
Sxx
estándar de acetaminofén por el método patrón
SR
externo. Sb = 𝑬𝒄𝒖. 𝟖
√Sxx
Se realizó una prueba t para determinar la
confiabilidad del índice de correlación “r” de la ΣSyy − b 2 Sxx
regresión lineal de los datos. SR = √ 𝑬𝒄𝒖. 𝟗
n−2
Prueba t para evaluar r.
𝐼𝐶𝑏 = 𝑏 ± 𝑡( 𝑡 = 𝑛 − 2) ∗ 𝑆𝑏 𝑬𝒄𝒖. 𝟏𝟎
1. Hipótesis nula H0 : si r = 0 no hay correlación
𝐼𝐶𝑎 = 𝑎 ± 𝑡( 𝑡 = 𝑛 − 2) ∗ 𝑆𝑎 𝑬𝒄𝒖. 𝟏𝟏
0.9976 = 0
En la tabla 4 se resumen los datos obtenidos.
2. 𝐻𝑖𝑝ó𝑡𝑒𝑟𝑠𝑖𝑠 𝑎𝑙𝑡𝑒𝑟𝑛𝑎 𝐻1 : r ≠ 0 hay correlación
Tabla 4. Datos estadísticos de la regresión lineal
0.9976 ≠ 0
curva de calibración por el método adición estándar.
|𝑟| ∗ √𝑛 − 2 |0.9976| ∗ √3 𝑥̅ 12.8
3. 𝑡𝑐𝑎𝑙𝑐𝑢𝑙𝑎𝑑𝑜 = = 𝑦̅ 0.8394
√1 − 𝑟 2 √1 − (0.9976)2
Sxx 236.8
𝑡𝑐𝑎𝑙𝑐𝑢𝑙𝑎𝑑𝑜 = 24,6 Syy 1.012
Sxy 15.44
4. 𝑡𝑐𝑟í𝑡𝑖𝑐𝑜 = 𝑝𝑎𝑟𝑎 (3) 𝑔𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑙𝑖𝑏𝑒𝑟𝑡𝑎𝑑 a 0.0446
 Sa 0.0376 𝟐
𝑺𝒓 𝟏 𝟏 𝒚𝟎 − 𝒚 𝟏
b 0.0652 𝑺𝑪𝒙𝟎 = × √ + + ( ) 𝑬𝒄𝒖. 𝟏𝟒
Sb 0.0026 𝒃 𝒏 𝒎 𝒃 𝑺𝒙𝒙
R 0.9976
R2 0.9953 0.04
𝑆𝐶𝑥0 =
SR 0.04 0.0652
ICa 0.0446 ± 0.12
ICb 0.0652 ± 8.2× 10−3 1 0.835 − 0.84 2 1
×√ +1+( )
Muestra 5 0.0652 236.8
xo 12.12
Sxo 0.67
𝑆𝐶𝑥0 = 0.67
I.C 12.2 ± 2.13
L.D 1.73 El intervalo de confianza al 95% de confianza con
L.C 5.7 t=3.18, se calculó con la ecuación 15.
A partir del método de mínimos cuadrados se halló 𝑰𝑪 = 𝑪𝒙𝟎 ± 𝒕( 𝒕 = 𝒏 − 𝟐) ∗ 𝑺𝑪𝒙𝟎 𝑬𝒄𝒖. 𝟏𝟓
la ecuación de la recta por el método de patrón
externo. 𝐼𝐶 = (12.2 ± 2.13) 𝑚𝑔/𝐿 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛
𝑦 ± 𝑆𝑟 = (𝑏 ± 𝑆𝑏 )𝑥0 + (𝑎 ± 𝑆𝑎 ) 𝑬𝒄𝒖. 𝟏𝟐 Determinación de la concentración de
acetaminofén en la muestra expresado en mg de
Determinación de la concentración de acetaminofén por tableta.
acetaminofén en la muestra por el método de
patrón externo. A partir de la concentración de acetaminofén en la
muestra 12.2 mg/L, se determinó la concentración de
Teniendo en cuenta la ecuación de la curva de acetaminofén en la muestra expresado en mg de
calibración por el método de patrón externo y valor acetaminofén por tableta, calculándose su
de la absorbancia obtenido en la muestra, se calculó incertidumbre según la ecuación 1.
la concentración de acetaminofén mg/L en la muestra
y su desviación estándar se utilizó ecuación 13 y 14. 12.1 𝑚𝑔 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛 50.00 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 2
×
1000 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 2 3.00 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 1
𝑨 = (0.0652 ± 0.002) 𝒎𝒈/𝑳−𝟏 (𝒙𝟎 ) 100.0 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 1 561,4 𝑚𝑔
+ (0.0446 ± 0.0376) × ×
23,1 𝑚𝑔 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎 1 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎
= 490.0 𝑚𝑔 𝐴𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓𝑒𝑛
/ 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎
Donde (A) es el valor de la señal en la muestra
(absorbancia=0.835), (𝐶𝑥0 ) es la concentración del
[𝐴𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛]
analito en mg/L, despejando (𝐶𝑥0 ) se tiene la
concentración de acetaminofén en la dilución. = 490,0
± 27,3 𝑚𝑔 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓𝑒𝑛
𝑨 − (𝒂) Para determinar el porcentaje de error en la
𝑪𝒙𝟎 = 𝑬𝒄𝒖. 𝟏𝟑
𝒃 concentración de acetaminofén en la muestra por el
método patrón externo, se tomó como valor teórico
0.835 − (0.0446) el reportado por la etiqueta de la tableta (muestra) de
𝐶𝑥0 = = 12.12
0.0652 𝑚𝑔/𝐿−1 500 mg acetaminofén/ tableta, se utilizó la ecuación
16.
𝐶𝑥0 = 12,1 𝑚𝑔/𝐿
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑡𝑒𝑜𝑟𝑖𝑐𝑜 − 𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟𝑒𝑥𝑝.
La desviación estándar de la concentración del %𝐸 = × 100
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑡𝑒𝑜𝑟𝑖𝑐𝑜
analito en la muestra (𝑆𝐶𝑥0 ) se calculó con la
ecuación 14. Ec.16.
 500 − 490,0 Curva de calibración por método adición
%𝐸 = × 100
500 estándar.

Preparación de soluciones Estándar.

% 𝐸 𝑝𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛 𝑒𝑥. = 2,0 % 𝑚𝑔 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛
Estándar 2
Límite de detección (LD) Método patrón externo
𝑽𝟏 ∗ 𝑪𝟏 = 𝑽𝟐 ∗ 𝑪𝟐 𝑬𝒄𝒖. 𝟏𝟗
Para determinar la mínima concentración de
acetaminofén que produce la señal analítica (0.50 ± 0.005)𝑚𝐿 ∗ 200 𝑚𝑔/𝐿
𝐶1 =
significativamente diferente a la señal del blanco, se (25.00 ± 0.03)𝑚𝐿
utilizó la ecuación 17. = 4.00 ± 0.05 𝑚𝑔/𝐿

Se realizó de forma equivalente el cálculo para las

(𝑦𝐵 + 3𝑆𝑎 ) − 𝑎 soluciones estándar restantes. Los resultados se
𝐿𝐷 = 𝐸𝑐𝑢. 17
𝑚 muestran en la columna 2 de la Tabla 5.

Donde (𝑦𝐵 ) es la señal del blanco (intercepto) (𝑆𝑎 ) Tabla 5. Datos experimentales las concentraciones,
es la desviación del intercepto, (𝑎) es el intercepto método adición estándar.
de la pendiente y (𝑚) es la pendiente de la recta. Se C. Volumen sln
remplazó por los valores de la (ecuación 12) curva de Estándar Experimental patrón. (mL)
calibración por el método de patrón externo en la (mg/L)
ecuación 18. 1 0.00 0.00

(0.0446 + 3(0.0376) − (0.0446) 2 4,00 ± 0,05 0,500 ± 0,005

𝐿𝐷 =
0.0652 (𝑚𝑔/𝐿)−1 3 8,00± 0,06 1,000 ± 0,005
𝑚𝑔 4 16,0 ± 0,1 2,00 ± 0,01
𝐿𝐷 = 1.73 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛
𝐿 5 24,0 ± 0,1 3,00 ± 0,01
Límite de cuantificación (LC) Método patrón
externo Determinación espectrofotométrica

Se determinó la mínima concentración de Posteriormente se realizó las medidas

acetaminofén que puede ser cuantificada con absorciométricas en el espectrofotómetro UV-1700
precisión, se utilizó ecuación 18. Pharma Spec marca Shimadzu. Los valores
obtenidos experimentalmente en la medición de
(𝑦𝐵 + 10𝑆𝑎 ) − 𝑎 absorbancia a cada estándar por el método de adición
𝐿𝐶 = 𝐸𝑐𝑢. 18 estándar se encuentran tabulados en la Tabla 7.
𝑚

Se remplazó por los valores de la (ecuación 12) curva Tabla 6. Datos experimentales, medición de
de calibración por el método de patrón externo en la absorbancia solución estándares y la muestra por
ecuación 18. adición estándar.
Estándar Concentración Absorbancia
(0.0446 + 10(0.0376) − (0.0446) (mg/L) (A)
𝐿𝐶 = ± 0.001
0.0652 (𝑚𝑔/𝐿)−1
1 0.00 0.012
𝐿𝐶 = 5.7 𝑚𝑔/𝐿 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛 2 4,00 ± 0,05 0.266
3 8,00± 0,06 0.521
 4 16,0 ± 0,1
5 24,0 ± 0,1
Al graficar Absorbancia (A) en función de la
concentración (mg/L), se obtuvo una línea recta,
como se muestra en el Gráfico 3.
1.086 Existe una fuerte relación lineal entre la señal
analítica y la concentración. El método es lineal.
1.535 Partiendo de este análisis se procedió a realizar los
datos estadísticos.
Se determinaron los datos de mínimos cuadrados
utilizando las ecuaciones de la 2 a la 12.

1.5 Tabla 7. Datos estadísticos de la regresión lineal

y = 0.0643x + 0.0149 curva de calibración por el método adición
Absorbancia (a)

R² = 0.9984
1 estándar.

0.5
𝑥̅ 10.4
𝑦̅ 0.684
0 Sxx 371.2
0 5 10 15 20 25 Syy 1.538682
Concentracion (mg/l) Sxy 23.88
a 0.0149
Grafica 3. Curva de calibración por método de Sa 0.01997
adición estándar en el rango de 0.0 a 24.0 ppm de b 0.0643
acetaminofén. Sb 0.00148
R 0.9992
Se realizó una prueba t para determinar la R2 0.9984
confiabilidad del índice de correlación “r” de la SR 0.03
regresión lineal de los datos. ICa 0.015±0.063
ICb 0.0643±4.7× 10−3
Prueba t para evaluar r Muestra
xo 0.233
1. Hipótesis nula H0 : si r = 0 no hay correlación Sxo 0.514
I.C 0.233 ±1.634
0.9992 = 0 L.D 0.93
2. 𝐻𝑖𝑝ó𝑡𝑒𝑟𝑠𝑖𝑠 𝑎𝑙𝑡𝑒𝑟𝑛𝑎 𝐻1 : r ≠ 0 hay correlación L.C 3.10

0.9992 ≠ 0 A partir del método de los mínimos cuadrados, se

|𝑟| × √𝑛 − 2 |0.9992| × √3 determina la ecuación de la recta, utilizando la
3. 𝑡𝑐𝑎𝑙𝑐𝑢𝑙𝑎𝑑𝑜 = = ecuación 12.
√1 − 𝑟 2 √1 − (0.9992)2
A ± 0.03 = (0.0643 ± 0.00148)ppm¯¹ (x0 )
𝑡𝑐𝑎𝑙𝑐𝑢𝑙𝑎𝑑𝑜 = 43,2
+ (0.015 ± 0.01997)
4. 𝑡𝑐𝑟í𝑡𝑖𝑐𝑜 = 𝑝𝑎𝑟𝑎 (𝑛 − 2) 𝑔𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑙𝑖𝑏𝑒𝑟𝑡𝑎𝑑
Para determinar la concentración de acetaminofén en
la muestra por el método de adición estándar, se
𝑡𝑐𝑟í𝑡𝑖𝑐𝑜 = 3.18
realiza extrapolación de la señal en el blanco (y =
0,012).
5. 𝐷𝑒𝑠𝑖𝑐𝑖ó𝑛:
𝑠𝑖 𝑡𝑐𝑎𝑙𝑐𝑢𝑙𝑎𝑑𝑜 43,2 > 𝑡𝑐𝑟í𝑡𝑖𝑐𝑜 → 𝑅𝑒𝑐ℎ𝑎𝑧𝑜 𝐻0 Por lo tanto:
𝑠𝑖 43,2 > 3.18 0,012 = 𝑏𝐶𝑥 + 𝑎

6. 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑙𝑢𝑠𝑖ó𝑛: Se despeja Cx (Concentración de Acetaminofén):

 |a − 0,012| Resultados
𝐶𝑥 = 𝑬𝒄𝒖. 𝟐𝟎
|b|
Se hizo una prueba f seguida de una prueba t para
0.0149 − 0,012 determinar si las pendientes de las curvas de la
𝐶𝑥 = | | = 0.0467 𝑝𝑝𝑚
0.0643 determinación del analito difieren
significativamente.
2
𝑆𝑟 1 𝑦0 − 𝑦 1
𝑆𝐶𝑥0 = × √ + ( ) 𝑬𝒄𝒖. 𝟐𝟏 1. Hipótesis nula H0 : 𝑆𝑏1 ≠ 𝑆𝑏2
𝑏 𝑛 𝑏 𝑆𝑥𝑥
2. 𝐻𝑖𝑝ó𝑡𝑒𝑟𝑠𝑖𝑠 𝑎𝑙𝑡𝑒𝑟𝑛𝑎 𝐻1 : 𝑆𝑏1 ≈ 𝑆𝑏2
0.04 1 0.835 − 0.84 2 1
𝑆𝐶𝑥0 = × √ +( ) 𝑆 2
0.0652 5 0.0652 236.8 𝐹 = (𝑆1 ) ; 𝑆1 > 𝑆2 Ecu. 22.
2

𝑆𝐶𝑥0 = 0,27 0,0026 2

𝐹=( ) = 3,1
0,00148
0.0466 𝑚𝑔 𝑎𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛 50.00 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 2 𝐹𝑐𝑟𝑖𝑡 (4 𝑔𝑑𝑙 𝑎𝑙 95%) = 9,60
× 𝐹𝑐𝑎𝑙 (3,1) < 𝐹𝑐𝑟𝑖𝑡(9,60)
1000 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 2 3.00 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 1
100.0 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 1 561,4 𝑚𝑔
× ×
23,1 𝑚𝑔 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎 1 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎 Por lo tanto, se rechaza H0 y se acoge H1, las
= 1,8 𝑚𝑔 𝐴𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓𝑒𝑛 / 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎 desviaciones de las pendientes sí son
significativamente diferentes, se prosigue con una
Se determinó la desviación de la concentración de prueba t donde se consideren las desviaciones de
acetaminofén, utilizando la ecuación 1. ambos métodos.

[Acetaminofén] = 1.8 ± 10.9 mg Hipótesis nula H0 : 𝑏1 ≠ 𝑏2

𝐻𝑖𝑝ó𝑡𝑒𝑟𝑠𝑖𝑠 𝑎𝑙𝑡𝑒𝑟𝑛𝑎 𝐻1 : 𝑏1 ≈ 𝑏2
Utilizando la ecuación 16, se determinó el porcentaje
de error.
500 − 1,8 |0,00145 − 0,0026|
%Error = × 100 = 99,6% 𝑡=
500
√(0,00146) + (0,0026)
2 2
5 5
Intervalo de Confianza (IC) 𝑡𝑐𝑎𝑙 = 0,9
𝑡𝑐𝑟𝑖𝑡(4 𝑔𝑑𝑙 95%) = 2,78
Se utilizó la ecuación 15 para determinar el IC. 𝑡𝑐𝑎𝑙(0,9) < 𝑡𝑐𝑟𝑖𝑡(2,78)

IC = (0.233 ± 1.634) mg acetaminofen Se rechaza H0 y se acoge H1, por lo tanto, sí existe

Límite de Detección (Adición Estándar)
Utilizando la ecuación 17, se determinó el Límite de
Detección (LD).
LD = 0.93 ppm 𝐴𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛
diferencia significativa entre los dos métodos.
En la tabla 8, se muestran los resultados obtenidos en
la determinación experimental de acetaminofén en la
muestra de tabletas, por espectrofotometría de UV-
Vis, mediante los métodos de patrón externo y
adición estándar.

Límite de Cuantificación (Adición Estándar)

Utilizando la ecuación 18, se determinó el Límite de
Cuantificación (LC).

𝐿𝐶 = 3.10 𝑝𝑝𝑚 𝐴𝑐𝑒𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑜𝑓é𝑛

Tabla 8. Resultados Experimentales de
concentración, porcentaje de error, LD y LC de
acetaminofén en muestra por espectrofotometría de
UV-Vis, mediante dos métodos.
Método Concentració Erro LD LC
n r (ppm (ppm
(mg) % ) )
Patrón 490.0 ± 27,3 2.0 1.73 5.7
Externo
Adición 1.8 ± 10.9 99.6 0.93 3.10
estánda
r espectrofotómetro para luego medir la absorbancia
ANÁLISIS DE RESULTADOS
El proceso de absorción de una molécula o átomo de
la radiación ultravioleta se considera de dos pasos, en
el primero la radiación llega a la molécula y los
electrones, específicamente los que hacen parte de
los enlaces π, realizan transiciones energéticas de
tipo π - π* ó n - π*, estos tipos de enlaces son
encontrados con mucha frecuencia en moléculas
orgánicas, en este caso, se trabajó analizando la
molécula del acetaminofén que presenta enlaces
C=O y C=C que absorben en la región del UV, a este
tipo de enlaces se les suele llamar cromoforos. [1]
Figura 4. Estructura del acetaminofén.
El principio de funcionamiento de los
espectrofotómetros de doble haz, radica en que el
rayo de luz que parte desde una fuente como una
lámpara de deuterio o wolframio, se divide mediante
cortador reflectante, pasando una estas divisiones por
la llama y la otra rodeándola, realizando una función
de haz de referencia, luego de volverse a unir después
con la intervención de un espejo semiplateado hasta
llegar a un monocromador, pasando por un tubo
fotomultiplicador hacia el amplificador de la relación
entre la referencia y la señal de la muestra, que es
registrada en el dispositivo de lectura
Figura 5. Instrumento de doble haz.
Estos instrumentos tienen muchas ventajas, la
principal de es que no debemos ajustar a cero el
del analito, debido a que el blanco (referencia) está
en paralelo, es decir que no se requiere remover el
blanco para cada medida, además, el doble haz
compensa las posibles fluctuaciones y cambios de
intensidad de la radiación de la fuente. [1]
Con respecto a los resultados se obtuvo una
concentración determinada de 490,0 ± 27,3 mg y 1.8
± 10.9 mg con errores relativos según la etiqueta del
producto de 2,0 % y 99,6 % para los métodos de
patrón externo y adición de estándar
respectivamente. Es evidente que el método de
patrón externo arrojo un resultado aceptable en
términos generales, aun así, como se puede apreciar
en la tabla 8, su incertidumbre como los límites de
detección y cuantificación son más grandes
comparados con el método de adición de estándar,
debido que este método es mucho más sensible y
cualquier alteración en el momento de preparar los
estándares hacer las mediciones pudo alterar el
resultado, también al usar ley de beer se requiere
manejar las curvas en rangos donde la linealidad sea
la mejor, lo que no ocurre a concentraciones muy
altas o muy bajas (por lo regular a medidas de
absorbancia A ˂ 0,6 como las registradas en la tabla
6) [2]. En general los métodos de extrapolación
(adición de estándar) son menos precisos que los
métodos de interpolación (patrón externo), pero vale
la pena resaltar que sí se obtuvieron LD y LC
relativamente bajos característicos de este método.
[3]
Finalmente, se hizo un análisis de las pendientes de
las dos curvas por medio de una prueba t, donde se
determinó que estás difieren significativamente una
de la otra, probablemente debido a efectos de matriz,
y teniendo en cuenta a que fue más aceptable el
método de patrón externo, se comprueba que en
algún momento del análisis por medio de adición de
estándar hubo alguna alteración.
CONCLUSIONES
- Se encontraron resultados aceptables por el
método de adición de estándar,
encontrándose una concentran cercana al
reportando en la etiqueta.
- Los métodos de extrapolación (adición de
estándar) son más sensibles y menos precisos
que los de interpolación (patrón externo).
- Se comprobó la efectividad para determinar
la concentración de un producto farmacéutico
usando un espectrofotómetro UV.
REFERENCIAS
[1] Skoog, D. A., Holler, F. J., & Nieman, T. A.
(2008). Principios de análisis instrumental. Pág. 336
– 396.
[2] Harris, D. C. (2007). Análisis químico
cuantitativo. Reverté. Pág. 565.
[3] Miller, J. N., & Miller, J. C. (2002). Estadística y
quimiometría para química analítica. Pearson
Educación, Pág. 103