ABSORCIÓN ATÓMICA Y FOTOMETRÍA DE LLAMA

Fotometría de Llama:
Es una técnica espectroscópica que mide la radiación emitida por la muestra, generalmente de metales
alcalinos.
En los laboratorios clínicos se usa principalmente para determinar: sodio, potasio y litio.

Absorción Atómica:
Es un método espectrofotométrico que mide la absorción de luz por una muestra atómica, generalmente de
metales. Analito en forma atómica
En los laboratorios clínicos se usa para determinar: calcio, magnesio, cobre, zinc, plomo, mercurio, entre
otros.

Diferencia: Que en fotometría de llama se mide la radiación emitida por parte de los átomos en estado
gaseoso y en absorción atómica se mide la absorción de la luz producida por parte de los átomos.

Los aparatos de Absorción Atómica están formados generalmente por:

1. Lámpara de cátodo hueco
2. Sistema denominado Chopper: genera luz intermitente, por tener una parte solida y una hueca
3. Quemador de premezcla: En la llama ocurre el proceso de atomización, aquí las moléculas se
transforman en estado atómico, para que esos átomos después puedan absorber esa radiación
proveniente de la lampara
4. Monocromador: Selecciona la radiación que absorba la luz
5. Detector: registra la cantidad de luz absorbida, solo la luz intermitente
6. Sistema de registro.

También hay instrumentos que no tienen Chopper, el quemador no es de premezcla sino de consumo total y
el selector de radiación es con filtros (vidrio o interferencia) en lugar de un monocromador.
Aquí se selecciona la longitud de onda de mayor absorbancia

El método: consiste en inyectar la muestra que contiene los elementos iónicos (generalmente iones metálicos)
para analizar en una llama, donde ocurre la transformación de estos elementos iónicos a metales en estado
gaseoso. Se hace incidir sobre la llama la luz específica de la lámpara de cátodo hueco y los átomos en
estado gaseoso absorben está radiación.

La absorción es proporcional a la concentración: A = -log P = bC , donde:

Po
“Po” es la potencia de la lámpara inicial sin la muestra, es decir, con el blanco del análisis, “P” es la potencia

de la lámpara después de la absorción por la muestra, es el coeficiente de extinción molar del elemento
metálico, “b” es el camino óptico de la luz de la lámpara donde está la muestra (en este caso es el ancho de la
llama) y “C” es la concentración del elemento metálico que se analiza. Los conceptos de la relación de la
absorbancia con la concentración son iguales que en Espectrofotometría Molecular, y también se maneja el
término de Transmitancia
(A = 2 – log %T).

Instrumentos en Fotometría de Llama: Contienen las mismas partes que un aparato de absorción atómica,
solo que no poseen lámpara de cátodo hueco, ni el sistema de Chopper.
 Aquí se absorbe la radiación emitida por la llama, no por la lampara porque no tiene, entonces esa
radiación va incidir a cierta longitud de onda y el selector seleccionara la de mayor emisión para separarla de
la luz visible.
El método: consiste en inyectar la muestra que contiene los elementos iónicos (metales) para analizar en una
llama, donde ocurre la transformación de estos elementos iónicos a metales en estado gaseoso. La radiación
de la misma llama excita a estos elementos metálicos en estado gaseoso y luego se produce la desactivación
con la consecuente emisión de una radiación específica que se mide en el sistema de registro. La radiación
emitida por la muestra (Ie: intensidad de luz emitida) es proporcional a la concentración del elemento metálico
que se analiza:
Ie = kC, en donde “k” es una constante de proporcionalidad característica para cada elemento

Absorción Atómica
Determinación de la absorción por la muestra
Para determinar la absorbancia de una muestra por el método de absorción atómica se procede de la
siguiente forma:
1- Se succiona el blanco hacia la llama. La lámpara de cátodo hueco envía una radiación específica que
incide sobre la llama. La luz que sale después de la llama es la sumatoria de la luz de la lámpara que
el blanco no absorbe más la luz de la propia llama que abarca todo el rango del visible (luz blanca).
2- El monocromador selecciona la longitud de onda programada para realizar el análisis. La luz que
emerge del monocromador corresponde a la radiación seleccionada (en el ejemplo 660 nm) de la
lámpara que el blanco no absorbió más la radiación seleccionada de 660 nm de la llama. Es evidente
que la luz de la llama representa un inconveniente en la medida de absorbancia, ya que constituye una
radiación semejante a una luz parásita que puede variar durante las medidas. Por esa razón, se
adiciona en el sistema un dispositivo denominado “Chopper”.
3- A su vez, el sistema de registro está diseñado para detectar solo la radiación intermitente procedente
de la lámpara y no la radiación continua de la llama. De esta forma, con el blanco succionado hacia la
llama se ajusta el cero de absorbancia correspondiente solamente a la radiación de la lámpara a 660
nm que el blanco no absorbe (Po).
4- Una vez ajustado el cero de absorbancia con el blanco, se succiona la muestra hacia la llama y se
produce la absorción correspondiente, e igualmente la luz que emerge del monocromador es la
sumatoria de la luz de la llama más la luz de la lámpara que la muestra no absorbió. La luz continua de
la llama no se registra, solo se mide la luz intermitente de la lámpara, que en este caso sería la
radiación no absorbida por la muestra, es decir “P”.
Chopper:
El Chopper es un disco giratorio con orificios, de tal manera que en su superficie hay zonas huecas y zonas
sólidas. Al incidir la luz de la lámpara de cátodo hueco sobre el Chopper, el cual se encuentra girando
continuamente, produce el efecto de una radiación intermitente que sale del mismo, producto del choque de la
luz con las zonas huecas y sólidas en su superficie. Este dispositivo en las medidas de absorbancia por
absorción atómica, permite diferenciar la luz de la lámpara (discontinua) de la luz de la llama que es continua,
ya que el sistema de registro en los instrumentos está diseñado para medir solamente la radiación
discontinua, de esta forma se evita la interferencia de la luz de la llama.
También, hay aparatos de absorción atómica que no poseen Chopper. En estos instrumentos se registra la luz
de la lámpara más la de la llama. El ajuste a cero de absorbancia con el blanco permite eliminar la luz de la
llama en las medidas, sin embargo, ello implica que la luz de la llama debe permanecer constante sin
fluctuaciones durante el análisis, cosa que en la mayoría de los casos no ocurre. Con el Chopper, no importa
que haya pequeñas variaciones de la luz de la llama durante las medidas, puesto que no se registra. Por lo
tanto, con el dispositivo se obtienen medidas más exactas.
Las lámparas siempre son del mismo elemento que se quiere analizar, ejemplo, si vas a analizar cobre la
lampara debe ser de cobre, porque ella va a emitir una radiación o un espectro con todas las longitudes de
onda y va a absorber en la región con mayor intensidad, se coloca el selector posterior a la llama porque la
llama emite radiación y esta radiación tenemos que eliminarla, es decir, el selector corrige.

Fotometría de Llama
Determinación de la intensidad de emisión de la muestra

Para medir una muestra por fotometría de Llama se procede de la siguiente manera:
1- Se succiona el blanco hacia la llama. La luz que se encuentra después de la llama corresponde a la
radiación propia de la llama y a cualquier radiación emitida por el blanco.
2- En el monocromador se selecciona la longitud de onda correspondiente al análisis. La luz que emerge
del monocromador corresponde a la radiación seleccionada de la llama, la radiación emitida por el
blanco (si la hay). Bajo estas condiciones se ajusta a cero de emisión.
3- - Se coloca la muestra y se mide la luz emitida. La radiación de la llama más el blanco se ajustó a cero
en el paso anterior, por lo tanto, la luz de emisión medida corresponde solo a la muestra.

¿Cómo se corrige la emisión producida por la llama, para diferenciarla de la emisión producida por la
muestra? en fotometría de llama: Se ajusta a 0 la radiación de la llama más el blanco.

Espectros de Absorción y Emisión en

Absorción Atómica y Fotometría de Llama
Absorción atómica:
1- En absorción atómica los espectros son de líneas
2- Espectros de absorción = Espectros de emisión
3- En un análisis por Absorción Atómica es necesario conocer el espectro de absorción del elemento que
se analiza para elegir la longitud de onda de máxima absorción en el monocromador.
4- La característica que presentan los espectros de absorción de los elementos atómicos en estado
gaseoso (en la llama se encuentran en estado gaseoso) es que son en forma de líneas, es decir, las
absorciones ocurren a determinadas longitudes de onda y son específicas para cada elemento.
5- Los espectros tienen esa característica debido a que en el estado gaseoso no hay niveles
vibracionales en los diferentes niveles electrónicos.
6- Por lo tanto, para átomos en estado gaseoso, la promoción de electrones a niveles superiores de
energía por la absorción de la radiación de la lámpara de cátodo hueco está limitada solamente a los
niveles electrónicos y hay menos posibilidades que en el caso de que estuvieran presentes los niveles
vibracionales.
7- Por esa razón, las absorciones se observan solamente a determinadas longitudes de onda específicas
8- Naturalmente, que, si hay alguna interferencia a la longitud de onda elegida, se escoge otra longitud de
onda para el análisis.

Fotometría en llama:
1- Para realizar un análisis por Fotometría de Llama es necesario conocer el espectro de emisión del
elemento que se determina, para elegir la longitud de onda de máxima emisión en el monocromador y
tener la mayor sensibilidad en el análisis.
2- Naturalmente, que, si hay alguna interferencia a la longitud de onda elegida, se escoge otra longitud de
onda para el análisis.
3- Además de lo expuesto, se observa que el espectro de emisión es igual al espectro de absorción, y
eso es otra característica de los elementos en estado gaseoso y al hecho de que no hay niveles
vibracionales. Por lo tanto, basta conocer el espectro de absorción de un determinado elemento en
estado gaseoso para saber cómo es su espectro de emisión, o viceversa.
Los espectros de absorción y emisión son iguales para elementos atómicos en estado gaseoso. Al no existir
niveles vibracionales en los niveles electrónicos, los espectros son de líneas y no de bandas, ya que hay
menos posibilidades de promoción de electrones a niveles superiores de energía.

 Para realizar los análisis por absorción atómica se escoge una longitud de onda donde la muestra
absorba más (que es donde también emite más), o una longitud de onda donde no haya interferencias.

 Para realizar los análisis por fotometría de llama se escoge una longitud de onda donde la muestra
emita más (que es donde también absorbe más), o una  donde no haya interferencias.

Si una muestra x absorbe x longitud de onda ¿dónde la emite?: Emite lo mismo que absorbe. Ejemplo, si
absorbe 400nm, emite 400nm.

Aparatos:

Quemador de premezcla o flujo laminar

 Los quemadores de premezcla en Absorción Atómica o Fotometría de Llama son una parte importante
de los equipos y contienen una cámara con aspas en su interior que permite la mezcla de la solución
de la muestra con el oxidante (comburente) y el combustible hasta formar una especie de neblina que
es inyectada hacia la cabeza del quemador. Este proceso llamado nebulización de la muestra permite
que la misma entre de manera homogénea en la llama y se evitan pérdidas de cierta cantidad de
volumen. La muestra es succionada a presión junto con el oxidante y combustible formándose una
especie de neblina que evita la formación de gotas grandes y pérdidas por depósito en la parte inferior
de la cámara.

 La temperatura de la llama es importante para lograr la atomización de la muestra. Dependiendo del

tipo de muestra se aplican diferentes temperaturas. Las diferentes temperaturas se logran con la
combinación de distintos combustibles con oxidantes (comburentes).

 También es importante la velocidad de inyección hacia el quemador de la mezcla y por esa razón los
instrumentos tienen sistemas de regulación de la velocidad, así como también, sistemas de seguridad
ya que algunas de las mezclas son peligrosas.

 Hay instrumentos que contienen un “quemador de consumo total” en lugar de un quemador de

premezcla. Este tipo de quemador no realiza el proceso de nebulización, sino la inyección directa de la
muestra a la llama. Presentan el inconveniente de sufrir obstrucción en la entrada de la muestra a la
llama, justamente por la formación de gotas grandes que son depositadas en el orificio de salida,
además de la ya mencionada pérdida de muestra en el análisis.

Lámpara de cátodo hueco en Absorción Atómica

 En Absorción Atómica se emplea una lámpara especial denominada de cátodo hueco.

 La lámpara está constituida por un cátodo que es igual al elemento que se analiza, es decir, si la
muestra es de sodio, el cátodo de la lámpara es de sodio, si la muestra es de cobre, el cátodo de la
lámpara es de cobre, para cada análisis se requiere una lámpara específica.
  Algunos aparatos de Absorción Atómica vienen equipados con varias lámparas lo que aumenta el
costo de los mismos.
 Además del cátodo hay un ánodo de alambre y gas (Neón u Argón) a una presión de 1-5 torr dentro de
un cilindro de vidrio.
 La salida de la luz de la lámpara hacia la llama puede ser equipada con una ventana de cuarzo para
evitar la absorción de las líneas de radiación UV emitidas por algunas lámparas.
 La razón de que el cátodo se encuentre formado por el mismo elemento atómico de la muestra que se
analiza, es que de esta forma se garantiza que el espectro de emisión de la lámpara, correspondiente
a un espectro de emisión atómico en forma de líneas, sea equivalente al espectro de absorción del
elemento que conforma la muestra (para átomos en estado gaseoso el espectro de emisión es igual al
espectro de absorción). Con este sistema es seguro que se está enviando sobre la muestra
exactamente la misma radiación que ella absorbe, y se puede elegir en el monocromador cualquier
longitud de onda donde haya máxima absorción logrando una gran especificidad.

Funcionamiento de la lámpara:
1- La lámpara está rellena de un gas inerte (Ar o Ne). Al aplicar un potencial el gas se excita y se dirige al
cátodo, originando el desprendimiento de átomos del cátodo (sputering)
2- El bombardeo de los átomos por el gas hace que se exciten y al relajarse se producen radiaciones
específicas (hV) en forma de líneas de acuerdo a la naturaleza del elemento que forma el cátodo.

PROCESOS QUE SUFRE LA MUESTRA EN LA LLAMA

La llama tiene tres zonas definidas, donde se llevan a cabo diferentes procesos de la muestra, estas son:
1- Zona de combustión primaria (Evaporación del disolvente): el líquido pasa a sólido, desaparece la
parte liquida del analito.
2- Región interzonal (Atomización y excitación): Pasa a estado gaseoso y estado atómico
3- Zona de combustión secundaria (Procesos de oxidación)

M= Muestra (elemento metálico)

A= Anión

Procesos de la muestra en la llama:

(Liquido)

Las muestras analizadas por Absorción Atómica o Fotometría de Llama deben estar en solución, de tal forma
que los átomos de la muestra se encuentran en forma de iones.
 1- La nebulización: ocurre en el quemador de premezcla antes de entrar la muestra a la llama, transforma
el líquido en aerosol
2- La desolvatación: implica la evaporación del disolvente que rodea a los iones en la solución pasando
entonces al estado sólido. Este proceso ocurre en la zona de combustión primaria.
Posteriormente, en la zona interzonal se produce:
3- La fusión (paso de sólido a líquido)
4- La vaporización (paso de líquido a gas)
5- La atomización (paso de la molécula gaseosa, MA, a átomos en estado gaseoso, M(g) + A(g) ). Este
último proceso implica reacciones de óxido-reducción facilitadas por los compuestos formados en la
combustión del combustible-oxidante.

Una vez obtenido los átomos en estado gaseoso de la muestra (M(g)), pueden sufrir diferentes procesos
dependiendo del método aplicado:
 En Absorción Atómica:
 La mayor parte de los átomos (M(g)) absorben radiación de la lámpara con energía igual a hV,
pasando a un estado excitado (M*(g)) debido a la promoción de electrones a niveles electrónicos
superiores de energía.
 Estos átomos excitados pasan al estado fundamental nuevamente (M(g)) al perder la energía de
excitación en forma de radiación equivalente a la de absorción (hV), cuando los electrones regresan al
nivel electrónico fundamental.
 El parámetro que se mide es la disminución de la radiación de la lámpara debido a la absorción de la
muestra.

 En Fotometría de Llama:
 Ocurre el mismo proceso que en Absorción Atómica: excitación de los átomos gaseosos (M*(g)) por
absorción de la radiación (E=hV), pero en este caso, de la llama.
 Los átomos excitados pierden la energía en forma de radiación (hV) al regresar los electrones al nivel
electrónico fundamental.
 El parámetro que se mide en este caso es la radiación emitida.
 Entre las dos técnicas la Absorción Atómica es más sensible que la Fotometría de Llama, ya que la luz
de la lámpara de cátodo hueco tiene la capacidad de excitar mayor número de átomos que la radiación
de la llama.
 Un proceso indeseable tanto en Absorción Atómica como en Fotometría de Llama es que los átomos
formados en el proceso de atomización (M(g)) sufran excitación por la llama y un segundo proceso
donde ocurre ionización ((M+(g)) con pérdida de electrones.
 Esta reacción disminuye el número de átomos en la llama en estado libre (M(g)) y por lo tanto,
disminuye el reactante en las reacciones de absorción tanto en Absorción Atómica como en Fotometría
de Llama.
 Es importante entonces controlar la temperatura de la llama (altas temperaturas favorecen la
ionización) y aplicar métodos correctivos que se explican más adelante (agregar un supresor de
ionización en los ensayos).

Errores en Absorción Atómica y Fotometría de Llama

Las tres primeras interferencias son comunes para Absorción Atómica y Fotometría de Llama. La última es
diferente para ambos métodos.
  Interferencia de matriz
 Interferencia química
 Interferencia por ionización
 Interferencia por absorción de fondo en Absorción Atómica y por por radiación de fondo
en Fotometría de Llama.

Interferencia de matriz:
En el proceso de nebulización. Diferencia de viscosidad entre muestra y patrones. Si la muestra es
más viscosa que los patrones habrá menos átomos en estado gaseoso disponibles para la absorción o
emisión ya que hay mayor dificultad en la nebulización. La concentración de la muestra daría más baja del
valor real.
Se corrige:
a) Agregando un compuesto que aumente la viscosidad de los patrones (glicerol) o que disminuya la
viscosidad de la muestra (alcohol)
b) Con adición de estándar en absorción atómica, o adición de estándar interno en fotometría de llama.

Error en Absorción Atómica: Am más baja porque hay menos átomos en la llama, por lo tanto, Cm será más
baja del valor real.

Error en Fotometría de Llama: Im más baja porque hay menos átomos en la llama, por lo tanto, Cm será más
baja del valor real.

Interferencia química:
Ocurre en el proceso de atomización, cuando MA no se separa para dar los átomos libres (M(g)), o
cuando hay algún componente (X) en la muestra que forme un compuesto estable (MX) con dicha muestra. El
resultado es que hay menos átomos libres para absorber o emitir radiación,
Se corrige:
a) Agregando un compuesto (Z) que reaccione con “A” o “X” y deje libre a M(g)
MA + Z  M(g) + AZ; MX + Z  M(g) + XZ
b) Aumentando la temperatura de la llama para romper los enlaces entre “M” y “A” o “M” y “X”.
c) Con adición de estándar en absorción atómica, o adición de estándar interno en fotometría de llama.

Error en Absorción Atómica: Am más baja porque hay menos átomos en la llama, por lo tanto, Cm será más
baja del valor real.

Error en Fotometría de Llama: Im más baja porque hay menos átomos en la llama, por lo tanto, Cm será más
baja del valor real.

Un ejemplo típico de esta interferencia es la determinación de calcio en suero. En el suero hay grandes
cantidades de fosfato y se forma un compuesto muy estable con el calcio en la llama de Ca3(PO4)2 , que
impide que se produzca la atomización del calcio (Ca(g)). Para evitar la interferencia del fosfato se añade a la
muestra cloruro de lantano (LaCl3), el cual atrapa el fosfato dejando libre al calcio: Ca3(PO4)2 + La+3 
LaPO4 + Ca+2   Ca(g), y facilitando de esta manera que se forme el calcio atómico en la llama.
Otra forma de corregir la interferencia sería aumentando la temperatura de la llama para romper el enlace
entre el calcio y el fosfato, o con adición de estándar.
La determinación de magnesio en suero sufre la misma interferencia que el calcio.
Interferencia por ionización:
Ocurre cuando la temperatura de la llama excita a los átomos libres (M(g)) y luego con la misma
temperatura de la llama se produce la ionización de M(g)*, formándose M(g)+ y electrones que se
desprenden. El resultado es que disminuyen los átomos libres (M(g)) para absorber o emitir radiación.
Se corrige:
a) Agregando un supresor de ionización. Un compuesto “X” que se ionice fácilmente e inhiba la ionización
de la muestra.
M(g)* > M(g)+ + e-; X > X+ + e- (la ionización de “X” aumenta el número de “e-“en la llama y
desplaza la reacción de ionización de la muestra hacia los reactantes, es decir, hacia M(g)* y M(g)
b) Con adición de estándar en absorción atómica, o adición de estándar interno en fotometría de llama.

Error en Absorción Atómica: Am más baja porque hay menos átomos en la llama, por lo tanto, Cm será más
baja del valor real.

Error en Fotometría de Llama: Im más baja porque hay menos átomos en la llama, por lo tanto, Cm será más
baja del valor real.

Interferencia por absorción de fondo en absorción atómica:

Ocurre cuando hay materiales moleculares en la muestra (ZX) que absorben en forma de banda e
incluyen la  del analito, o se forman partículas sólidas en la llama con el interferente que dispersan la
radiación.
Se corrige:
a) Midiendo la absorbancia del interferente y restándosela a la absorbancia de la muestra. Hay equipos
que poseen un sistema para efectuar dicha corrección.
b) A veces se puede corregir dicha interferencia cambiando la longitud de onda.
c) Con adición de estándar no se corrige esta interferencia de fondo.

Error si no se corrige la absorción de fondo: Am más alta porque hay un interferente que absorbe e incluye la
longitud de onda del analito, o porque dispersa la luz, por lo tanto, Cm será más alta del valor real.

La interferencia por absorción de fondo, no incluye la absorción de la luz de la lámpara por compuestos
moleculares de la propia llama, ya que dicha interferencia se corrige ajustando a cero de absorbancia con el
blanco.

Interferencia por radiación de fondo en fotometría de llama:

Ocurre cuando hay compuestos en la muestra (X) que emiten radiación en la misma zona del analito.
Se corrige:
a) Midiendo la radiación emitida del interferente y restándosela a la radiación de la muestra.
b) Se puede corregir dicha interferencia cambiando la longitud de onda de emisión del analito.
c) Con adición de estándar interno no se corrige esta interferencia de radiación de fondo.

Error si no se corrige la radiación de fondo:

Im más alta porque hay un interferente que emite radiación en la longitud de onda del analito, por lo tanto, Cm
será más alta del valor real
La interferferencia por radiación de fondo, no incluye la radiación emitida por la propia llama, ya que dicha
interferencia se corrige ajustando a cero de intensidad de emisión con el blanco
La llama también emite radiación, pero no representa mayor problema ya que se puede corregir cuando se
ajusta a cero de emisión con el blanco, es decir, que la emisión de la llama a la longitud de onda del análisis
se puede considerar como la emisión junto con el blanco.
 Adición de estándar en Absorción Atómica
Esta técnica es común aplicarla con un solo patrón o también con varios patrones para realizar la curva de
calibración, debido a que se corrigen los errores por interferencia de matriz, por interferencia química y por
ionización (como ya se explicó).

Las interferencias de matriz, químicas y por ionización afectan al número de átomos disponibles en la
llama para la absorción de la luz de la lámpara, es decir, afectan la absorbancia de la muestra (Am). Cuando
la muestra se mezcla con el patrón, la absorbancia de la mezcla (Amezcla) se encuentra afectada de la misma
forma, por lo tanto, al efectuar la relación Am/Amezcla se cancelan los errores mencionados.