Microbiología clínica “IES Federico Mayor Zaragoza” Curso 2018-2019

PRÁCTICA nº14: PRUEBA BIOQUÍMICA DEL ROJO METILO

1. OBJETIVO.

Esta práctica tiene por objeto aprender a realizar esta prueba bioquímica para
ver si las bacterias realizan la fermentación ácido-mixta de los hidratos de
carbono produciéndose ácidos estables fuertes, como productos finales, como
consecuencia de su metabolismo hidrocarbonado.

2. FUNDAMENTO.

Muchas bacterias de la familia de las enterobacteriáceas con importancia

clínica son anaerobios facultativos. Para obtener la energía necesaria para sus
reacciones metabólicas utilizan la fermentación ácido-mixta de los hidratos de
carbono produciéndose ácidos estables fuertes, como productos finales, como:
ácido succínico, ácido acético, etc.

Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de una bacteria de

fermentar la glucosa por la vía ácido-mixta, con producción de ácido. Para
detectar si se han producido esos ácidos se utiliza un indicador de pH, el rojo
de metilo, que actúa cambiando de color de amarillo a rojo cuando se forman
estos ácidos.

3. MATERIAL.

- Asa de siembra.
- Mechero de gas.
- Pipeta Pasteur.
- Papel de filtro.
- Frasco lavador.
- Tubos
- Tapones

4. REACTIVOS.

- Agua destilada estéril.

- MEDIO MR-VP (MEDIO ROJO DE METILO VOGUES PROSKAUER)

5. MUESTRA.

- Cultivo puro del microorganismo problema.

6. TÉCNICA.

⮚ En un tubo de ensayo que contenga medio líquido MR-VP (medio rojo

metilo voges proskauer) se siembra el microorganismo problema, se
deja otro tubo sin inocular que servirá como control negativo.
⮚ Se incuba a 37 ºC durante 24-48 horas

1
Microbiología clínica “IES Federico Mayor Zaragoza” Curso 2018-2019

⮚ Si el medio no lleva el indicador rojo de metilo incorporado (mirar en la

etiqueta) hay que incorporárselo después. Para ello añadir tras la
incubación del medio 0,1 ml. De rojo de metilo al 0.1% (1g. de rojo de
metilo en 1 litro de etanol al 70%, mirar el etanol del laboratorio “alcohol
96º que está al 100%).

7. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

 Rojo de metilo positivo (+): medio rojo.

 Rojo de metilo negativo (-): medio amarillo.

Observaciones:

- No interpretar la prueba si el medio no se ha incubado un mínimo de 48

horas

8. APLICACIONES

Esta fermentación es característica de las siguientes enterobacteriáceas:

Escherichia, Proteus, Yersinia, Salmonella, Sighella, Vibrio.

9. RESULTADOS

Muestra: N.º 3

Color del medio inicial: Amarillo

Color del medio final: Rojo

RM: Positivo

Significado clínico: La bacteria por la via acido – mixta fermenta la glucosa.

Puede ser Escherichia, Proteus, Yersinia, Salmonella, Sighella.

Adjunta foto de los tubos.

2
Microbiología clínica “IES Federico Mayor Zaragoza” Curso 2018-2019