UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA

MOLINA
FACULTAD DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE INGENIERÍA DE ALIMENTOS Y
PRODUCTOS AGROPECUARIOS

TEMA: INFORME 8. Numeración de halófilos y Prueba

de la reductasa
Alumnos:
ÁNGELES SOSA, MARCO
20181311
ANTONIO
NOA GARAGUNDO, LUIS
20181334
FERNANDO

PIZARRO JURADO, ROMINA 20181336

VALER CHACÓN, ROBERT 20170419

Curso: MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

Grupo: “B*”
PROFESORA: RAMOS RAMÍREZ, MIRIAM
Fecha de práctica: 13.09.21
Fecha de entrega: 27.09.21

Lima, 2021
 ÍNDICE

INTRODUCCIÓN 3
OBJETIVO 3
REVISIÓN DE LITERATURA 4
METODOLOGÍA 5
RESULTADOS Y/O CASOS PRÁCTICOS 6
CONCLUSIONES 8
CUESTIONARIO 8
BIBLIOGRAFÍA 9

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1. INTRODUCCIÓN

Los microorganismos halófilos han desarrollado complejos procesos de adaptación

que les han permitido hacer frente a las condiciones ambientales extremas que
caracterizan a los ambientes salinos. Uno de los más importantes mecanismos de
adaptación que han desarrollado estos microorganismos es la acumulación intracelular
de solutos u osmolitos compatibles, y cuya principal característica es la de no
interactuar con el metabolismo celular, por lo que su función es puramente osmótica
(Rodriguez, 1981).

Las bacterias halófilas moderadas crecen óptimamente en un rango de salinidad de 0,5

a 2,5 M; además producen una serie de enzimas hidrolíticas extracelulares tales como:
amilasas, proteasas, lipasas, nucleasas y esterasas (Margesin, 2001).
En los últimos años, el interés por el estudio de estas enzimas se ha incrementado
debido a sus propiedades catalíticas y potencial aplicación industrial en la
formulación de detergentes, elaboración de productos dietéticos, procesamiento de
cuero, papel y alimentos cárnicos; así como también en la síntesis de enantiómeros
puros de fármacos, biodegradación de residuos tóxicos y contaminantes industriales,
entre otros. Actualmente, las industrias requieren procesos tecnológicos eficientes y
limpios, es por ello que el uso de microorganismos aislados de ambientes extremos, o
sus enzimas, constituye una excelente opción para satisfacer esta creciente demanda
del mercado biotecnológico (Sanchez, 2003).

La prueba de la reductasa bacteriana o medición del tiempo de decoloración del azul

de metileno en leche se basa en que cuando se añade una pequeña cantidad de azul de
metileno a la leche y la mezcla se incuba a 37ºC, se produce una decoloración debida
al metabolismo bacteriano.

2. OBJETIVO

Aprender los procedimientos y la interpretación de la presencia de las bacterias

halófilas en los alimentos; así mismo, la aplicación de la prueba de la reductasa en la
inspección sanitaria de los alimentos.

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3. REVISIÓN DE LITERATURA

Bacterias halófilas
Son organismos que necesitan NaCl para poder crecer (Madigan, Martino, Bender y
Stahl, 2015). Se han adaptado bien a condiciones hipertónicas (Prescott; Harley y
Klein, 2002).
Clasificación, según Rosas, (2017):
- No halófilos: crecen a concentraciones de NaCl inferiores a 1% p/v (0.2 M).
- Halófilos débiles: crecen a concentraciones de NaCl entre 1-10% p/v (0.2-0.5
M)
- Halófilos moderados: crecen a concentraciones de NaCl de 10-20% p/v (0.5 –
2.5 M)
- Halófilos extremos: crecen a concentraciones de NaCl mayores del 20% p/v
de NaCl (2.5 – 5.2 M)
Ejemplos, Madigan, (2015):
- No halófilos: Escherichia
- Halotolerantes: Staphylococcus aureus
- Halófilos extremos: Halobacterium salinarum
Mastitis bovina
Es una enfermedad infecto-contagiosa de la glándula mamaria, produciendo
inflamación como respuesta a la invasión, se debe a diferentes tipos de bacterias como
por ejemplo: micoplasmas, hongos, levaduras y hasta algunos virus. La enfermedad
puede se subclínica o clínica, esta última genera alteraciones macroscópicas a la leche
y síntomas palpables de
la ubre. (Instituto Nacional De Tecnología Agropecuaria, s.f)
Microorganismos causantes:
- Mastitis contagiosa: Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus
coagulasa positivo y Mycoplasmas spp.(Andresen, 2001).
- Patógenos comunes del entorno ambiental en que viven las vacas: coliformes,
estreptococos ambientales y estafilococos coagulasa negativos (Andresen,
2001).
- Patógenos no comunes del medio ambiente: Arcanobacterium pyogenes,
Pseudomonas aeruginosa, levaduras, Nocardia asteroides, el alga incolora
Prototheca spp (Andresen, 2001).

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 Prueba de la reducción del azul de metileno
La prueba de la reductasa bacteriana o medición del tiempo de decoloración del azul
de metileno en leche se basa en la decoloración de la mezcla de una pequeña cantidad
de azul de metileno a la leche se incuba a 37ºC, esto se produce debido al
metabolismo bacteriano. La velocidad de cambio de color es directamente
proporcional al número de gérmenes presentes. De esta manera se puede determinar
de manera indirecta la calidad higiénica de la leche. (García, Fuentes y Fernández s.f)

4. METODOLOGÍA

4.1. Prueba de la reductasa o reducción de azul de metileno

5
 4.2. Método del recuento en placas para bacterias halófilas

5. RESULTADOS Y/O CASOS PRÁCTICOS

Video de detección de microorganismos por prueba de azul de metileno

- El método trata de: mezclar 10 ml de leche con 1 ml de azul de metileno, se sella y se

pone a baño maría 36-37°C, se observa el cambio de color en inteervalos de tiempo.
Además el azul de metileno es un colorante para tratar metahemoglobina.
- Análisis de respuesta:
Má rápida la decoloración / más alto contenido de microorganismos
Si se vuelve más blanquecino / bajo contenido de microorganismos
Mayor tiempo de decoloración / buena calidad microbiológica
Menor tiempo de decoloración / mala calidad microbiológica

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Video de diagnóstico para la identificación de casos de mastitis

- Alto recuento de células somáticas se asocia con la pérdida de producción de leche y

también es indicador de la prevalencia de mastitis.
- Se sabe que el 98% de las células somáticas provienen de las células blancas que
ingresaron por las infecciones de la ubres. Si el recuento de células somáticas
>200.000/mL indica la presencia de casos subclínicos. Además es aceptable
100.00/mL; sin embargo, mayores a 500.000/mL indican que 1/3 de las vacas ha sido
infectada y que la pérdida de leche debido a casos subclínicos es mayor al 10%.
- El diagnóstico no revela el tipo de infección ni la identidad de los animales infectados
- Para la determinación de mastitis en vacas individuales se realiza un examen físico en
la ubre. Una mastitis aguda implica cuartos inflamados con temperatura elevada y
dolor al tacto.
- El aspecto de la leche también implica a la identificación de mastitis cuando la leche
posee coloración, descamación y coágulos. Si se presenta este caso se debe remover la
leche sin manchar a la vaca para evitar el contagio con otras vacas
-

Video de cómo prevenir la mastitis en vacas lecheras

- La mastitis es una de las 3 enfermedades más comunes que encontramos en los

tambos. Al afectar la glándula mamaria habrá una menor producción de leche y esta
es de menor calidad.
- Mastitis clínica: tiene signos clínicos evidentes como el cambio de color de la leche o
aparicón de ciertos grumos. Y a partir de las 100 000 células/ml la leche de vaca está
teniendo problemas de mastitis.
- Las vaquillas están mucho menos expuestas a bacterias.La única forma de medir la
cantidad de células somáticas es a través de un análisis de la leche.
- La mastitis es una enfermedad multifactorial.
- Mantener los ambientes por donde está la vaca ayuda a prevenir la vaca.
- Mantener una rutina ordenada de ordeño también ayuda a prevenir la mastitis.
- Dependiendo de la bacteria se le aplicará el procedimiento para tratar la mastitis.

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6. CONCLUSIONES

Se determinó los procedimientos y la interpretación de las bacterias halófilas en los

alimentos haciendo uso de la prueba de la reductasa o reducción de azul de metileno
en muestra de leche, para después realizar el recuento de bacterias halófilas por
placas. Haciendo uso del agar de Gibbons e incubando a 37.5 °C
.
7. CUESTIONARIO
a. ¿Cuál es la razón fundamental de la haloficidad de algunas bacterias? Explique.
La razón fundamental de la haloficidad de algunas bacterias es que tiene afinidad por
NaCl y esto hace que no puedan crecer y proliferar en medios que no sean ricos en sal
(Fica, 2007). El requerimiento de sodio es específico e independiente de una función
osmótica, dado que es difícilmente reemplazado por cantidades equimoleculares de
otros cationes monovalentes (García, 2000).
b. ¿Cuál es el fundamento de la bioquímica de la prueba de la decoloración azul de
metileno?
La prueba de decoloración azul de metileno indica la variación del potencial de oxido
- reducción de la leche que se presenta por los cambios de color del colorante que
depende de la actividad reductora de los microorganismos y sustancias reductoras de
la leche que en el proceso de respiración eliminan el oxígeno disuelto en la leche y el
colorante se reduce hasta que se elimina totalmente (Zambrano y Grass, 2008).
c. Detalle las características de la haloficidad del Vibrio cholerae.
Según Gil (2005):
● Vibrio cholerae es un bacilo Gram (-)
● Posee un único flagelo polar, no esporulado
● Anaerobio facultativo
● Reductor de nitratos y fermentador de glucosa
● Oxidasa positiva y presenta motilidad
● Puede crecer en presencia de sodio por lo que se denomina halófilo
● Sensible a pH bajos
● Rango de temperatura entre 16°C - 42°C

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8. BIBLIOGRAFÍA

● Andresen S, Hans. (2001). Mastitis: prevención y Control. Revista de

Investigaciones Veterinarias del Perú, 12(2), 55-64. Recuperado en 26 de

septiembre de 2021, de http://www.scielo.org.pe/scielo.php?

script=sci_arttext&pid=S1609-91172001000200010&lng=es&tlng=es.

● Fica, A. (2007). Infecciones por Vibrio parahaemolyticus. Revista Biomédica

Revisada Por Pares, 7(9). https://doi.org/10.5867/medwave.2007.09.2544

● García, I. (2000). Diagnóstico de las infecciones humanas causadas por

especies halófilas del género Vibrio. Servicio de Microbiología. Hospital de

Getafe.

https://www.seimc.org/contenidos/ccs/revisionestematicas/bacteriologia/vibrio

.pdf

● García M., E., Fuentes L., A. y Fernández S., I. (s.f). Determinación de la

calidad higiénica de la leche mediante la medición indirecta del tiempo de

reducción del azul de metileno o prueba de la reductasa microbiana.

Universidad Politécnica de Valencia. España.

● Gil, N. (2005). Importancia de Vibrio cholerae y otros Vibrio como causantes

de ETA’s. Tesis para la obtención del título de Microbiología en Alimentos e

Industria. Programa de microbiología. Departamento de ciencias biológicas.

Facultad de ciencias. Universidad de los Andes. Bogotá, Colombia.

https://repositorio.uniandes.edu.co/bitstream/handle/1992/22562/u270767.

pdf

● Instituto Nacional De Tecnología Agropecuaria. (s.f). La mastitis bovina y su

impacto sobre la calidad de la leche.

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● Madigan, M.T, Martino, J.M, Bender, K.S y Stahl, D.A (2015) BROCK:

Biología de los microorganismos. 14 edición. PEARSON EDUCACIÓN, S.A

● Margesin R, Schinner F. Potential of halotolerant and halophilic

microorganisms for biotechnology. Extremophiles 2001; 5(2): 73-83.

● Prescott, L.M.; Harley, J.P. y Klein, D.A., (2002). Microbiología. 5 edición,

McGRAW-HILL-INTERAMERICANA, España.

● Rodriguez-Valera F, Ruiz-Berraquero F, RamosCormenzana A. Characteristic

of the heterotropic bacterial population in hypersaline enviroments of different

salt concentrations. Microb Ecol 1981; 7(3): 235-43.

● Rosas R., J.R. (2017). “Identificación de bacterias halófilas tolerantes a

metales pesados” (tesis de grado). Universidad Autónoma del Estado de

México.

● Sánchez-Porro C, Martín S, Mellado E, Ventosa A. Diversity of moderately

halophilic bacteria producing extracellular hydrolytic enzymes. J Appl

Microbiol 2003; 94(2): 295-300

● Zambrano, J. y Grass, J. (2008). Valoración de la calidad higiénica de la leche

cruda en la asociación de productores de leche de Sotará - Asproleso,

mediante las pruebas indirectas de resazurina y azul de metileno. Volumen 6,

número 2. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad del Cauca.

http://www.scielo.org.co/pdf/bsaa/v6n2/v6n2a08.pdf

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