Universidad Politécnica del Valle de Toluca

Ingeniería en Biotecnología

Ingeniería en Biorreactores

Reporte parcial
“Aislamiento de rhodotorula mucilaginosa”

Unidad 2

Equipo 5

Docente
Aníbal Mérida Reyes

19 de mayo de 2023
 DATOS GENERALES DE LA PRÁCTICA DE LABORATORIO

Asignatura: INGENIERIA DE BIORREACTORES

Cuatrimestre: 6°

Número de práctica: 1

Nombre de la práctica: “AISLAMIENTO DE RHODOTORULA MUCILAGINOSA

EN DISTINTOS

MEDIOS DE CULTIVO”
Nombre del docente: ANIBAL URIEL REYES MERIDA
INTRODUCCIÓN

Los pigmentos carotenoides presentes en algunos géneros de levaduras confieren

colores característicos a las colonias y protección contra efectos dañinos de la
radiación UV. La identificación de especies basada en criterios de morfología está
fuertemente influenciada por las condiciones de cultivo por lo que, en la actualidad,
es complementada con datos obtenidos por técnicas de biología molecular, que se
fundamentan en el análisis de fragmentos de las moléculas de ácidos nucleicos, con
particular énfasis en la comparación de secuencias de ADNr.

Levaduras productoras de carotenoides pertenecientes a los géneros Rhodotorula,

Rhodosporidium, Sporobolomyces, Sporidiobolus y la especie Phaffia rhodozyma
han sido estudiadas en otros trabajos similares, las cuales se caracterizan por
asimilar un amplio espectro de fuentes de carbono. Los géneros Rhodosporidium y

Sporidiobolus, son productores de carotenoides como: caroteno, -caroteno,

toruleno y torularodina.

Mientras que, Phaffiarhodozyma ha sido utilizada industrialmente en la producción

de astaxantina. Este pigmento es utilizado en la avicultura para la alimentación de
gallinas de postura y pollos de engorde para mejorar el color de la yema de huevo
y la piel de pollo; además, en la acuacultura se utiliza como pigmento de carne, piel
o exoesqueleto en salmónidos y crustáceos.

Estas levaduras pueden ser aisladas de ambientes naturales ya que presentan una
amplia distribución, y son capaces de colonizar múltiples sustratos naturales y
artificiales.

Además, presentan capacidad de adaptación a ambientes extremos como glaciares

y ambientes ácidos.
OBJETIVOS

GENERAL:

• Aislar la levadura Rhodotorula mucilaginosa productora de

pigmento.

ESPECÍFICOS:

• Aislar la levadura de las distintas muestras seleccionadas.

● Estriar para obtener colonias aisladas de levaduras con pigmentos.

● Identificar en qué medio de cultivo fue óptimo para el desarrollo y crecimiento de

la levadura.

● Reconocer que colores de pigmentos fueron producidos por la levadura.

JUSTIFICACIÓN

Los carotenoides son pigmentos terpenoides de cuarenta átomos de Carbono. Son

colorantes naturales y se encuentran en alimentos pigmentados, como zanahoria,
betabel, espinacas, verdolaga, papaya, calabaza, entre otros. La función más
importante de los carotenoides en las levaduras es la protección contra la
combinación dañina del oxígeno y la luz visible o UV. Su acción consiste en
desactivar los radicales libres que se producen durante el metabolismo normal de
las células, tales como el oxígeno, hidroxilo (OH-), peróxidos y otros oxidantes
mediante un proceso en el que se transfiere energía de altos niveles de excitación
a un triplete de la molécula de caroteno, el cual puede regresar a su estado basal
liberando calor.

Figura 1: Estructura química de carotenos. Fuente: Biomed Central

Rhodotorula mucilaginosa forma parte del género Rhodotorula, que pertenece al

grupo de los hongos levaduriformes. Es un simbionte natural de la piel y del tracto
respiratorio. Se caracteriza por la producción de pigmentos carotenoides, que
confieren una coloración rojiza o rosada a las colonias.
La presente práctica tiene como finalidad el aislamiento y obtención de pigmentos
carotenoides mediante el crecimiento de Rhodotorula mucilaginosa en diferentes
medios de cultivo para posterior aislamiento y crecimiento, esto con el fin de conocer
que medio permitió el crecimiento total o parcial y la fuente de su obtención.

Figura 2: Caja petri con colonias de Rhodotorula mucilaginosa. Fuente: Marine Drugs.
MARCO REFERENCIAL

1. Pigmento natural

Sustancia utilizada como aditivo para recuperar su color, perdido tras un procesado
industrial, para acentuar el color original o para dotarlo de un color más atractivo.
Los pigmentos son naturales, si son extraídos de una sustancia vegetal, animal o
mineral, o sintéticos, si son productos modificados química o físicamente.

TIPOS DE PIGMENTOS NATURALES

Existen dos tipos de pigmentos naturales: orgánicos e inorgánicos. Los pigmentos

orgánicos provienen de plantas y animales. Los pigmentos inorgánicos se elaboran
con tierras y minerales. Según su origen tienen diferentes métodos de extracción.

2. Carotenoides

Los carotenoides son pigmentos naturales que se encuentran en plantas, algas y

algunos microorganismos.

Estos compuestos son conocidos por sus propiedades antioxidantes y por

proporcionar colores amarillos, naranjas y rojos a los alimentos y productos
naturales.

Clasificación de los carotenoides

Entre los colorantes de origen natural se encuentran los carotenoides, una clase de
pigmentos con coloraciones que oscilan entre el amarillo y el rojo. En esta
clasificación se encuentran los carotenos como el β-caroteno, α-caroteno, toruleno,
torularhodina y licopeno, y las xantofilas como la luteína, la zeaxantina, la
capsantina y la astaxantina.

3. Medios de cultivo

Los medios de cultivo son mezclas de sustancias que promueven el crecimiento y

diferenciación de los microorganismos. Estos medios contienen nutrientes, fuentes
de energía, minerales etc.

Se pueden clasificar de diferentes maneras como son por su consistencia (sólidos,

líquidos, semisólidos), su origen (naturales, sintéticos, semisintéticos), su
formulación (definidos químicamente, complejos), su preparación, su utilización y
por su estado.

4. Rhodotorula

Es una levadura ambiental común que se encuentra en el aire, el suelo, los

lagos, el agua del océano, la leche y el jugo de frutas. Rhodotorula produce
colonias de color rosa a rojo y blastoconidios que son unicelulares sin
pseudohifas ni hifas.

R. mucilaginosa se aísla comúnmente de alimentos y bebidas. Varios estudios han

informado la presencia de R. mucilaginosa en maní, sidra de manzana, cerezas,
frutas frescas, jugos de frutas, queso, salchichas, moluscos comestibles y
crustáceos.

Aunque el consumo de alimentos contaminados con levadura puede no tener un

papel directo en la causa de infecciones oportunistas, existe una creciente
preocupación de que los alimentos puedan ser una fuente subestimada de
patógenos ambientales.

5. Levadura

Son hongos unicelulares, muy pequeños, que, para poder observarlos en detalle,
necesitamos de un microscopio. Estos microorganismos son muy abundantes en la
naturaleza y se encuentran tanto en el suelo, en las plantas (semillas, frutas, flores,
etc.), como en el intestino de los animales. Se alimentan de azúcares de los que
obtienen energía durante el proceso de fermentación (que explicaremos a
continuación).

6. Microbiota

La microbiota es el conjunto de bacterias que colonizan la piel, el aparato digestivo,

incluida la boca, y el aparato genital. La microbiota se va desarrollando a medida
que avanza la vida, de forma que su composición es diferente en la infancia y
adolescencia que en la vida adulta.

Tipos de microbiota

- Microbiota oral
La puedes ubicar en nariz (rino), boca y garganta (laringo) y oídos (oto), de ahí
su nombre. Sabiendo qué partes impacta esta microbiota, cabe destacar que su
desequilibrio lo puedes notar en enfermedades de dientes (caries), encías,
lengua, del oído (infección) y vías nasales.

- Microbiota Pulmonar

Este microorganismo determina el entorno, es decir: el clima, zona geográfica,

medio en el que vives y si tienes contacto con animales domésticos, entre otros. Se
ubica en las vías respiratorias inferiores como los pulmones y los bronquios.

- Microbiota Cutánea

La ubicas en la composición y recubierta de tu piel. Tiene tres funciones clave: ser

una barrera física, química e inmune. Tu edad, sexo, genes, pH, entorno y estilo de
vida, determinan la “personalidad” de esta microbiota. Algunas de las enfermedades
que te indican un desequilibrio en este elemento es la presencia de acné, dermatitis
atópica, entre otros.

- Microbiota Intestinal
Su correcto funcionamiento depende de tus hábitos alimenticios (cantidad de
azúcares, grasas y fibra), el estilo de vida, el consumo de medicamentos y ciertas
enfermedades.

- Microbiota Urinaria

Actualmente se sabe que está compuesta principalmente por lactobacilos (bacterias

que viven en tu sistema digestivo, urinario y genital). Tiene una estrecha relación
porque su desequilibrio puede verse afectado por bacterias de origen intestinal.
Esto, a su vez, se refleja en enfermedades como infecciones urinarias o de próstata,
entre otras.

- Microbiota Vaginal

Su composición depende de factores como tus genes, origen étnico, si has estado
embarazada, menopausia, medio ambiente y hábitos de higiene, e incluso de tu vida
sexual. Su tarea principal es defender a tu cuerpo de infecciones vaginales y
asegurar un entorno favorable para el embarazo.
MATERIAL, EQUIPOS Y REACTIVOS
Material que debe traer el estudiante:

Guantes Cubrebocas kn95 bata careta

Calculadora Cerillo o Regla lápiz

encendedor

Marcador permanente punto fino Pañuelos Material necesario

desechables para práctica
de creación de
medios
de cultivo e
inoculacion.
 DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Preparación de soluciones

Para preparar la solución de HCl 0,1 M o 0,1 N se disuelven 3, 64 g de HCl

en 1 litro de agua destilada. Si partimos de HCl de riqueza 37% y densidad 1,19,
hemos de disolver 9, 8 g/l u 8, 2 ml/l. Como preparamos 500 ml tomaríamos la
mitad, es decir, 4,9 g o 4,11 ml.

Para preparar 500 mL de una solución 0,1 N se necesitan 2 gramos de NaOH

en 500 ml de agua, lo cual da como resultado una solución de 0.1 molar.

Preparación del material de vidrio y medios de cultivo

1. Lavar en forma respectiva el material de vidrio y enjuagar con abundante

agua corriente.

2. Escurrir el exceso de agua y enjuagar el material con agua destilada. Dejar

escurrir el material sobre una toalla o papel de envolver.

3. Preparar Agar Nutritivo en un matraz Erlenmeyer de 250 mL y ajustar el pH

a 6.5-7.0 con un potenciómetro, agregando con una pipeta Pasteur poco a
poco solución de HCl 0.1M o solución de NaOH 0.1M en caso de que el pH
sea más alcalino o ácido respectivamente.

4. Calentar el medio en una parrilla con agitación constante hasta ebullición

(cuidar que no se proyecte).

5. Preparar el medio de cultivo PDA en un matraz Erlenmeyer de 250 mL,

ajustar el pH del medio a 5.6. Colocar un agitador magnético y calentar hasta
ebullición, cuidando que no se proyecte o derrame.

NOTA: ¡Cuidar que no se derrame!

 Esterilización de materiales y medios de cultivo
1. Las cajas Petri y pipetas envueltas con papel estraza se colocarán en un
autoclave a 150ºC. Después de sacarlas, dejar enfriar y abrir los paquetes
únicamente en área aséptica (cerca del mechero).

2. Los medios de cultivo se esterilizarán en autoclave.

Vertido de los medios en cajas Petri y solidificación.

1. Enfriar los medios de cultivo de los matraces hasta una temperatura

aproximada de 45-50°C, que coincide con la posibilidad de sostener el matraz
en la palma de la mano sin quemarse.

2. Limpiar la mesa con solución de alcohol al 70% (v/v), encender mecheros y

colocarlos a una distancia de 50 cm. Verter entre 15 y 20/mL de cada uno de
los medios en tres cajas Petri en esta zona aséptica. Dejar que los medios
solidifiquen.

3. Posteriormente realizar el estriado en la placa, con las muestras:

 Plátano
Betabel
Mango
Micro biothaumana

CÁLCULOS, TABLAS Y GRÁFICOS RESULTANTES DE LA PRÁCTICA

Se preparo el dio de cultivo:

• Agar Nutritivo

• Agar papa dextrosa

Se prepararon 75 mililitros de cada medio

Cálculos

Agar nutritivo Agar papa dextrosa

Son 23 gramos por cada litro de agua
Por lo tanto se pesaron
1.725 gramos para los
75 mililitros requeridos.
Son 39 gramos por cada litro de
agua
Por lo tanto se pesaron 2.92
gramos para los 75 mililitros
requeridos.
El pH inicial del agar nutritivo fue de 6. 86 y se mantuvo en 7.0
El pH inicial del agar papa dextrosa fue de 7.0 y se mantuvo en 7.0

RESULTADOS

Obtuvimos el medio de cultivo, agar nutritivo y agar papa dextrosa, los cuales por
cuestiones de tiempo no se vaciaron en cajas Petri, y se quedaron el almacén del
laboratorio.
REFERENCIAS

Giron, G., Funes, L. (2013). Obtención de alcohol etílico por medio de fermentación
alcohólica de Musa paradisíaca (plátano) utilizando como microorganismo productor
Saccharomyces cerevisiae (levadura) (tesis de pregrado).

Universidad del Salvador, El Salvador • Morones, J., Alvarado, V., Flores, O., Menchaca,
D., Villarreal, J., & Cantú, M. (2015). Colorantes y pigmentos microbianos en la belleza
cosmética. Revista digital Universitaria, 16(4), 1-8.

Reyes, I., Pérez, L., Morffi, M., & Barletta, J. (2015). Aislamiento de Rhodotorula.
Presentación de un caso en paciente con leucemia mieloide aguda. Medisur, 11(5), 542-54