Microbiología Pesquera

Guía de Practica

PRACTICA Nº 5

FACTORES DEL CRECIMIENTO Y MUERTE DE LOS MICROORGANISMOS

Logro del aprendizaje

Reconoce la influencia de factores en el crecimiento y muerte de los
microorganismos para el control de las actividades microbianas.
I. Efecto de la Temperatura
II. Efecto del Potencial Redox
III. Efecto del pH.
IV. Efecto de la Luz Ultravioleta

1. Efecto de la Temperatura

La temperatura es uno de los factores ambientales más importantes que

influyen en el crecimiento y supervivencia de los microorganismos.
Las bacterias pueden clasificarse de acuerdo a la temperatura necesaria
para su crecimiento

TEMPERATURAS DE CRECIMIENTO DE LAS BACTERIAS

BACTERIAS TEMPERATURA (ºC) DE CRECIMIENTO

MINIMAS OPTIMAS MAXIMAS
Psicrófilas 0 - 5 15 - 20 30
Mesófilas 10 - 25 30 - 40 35 - 50
Termófilas 25 - 45 50 - 55 70 - 90
Fuente: FAO ,1993

PROCEDIMIENTO

Ing. Nancy Martinez Ordinola -1-

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EFECTO DE LA TEMPERATURA
1.1. Materiales
 Seis tubos conteniendo cada uno 2 ml. de cultivo de una cepa de 24
horas.
 Seis placas estériles
 Matras conteniendo Agar nutritivo fundido
 pipetas
 baño maría
1.2 Pasos a Seguir:
Enumerar tubos y placas del 1 al 6
 Del tubo n° 1 tomar 0.5 ml. de cultivo y colocarlo en la placa n° 1;
Agregar aproximadamente 12 ml. de Agar Fundido (45°C), mezclar y
dejar solidificar.

 El tubo n°2 llevar al baño maría. por 10' a 45 °C. Transcurridos los
10 minutos enfriar bruscamente en agua fría. Una vez frío, tomar 0.5
ml. y colocarlos en la placa n° 2; Operar en igual forma que en el
caso anterior.

Ing. Nancy Martinez Ordinola -2-

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Con los cuatro tubos restantes, operar de igual manera pero elevando la
temperatura del baño maría 10 °C más cada vez que se coloque un tubo,
por lo tanto para el tubo N°6 la temperatura será de 85°C.
1.3 Resultados:

 Contar las colonias de cada una de las placas y graficar número de

colonias vs. Temperatura.
II. Efecto del Potencial Redox

Este efecto esta referido a la pérdida y ganancia de electrones, si un

sustrato pierde electrones se oxida es un agente reductor y si gana se
reduce ósea es un agente oxidante.
Los aerobios tienen el potencial redox positivo y los anaerobios tienen el
potencial redox negativo. También se tiene oxidación por adición de
oxígeno.
Entre las sustancias que ayudan a mantener en los alimentos condiciones
de reducción se encuentran los grupos –SH en las carnes y el ácido
ascórbico y los azúcares reductores en las frutas y verduras.
Un elevado potencial de oxidación del alimento favorece a los
microorganismos aeróbicos y permite el crecimiento de organismos
facultativos mientras que un potencial bajo (reducción) favorece a los
anaeróbicos y facultativos.

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Ejemplo de bacterias anaeróbicas: género Clostridium

Ejemplo de bacterias aerobias: Género Bacillus
Bacterias microaerofilas están en sustratos ligeramente reductores:
Lactobacillus y Streptococcus.
EFECTO DE POTENCIAL REDOX
2.1 Materiales
 Cepas de los microorganismos a estudiar
 Placas con el medio: Agar cerebro corazón (ACC)
 Sistema de anaerobiosis

2.2 Pasos a Seguir

 Tomar una placa de ACC y dividirla en dos partes con la ayuda de

un plumón. Sembrar en cada espacio, las cepas que se indiquen.
 Colocar las placas en la jarra anaeróbica con el sistema de
anaerobiosis.
 Incubar a 35 -37 por 24 - 48 horas.

Con la Cepa 1

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Con la Cepa 2:

Finalmente: Colocar la placa en la jarra anaeróbica y activar el sistema

2.3 Resultados
 Observar si hay crecimiento de cada una de las cepas. determinar
si estas son aerobias o anaerobias.

III. EFECTO DEL pH

La acidez o la alcalinidad de una solución se expresa por su valor de pH,
en una escala en que la neutralidad es pH 7.

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Aunque los microorganismos se encuentran en habitas de un amplio

margen de pH, en el interior de sus células está probablemente cerca de la
neutralidad. En un ambiente ácido el organismo puede mantener un pH
próximo al neutro no permitiendo la entrada de iones H+ o bien
expulsándolos de modo activo tan rápidamente como entraron.
Se ha demostrado que la mayor parte de los microorganismos se
multiplican con valores de pH alrededor de 7 (6,6 –7,5) mientras que sólo
algunos crecen por debajo de 4.
Los hongos y levaduras toleran por lo general los ácidos y por esto suelen
encontrarse en alimentos ácidos.
El pH final de la mayor parte de carnes y pescado es alrededor de 5,6 o
mayor, eso explica la alteración por bacterias y no hongo.
Los microorganismos se pueden clasificar en tres categorías:
 Acidófilos , pH: 1 - 5
 Neutrófilos, pH: 6 - 7
 Basófilos, pH: 8 - 12
Ejemplos :
Escherichia coli tiene un pH mínimo de 4,5 y máximo 9,0
Salmonella tiene como pH mínimo: 4,5 y máximo 8,0
EFECTO DEL PH
3.1 Materiales:
 cepa a estudiar
 6 tubos con caldo nutritivo con los siguientes rangos de pH.: 4, 5, 6,
7, 8, y 9

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3.2 Pasos a Seguir:

 Sembrar cada tubo por suspensión con la cepa proporcionada.
 Incubar a 35 – 37°C por 24 a 48 horas
Para cada tubo, proceder de la siguiente manera:

3.3 Resultados:

 Observar la turbidez en cada tubo y calificar comparando con un

patrón mediante cruces:
 +++ Abundante turbidez
 ++ Mediana Turbidez
 + Ligera Turbidez
 - Negativa,
Nota.- Comparar con un patrón.

IV. Efecto de la Luz Ultravioleta

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La radiación ultravioleta tiene considerable interés microbiológico a causa

de su frecuente acción letal sobre los microorganismos.
La radiación UV de onda corta son extremadamente letales
La radiación Ultravioleta se utiliza en las lámparas germicidas.
Las bases púricas y pirimidinicas de los ácidos nucleicos y los aminoácidos
aromáticos de las proteínas absorben intensamente la radiación ultravioleta
y esto puede matar a la célula. Las células secas son más resistentes que
las húmedas, las esporas son más resistentes que las vegetativas y las
pigmentadas más resistentes que las no pigmentadas. Existen muchos
microorganismos que tienen mecanismos enzimáticos para reparar los
daños inducidos por la radiación ultravioleta en el DNA. Un tipo de enzima
de reparación actúa solamente cuando la célula dañada es activada por luz
visible. La recuperación del daño de la radiación ultravioleta a través de la
acción de las enzimas se denomina foto reactivación.
EFECTO DE LUZ ULTRA VIOLETA
4.1. Materiales:

 Cultivo de la cepa a analizar en caldo nutritivo

 Tubos conteniendo 10 ml de agar nutritivo fundido.
 Placas estériles
 pipetas
 Lámpara de Luz U.V.
 Cartón circular estéril cortado en uno de los cuadrantes.

4.2. Modo operativo

 Tomar de la cepa proporcionada 0.1 ml. y colocar por triplicado en

placas petri estériles, agregar aprox. 10 ml de agar fundido (45°C)
homogenizar bien la dilución con el agar, dejar enfriar y solidificar.

 Enumerar las placas del 1 al 3 y realizar lo siguiente:

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Placa 1 :
Utilizarla como patrón de comparación.

Placa 2 y placa 3:
Llevarlas al gabinete microbiológico para exponerlas a la radiación U.V.,
utilizando para esto el cartón circular cortado en un cuadrante en vez de la
tapa. Exponer cada cuadrante de la placa 0, 5, 10 y 15 minutos
respectivamente, a la luz U.V. Luego tapar y envolver la placa 2 en papel y la
placa 3 exponerla 10 min. a la luz solar luego incubarlas a 35 - 37 °C por 24 a
48 horas.

4.3.Resultados:

 Hacer un recuento relativo de las colonias que han desarrollado después

de sufrir el efecto de las radiaciones, tanto en la luz como en la
oscuridad, y teniendo en cuenta el tiempo de exposición.

 Expresar en porcentaje el Número de microorganismos inhibidos

mediante las radiaciones con respecto al tiempo de exposición.

Ing. Nancy Martinez Ordinola -9-

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Evaluación de la práctica N° 5

1.- En el cuadro 5.1, coloque el valor D a 2 temperaturas, de las siguientes

bacterias y comente.
Cuadro 5.1 Valor D de bacterias
Bacteria
Clostridium botulinum
Listeria monocytogenes
Bacillus cereus
Vibrio parahaemolyticus
Escherichia coli
Vibrio cholerae
Staphylococcus aureus
E.coli
Salmonella typhii
Morganella morganii

2. En el cuadro 5.2 coloque, el pH de crecimiento de las bacterias y comente

Cuadro 5.2 pH de crecimiento de bacterias
Bacteria pH de crecimiento
Clostridium botulinum
Camilobacter yeyunii
Staphylococcus aureus
Lactobacillus plantarum
Clostridium perfringes

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3- En el cuadro 5.3. identifique la bacteria, si es aerobia, anaerobia,

microaerofilo o facultativo y comente
Cuadro 5.3 Comportamiento de bacterias según la presencia de
oxígeno en el medio
Bacteria
Salmonella enteritidis
Listeria. monocytogenes
E. coli
Staphylococcus aureus
Clostridium botulinum

Ing. Nancy Martinez Ordinola - 11 -