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CRECIMIENTO MICROBIANO

KATHERINE PESTANA ORTIZ ALEXANDRA ROCA ROCA ROSIRIS SMALBACH SOLIS

NORLEYN NAVAS M.Sc

MCROBIOLOGIA

UNIVERSIDAD DEL ATLANTICO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA EDUCACION LICENCIATURA EN BIOLOGIA Y QUIMICA ATLANTICO 2013-I

CRECIMIENTO MICROBIANO

1. Cules son los efectos de las temperaturas altas y temperaturas bajas en las clulas bacterianas?
Los efectos de las altas y bajas temperaturas en la clula bacteriana son: Efectos segn las bajas temperaturas: - A temperaturas inferiores a la ptima, la velocidad de crecimiento de los microorganismos disminuye y los periodos de latencia se alargan mucho. - A una temperatura de refrigeracin (0 - 5 C) los organismos psicrfilos crecen ms rpidamente que los mesfilos. Po tanto, la baja temperatura supone un factor de seleccin de la flora del alimento de gran importancia. - Cuando se enfra rpidamente un alimento muchas de las bacterias mesfilas que normalmente resistiran la temperatura de refrigeracin, mueren como consecuencia del choque de fro. Esto es ms frecuente en Gram-negativas que en Gram-positivas. - A baja temperatura las rutas metablicas de los microorganismos se ven alteradas, como consecuencia de su adaptacin al fro. Estos cambios metablicos pueden dar lugar a que se produzcan deterioros diferentes, causados por los mismos microorganismos a diferentes temperaturas. - El deterioro de alimentos refrigerados se produce por microorganismos psicrofilos porque, aunque sus velocidades de crecimiento son lentas, los periodos de almacenamiento son muy prolongados. - Los microorganismos patgenos son, en su mayora, mesfilos y no muestran crecimiento apreciable, ni formacin de toxinas, a temperaturas de refrigeracin correctas. Ahora bien, si la temperatura no es controlada rigurosamente puede producirse un desarrollo muy peligroso rpidamente. - La congelacin detiene el crecimiento de todos los microorganismos. Los superiores (hongos, levaduras, helmintos) son ms sensibles que las bacterias y mueren. - A temperaturas ms bajas (-30 C) la supervivencia de las bacterias es mayor que en temperaturas de congelacin ms altas (-2 a -10 C), sin embargo estas temperaturas tambin deterioran el alimento ms que las ms bajas. - La congelacin puede producir lesiones subletales en los microorganismos contaminantes de un alimento. Este aspecto hay que considerarlo al hacer control microbiolgico.

- Durante la congelacin la carga microbiana contina disminuyendo. Sin embargo, las actividades enzimticas de las bacterias pueden continuar dando lugar a ms deterioro. - Tras la congelacin los microorganismos supervivientes pueden desarrollarse en un ambiente en el que la rotura de la integridad estructural del alimento como consecuencia de la congelacin puede producir un ambiente favorable para el deterioro microbiano. Efectos Altas temperaturas. - Las temperaturas superiores a las de crecimiento ptimo producen inevitablemente la muerte del microorganismo o le producen lesiones subletales. Las clulas lesionadas pueden permanecer viables; pero son incapaces de multiplicarse hasta que la lesin haya sido reparada. - Aunque se han observado excepciones, est perfectamente establecido que la cintica de termodestruccin bacteriana es logartmica. - Se pueden determinar para cada microorganismo y alimento los valores de termodestruccin D y z. - La velocidad de termodestruccin se ve afectada por factores intrnsecos (diferencia de resistencia entre esporas y clulas vegetativas), factores ambientales que influyen el crecimiento de los microorganismos (edad, temperatura, medio de cultivo) y factores ambientales que actan durante el tratamiento trmico (pH, a tipo de alimento, sales, etc.).

2. Como productos del metabolismo redox se forman compuestos txicos del oxgeno como radical hidroxilo (OH-), perxido de hidrgeno (H2O2) y superxido (O2), entre otros, los cuales pueden daar las protenas, membranas y cidos nucleicos, ocasionando la muerte celular. Cmo se defienden las bacterias ante este tipo de sustancias txicas?
Las bacterias segregan enzimas que le permiten defenderse de estas sustancias toxicas. Ya sea para el perxido de hidrgeno (H2O2), segregan la enzima catalasa y peroxidasa, para el superxido

(O2), la enzima superxido dismutasa (SOD), (neutraliza).

3. Qu mtodos se emplean para el cultivo de bacterias anaerobias? Explique.


Las bacterias anaerobias Para la obtencin de energa emplean como donantes y aceptores de electrones sustancias orgnicas. Por ello dan lugar, como productos finales de su metabolismo, a cidos grasos de cadena corta. Su deteccin, por cromatografa, es esencial para identificarlas correctamente, pues muchas son metablicamente muy inactivas. Por esta necesidad metodolgica no todos los laboratorios pueden identificar las bacterias anaerobias a nivel de

especie. Adems los anaerobios pueden morir por exposicin al oxigeno deben emplearse medios especiales: reductores, para lograr el desarrollo y el mantenimiento de cultivos puros de anaerobios estrictos los microbilogos utilizan medios reductores fraccionados en tubos de ensayo comunes con tapas bien ajustadas. Estos medios se calientan justo antes de su empleo para eliminar el oxgeno absorbido.

Cuando se utilizan cultivos en placas de Petri para observar colonias individuales jarras especiales para anaerobios, las placas de cultivo se colocan en la jarra y el oxgeno se le elimina por el siguiente proceso: se coloca en la jarra u n sobre con sustancias qumicas (bicarbonato de sodio y borohidruro de sodio) que humedece mediante el agregado de algunos mililitros de agua y se cierra la jarra. La reaccin qumica de estas sustancias qumicas con el agua produce hidrogeno y dixido de carbono. El catalizador paladio agregado en la jarra antes de su cierre combina el oxgeno presente en la jarra con el hidrogeno producido por la reaccin qumica y se forma agua. Como consecuencia, el oxgeno desaparece con rapidez. Adems el dixido de carbono producido favorece el desarrollo de muchas bacterias anaerobias. Otro mtodo utilizado es cuando se usa la enzima oxitrasa. Que reduce el oxgeno a agua. La oxitrasa es una enzima respiratoria proveniente de las membranas plasmticas de ciertas bacteria, cuando se le agrega a los medios de crecimiento transforma la placa de Petri OxyPlate, en una cmara para anaerobiosis independiente. Este mtodo evita la necesidad de aparatos ms incomodos, se est utilizando cada vez ms en los laboratorios de microbiologa clnica
4. Un pastelero inocul de forma accidental 6 clulas de una bacteria en un pastel de crema. Si la bacteria tiene un tiempo de generacin de 60 minutos, Cuntas clulas tendr el pastel despus de 7 horas? Calculo de la concentracin final de clulas Nmero inicial de clulas x 2numero de generaciones = nmero final de clulas Tiempo de generacin = Numero de generaciones= Numero de generaciones= 6 clulas x 27 = 6 x 128 = 768 clulas R// nmero final de clulas = 768 clulas = = 7 generaciones

5. Si un cultivo puro de una poblacin bacteriana durante la incubacin a 35C en un extracto nutricionalmente rico aument a 5x106 a partir de la poblacin inicial de 2.5x102 clulas en 300 minutos. Cul es el tiempo de generacin de la cepa? Nmero de generaciones= Nmero de generaciones= = = = 14.28

Tiempo de generacin (300 minutos =5 horas)

Minutos / generacin R// 21.00 minutos /generacin

=21.00 minutos /generacin

6.

Complete el siguiente cuadro

Mtodo

Recuento placa

Tipo mtodo: directo indirecto en Directo

NMP

Directo

Filtracin

Directo

Recuento microscpico

Directo

de Tipo de Ventajas/limitaciones recuento: o total o viables viables Ventaja: mide el nmero de clulas viables. Limitaciones: es que se requiere bastante tiempo, por lo general 24 horas para que se puedan formar colonias visibles. Viable Ventaja: basados en atributos relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinar la densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una muestra de suelo usando el mtodo de infeccin de plantas. provee una recuperacin uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados, determina slo organismos vivos y activos metablicamente, y suele ser ms rpido e igual de confiable que los mtodos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo, entre otros. Limitaciones: Dependiendo del medio de cultivo a utilizar, el costo y la dificultad de la tcnica pueden ser una limitaciones frente a mtodos ms sencillos y econmicos como el de recuento en placa. Viable Ventaja: este mtodo es importante porque nos permite identificar bacterias coliformes, producto de la contaminacin fecal en alimentos y bebidas. Limitaciones: se dificulta cuando las muestras de agua son muy turbias o con abundante carga bacteriana, por lo cual hay que hacer diluciones o inculos muy pequeos. Total Ventaja: no se requiere un tiempo de incubacin, por lo que su utilizacin se reserva sobre todo para aplicaciones en las que el tiempo es el factor principal, esta ventaja tambin es vlida

para los contadores electrnicos de clulas, a veces denominados corter counters, que cuentan de forma automtica el nmero de clulas en un volumen determinado de lquido. Estos instrumentos se utilizan en algunos laboratorios de investigacin y hospitalarios. Limitaciones: las bacterias mviles son difciles de contar con este mtodo y, como sucede con otros mtodos microscpicos, las clulas muertas presentan un aspecto similar al de las vivas que se pretende contar. Turbidimetria Indirecto Total Ventaja: mtodo practico para controlar el crecimiento bacteriano. Relativamente rpida Limitaciones: no es un mtodo til para medir la contaminacin de lquidos por un nmero relativamente pequeo de bacterias. Actividad metablica Peso seco Indirecto total Se estima el nmero de bacterias mediante la actividad metablica de la poblacin. Produccin de cido o CO2. Indirecto Total Ventajas: til para grandes volmenes, debido a que diferencias del orden de los miligramos representan el peso de un gran nmero de bacterias. Limitaciones: una limitaciones de este mtodo es que componentes voltiles de la clula pueden perderse por el secado Puede existir alguna degradacin

BIBLIOGRAFIA

Tortora G, Funke B, Case C, Introduccin A La Microbiologa, 9 Edicin, Editorial Mdica Panamericana, Argentina, 2007.
http://www.uprm.edu/biology/profs/massol/manual/p4-nmpenumeracion.pdf

http://www.bvsde.paho.org/bvsaidis/mexico13/034.pdf : COMPARACION DE DOS METODOS DE NUMERO MAS PROBABLE (NMP) CON LA CUENTA VIABLE EN PLACA (CVP) Y EVALUACION DE LA CALIDAD DEL AGUA DE LA CIUDAD DE SALTILLO, COAHUILA.Chacn Garza, Luis Ervey Villarreal Snchez, Juan Antonio Villarreal Lpez, JosLuis*Laboratorio de Microbiologa de la Facultad de Ciencias Qumicas de la UA de C http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis273.pdf: validacin secundaria del mtodo de numero mas probable y recuento enplaca profunda para coliformes totales y fecales en muestras de alimentos casada en la norma ISO NTC 17025

http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologia/recuento-de-bacterias-viables/recuento-text http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioRecuento.htm http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/12crecimiento.htm