UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO

FACULTAD DE MEDICINA

BIOQUÍMICA Y NUTRICIÓN HUMANA

MEDICINA HUMANA

INFORME SEMANA 4

DOCENTE:

Mogollón García, Milagros

ESTUDIANTE:

- Berrospi Serna, Rossella Sabina

TURNO: Jueves 10:40 – 13:20

2023 - 10

INFORME N4 - LABORATORIO BIOQUIMICA SEMANA 4

 DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES

1. INTRODUCCIÓN

Las proteínas son macromoléculas y están conformadas por la unión de sus unidades
estructurales, los aminoácidos; estos se encuentran unidos a través de enlaces
llamados peptídicos. Para que se considere una proteína como tal, esta debe estar
conformada por la unión de 50 a más aminoácidos. Estas importantes
macromoléculas, cumplen funciones como la de tipo estructural (conforman parte de
la membrana celular), tipo transporte (un claro ejemplo es la proteína por excelencia:
Albúmina), tipo hormonal (insulina, etc), tipo reguladora y enzimática.
Todas estas funciones permiten que nuestro cuerpo se mantenga en homeostasis y
realice sus funciones con normalidad.

Las proteínas séricas son aquellas proteínas que vamos a encontrar en el plasma, ellas
se clasifican como albúmina o globulinas las cuales son sintetizadas en el hígado a
excepción de las inmunoglobulinas. La albúmina es la proteína más abundante en el
suero. Transporta muchas moléculas pequeñas, y las globulinas, que pueden ser alfa1,
alfa 2, beta 1, beta 2 y gammaglobulinas al separarlas por electroforesis. Pueden
disminuir (hipoproteinemia) generalmente secundarias a hipoalbuminemia o aumentar
(hiperproteinemia) generalmente por aumento de las globulinas.
En esta auténtica y valiosa práctica de laboratorio, hemos aprendido a través de
distintos pasos, cómo poder evaluar las proteínas totales que hay en la sangre de una
compañera, para poder saber así si es que sus proteínas totales se encuentran en un
rango normal o si hay algún tipo de irregularidad por descubrir.

2. MARCO TEÓRICO:

Albúmina: La albúmina es la proteína más abundante que se encuentra en el plasma,

un líquido de color pajizo que es un componente de la sangre. El cuerpo produce
albúmina sérica en el hígado. La albúmina tiene una función importante: evitar que el
líquido del torrente sanguíneo se filtre a otros tejidos.

Globulinas: Las globulinas aumentan en procesos inflamatorios, infecciosos, en las

hepatitis crónicas y cirrosis. Éstas se pueden dividir en varios grupos:

Globulinas alfa 1 y 2, Globulinas beta y Globulinas gamma. Algunas de las siguientes

globulinas se clasifican como "reactivo de fase aguda". Esto quiere decir que son
proteínas que van a aumentar o disminuir su concentración en el plasma, a partir de
los procesos inflamatorios o infecciosos. Y que van a servir para determinar ciertas
patologías. La inmunoglobulina IgG. aumenta en la hepatitis autoinmune, la IgM en la
cirrosis biliar y la IgA en la enfermedad hepática alcohólica.
Proteínas totales: El examen de proteína total mide la cantidad total de dos clases de
proteínas encontradas en la porción líquida de la sangre: albúmina y globulina. Sus
valores de referencia se encuentran entre 6.1 a 7.9 g/dl.

3. MUESTRA, REACTIVOS Y CONDICIÓN DE LOS REACTIVOS:

-La muestra que se utilizó en el experimento, fue el suero de la sangre de una

compañera de clase.

Reactivos utilizados:

-Reactivo A: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en hidróxido de sodio 875 mmol/l y

alquil aril poliéter (AAP).

-Standard (Suero Patrón): solución de albúmina y globulinas de origen bovino, con

título conocido de proteínas y albúmina.

Los reactivos utilizados a una condición de:

-Longitud de onda: 540 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con filtro verde

(520-560 nm).

- Temperatura de reacción: 370 C

- Tiempo de reacción: 15 minutos

- Volumen de muestra: 50 ul

- Volumen de Reactivo A: 3,5 ml

Volumen final de reacción: 3.55 ml

4. PROCEDIMIENTO

1. En tres tubos marcados B(Blanco), S(Standard) y D(desconocido), se colocó

y realizó el procedimiento como indica la siguiente tabla:

2. Se llevó al espectrofotómetro y se observó los resultados para proteínas totales.

5. RESULTADOS:

- El primer proceso de resultados se presentó de una manera en la que ya teníamos los

tubos preparados (pasos de la tabla) con sus respectivos componentes para llevarlo a
lectura del espectrofotómetro.

Después de la lectura con el espectrofotómetro, se obtuvieron los siguientes

resultados:

6. DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS:

Podemos observar que el resultado obtenido de proteínas totales se encuentra dentro

del rango normal, ya que mi compañera presenta un 7.19 de PT y el rango
normalizado es de 6.5 a 7.9g/dl.
Demuestra así, que mi compañera se encuentra en un buen estado de salud, tiene sus
proteínas plasmáticas en un estado óptimo, es decir, la albúmina y las globulinas que
son las que conforman las PT se encuentran en condiciones muy
favorables y no está en riesgo a sufrir alguna enfermedad (Hiponatremia o
hipernatremia).

7. CONCLUSIONES:

La determinación de las proteínas totales sirve para el diagnóstico de distintas

enfermedades que alteran las proteínas de la sangre, orina o del líquido
cefalorraquídeo. Es por eso que cuando nuestro organismo sufre de alguna alteración
o afección en estos medios (infección, traumatismos, etc) se iniciará un proceso de
reacción el cual tendrá como principal objetivo hacerle frente al problema, limitar la
agresión y contribuir a la reparación.

Con justa razón, es importante que el médico indique una prueba al paciente del cual
sospeche alguna enfermedad relacionada a este concepto, confirmando que si está
elevado o bajo, algo está yendo mal y podrá dar un diagnóstico de mejor manera.

8. CUESTIONARIO:

8.1. ¿En qué se diferencia el suero del plasma? ¿Cómo se obtienen?

El suero es el líquido sobrenadante que queda en el momento donde la sangre total se

coagula, por lo que tiene una composición similar a la del plasma, aunque sin
fibrinógeno ni otros factores de la coagulación, lo que los asemeja es que ambos
contienen proteínas.

El plasma es la parte líquida sin células de la sangre que no ha sido coagulada y sirve
para la suspensión de elementos sólidos, eritrocitos, leucocitos y plaquetas. Se obtiene
por centrifugación de la sangre y a ella se le debe de añadir anticoagulantes para que
se obtenga lo buscado.

8.2. ¿Cuáles son las proteínas plasmáticas?

Las proteínas plasmáticas son aquellas que se encuentran en el plasma sanguíneo y

aquí se encontrarán principalmente dos tipos: albúmina y globulina. Las proteínas son
partes importantes de todas las células y tejidos. La albúmina ayuda a impedir que se
escape líquido de los vasos sanguíneos. También transporta químicos a través de su
sangre.
Las globulinas son una parte importante del sistema inmunitario.

8.3. ¿Qué proteínas son alfa 2 globulinas?

La alfa-2 globulina es un grupo de proteínas que se encuentran en la sangre y que
sirven para el transporte de lípidos y polisacáridos y que son sintetizadas en el hígado.
Forman parte de las globulinas junto a las alfa-1, beta y gamma globulinas.

8.4. ¿Qué proteínas son beta globulinas?

La beta globulina es un conjunto de proteínas presentes en la sangre que sirven para el

transporte de diferentes sustancias (hormonas, colesterol o hierro). Las betas
globulinas son sintetizadas principalmente en el hígado y pertenecen al grupo de las
globulinas junto a las alfa-1, alfa-2 y gamma globulinas.

8.5. ¿Qué tipo de gammaglobulinas conoce?

En general se consideran dentro del grupo de las gamma globulinas las IgG, IgA e
IgM ya que las inmunoglobulinas IgD o IgE pueden encontrarse en la zona de las
betas globulinas.

8.6. Señale cinco enfermedades pueden causar hipoproteinemia.

● Colitis ulcerosa
● Hepatopatías tipo cirrosis (Déficit de síntesis proteica)
● Síndrome nefrótico, aminoacidurias (pérdidas renales)
● Pancreatitis crónica
● Malnutrición

8.7. Señale cinco enfermedades que pueden causar hiperproteinemia:

 ● Mieloma múltiple: Aumento de gammaglobulinas. 2. - Macroglobulinemia de
Waldenstrom
● Amiloidosis: Depósitos de proteínas en riñón (más importante), vaso, piel, etc.
4. Artritis reumatoide-
● Hipersensibilidad tipo 4, genera lesiones erosivas en las articulaciones.
5. Infección aguda: Puede ser hepatitis B o C, inicios de VIH, estos generan
elevaciones en las gammaglobulinas y en las proteínas de fase aguda.

1. INTRODUCCIÓN

DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA

La albúmina es una proteína muy importante que se encuentra en el plasma, transporta

bilirrubina, ácidos grasos, calcio, etc. A pesar de que el transporte es una importante
función, esta se destaca principalmente en mantener la presión coloidosmótica del
plasma, esto quiere decir que al haber irregularidades respecto a esta proteína
(hipoalbuminemia, hipoalbuminemia) se debe atender de manera inmediata al paciente
para poder darle el diagnóstico correctamente.

En esta práctica de laboratorio se aprendió a preparar una mezcla para la lectura de

albúmina en sangre de una compañera.

2. MARCO TEÓRICO

Albúmina: La albúmina es la proteína más abundante que se encuentra en el plasma,

un líquido de color pajizo que es un componente de la sangre. El cuerpo produce
albúmina sérica en el hígado. La albúmina tiene una función importante: evitar que el
líquido del torrente sanguíneo se filtre a otros tejidos. Sus rangos normales son de 3.5-
4.8 g/dl.

Prueba de albúmina en la sangre: La prueba de albúmina en la sangre mide la cantidad

de albúmina en la sangre. Niveles bajos de albúmina pueden ser una señal de
enfermedad del hígado o los riñones; u otra afección médica. Los niveles altos pueden
ser una señal de deshidratación.

3. MUESTRA, REACTIVOS Y CONDICIÓN DE LOS REACTIVOS

La muestra que se utilizó en el experimento, fue el suero de la sangre de un

compañero de clase.
Reactivos utilizados:

- Reactivo B: solución de 3,3',5,5'-tetrabromo cresolsulfon ftaleína (en polioxietilén

lauril éter).
-Standard (Suero Patrón): solución de albúmina y globulinas de origen bovino, con
título conocido de proteínas y albúmina.

Los reactivos utilizados a una condición de:

- Longitud de onda: 625 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con filtro rojo

(620-650 nm).
- Temperatura de reacción: 15-28 °C
- Tiempo de reacción: 10 minutos
- Volumen de muestra: 10 ul
- Volumen de Reactivo B: 3,5 ml
- Volumen final de reacción: 3,51 ml

4. PROCEDIMIENTO

1. En tres tubos marcados B(Blanco), S(Standard) y D(desconocido), se colocó y

realizó el procedimiento como indica la siguiente tabla:

2. Se llevó al espectrofotómetro y se observó los resultados para proteínas totales.

5. RESULTADOS
- El primer proceso de resultados se presentó de una manera en la que ya teníamos los
tubos preparados (pasos de la tabla) con sus respectivos componentes para llevarlo a
lectura del espectrofotómetro.

Después de la lectura con el espectrofotómetro, se obtuvieron los siguientes

resultados:

6. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

En este experimento, podemos deducir que la persona tiene un valor de albúmina de

4.47 lo que la posicionó en un rango normal de albúmina en el plasma. Nos lleva a
descartar cualquier tipo de enfermedad referente a estas, por ejemplo, si tuviese
hipoalbuminemia, pensaríamos en Edema; y si hablo de hipoalbuminemia,
pensaríamos en un caso de deshidratación.

7. CONCLUSIONES

Una prueba de albúmina en sangre se usa para verificar la salud en general y ver qué
tan bien funcionan sus riñones y su hígado. Si su hígado está dañado o no está bien
nutrido, es posible que no produzca suficiente albúmina. Si sus riñones están dañados,
pueden permitir que demasiada albúmina salga de su cuerpo en la orina. Estos
ejemplos mencionados son algunas de las conclusiones que se pueden sacar al tener
un resultado por el espectrofotómetro de las personas que se encuentran a nuestro
alrededor.
8. CUESTIONARIO

8.1. ¿En qué patologías se produce hipoalbuminemia?

Problemas hepatobiliares (Hepatitis crónica, cirrosis hepática e ictericia obstructiva
crónica)
● Proteinuria: Síndrome nefrótico
● Desnutrición: menor ingesta, un ejemplo claro de hipoalbuminemia es en la
enfermedad de kwashiorkor.
● Pérdida intestinal de proteínas.

8.2. ¿En qué casos se produce hiperalbuminemia?

Deshidratación:Esto hace que la sangre se espese, causando la concentración de sus

elementos. Los resultados de las pruebas, por lo tanto, demostrarán que hay
un nivel alto de globulina en la sangre, mientras que en verdad este no es el caso.
Normalmente se debe a deshidratación por pérdida de agua debido al calor o al
ejercicio. También se observa si existe una ingesta limitada de líquidos,
particularmente agua, en la dieta.

Gammapatía monoclonal:

La gammapatía monoclonal de significación indeterminada (GMSI), es donde el

cuerpo produce una proteína anormal llamada proteína monoclonal o proteína M.
Aunque esta proteína es anormal, por lo general no causa ningún problema.
En algunos casos, sin embargo, esta condición puede progresar durante años y generar
enfermedades, incluido el cáncer. Sin embargo, es imposible determinar cuál
condición progresará y cuál no.

Mieloma múltiple:

Condición en la que las células de mieloma (células plasmáticas presentes en la

médula ósea que producen anticuerpos), se convierten en cancerosas y se multiplican.
Esto aumenta el número de células plasmáticas que se manifiestan como altos niveles
de albúmina en la sangre.

Amiloidosis:

Condición similar a la GMSI, donde proteínas anormales llamadas proteínas amiloides

son producidas por células de la médula ósea. Estos se depositan en diferentes órganos
como el corazón, los riñones, el bazo, el hígado, el sistema nervioso y el tracto
gastrointestinal. La causa de la amiloidosis no se conoce, pero se considera una
condición muy rara.
8.3. ¿Cuál es la relación entre los niveles de albúmina y grados de desnutrición?

El rango normal es de 3.4 a 5.4 g/dL (de 34 a 54 g/L).

Es muy probable que la deficiencia de albúmina en la sangre, se esté dando por
desnutrición o problemas hepáticos. Gracias a distintos estudios se ha llegado a
detallar este cuadro, donde se ve a más detalle la relación directa de albúmina y
desnutrición.

TRANSAMINASA GLUTÁMICO PIRÚVICA O ALANINA

1. INTRODUCCIÓN

AMINOTRANSFERASA (GPT):

Alanina aminotransferasa (ALT) o Transaminasa Glutámico Pirúvica o GPT,

exclusivamente citoplasmática y es más específica de daño hepático o renal También
presente en el tejido muscular. Aumento:
- Hepatitis aguda, GPT>GOT, generalmente >500 U/I.
- Hepatitis crónica: GPT>, <300 U/I.
- Hepatitis alcohólica y cirrosis hepática, GOT: GPT >2, sugestivo.
- Ictericia obstructiva: discreto aumento.

Otras causas: El daño muscular AST aumenta en forma significativa y la ALT menos,
igualmente con la hemólisis. La AST aumenta en el infarto de miocardio. Valores de
referencia para ALT: Hasta 41U/L(Hombres) - 31 U/L(Mujeres)
2. FUNDAMENTO

L-alanina + alfa cetoglutarato L-glutamato + piruvato

El piruvato reacciona con la fenilhidrazina dando compuesto coloreado en medio
alcalino que se lee a 505 nm.

3. MUESTRA, REACTIVOS Y CONDICIÓN DE LOS REACTIVOS

La muestra que se utilizó en el experimento, fue el suero de la sangre de una

compañera de clase.

Reactivos utilizados:

Sustrato ALT (Reactivo A): alanina 200 mM, alfacetoglutarato

mM pH 7.4 2mM, buffer fosfato 100
Reactivo B: difenilhidrazina 1 mmol en HCL 1 M
Reactivo C: NaOH 0.4 M
Estándar de piruvato de sodio 2 mM

Los reactivos utilizados a una condición de:

- Longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro, Hg 546 o

en fotocolorímetro con filtro verde (500-550 nm).
- Temperatura de reacción: 37 °C
- Tiempo de reacción: 40 minutos
- Volumen de muestra: 100 ul
- Volumen final de reacción: 6,1 ml
Alternativamente pueden disminuirse los volúmenes de muestra y reactivos
a la mitad.

4. PROCEDIMIENTO

1. Se armó el siguiente sistema:

Mezclar, sacar del baño y leer después de 2 minutos a 505 nm Obtener concentración
de curva de calibración.

2. Se llevó al espectrofotómetro y se observó los resultados para proteínas totales.

5. RESULTADOS

Después de la preparación de la mezcla y la lectura con el espectrofotómetro, se

obtuvieron los siguientes resultados:

6. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Podemos observar que el resultado obtenido de ALT se encuentra dentro del rango
normal, ya que mi compañera presenta un 14.14 de ALT y el rango normalizado es en
mujeres hasta los 31 U/L.

Demuestra así, que mi compañera se encuentra en un buen estado de salud, tiene su

transaminasa en un estado óptimo y no presenta riesgo a sufrir alguna enfermedad, ya
que, por ejemplo, en general, niveles elevados de ALT pueden indicar daño hepático
por hepatitis, infección, cirrosis, cáncer del hígado u otras u otras enfermedades del
hígado. El daño también puede ser por falta de flujo sanguíneo al hígado o por ciertos
medicamentos o venenos. Pero, esto en un caso supuesto, ya que, vemos como la
compañera tiene sus valores muy estables.

TRANSAMINASA GLUTÁMICO OXALACÉTICA O ASPARTATO

1. INTRODUCCIÓN

AMINOTRANSFERASA (GOT):

Aspartato aminotransferasa (AST) o Transaminasa Glutámico Oxalacética o GOT, es

una enzima citoplasmática y mitocondrial presente en los hepatocitos, pero también en
las células de otros tejidos como corazón, músculo esquelético y riñón. Se emplea en
el diagnóstico de hepatitis aguda igual que la TGP. En hepatitis alcohólica y cirrosis la
relación GOT/GPT se invierte.
Valores de referencia para AST: Hasta 38U/L(Hombres) - 32 U/L(Mujeres).

2. FUNDAMENTO

L-aspartato + alfa cetoglutarato

L-glutamato + oxalacetato El oxalacetato se
Se convierte en piruvato reacciona con la fenilhidrazina dando compuesto marrón en
medio alcalino que se lee a 505 nm.

3. MUESTRA, REACTIVOS Y CONDICIÓN DE LOS REACTIVOS

La muestra que se utilizó en el experimento, fue el suero de la sangre de un
compañero de clase.

Reactivos utilizados:

Sustrato ALT (Reactivo A): alanina 200 mM, alfacetoglutarato

mM pH 7.4 2mM, buffer fosfato 100
Reactivo B: difenilhidrazina 1 mmol en HCL 1 M
Reactivo C: NaOH 0.4 M
Estándar de piruvato de sodio 2 mM

Los reactivos utilizados a una condición de:

- Longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro, Hg 546 o

en fotocolorímetro con filtro verde (500-550 nm).
- Temperatura de reacción: 37 °C
- Tiempo de reacción: 40 minutos
-Volumen de muestra: 100 ul
- Volumen final de reacción: 6,1 ml
Alternativamente pueden disminuirse los volúmenes de muestra y reactivos
a la mitad.

4. PROCEDIMIENTO

a. Se armó el siguiente sistema:

b. Se llevó al espectrofotómetro y se observó los resultados para proteínas totales.

5. RESULTADOS

Después de la preparación de la mezcla y la lectura con el espectrofotómetro, se

obtuvieron los siguientes resultados:

6. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Podemos observar que el resultado obtenido de AST se encuentra dentro del rango
normal, ya que mi compañera presenta un 12.38 de AST y el rango normalizado es en
varones hasta los 38 U/L.
Demuestra así, que mi compañero se encuentra en un buen estado de salud, tiene su
transaminasa en un estado óptimo y no presenta riesgo a sufrir alguna enfermedad. La
AST (aspartato aminotransferasa) es una enzima que se encuentra principalmente en
el hígado, pero también está en los músculos. Cuando las células que contienen AST
están dañadas, liberan el AST en su torrente sanguíneo, es por eso que se da el
diagnóstico confiable que el compañero de clase se encuentra bien de salud, sus
valores son óptimos y no tiene tendencia a sufrir hepatitis, cirrosis, mononucleosis,
problemas cardíacos o pancreatitis u otras enfermedades del hígado que son comunes
al estar esta transaminasa (AST) elevada.

7. CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el rol de la transaminación en el metabolismo nitrogenado?

La reacción de transaminación comprende la transferencia de un grupo a-amino de un

aminoácido a un a- cetoácido. El aminoácido se convierte en un cetoácido y el
cetoácido aceptor del grupo amina, en el aminoácido correspondiente.

2. ¿Cuál es el rol del piridoxal fosfato en la transaminación?

El piridoxal fosfato (PLP) actúa como cofactor de las enzimas que participan en
muchas reacciones bioquímicas que afectan el metabolismo de los glúcidos, lípidos, y
proteínas siendo el cofactor de más de 140 reacciones enzimáticas en nuestro
organismo.

3. ¿Cuál es la utilidad de las transaminasas en el diagnóstico?

Las transaminasas o aminotransferasas catalizan la reacción de transferencia del grupo

amino de un aminoácido a un a-cetoglutarato (un -cetoácido). Las más conocidas son
la transaminasa glutámico-oxalacética (TGO) o aminotransferasa de aspartato (AST) y
la transaminasa glutámico-pirúvica (TGP) o aminotransferasa de alanina (ALT). La
GOT se localiza principalmente en el hígado, miocardio, riñón, encéfalo y
musculatura esquelética; la TGP está presente en concentraciones mucho más
elevadas en el hígado que en los demás órganos. La medición en sangre de ambas
enzimas es un indicador sensible de la integridad de muchos tejidos, en particular de
las células hepáticas, coadyuvando en el diagnóstico etiológico.