UNIVERSIDAD TECNICA DE ORURO

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA AGROINDUSTRIAL CIAI-2053

EXTRACCION DEL ADN

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

La molécula de ADN es lineal sin ramificaciones, forma hebras largas, está formada por
dos cadenas de polinucleótidos enrolladas alrededor del mismo eje, comúnmente conocida
como doble hélice con giro a la derecha, cada una de ellas está formada por los fosfatos al
exterior en contacto con el medio acuoso, éstos se unen en el C5 y C3 de un azúcar de cinco
átomos de carbono llamado desoxirribosa se une a cada base en el ADN. Las bases púricas
y pirimídicas se enlazan en el extremo opuesto del azúcar; las cuatro bases son: Adenina
(A), Guanina (G), Tiamina (T) y Citosina (C). La adenina y la guanina son bases grandes
de anillos dobles llamadas purinas; la timina y la citosina son bases más pequeñas de un
solo anillo denominadas pirimidinas; se sitúan en la parte interna de la molécula, quedando
perpendicularmente al eje, se enlaza una base púrica con una pirimídica por medio de
puentes de hidrogeno, lo que le da mayor resistencia a la desnaturalización. Las cadenas de
ADN son antiparalelas, es decir siguen direcciones opuestas, una va en sentido 5’ a 3’ y la
opuesta en dirección 3’ a 5’.

2. COMPETENCIAS. -

Realiza una extracción sencilla de ADN con materiales sencillos de laboratorio

3. MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS. -

Para realizar la práctica se debe tener un listado de materiales, equipos e insumos que serán
utilizados para efectuar el trabajo de laboratorio, especificando la cantidad y la unidad a
utilizar.

MATERIALES, EQUIPOS E INSUMOS

Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Tomate 1 Pza  
Agua destilada 500 Ml
Bicarbonato sódico 6 Cucharillas
Detergente de vajilla 2 Cucharas
Licuadora 1 -
Cucharilla 1 -
Colador 1 -
Vasos precipitados de 250 ml 2 -
Frasco schot con tapa de 500ml 1 -
Frasco schot de 100 ml 1 -
Pipeta de 10 ml 4 -
Propipeta 1 -
 Alcohol 96% 10 Ml
Asa de siembra aguja 1 -
Microscopio - -
Encendedor - -
Portaobjeto 10 Unidades
Cubreobjeto 10 Unidades
Tubo de ensayo de 20 ml 1 Unidades
Pipeta de plástico 2 Unidades
Caja petri 1 pza

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. -

1. Preparación de la muestra
 Medio tomate licuar con agua destilada por 1min para romper las células y se
liberen los orgánulos del citoplasma
 El licuado colar en un colador para quitar la pulpa y cascara de la muestra

2. Prepara el tampón de lisis mezclando los siguientes componentes:

 2 cucharillas rasas de sal de mesa o cloruro de sodio (para neutralizar las cargas
negativas de los grupos fosfatos del ADN)
 6 cucharitas de bicarbonato sódico (permite mantener un pH neutro)
 2 chorritos de detergente de vajilla (para romper la membrana de lípidos)
 Agua destilada 250 ml
 Todo ello mezclar bien

3. Solubilizarían de las membranas

 En un matraz o frasco con tapa añadir 10 ml de la solución de tomate y 20
ml de tampón de lisis
 Tapar con papel aluminio
 Agitar la mezcla por 10 min para que las membranas se disuelvan y el ADN
se libere del núcleo, mitocondrias y cloroplastos
 Filtrar la solución
 Pasar 5 ml de la solución filtrada en un tubo

4. Extracción del DNA

 Al tubo que contiene los 5 ml de la muestra de tomate se añade 10 ml de
alcohol 96% con mucho cuidado, que el alcohol resbale por la pared del tubo
 Se formará una interface entre el alcohol y la muestra de tomate, este será el
ADN

5. Recogida del ADN

 Con ayuda de una pipeta recoger el DNA de la interfase y depositar sobre
una caja Petri para observar luego al microscopio
 Si se deja por más tiempo Con un asa de siembra recoger el DNA de la
interface
  Depositar el DNA en u portaobjeto y observar al microscopio

5. CUESTIONARIO. -

1) Dibuja la estructura del ADN y ARN indicando su estructura y composición

molecular

2) ¿Cómo se compone un nucleótido? Dibuja su estructura.

3) ¿En que difieren el ADN y el ARN? Elabora una tabla comparativa entre ADN
y ARN.