INGRESO MEDICINA 2023

BIOLOGÍA

ANEXO 1:

Uso del Microscopio Óptico

Microscopía
La microscopía es el conjunto de técnicas y métodos utilizados para observar objetos
que se encuentran fuera del rango de resolución del ojo humano, es decir, inferiores a 0,2 mm.
El uso del primer microscopio tiene registro en el siglo XVII, este fue fabricado por Antonio Van
Leuwenhoeck. Luego de continuar su perfeccionamiento a lo largo de los años, surgieron los
microscopios ópticos que permitieron descubrir que los tejidos vegetales y animales estaban
compuestos por células. A principios de 1940 se desarrolló el microscopio electrónico, mucho
más poderoso que el microscopio óptico, que permitió la observación detallada de muchas
estructuras complejas.

Con el microscopio óptico compuesto se obtiene una imagen bidimensional e invertida.

El microscopio óptico está formado por dos partes: sistema óptico que comprende los
objetivos, oculares, condensador, fuente luminosa, diafragma y el sistema mecánico que
comprende tornillos de ajustes macrométrico y micrométrico, brazo, platina, revolver, pie.

Dos conceptos claves a la hora de utilizar el microscopio son el de AUMENTO y

RESOLUCIÓN. El aumento se refiere al grado de ampliación obtenido. Cuando se usa el
microscopio es importante saber cuántas veces está ampliado el objeto. Si un microscopio
aumenta el objeto 40 diámetros (40X) la imagen que se ve es 40 veces más larga y ancha que el
objeto observado a simple vista, a una distancia de 25,4 cm. Grabado en cada objetivo y ocular
hay un número que indica el grado de aumento que suministra:

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El aumento total es el producto entre el aumento del objetivo y el aumento del ocular.
Por ejemplo, el número del ocular es 10X y el del objetivo es de 10X, la ampliación total es
10x10= 100 diámetros. Debido a que los objetos observados con el microscopio son
generalmente muy pequeños, los biólogos encuentran conveniente usar unidades de longitud
menor que el cm o el mm, para la medición microscópica. Una de las unidades usada
comúnmente, es el micrómetro, 1/1000mm = 1μm.

La resolución es la distancia mínima a la cual el microscopio puede mostrar dos puntos

como entidades separadas. El ojo humano puede separar dos puntos que se encuentran a
0.25mm, mientras que el microscopio óptico puede separar puntos que tienen 0.25μm de
separación.

Reconocimiento de sistemas y componentes del microscopio óptico:

Reconozca los sistemas mecánicos, óptico y de iluminación del microscopio óptico:

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Preparación de muestras biológicas y observación al microscopio

óptico:
El material biológico que se quiere observar debe ser tratado para que reúna las condiciones de
transparencia, grosor y tamaño adecuados. El material puede simplemente ser colocado sobre
un portaobjetos (montaje) añadiendo, generalmente, un cubreobjetos o puede someterse a
diferentes métodos de montaje.

Se distinguen dos tipos principales de preparados:

● Temporarios: se observan en el momento y no perduran en el tiempo. Por lo general, se

montan con una gota de agua entre portaobjetos y cubreobjetos. Pueden ser sometidos
a una fijación que consiste en detener los procesos de autolisis celular, conservar las
estructuras y composición química, impidiendo alteraciones post-mortem; y coloración
o tinción para generar contraste entre las estructuras observadas.

Tipos de coloración: simple, utiliza un solo colorante para teñir estructuras celulares que de otro
modo no serían visibles al microscopio y; diferencial, utiliza al menos dos colorantes que se
aplican en forma secuencial a un extendido con fijación física al calor.

● Permanentes: son aquellos que deben realizarse utilizando procesos y reactivos más
complejos (técnicas histológicas) que permiten su permanencia en el tiempo. Para
conservar las preparaciones de modo permanente, además de fijarlas y colorearlas, se
deben montar incluyéndolas en líquidos determinados (glicerina, bálsamo de Canadá,
etc.).

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Uso del microscopio paso a paso:

Una vez que se tenga la muestra, se deben seguir los siguientes pasos para llevar a cabo una
observación.

Paso 1: Mediante el revólver del microscopio, coloca el objetivo de menor aumento

(normalmente 4X). Las observaciones se empiezan siempre con el aumento mínimo, a partir del
cual se va aumentando hasta llegar al nivel de aumento deseado.

Paso 2: Enciende la luz del microscopio. Esto puede requerir enchufarlo primero a la corriente
eléctrica o asegurarte de que las baterías están cargadas.

Paso 3: Coloca el portaobjetos con la muestra en el centro de la platina. Asegúrate de que la

muestra se encuentra aproximadamente sobre el agujero de la platina. Una muestra bien
preparada estará cubierta con un cubreobjetos para evitar el contacto entre el objetivo y la
muestra. Puedes fijar correctamente la muestra mediante las pinzas de la platina.

Paso 4: A continuación, sin todavía mirar por el ocular, ajusta el tornillo macrométrico para
acercar la platina al objetivo. Intenta acercar la muestra al objetivo tanto como sea posible pero
evitando siempre que lleguen a tocarse ya que esto podría dañar la muestra y el objetivo.

Paso 5: Mirando por el ocular, ajusta ahora el condensador y el diafragma para maximizar la
cantidad de luz que llega a la muestra. Algunos microscopios tienen un pequeño espejo que
dirige la luz hacia la muestra. Si este es el caso de tu microscopio, ajusta también la posición del
espejo para que la muestra esté totalmente iluminada.

Paso 6: A continuación ajusta nuevamente el tornillo macrométrico para aumentar la distancia

entre muestra y objetivo mientras miras por el ocular. Mueve suavemente el tornillo hasta
detectar el punto en que la imagen de la muestra se enfoca.

Paso 7: Ajusta el tornillo micrométrico para mejorar el enfoque de la imagen y obtener una
observación nítida de la muestra.

Paso 8: Una vez puedas ver una imagen enfocada de la muestra a través del ocular, mueve con
cuidado el portaobjetos para que los detalles de la muestra que te interesan entren en tu campo
de visión. Si tu platina está equipada con un carro móvil, puedes utilizar los tornillos del carro
móvil para ajustar la posición del portaobjetos.

Paso 9: Para mejorar la calidad de la imagen puedes ajustar de nuevo el condensador o el

diafragma para regular la cantidad de luz que ilumina la muestra.

Paso 10: A partir de este punto, si quieres observar la muestra con un mayor aumento puedes
seleccionar el siguiente objetivo (10X) mediante el revólver. Es posible que sea necesario un
pequeño ajuste del tornillo micrométrico para mantener el enfoque. Si no consigues enfocar la
muestra puedes repetir los procedimientos descritos a partir del paso 3 con el nuevo objetivo.
Puedes de nuevo ajustar la posición de la muestra y a continuación cambiar una vez más al
siguiente objetivo en caso que sea necesario.

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Paso 11: Cuando finalices la observación apaga la luz y ajusta el tornillo macrométrico para
maximizar la distancia entre la muestra y el objetivo. A continuación retira la muestra y deja
seleccionado el objetivo de mínimo aumento. Si has terminado de utilizar el microscopio puedes
taparlo con una funda para evitar la acumulación de polvo.

IMPORTANTE: Los objetivos de mayor aumento, tienen una distancia focal muy pequeña por lo
que si se utiliza el Objetivo de 100X se debe colocar una gota de aceite de inmersión sobre el
cubreobjetos. El aceite de inmersión es un líquido viscoso y transparente que tiene un alto índice
refractivo. Es utilizado en las observaciones microscópicas ya que brinda la propiedad de
concentrar la luz cuando esta pasa a través del objetivo de 100X del microscopio, aumentando
su poder de resolución.

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