MICROSCOPIO Y PREPARACIONES MICROSCOPICAS

INTEGRANTES:
ARRIETA OTERO KAREN ANDREA
JIMÉNEZ ROQUEME MARIANA
LÓPEZ NARVÁEZ DIVIER DAVID
MURILLO MACHADO YADIS TATIANA
VERGARA ROMÁN ALEXANDRA

DOCENTE:
LÓPEZ BERNAL CRISTIAN ALBERTO

MATERIA:
BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR (BCM)

PREGRADOS:
ENFERMERÍA Y PSICOLOGÍA

SEMESTRES:
1Y2

UNIVERSIDAD DEL SINÚ ELÍAS BECHARA ZAINÚM

SEDE MONTERÍA - CÓRDOBA
AGOSTO 12 DE 2022
 PRÁCTICA 3
MICROSCOPIO Y PREPARACIONES MICROSCOPICAS

INTRODUCCIÓN

El microscopio está hecho de un sistema de lentes, un sistema mecánico que las

articula y un sistema de iluminación. Mediante estos sistemas se visualizan las
imágenes que se forman en ellos cuando se les coloca objetos que a simple
vista no se puede observar. Esas imágenes tienen unas propiedades que es
preciso conocer y analizar para un manejo correcto del microscopio
compuesto. Las propiedades de la imagen se relacionan con medición
microscópica, la resolución, el aumento y el área del campo visual.

OBJETIVOS

• Identificar las partes ópticas y mecánicas del microscopio.

• Realizar preparaciones microscópicas temporales.
• Reconocer el uso adecuado de cada una de las partes del microscopio
óptico compuesto.
• Adquirir habilidad en la medición aproximada del tamaño microscopio
de estructuras, microorganismos y células.

PRELABORATORIO

1. Sobre los tipos de microscopio óptico más utilizados completa la siguiente

tabla:

TIPO DE PRINCIPIO DE APLICACIONES

MICROSCOPIO FUNCIONAMIENTO
CAMPO OSCURO
FLUORESCENCIA
CONFOCAL
DE CONTRASTE DE
FASES
° Microscopio de Campo oscuro
Principios de funcionamiento: La iluminación de campo oscuro precisa el bloqueo de la mayor
parte de la luz que normalmente viaja a través y alrededor del espécimen; esto posibilita la
interacción exclusiva de los rayos oblicuos con el espécimen.
La lente superior de un simple condensador de campo oscuro Abbe es esférica cóncava, lo que
permite que los rayos de luz emitidos por la superficie de la lente superior formen un cono de luz
hueco invertido con el enfoque centrado en el plano del espécimen. En la áreas donde hay
ausencia de muestra y la apertura numérica del condensador es superior a la del objetivo, los
rayos oblicuos se
cruzan entre sí obviando el objetivo y dejan dichas áreas oscuras.
Aplicaciones: La técnica de campo oscuro es muy útil para observar materiales en suspensión,
permitiendo detectar con gran facilidad partículas sólidas con índices de refracción muy cercanos
al del medio en que se encuentran, por esta razón, es un sistema de gran utilidad para realizar
conteos de número de partículas en una muestra.

° Microscopio de Fluorescencia
Principios de funcionamiento: El microscopio de fluorescencia funciona, en primera instancia,
etiquetando la muestra de interés con una sustancia fluorescente, conocida como fluoróforo, para
luego ser iluminada a través del lente con una luz de energía alta. La luz será absorbida por el
fluoróforo y provocará la emisión de luz con baja energía y una larga longitud de onda. Esta luz
fluorescente puede ser separada de la radiación que la rodea utilizando filtros diseñados para esa
longitud de onda en específico, permitiendo que el observador visualice sólo aquello que es
fluorescente.
Aplicaciones: Son numerosas las aplicaciones de la microscopía de fluorescencia, notablemente
en biología y medicina:
• Marcaje de moléculas en células y tejidos para su caracterización e identificación.
• Estudio de células normales y patológicas.
• Estudios inmunológicos.
• Mineralogía.

° Microscopio de Confocal
Principios de funcionamiento: El principio en el que se basa el microscopio confocal es eliminar la
luz procedente de los planos fuera del foco. El microscopio confocal trabaja con epiluminación, es
decir, con muestras que reflejan la luz o emiten fluorescencia.
Aplicaciones: Ha emergido como una técnica que exhibe algunas ventajas en comparación con los
sistemas convencional están basados en la microscopía clásica. La principal de las ventajas radica
en el hecho de que las zonas borrosas que aparecen debido a los puntos fuera del foco están
prácticamente ausentes de las imágen

° Microscopio de Contraste de Fases

Principios de funcionamiento: Se basa fundamentalmente en el retraso que se produce en las
ondas de luz al atravesar objetos de distintos índices de refracción, aprovechando y amplificando
dichos retrasos. El microscopio de contraste de fase permite observar células sin colorear y resulta
especialmente útil para células vivas.
Aplicaciones: Se usa principalmente para aumentar el
contraste entre las partes claras y oscuras de las células sin colorear. Es ideal para
especimenes delgados, o células aisladas.
2. Defina las siguientes propiedades básicas del microscopio:

a) Poder de ampliación c) Poder de resolución

b) Poder de definición d) Apertura numérica

MATERIALES (Por grupo)

❑ 1 Microscopio compuesto ❑ Hoja de afeitar o bisturí́

❑ Láminas portaobjetos ❑ 1 Flor de Bonche roja *
❑ Láminas cubreobjetos ❑ 1 página de periódico o
❑ Corcho * revista*
❑ Granos de polen *
*MATERIALES QUE DEBE TRAER EL ESTUDIANTE

PROCEDIMIENTO
1. MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO
- Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la
platina completamente.
- Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
- Comenzar la observación con el objetivo de 4x o colocar el de 10x si la
preparación es de bacterias.

Para realizar el enfoque:

NOTA: La distancia entre la platina y la muestra es inversamente proporcional

al aumento del objetivo usado, de tal forma que CUANTO MAYOR EL
AUMENTO DEL OBJETIVO MENOR LA DISTANCIA A LA QUE SE UBICARÁ LA
PLATINA; así́, al usar un objetivo de 4X, la platina y por ende la muestra, estarán
ubicadas a mayor distancia del objetivo, mientras que para un objetivo como el
de 100X, la platina, la muestra y el objetivo estarán a pocos milímetros de
distancia.

1. Con el enfoque en 4X y observando por el ocular, suba la platina

lentamente hasta obtener la imagen.
2. Una vez captada la imagen, girar el micrométrico hasta obtener un
enfoque fino. Haga sus observaciones y dibujos.
3. Para pasar a otro objetivo, como la imagen debería estar casi enfocada,
cambie el objetivo y solo mueva un poco el micrométrico para lograr el
enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió́ por completo la imagen,
es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior.
4. Para trabajar con el objetivo de 100X deberá́ usarse el aceite de
inmersión. Es recomendable pasar a este objetivo solo después de haber
hecho las observaciones con los objetivos de menor aumento para evitar
el riesgo de contaminarlos con aceite y causarles un daño grave.
 5. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por
ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: i) incrustarlo en la
preparación si se descuidan las precauciones anteriores y ii) mancharlo
con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó́
con el objetivo de inmersión.

2. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

- Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en

posición de observación y dejarlo cubierto con su funda para evitar que se
ensucien y dañen las lentes. Si el microscopio no se va a usar de forma
prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo
del polvo.
- Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de arroz.
- No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está́ utilizando el
microscopio.
- Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que
queda en el objetivo con papel de arroz. Se pasará el papel por la lente en un
solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el
objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No
hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes
en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.
- Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella
algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un
paño humedecido en xilol.

3. MONTAJE DE UNA PREPARACIÓN MICROSCÓPICA TEMPORAL

3.1 LETRA E: Selecciona una letra e (minúscula) y lo más pequeña posible de

tu hoja de papel periódico o revista, colóquela en el portaobjetos de manera
que quede derecha (como se lee), coloque 1 gota de agua destilada y después
un cubreobjetos, procurando que no lo queden burbujas de aire haciendo un
ángulo de 45o. Proceda a su observación microscópica. Haga su esquema
correspondiente utilizando el objetivo de 4X.
 LETRA e (4X) CORCHO. (10X)

3.2 CORCHO: Haga varios cortes delgados de corcho utilizando la hoja de

afeitar nueva y escoja el más fino. En un porta objetos coloque una gota de agua
destilada y coloque en el pedazo de corcho seleccionado. Colóquele un cubre
objetos, Colóquele un cubre objetos, procurando que no lo queden burbujas
de aire haciendo un ángulo de 45o. Proceda a su observación microscópica.
Haga su esquema correspondiente utilizando el objetivo de 10X y lo observado
en el video del laboratorio.

3.3 POLEN: Coloque granos de polen del androceo de una flor en un

portaobjetos, con ayuda de un gotero ponga una gota de agua y observe al
microscopio. Es necesario colocar el cubreobjetos y realizar un SQUASH para
liberar el polen. Esquematice sus observaciones utilizando el video de la
observación con el objetivo de 10X.

3.4 Flor de Bonche: (Opcional) Corte un pequeño fragmento de un pétalo de

la flor, colóquelo en un portaobjetos. Con un gotero ponga una gota de agua, y
observe al microscopio. . Colóquele un cubre objetos, Colóquele un cubre
objetos, procurando que no lo queden burbujas de aire haciendo un ángulo de
45º. Proceda a su observación microscópica. Esquematice sus observaciones
con el objetivo de 40X.

POLEN. (10X) FLOR DE BONCHE (40X)

2. Defina las siguientes propiedades básicas del microscopio:
a) Poder de ampliación
R// Es la relación entre diámetro aparente y el diámetro del objeto. Por
ejemplo, si un microscopio aumenta 10 diámetros un elemento significa
que se observa una imagen ampliada en 10 veces. Para determinar el
aumento, se calcula los aumentos del objetivo y el ocular empleado.

b) Poder de definición
R// Es la nitidez de las imágenes que se obtiene. Esto depende de la
calidad de las lentes. Un microscopio tiene un buen poder de definición
cuando logra mostrar contornos nítidos. Para que sea de calidad es
necesario que cuente con objetivos apocromáticos y oculares
compensados. Es decir, un microscopio es bueno cuando su sistema
óptico está corregido para evitar las aberraciones ópticas (aberraciones
cromáticas y aberraciones esféricas).

c) Poder de resolución
R// También se lo conoce como poder separador y es la distancia mínima
entre dos puntos que pueden verse separados. En un microscopio óptico
este valor es de 0,2 décimas de micrómetro mientras que en el
electrónico es de 10 A.

d) Apertura numérica
R// Es una medida que indica la capacidad del objetivo de poder captar
los rayos refractados por las estructuras finas de las cuales está
constituido el objeto que se observa. Esta capacidad se traduce en el
poder 5 del microscopio de formar imágenes que muestren al observador
una serie de detalles del objeto que se está examinando. Cuanto mayor
sea la apertura numérica de un objetivo, éste tendrá una mayor
capacidad de mostrar detalles finos en la imagen que forma.
 WEBGRAFÍA

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defases#:~:text=Se%20basa%20fundamentalmente%20en%20el,especial