CARRERA DE MEDICINA

MANUAL DE BIOQUÍMICA PRACTICA

MATERIALES DE LABORATORIO
El vidrio es el material más utilizado en el laboratorio. Con él, se fabrican los recipientes y los
accesorios más comunes, ya que posee propiedades que hacen de él, el material más adecuado.

Estas propiedades son: la transparencia, la resistencia al calor y la escasa reactividad de las

sustancias químicas.

Los objetos de vidrio mejor conocidos y más usados son los clásicos TUBOS DE ENSAYO,
cerrados en un extremo con fondo redondeado. Los hay de distintas dimensiones y capacidad.
Algunos son graduados para colocar una cantidad determinada de reactivo a utilizar. Otros tienen
un grosor y forma adecuados para ser utilizados en las centrífugas.

Otros, son los FRASCOS DE ERLENMEYER, los MATRACES DE FONDO PLANO Y LOS
VASOS DE PRECIPITACIÓN. Todos ellos, son elaborados de tamaños y capacidades distintas
desde 25 ml hasta de algunos litros. Los vasos de precipitación se usan cuando no importa evitar
la evaporación del líquido; en caso contrario, se prefieren los frascos de Erlenmeyer o los
matraces que tienen el cuello y boca menos anchos que el fondo y se pueden cerrar con tapón
esmerilado.

Para medir líquidos, se utiliza recipientes llamados “aforados” que presentan en su pared una
escala graduada de medida y que, por tanto, llenados hasta una señal marcada sobre ellos,
indican exactamente el volumen de líquido Algunos matraces aforados, suelen tener una sola
señal o enrase en su cuello largo, que permiten medir volúmenes exactos.

Para medidas de menor precisión, se utilizan las PROBETAS o cilindros graduados de distintas
capacidades.

Finalmente, las PIPETAS son tubitos que se usan para trasvasar líquidos ele un frasco a un tubo
de ensayo. Las hay de distinta capacidad, entre 0.1 y 10 ml, son de vidrio y con una escala
graduada; tienen un orificio superior y terminan en punta en un orificio inferior. Para usar la pipeta
de vidrio, es preciso tomarla con la mano y aspirar con la mano y aspirar con la boca el líquido
hasta unos 2 cm por encima de la señal correspondiente a 0; se tapa luego rápidamente el
extremo superior con el índice, se deja vaciar hasta la señal 0 (cero), tras lo cual se lo. lleva hasta
el recipiente al cual se va a trasvasar el líquido, soltando lentamente la presión del dedo y
manteniendo la pipeta perfectamente vertical hasta que la columna líquida alcance la señal
correspondiente. Las graduaciones varían entre 0.1 y 0.01 de ml. En el extremo superior de las
pipetas se identifica el volumen total y el de cada división, de la misma, así como una banda de
color característica de la capacidad. Además, existen las PIPETAS DE PRECISIÓN, que
consisten en un dispositivo manual destinado al trasvase de cantidades exactas en microlitros o
lambdas y las hay de 20, 50, 100 y 200 microlitros (ul) utilizadas en los mícro métodos para
determinar sustancias químicas o actividad enzimática en líquidos biológicos.

Otro aparato muy utilizado en el laboratorio, es la BALANZA para pesar sustancias químicas, la
misma que ha variado con el tiempo desde la común, usada por el tendero, hasta las actuales,
electrónicas, de precisión, y que se protegen del polvo y de las corrientes de aire con una cubierta
de vidrio y no requieren de pesas

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FOTOCOLORIMETRÍA
La mayoría de los métodos modernos para el análisis de los componentes de la sangre, orina y
otros líquidos biológicos, se basan en la producción de una solución coloreada y la comparación
de la luz qué transmite (o absorbe) dicha solución problema con relación a la que transmite una
solución de concentración conocida.

Los métodos son generalmente simples, rápidos y sensibles y se puede estimar pequeñas
cantidades de sustancias muy difíciles de medir por otros métodos. Actualmente se emplean
técnicas e instrumentación fotométrica.

Los Fotómetros son instrumentos para medir la luz que llega a una Fotocelda, por medio de un
potenciómetro al que se adapta una escala convencional graduadas en unidades que permiten
hacer el cálculo de la concentración del material emisor, absorbente dispersor o transformador de
longitud de onda (fluorescencia) de la luz.

Los Fotocolorímetros o espectrofotómetros miden la absorción de la luz a longitudes de ondas

específicas de materiales transparentes como las soluciones no solo en el rango visible des
espectro electromagnético, sino extensivo al ultravioleta y al infrarrojo La medición de la luz
dispersada por el material suspendido en un líquido, se conoce con el nombre de nefelometría o
turbidimetría.

Los Fotómetros constan en esencia de las siguientes partes.

● Una fuente luminosa que es variable según la zona del espectro que se desea utilizar:
lámpara de Hidrógeno, mercurio, halógeno, etc.
● Un dispositivo colimador para alinear los rayos luminosos que se emiten en todas las
direcciones a partir del material incandescente.
● Un selector de longitud de onda para alinear el haz de luz de la fuente, eliminando las
radiaciones de longitud de onda que no se van a utilizar y obtener luz monocromática y que
puede ser un filtro que descompone la luz en su espectro y por medio de una hendidura móvil
dejar pasar solo la que interesa.
● Una cubeta que es solo un recipiente que absorbe una cantidad de luz conocida y constante,
en la cual se coloca la solución problema o el blanco de reactivos.
● Una Fotocelda que transforma, por efecto fotoeléctrico, la energía luminosa en energía
eléctrica.
● Un potenciómetro para medir la corriente generada en la Fotocelda con escala graduada en
unidades de lectura convenientes como densidad óptica (D.O), transmitancia (T).

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1. AGUA Y SOLUTOS DE LA ORINA

La cantidad de gramos de solutos por litro de orina, puede calcularse fácilmente multiplicando las
dos últimas cifras de la densidad urinaria, por el llamado COEFICIENTE DE LONG = 2.8; lo que
nos da un valor aproximado, considerando que no todas las sustancias tienen el mismo efecto
sobre la densidad urinaria.

NOCIONES PRELIMINARES
● La orina es una solución de agua y solutos de desecho.
● La cantidad de orina eliminada al día es de 800 a 1.500 ml
● La cantidad de solutos de desechos eliminados al día es de 50 a 70 g. que son tanto
orgánicos como inorgánicos.
● Determinando la DENSIDAD URINARIA (también llamada gravedad específica) sé puede
investigar fácilmente la relación SOLUTOS DE LA ORINA/AGUA.
● Los valores normales de densidad urinaria fluctúan entre 1015 y 1025.
● Este valor aumentará si se incrementa la cantidad de solutos eliminados en la orina; mientras
que se verá disminuido en el caso de que se incremente la eliminación de agua, de esta
manera los valores pueden variar desde 1.010 hasta 1.030. (Por esto se dice que la densidad
urinaria guarda una relación directa con la cantidad de sólidos eliminados, e inversa con la
cantidad de agua eliminada).
● La cantidad de agua eliminada depende de:
■ LA ACCIÓN DE LA HORMONA ANTIDIURÉTICA (ADH).
■ LA ACCIÓN DE LA ALDOSTERONA.
● Cuyas funciones guardan relación con la OSMOLALIDAD de los líquidos biológicos.
● La cantidad de sólidos eliminados, debido a su variedad depende de varios factores.

COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA ORINA

● Los sólidos de la orina son:
■ a) ORGÁNICOS (33 gramos)
○ Urea: 30 g.
○ Creatinina: 1.5 g.
○ Otros: como el amoniaco, ácido úrico, albúmina, cuerpos cetónicos; que en total se
eliminan 1.5 g.
■ b) INORGÁNICOS (20.2 gramos)
○ Cloruros: 10 g.
○ Sodio: 4 g.
○ Fosfato de potasio: 4 g.
○ Otros: como el azufre, magnesio, yodo, arsénico, plomo; que en total se eliminan
2.2g.

IMPORTANCIA MÉDICA
● Normalmente la primeras-orina de la mañana es más densa (más solutos) que las emitidas
durante el resto del día.
● Con la ingestión de líquidos, la densidad urinaria puede bajar hasta: 1010 y aún a cifras más
bajas.
● Por eso es que la densidad debe ser determinada en orinas emitidas en las mañanas para
evitar errores de interpretación clínica.
● En caso de enfermedades, las densidades urinarias de todas las muestras diarias pueden
variar desde 1.001 hasta 1.060.
● Una densidad urinaria constante (isostenuria) de 1.010, nos indica que los riñones han
perdido la capacidad de concentrar la orina, por lo tanto, una isostenuria es indicativa de falla
renal.
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CAUSAS DE ALTERACIONES EN LA DENSIDAD URINARIA

DISMINUCIÓN DE LA DENSIDAD URINARIA: (ALGUNAS CAUSAS)

● INGESTIÓN EXCESIVA DE AGUA.
● ALTERACIONES EN LOS TÚBULOS RENALES.
● FALLAS EN HORMONAS: ANTIDIURÉTICA Y ALDOSTERONA.

AUMENTO DE LA DENSIDAD URINARIA: (ALGUNAS CAUSAS)

● DESHIDRATACIÓN INTENSA.
● FIEBRE.
● PRIVACIÓN DE AGUA.
● DIABETES MELLITUS (POR ELIMINACIÓN DE GLUCOSA)
● NEFROSIS (POR ELIMINACIÓN DE ALBÚMINA)

AUMENTO DE LOS SOLUTOS URINARIOS (CAUSAS)

Orgánicos:
■ Urea: sobrealimentación proteica, degradación de las proteínas tisulares por fiebre,
infecciones, neoplasias, diabetes mellitus.
■ Creatinina: en afecciones musculares (etapas iniciales).
■ Glucosa: en diabetes mellitus
■ Albúmina: en afecciones renales (nefrosis).
Inorgánicos:
■ Cloruro y Sodio: por aumento de ingestión, falla de aldosterona.
■ Fosfatos: disminución de la absorción tubular renal debido a: hipertiroidismo, raquitismo
renal, intoxicación por vitamina D.
■ Potasio: en infecciones renales, utilización de diuréticos, hipercatabolismo proteico,
hiperaldosteronismo primario.
■ Calcio: por alteración en la reabsorción tubular, hiperparatiroidismo primario,
hipertiroidismo, acidosis renal, Intoxicación, dieta láctica excesiva.

DISMINUCIÓN DE LOS SOLUTOS URINARIOS (CAUSAS)

a) Orgánicos:
■ Urea: disminución de la ingesta de proteínas, disminución de la síntesis hepática por
insuficiencia.
■ Creatinina: en afecciones musculares (etapas finales).

b) Inorgánicos:
■ Cloruro de sodio: dieta sin sal, retención acuosa (edema), deshidratación por pérdidas
extrarrenales (vómitos, diarreas, quemaduras).
■ Fosfatos: aumento de la absorción tubular renal por: insuficiencia paratiroidea,
hipovitaminosis D; por disminución de la absorción intestinal de fosfatos.
■ Calcio: Raquitismo e insuficiencia paratiroidea.

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