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UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD DPTO: MEDICINA

CARRERA: MEDICINA

BIOQUIMICA I

GUIA PRACTICA DE LABORATORIO

COMPETENCIAS ESPECFICAS A SER EVALUADAS EN LA CLASE PRCTICA DE BIOQUMICA I


SABER SER HACER Revisin y Calidad de Desarrollo aplicacin de trabajo de la Disciplina conocimiento (mapas, casos prctica. (Uso de Puntualidad previo clnicos, (Uso vestimenta (examen) resolucin de correcto de adecuada) previo) cuestionario) Material) SABER

EVALUACIN DE PRCTICA

Nota Examen parcial parcial

NOTA FINAL

ESTUDIANTES

PUNTAJE

0 - 9

0-3

15

15

30

UNIVERSIDAD DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA No 1 INTRODUCCIN AL LABORATORIO DE BIOQUMICA -BIOSEGURIDAD

I.-CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO El laboratorio de Bioqumica es el complemento a la materia terica de Bioqumica I, estableciendo una correlacin con los temas impartidos en la teora. El laboratorio de anlisis bioqumico es un ambiente dinmico actual que permite enfrentar el reto de manejar pruebas ms sensibles, especficas y efectivas en el monitoreo de la salud y la enfermedad basados en conocimientos previos de la parte terica de Bioqumica sobre los constituyentes qumicos de los seres vivos, sus funciones y transformaciones que pueden alterarse y desencadenar en procesos patolgicos. Las pprcticas estn diseadas para que los estudiantes desarrollen un conjunto de habilidades que les permitan la aplicacin flexible de las tcnicas manuales mediante la utilizacin de equipos y materiales especficos de laboratorio, cumpliendo estrictamente con las normas de bioseguridad y de manejo de residuos biolgicos establecidas en el laboratorio. En adicin, el estudiante debe familiarizarse con las distintas unidades de medicin y factores de conversin utilizados en Bioqumica que le permitan calcular resultados, interpretar valores y resolver casos clnicos. Por otro lado, durante el curso se debe fomentar que el estudiante por s mismo, consulte y complemente las clases prcticas, mediante la revisin de la bibliografa de referencia que le impulse a la actualizacin continua de sus conocimientos. Material volumtrico Son aquellos que se utilizan para medir volmenes, son de vidrio o de plstico transparente que permiten la visualizacin del lquido que se desea medir, poseen unas marcas grabadas ya sea en forma graduada o de aforos. NOMBRE DESCRIPCIN Y USOS MATRAZ Es un recipiente con forma de pera, fondo plano y un cuello largo y VOLUMTRICO delgado, puede ser de vidrio borosilicatado o polipropileno, dependiendo O AFORADO de su aplicacin Tiene una marca grabada alrededor del cuello que indica un volumen determinado que contiene a una temperatura especfica. La marca de graduacin rodea todo el cuello de vidrio, por lo cual es fcil determinar con precisin cundo el lquido llega hasta la marca. Los matraces se presentan en volmenes que van de 10 ml hasta 2 l. Uso: Se emplea para la preparacin de disoluciones de concentracin conocida y exacta. MATRAZ Es un frasco cnico de vidrio de base ancha y cuello estrecho, que ERLENMEYER puede ser de diversas capacidades. Usos: Se emplea para el calentamiento de sustancias, agitacin de sustancias y preparacin de reactivos de trabajo. PIPETA MANUAL El volumen de la pipeta se determina por diversas graduaciones de enrace y existe desde 0,1 ml a 10 ml. Puede ser de vidrio (reutilizables), o de plstico (de un slo uso). La pipeta se llena por un sistema mecnico denominado pro pipeta que es un instrumento que evita el contacto con la sustancia a medir. Usos: Se emplea para medir y transferir pequeos volmenes de disoluciones con exactitud.

NOMBRE TUBO DE ENSAYO

MICROPIPETA

DESCRIPCIN Y USOS Consiste en un pequeo tubo de vidrio con una punta abierta (que puede poseer una tapa) y la otra cerrada y redondeada que se construye de cristales resistentes (vidrio borosilicatado) que permite el calentamiento. Usos: Sirve para contener pequeas muestras lquidas, realizar reacciones en pequea escala, conservacin de muestras discretas de reactivos. Es un instrumento de laboratorio automtico; los volmenes que puede captar volmenes que pueden variar segn el modelo: los ms habituales, denominados p20, p50 y p100, admiten un mximo de 20, 50 y 100 l respectivamente; utilizan puntas desechables, de plstico y estriles. Existen dos tipos de puntas: las amarillas, para pipetear volmenes pequeos (10 l), y las azules, para pipetear volmenes grandes (80 l). Usos: Sirve para medir pequeos volmenes de lquidos en forma exacta La pipetas automtica es un instrumentos de gran precisin, cuyo perfecto funcionamiento, exactitud y mantenimiento dependen de que se utilice con gran cuidado teniendo en cuenta varios factores: Ajuste cuidadoso al volumen a toma Colocar el mbolo al final de su recorrido antes de introducir la punta de la pipeta en la solucin a tomar, evitando as la formacin de burbujas en la solucin. Tener en cuenta los dos topes del recorrido del mbolo. El primer tope (ofrece ligera resistencia al dedo) indica el volumen exacto a tomar. El segundo tope se emplea para expulsar la totalidad del lquido. Si se carga la pipeta apretando hasta el ltimo tope, se toma ms volumen del medido, producindose un error por exceso. Devolver con suavidad el mbolo a su origen al cargar la solucin. No invertir ni inclinar excesivamente la pipeta cuando est cargada con un lquido. No golpear ni dejar caer la pipeta. No tocar la punta de la pipeta con los dedos al colocarla, ya que puede contaminar la solucin a medir Expulsar las puntas utilizadas en los contenedores dispuestos a tal efecto en todas las mesas.

PROBETA

Est formada por un tubo de vidrio o de plstico transparente de unos centmetros de dimetro, tiene graduacin que indica distintos volmenes. En la parte inferior est cerrada y posee una base que sirve de apoyo, mientras que la superior est abierta y suele tener un pico que permite verter el lquido medido. Puede estar constituido de vidrio o de plstico. Usos: Sirve para medir volmenes de lquidos en forma menos exacta

TUBOS DE EPPENDORF

Son pequeos viales cnicos, provistos de tapa Usos: Se utilizan para centrifugar a gran velocidad pequeos volmenes o para almacenar cantidades pequeas de soluciones.

CUBETAS DE Son pequeos contenedores con dos caras transparentes que ESPECTROFOTMETRO pueden ser de plstico o de vidrio, segn la longitud de onda a la que se quiera medir. Pueden ser tambin de varios volmenes, siendo las ms frecuentes de 1 ml y de 3 ml. Usos: Se utilizan para colocar las soluciones cuya absorcin de luz o color se desea determinar mediante un espectrofotmetro Equipos ESPECTROFTMETRO Es un equipo que mide una regin del espectro de la luz absorbido o emitido por una muestra cuya concentracin se desea averiguar porque todas las sustancias pueden absorber energa radiante, ya sea ultravioleta, visible e infrarroja y depende de la estructura de las molculas, siendo caracterstica para cada sustancia qumica. El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida. Los componentes bsicos del instrumento son: una fuente de luz (foco), un selector de la longitud de onda (monocromador), filtros, cubetas (tubos especiales para muestras) y un detector digital. Los principales pasos para el manejo del espectrofotmetro son: Verificar el voltaje de la corriente de este equipo Encender y dejar estabilizar el equipo durante 10 minutos como mnimo Elegir la longitud de onda requerida Colocar el blanco (agua destilada por lo general) para verificar la absorbancia Colocar la muestra a ser medida en las cubetas Elegir el tipo de medicin absorbancia o transmitancia Leer los valores mostrados en la pantalla y registrar Desenchufar y cubrir

MICROSCOPIO

CENTRFUGA DE BAJA VELOCIDAD, DE SOBREMESA O CLNICAS BAO MARIA

Es un instrumento que est formado bsicamente por una parte mecnica y una parte ptica que es capaz de conseguir aumentos considerablemente mayores de un objeto muy pequeo. Los principales pasos para el manejo del microscopio son: Retirar el microscopio, tomndolo con una mano por el brazo y con la otra mano por la base, transportar en posicin vertical. Apoyarlo sobre la mesa donde se va a trabajar. Limpiar suavemente la parte mecnica del microscopio con un pao Verificar el voltaje antes de conectar a la corriente Conectar a la corriente y encender Sentarse en forma adecuada frente al microscopio Abrir el diafragma del condensador Subir el condensador ( no tocar el portaobjetos) Colocar el objetivo de menos aumento o el ms pequeo Regular la intensidad de luz Bajar la platina y colocar el preparado en la platina Centralizar el preparado, hacer coincidir, el tejido con el rayo de luz observando por un costado Enfocar observando con los ojos cerca de los oculares, usando los mandos de enfoque macro y micromtrico hasta lograr encontrar la imagen Para cambiar de aumento se hace rotar el revolver Para sacar la preparacin, girar el revolver y colocar al objetivo de menor aumento y retirar la lmina Apagar, desconectar de la corriente y guardar. Es una mquina que pone en rotacin una muestra para poder separar sus fases (generalmente una fase slida de una lquida) a travs de la fuerza centrfuga que se genera, permite la separacin de clulas y lquidos de diferente densidad Es un equipo que mantiene la temperatura constante gracias a un bao de agua que se puede calentar o enfriar segn se requiera. Este equipo consta de un recipiente donde se coloca agua destilada en suficiente cantidad, botn de encendido/apagado un selector de temperatura, un termostato que controla la temperatura del agua y una pantalla digital que indica la temperatura. Para su manejo se procede de la siguiente manera: Verificar el voltaje de la corriente elctrica Encender y dejar estabilizar durante 10 minutos como mnimo Verificar el nivel de agua destilada Colocar los tubos debidamente formados en una gradilla metlica Controlar el tiempo de reaccin Sacar la gradilla con los tubos una vez concluida la reaccin Apagar y desenchufar

II.- OBJETIVOS.-

Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de: Reconocer los equipos y materiales utilizados en el laboratorio de bioqumica Manejar correctamente los equipos y materiales de vidrio utilizados en el laboratorio de bioqumica considerando las normas de bioseguridad establecidos por el manual de bioseguridad de laboratorios Desarrollar una actitud y pensamientos crticos en el trabajo.

III.- MATERIAL Y REACTIVOS.REACTIVOS- EQUIPOS CANTIDAD MATERIALES CANTIDAD Pipetas graduadas y volumtricas Centrfuga 1 20 Vaso de precipitacin Microscopio 6 6 Tubos de ensayo Bao Mara 1 12 Gradilla Espectrofotmetro 1 6 Matraz Erlenmeyer 6 Matraz aforado 6 Micro pipetas de volumen variable 6 Puntillas Pro pipetas 10 IV.-PROCEDIMIENTO. 1. Planificacin de la prctica: La prctica se llevar a cabo en forma individual 2. Desarrollo de la prctica: Cada alumno reconocer los distintos equipos y materiales de laboratorio Cada alumno realizar medidas de diferentes volmenes de acuerdo al siguiente procedimiento: o Llenar de agua un vaso de precipitacin o Poner la pro pipeta sobre una pipeta de 5ml. o Pipetear 5 ml de agua con una pipeta de 5 ml, divisiones 1/10 y verter diferentes volmenes a un tubo de ensayo. o Realizar el mismo procedimiento con pipetas de diferentes volmenes V.- CUESTIONARIO.1. Nombre los tipos de tcnicas Bioqumicas que se emplean en el diagnstico de patologas 2. En que unidades se expresa la concentracin de las enzimas en el organismo 3. Convierta 120 mg/dl de glucosa a mol/l, Meq/l y g% 4. Describa la clasificacin de las pipetas 5. Elabore un mapa conceptual de las normas de bioseguridad establecidas para el laboratorio de Bioqumica 6. Realice la clasificacin de los siguientes residuos slidos A.- Clase A- rojo B.- Clase B- azul C.- Clase C- negro ( ( ( ( ( ( ( ( ( ) residuos de rganos ) sangre ) radiactivos ) frascos sin sangre ni fluidos ) plstico ) residuos farmacuticos ) animales contaminados ) cartones o envolturas ) hemoderivados

( (

) residuos qumicos ) guantes con sangre

UNIVERSIDAD DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA No 2 FLEBOTOMA- RECOGIDA DE MUESTRA SANGUNEA I.-CONOCIMIENTO PREVIO REQUERIDO La sangre es el tejido ms fcilmente biodializable que puede alterarse ante circunstancias patolgicas y fisiolgicas que modifican tanto los elementos celulares que la integran como las sustancias presentes en el plasma. En el adulto el volumen total de sangre comprende el 8 % de la masa corporal (rango, 7 y 9 %, aprox. 70 a 80 ml/kg de peso), es decir 4 a 5 litros en la mujer no embarazada y 5 a 6 litros en el varn. El pH de la sangre es de 7.40 y su densidad es de 1.055 g/cm3 La sangre tiene las siguientes funciones: Transporte de gases: Oxgeno desde los pulmones hacia los tejidos y dixido de carbono desde los tejidos hacia los pulmones Transporte de nutrientes desde el tracto digestivo hacia el hgado y otros tejidos, e intercambio de nutrientes entre diversos tejidos. Transporte de seales hormonales desde las glndulas endocrinas hacia sus rganos blanco Transporte de sustancias de desecho hacia los rganos de eliminacin (rin, hgado) Transporte de calor y regulacin de la temperatura Metabolismo de hormonas y diversas sustancias biolgicas Regulacin del equilibrio cido bsico Regulacin del equilibrio hidrosalino Defensa contra microorganismos El anlisis de sangre es una herramienta de gran utilidad para el diagnstico clnico porque la sangre est compuesta por diferentes clases de clulas y una parte lquida, llamada plasma; el plasma contiene varias substancias que estn disueltas en el lquido. La sangre fuera del organismo se coagula porque sus clulas y protenas se hacen slidas, quedando una parte lquida que se denomina suero que carece de clulas y de factores de la coagulacin incluyendo la protena fibringeno, pues sta ha sido transformada en fibrina insoluble en el proceso de la coagulacin. La porcin celular de la sangre consta principalmente de glbulos rojos, glbulos blancos y plaquetas. El suero puede ser analizado en pruebas bioqumicas y serolgicas en cambio la sangre total obtenida con un anticoagulante sirve para realizar el hemograma y mediante el anlisis de la coagulacin se mide la capacidad de la sangre para llevar a cabo la coagulacin. Composicin de la sangre Plasma El plasma sanguneo es la porcin lquida de la sangre de color amarillento en la que estn inmersos los elementos formes. Es una solucin acuosa de un 91% y el 8% contiene protenas, aminocidos, glcidos, lpidos, sales, hormonas, enzimas, anticuerpos, urea, gases en disolucin y sustancias inorgnicas (Na+, K+, CaCl2, C03, H2C03). El plasma se obtiene cuando, inmediatamente despus de extraer la sangre, se le agrega anticoagulantes como EDTA (Etilendiamino tetra actico) o heparina y se centrifuga. Elementos celulares de la sangre ERITROCITOS Son los ms abundantes en la sangre, tienen una forma de discos redondeados, bicncavos con un dimetro aproximado de 7,5 ul, no presentan ncleo y tienen una vida media de 120 das Contienen la hemoglobina que transporta O2, CO2 e H+ Carecen de ncleo

Son destruidos y extrados de la sangre por el bazo, el hgado y la mdula, donde la hemoglobina se desintegra, pero el Fe es reutilizado para formar nueva hemoglobina LEUCOCITOS Forman parte del sistema inmunolgico, son encargados de destruir los agentes infecciosos. Segn su citoplasma y su ncleo se dividen en: Los granulocitos que tienen un ncleo redondeado, numerosos grnulos en su citoplasma y se forman en las clulas madres de la mdula sea, los granulocitos pueden ser: Neutrfilos, que fagocitan y destruyen bacterias, los eosinfilos, que se activan en presencia de ciertas infecciones y alergias, los basfilos, que segregan sustancias como la heparina, que es anticoagulante e histamina que se produce en la inflamacin. Los agranulocitos que no tiene grnulos en el citoplasma y se forman en la mdula sea y en el timo y pueden ser: Linfocitos o monocitos PLAQUETAS Son cuerpos pequeos, ovoideos, sin ncleo, con un dimetro menor que el de los eritrocitos. Los trombocitos o plaquetas que participan en la hemostasia (prevencin y detencin de las hemorragias) porque se adhieren a la superficie interna de la pared de los vasos sanguneos en el lugar de la lesin y ocluyen el defecto de la pared vascular II.- OBJETIVOS.A la conclusin de la prctica el alumno ser capaz de: - Preparar el material necesario para la obtencin de muestra sangunea por puncin venosa y capilar. - Aplicar adecuadamente el procedimiento para la puncin venosa o puncin capilar - Evaluar los cuidados y recomendaciones para realizar una puncin venosa y capilar III.- MATERIAL Y REACTIVOS.REACTIVOS- EQUIPOS CANTIDAD MATERIALES CANTIDAD Cinta adhesiva Centrfuga 1 Gradilla Microscopio 6 Guantes de ltex. 2 Agujas y jeringas desechables estriles de volumen entre 5 a 10 ml (Con agujas N 21 G para adultos) 15 Lazo de goma o torniquete. 6 Recipientes descartadores 6 Torunda con alcohol. Torundas secas Micro pipetas 6 Tubos de hemlisis 30 Puntillas Jabn antisptico Cola de Zorro 1 Papel absorbente Plastilina 1 Lancetas 20 IV.-PROCEDIMIENTO.1. Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en grupos de 5 personas. 2. Desarrollo de la prctica:

Un estudiante de cada grupo realizar un libro de registro en el que se anotan los datos del paciente (Nmero, nombre completo, edad, sexo, procedencia, tipo de prueba a realizarse) Cada estudiante realizar la toma de muestra sangunea por puncin capilar o venosa de acuerdo al siguiente procedimiento. 3. Toma de muestra de sangre La sangre perifrica constituye el material biolgico de eleccin sobre el cual se realiza la mayor parte de las investigaciones de laboratorio relacionadas con la qumica clnica. La toma de muestra de sangre puede ser venosa, capilar y arterial. La sangre arterial se utiliza para estudiar los parmetros del equilibrio cido-base. La sangre venosa o capilar se utiliza indiferentemente para determinar todos los analitos. Los instrumentos que se utilicen para la toma de muestra tienen que ser absolutamente estriles, qumicamente inertes (para evitar hemlisis), muy eficientes para la penetracin a travs de la piel y poco traumticos. Desinfeccin La zona de la toma de la muestra tiene que estar limpia, desinfectada con sustancias eficaces. 3.1. OBTENCIN DE SANGRE POR PUNCIN CAPILAR SITIO DE PUNCIN: Dedo anular en su superficie palmar en el ltimo segmento (Yema del dedo), lbulo de la oreja, superficie plantar media o lateral del taln. Realizar la antisepsia del lugar elegido Dejar secar el rea Puncionar con rapidez y firmeza de tal manera que ingrese toda la punta de la lanceta. Descartar la primera gota. Tomar la sangre que fluye libremente, llenando partes el capilar sellar con plastilina el otro extremo del capilar Realizar hemostasia por compresin 3.2. OBTENCIN DE SANGRE POR PUNCIN VENOSA SITIO DE PUNCIN: Vena ceflica o mediana cubital, femoral, venas del dorso de la mano o del dorso del pie El personal deber usar guantes de ltex para realizar operaciones de recoleccin de sangre y para toda manipulacin de sangre, suero, plasma y otros especmenes. La toma de muestra se efecta preferiblemente de una vena anterior del brazo: en la mayora, se escoge la vena ceflica o la vena cubital mediana. Solicitar al paciente que empue la mano para facilitar la aparicin de la vena. Ligar unos 7 cm arriba de la fosa ante cubital (pliegue del codo) Pedir al paciente que cierre el puo firmemente varias veces; esto favorece que las venas que normalmente tienen forma elptica, se vuelvan ms turgentes y redondeadas Localizar la vena palpando y visualizando cual es la ms apta Limpiar el sitio de la puncin con torunda de algodn impregnada con alcohol 70% u otro antisptico cutneo, con movimiento circular desde adentro hacia fuera Con el dedo ndice o el pulgar de la otra mano fijar la vena en un lugar prxima a la puncin para evitar que esta se mueva Introducir la aguja con el bisel hacia arriba de 1 a 2 cm hasta ver que fluya la sangre, formando un ngulo de 15 con la piel. Despus de haber llevado a cabo la venopuncin, aflojar el torniquete y extraer la aguja Sostener con firmeza una torunda de algodn seco sobre el sitio de extraccin durante algunos minutos Poner sobre este sitio una tira de cinta adhesiva Separar la aguja de la jeringa de acuerdo a normas de bioseguridad

La sangre que se encuentra en la jeringa (muestra), colocar en los respectivos tubos de previamente identificados, los cuales pueden o no tener anticoagulante segn el estudio a realizar (Verter la sangre por las paredes del tubo con suavidad evitando que los glbulos rojos sufran hemlisis) Los tubos pueden tener o no anticoagulante de acuerdo al tipo de prueba realizar 3.3. HEMLISIS Una de las causas ms importante para que una muestra de sangre se considere no idnea est representada por la hemlisis. La hemlisis es la ruptura del glbulo rojo y el pasaje al plasma o suero de hemoglobina (coloracin de la muestra) y de todas las sustancias contenidas (potasio y enzimas). Las causas ms frecuentes de hemlisis son: Aguja de calibre pequeo. Presencia de alcohol sobre la piel. Excesiva aspiracin (toma de muestra con jeringa). Excesiva presin en el pasaje de la sangre con la jeringa al tubo de ensayo. Mezcla muy violenta de la toma de muestra. Toma de muestra muy dificultosa y prolongada. 3.4. SEPARACIN DE SUERO O PLASMA Recoger una muestra de sangre venosa en un tubo de separacin de suero o un tubo con tapn rojo de 5 ml Permitir que la sangre se coagule en el recipiente original tapado hasta que tenga lugar la coagulacin Centrifugar la sangre coagulada durante 10 a 20 minutos a 2.500-3.600 rpm Transferir el suero mediante el empleo de micro pipetas a los tubos de eppendorf previamente identificados con los datos del paciente Las muestras de suero pueden conservarse a 2-8C durante un mximo de una semana. Para conservarlas durante perodos ms prolongados, congele las muestras a -20C Proceso de separacin de suero o plasma

V.- CUESTIONARIO.1. Describa las normas de bioseguridad para el manejo de agujas desechables 2. Describa los cuidados en la toma de muestra sangunea 3. Describa los anticoagulantes ms utilizados en el laboratorio de Bioqumica y su utilidad

UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUIMICA I PRACTICA# 3 PROTEINAS PLASMTICAS-SEMINARIO I. CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO

Los mtodos utilizados para separar las protenas plasmticas son: La electroforesis, isoelectroenfoque, inmunonefelometria, inmunoensayo turbidimtrico, inmunoensayo enzimtico, inmunodifusin radial, inmunoelectroforesis, inmunofijacin, radioinmunoensayo La tcnica ms utilizada es la electroforesis de las protenas sricas en la que las partculas cargadas se separan por su velocidad de migracin diferente. Se utiliza para separar compuestos con carga neta, como son las protenas. La movilidad electrofortica de una molcula depende directamente de su carga e inversamente del coeficiente de friccin, que a su vez depende directamente del tamao de la molcula, de su forma y de la viscosidad del medio. La migracin de las partculas es dependiente del pH del medio en que se encuentran, ya que su carga neta depende del pH: las protenas son anfolticas en su punto isoelctrico no tienen carga, pero a pH alcalino se cargan negativamente y van hacia el nodo, y a pH cido se carga positivamente e iran hacia el ctodo. La electroforesis consiste en colocar las protenas en un soporte (Geles polimricos, almidn o papel) inmersas en una solucin amortiguadora a un pH determinado dentro de un campo elctrico, las protenas se desplazan hacia un polo cargado; de acuerdo a la relacin entre el pH del amortiguador y el pI (Punto isoelctrico) de la molcula; la protena se mover hacia el ctodo, hacia el nodo o permanecer estacionaria La aplicacin principal de las membranas de acetato de celulosa es para separar las protenas del suero que las separa en 5 fracciones: En un proteinograma normal: en orden decreciente de movilidad:

ALBMINA= 53-62% (1 que migra al nodo) ALFA1 GLOBULINAS = 3 -3,6% ALFA2 GLOBULINA= 10 -10,2% BETA GLOBULINAS= 8-13% GAMMA GLOBULINAS=14-19%

Principales protenas plasmticas y su significado clnico MODIFICACIONES PATOLGICAS PROTENA FUNCIN AUMENTA DISMINUYE Pre albmina de Es una protena de fase aguda Tiene un peso molecular de Enfermedad Hodgkin negativa, que disminuye en la 54 kDa y es sintetizada en el inflamacin y en el cncer hgado En cirrosis heptica Transporte de la vitamina A Albmina Disminucin de la sntesis: Reserva de protenas en la de Fiebre, parasitosis o malnutricin, ayuno privacin nutricional o mala absorcin alimentaria Transporte de cidos grasos o enfermedad heptica crnica de cadena larga y esteroles avanzada Unin y solubilizacin de Distribucin anormal o dilucin: drogas: (salicilatos, o Sobre hidratacin barbitricos, sulfonamidas, o aumento de permeabilidad penicilina, warfarina) capilar (septicemia, Regulacin de la presin quemados) coloidal (la disminucin de la Excrecin anormal o degradacin albmina produce salida de o sndrome nefrtico lquido al espacio intersticial y o quemados edema). o hemorragia o enteropata con prdidas proteicas ALFA GLOBULINAS TIPO I TBG Protena de Sndrome nefrtico En el embarazo Transporte de hormonas unin a la tiroxina tiroideas en sangre 1 Antitripsina Enfermedad pulmonar Reacciones inflamatorias porque es Tiene un peso molecular de aguda (enfisema una protena de fase aguda 45 kDa y es producida por los pulmonar) leucocitos de pulmn y pncreas Es inhibidor de la tripsina y de la plasmina

PROTENA 1 Glicoprotena cida (Orosomucoide) Protrombina

FUNCIN Modula la respuesta celular porque est relacionada con matriz extracelular. Tiene un peso molecular 72 kDa, es producida en el hgado 1- Lipoprotena Transporte de lpidos como HDL vitaminas liposolubles y colesterol Producida en el hgado e intestino ALFA GLOBULINAS TIPO II 2- Lipoprotena Transporte de lpidos VLDL 2- Macroglobulina Es producida en el hgado y tiene un peso molecular de 820 kDa. Inhibe a las proteasas (tripsina, plasmina) Ceruloplasmina Transporte de un 90% de Cu++ Haptoglobina Se une a la hemoglobina formando un complejo que sirve de reserva de hierro. Este complejo irreversible es captado por las clulas del sistema retculo endotelial, y lo degradan en hierro y aminocidos; as el hierro puede ser reutilizado.

MODIFICACIONES PATOLGICAS AUMENTA DISMINUYE ------------------ Procesos inflamatorios agudos Enfermedades hepticas Enfermedades hepticas Enfermedad de Tangier Coagulacin intravascular diseminada Hiperlipemia

Enfermedad heptica grave Artritis mieloma

Hiperlipidemias Sndrome nefrtico Enfisema Diabetes mellitus Sndrome de Down Embarazo ------------------ Inflamacin aguda y crnica, Neoplasias Infarto de miocardio Enfermedad de Hodgkin.

Enfermedad de Wilson Enfermedad heptica crnica Eritroblastosis fetal, Anemias hemolticas, Anemia megaloblastica

PROTENA Eritropoyetina

FUNCIN Es la hormona de la eritropoyesis y es producida en el rin Transporte de hierro en plasma en forma de in frrico (Fe3+) Transporte de colesterol y fosfolpidos. Componentes del sistema de complemento producidos por el hgado

MODIFICACIONES PATOLGICAS AUMENTA DISMINUYE Enfermedades renales y Anemia autoinmunes Enfermedades hepticas Nefrosis Neoplasias malignas Desnutricin, ayuno. Enfermedades autoinmunes (lupus eritematoso sistmico, anemia hemoltica autoinmune) Edema angioneurtico hereditario Disminuye en las mismas situaciones que la haptoglobina. Edad avanzada, drogas, leucemia linftica crnica, agammaglobulinemia. Anemias con deficiencia de hierro.

BETA GLOBULINAS Transferrina

Beta lipoprotena (LDL) C3-C4

Nefrosis Hiperlipidemias -------------------

C1 inhibidor de estearasa Hemopexina

Inhibe la actividad de C1. Transporte especfico del grupo hemo.

------------------ Aumenta en las mismas situaciones que la haptoglobina.

GAMMAGLOBULINAS La regin gamma contiene las inmunoglobulinas. Se conocen 5 clases: IgG ( 150 kDa) IgA ( 180 kDa ) IgM ( 900 kDa) IgD ( 170 kDa) IgE ( 190 kDa)

Hipergammaglobulinemia Enfermedad heptica Infecciones crnicas Lupus sistmico Enfermedad de Waldenstrm, linfoma.

Caractersticas electroforticas del suero en las patologas ms comunes Inflamacin aguda El dao tisular se produce en la inflamacin aguda y es caracterizada por la respuesta bioqumica (activacin del complemento) y respuesta celular (movilizacin de fagocitos, incrementada sntesis de protenas), se presenta fiebre resultado de la liberacin de sustancias toxicas y estimulacin del sistema nervioso central, niveles altos de alfa l y alfa 2 globulinas, de protenas de fase aguda como la alfa l antitripsina, orosmucoide, haptoglobina, protena c reactiva alfa2 macroglobulina y ceroluplasmina. Inflamacin crnica Est asociada al incremento de protenas de fase crnica; se tiene una ligera elevacin de alfa2, la albmina puede estar ligeramente suprimida con un incremento policlonal de gammaglobulinas esto se observa en desordenes como en las infecciones crnicas (brucelosis, tuberculosis, enfermedad de hodgkin) y en colgenopatas, alergias, cncer y desordenes auto inmunes. Enfermedad heptica Como el hgado es el sitio de sntesis de albmina y globulinas una afeccin de este, los niveles bajos de albmina se dan en enfermedades hepatolobulares avanzadas. La hepatitis viral aguda incrementa niveles de Ig G e IgM, la enfermedad crnica del hgado (incluyendo cirrosis) incrementa IgG, IgM e IgA con decrecimiento de albmina y transferrina, la destruccin biliar incrementa niveles de C4 y beta lipoprotena. Sndrome nefrtico El sndrome nefrtico puede ser causado por diabetes mellitus, enfermedad glomerular y circulatoria se caracteriza por: hipoproteinemia, hipolbuminemia, edema, hiperlipidemia, proteinuria; incremento de ciertas protenas de alto peso molecular (macroglobulina, IgM, lipoprotenas) Hipogammaglobulinemia y agammaglobulinemia Las hipogammaglobulinemias se caracterizan por cantidades decrecientes de algunas o de todas las inmunoglobulinas, la mayora de las deficiencias son hereditarias y se manifiestan en la infancia (enfermedad de Brutons), las deficiencias adquiridas en adultos pueden deberse a enfermedades secundarias (terapia inmunosupresora) Gammapatia monoclonal La gammapatia monoclonal representa desordenes de sntesis de inmunoglobulinas asociada con proliferacin de clones de linfocitos B, la electroforesis muestra un pico homogneo en el rea B, asociada con decremento de inmunoglobulinas normales Gammapatia policlonal La gammapatia policlonal se caracteriza por incrementos difusos en la regin gamma, de las tres mayores inmunoglobulinas (IgG, IgA, IgM) Despus de la hipoalbuminemia la gammapatia policlonal es la anormalidad ms comn se observan en: desordenes hepticos crnicos, infecciones crnicas, colagenopatias, metstasis, fbrosis quistica II. - OBJETIVO. Describir las principales globulinas y sus funciones Relacionar valores anormales del proteinograma con las patologas ms comunes

V. - CUESTIONARIO. 1. Resuelva casos clnicos planteados por el docente 2. Realice un mapa conceptual de las protenas plasmticas

UNIVERSIDAD DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA No 4 DETERMINACIN DE PROTENAS TOTALES Y ALBMINA EN SUERO

I.-CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO.Las protenas son polmeros lineales constituidos por los aminocidos, que se unen entre s por medio de enlaces tipo amida denominados enlaces peptdicos. Las protenas pueden ser clasificadas en funcin de aspectos tan diversos como su composicin, su disposicin espacial, su funcin biolgica y su localizacin. Las protenas pueden clasificarse en: Hsticas o tisulares, son las protenas de los tejidos. Plasmticas o hemticas, son las protenas de la sangre. Aunque las protenas tisulares son de gran importancia en el organismo, las localizadas en la sangre por su gran accesibilidad, proporcionan con facilidad informacin importante por lo tanto, son las ms utilizadas en el laboratorio clnico Existen en el suero humano ms de 125 conocidas con mltiples funciones como ser: Transporte, almacenamiento, balance de fluidos (Agua y electrolitos), regulacin del equilibrio cido/base, respuesta de fase aguda en procesos de inflamacin, construccin, reparacin de tejidos, cataltica, hormonal y de coagulacin Las protenas totales estn constituidas por dos fracciones fundamentales la albmina y las globulinas (Que incluye diferentes fracciones protenicas) Albmina Es la protena predominante en el plasma ~50% (40-60%) de la protena total plasmtica. Presenta una concentracin de 4-5 g/kg de peso, 35-45 g/L Su concentracin es funcin del estado nutricional, en particular es sensible a deficiencias de aminocidos. Corresponde al 50% de toda la protena que sintetiza en el hgado Su velocidad de sntesis es de 14-15 g diarios y su vida media es de unos 20 das Es globular compuesta por 585 aminocidos en una sola cadena polipeptdica con 50% de -hlice y 15% de estructura , posee 17 puentes disulfuro La albmina ayuda a conservar la distribucin normal de agua ya que produce cerca de 80% del efecto coloido osmtico de las protenas plasmticas totales, debido a su alta concentracin y bajo peso molecular. La albmina interviene en el equilibrio cido-bsico y se encarga tambin del transporte de varias sustancias como son los cidos grasos, bilirrubina, varias hormonas e incluso algunos frmacos (sulfonamidas, penicilina G, aspirina, dicumarol). Globulinas Las globulinas incluyen la fraccin 1-globulina, la fraccin 2-globulina, la fraccin -globulina y la fraccin de -globulinas II.- OBJETIVOS.Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de: - Determinar la concentracin srica de protenas totales, de albmina y de globulinas - Interpretar los resultados obtenidos en la prctica y relacionarlos con patologas

III.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.REACTIVOS- EQUIPOS CANTIDAD MATERIALES CANTIDAD Kit Reactivo Protenas Totales 1 Tubos de ensayo 20 Kit Reactivo de Albmina Gradilla 3 Espectrofotmetro Micro pipetas 3 Agua destilada 1 Marcador de vidrio 2 Bao Mara 1 Pipetas de 5 ml 12 Pipetas de 10 ml 6 Pro pipetas 5 Cola de zorro 5 Puntillas 12 Jabn antisptico-detergente Muestra: Suero de un paciente que no debe haber consumido alimentos durante un perodo de 4 horas previa suspensin de medicamentos que pueden aumentar su concentracin, los cules son: Esteroides anablicos, andrgenos, corticosteroides, hormona del crecimiento, insulina, fenazo piridina y progesterona o de los medicamentos que pueden reducir la concentracin de protenas totales como ser: Iones de amonio, estrgenos, drogas hepato txicas y anticonceptivos orales IV.-TCNICA.- (La tcnica puede variar de acuerdo al Kit de Protenas totales y de albmina disponibles para la prctica) 1. Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en grupos de 5 personas. 2. Desarrollo de la prctica: Cada grupo realizar el siguiente procedimiento Marcar tres tubos de ensayo para Protenas Totales Blanco Standard Desconocido Reactivo 3,5 ml 3,5 ml 3,5 ml Suero ***** ***** 50 ul Standard ***** 50 ul ***** Agitar ligeramente e incubar en Bao Mara a 37 C 15 minutos al cabo de los cuales leer en el espectrofotmetro a 530 nm las respectivas absorbancias Los enlaces peptdicos de las protenas reaccionan con el in cprico en medio alcalino para dar un complejo de color violeta Tcnica Prot.- Winner Marcar tres tubos de ensayo para Albmina Blanco Standard Desconocido Reactivo 2 ml 2 ml 2 ml Suero ***** ***** 20 ul Standard ***** 20 ul ***** Incubar a temperatura ambiente por diez minutos al cabo de los cuales se desarrollar el color, leer en el espectrofotmetro a 630 nm las respectivas absorbancias La albmina reacciona con el bromo cresolsulfon ftalena en presencia de un exceso de colorante, en medio tamponado a pH 3,8 Tcnica Prot.- Winner V.- RESULTADOS.1. Expresar en forma ordenada los clculos efectuados durante la prctica mediante las siguientes relaciones matemticas:

Absorbancia del desconocido [Protenas totales] g/dl= ---------------------------------------x [Standard] Absorbancia del Standard

[Albmina] g/dl=

Absorbancia del desconocido -------------------------------------- x [Standard] Absorbancia del Standard

[Globulinas] g/dl= Protenas Totales - Albmina

2. Registrar todos los valores obtenidos al finalizar el procesamiento de la prctica VI.- CONCLUSIONES.1. De acuerdo a los resultados obtenidos, plantear las conclusiones de la prctica de acuerdo al siguiente cuadro referencial

PROTENAS TOTALES VALORES DE REFERENCIA: 6,1 -7,9 g/dl Niveles de protenas totales Niveles de Protenas totales inferiores al normal superiores al normal Mala absorcin Hipergammaglobulinemias Kwashiorkor mono o policlonales Marasmo Estados hipovolmicos Sntesis proteica disminuida o ineficaz Hepatopata grave Agammaglobulinemias Afecciones por aumento de las prdidas de protenas Sndrome nefrtico Enfermedades gastrointestinales- enteropatas Dermopatas graves- quemaduras, eczemas Hemorragias Catabolismo incrementado de protenas Fiebre, Inflamacin Hipertiroidismo Neoplasia Enfermedades crnicas Estados dilucionales- lquidos I.V.

ALBMINA VALORES DE REFERENCIA: 3,5 4,8 g/dl Niveles de Albmina Niveles de Albmina inferiores al normal superiores al normal Ingestin adecuada- desnutricin Deshidratacin Absorcin disminuida- sndrome de mala absorcin Infusiones I.V. de Necesidades aumentadas- hipertiroidismo- embarazo albmina Sntesis deteriorada- hepatopatas, infeccin crnica, analbuminemia hereditaria Degradacin incrementada- neoplasias, infecciones, traumatismos Aumento de las prdidas- edema, ascitis, quemaduras, hemorragias, sndrome nefrtico, enteropatas Estados dilucionales- lquidos I.V. GLOBULINAS VALORES DE REFERENCIA: 1,5 3 g/dl Niveles de protenas totales superiores al normal Deficiencias inmunolgicas Deshidratacin

VII.- CUESTIONARIO.1. Describa los signos, sntomas y clases de desnutricin 2. Describa qu es el edema y su mecanismo bioqumico 3. Resuelva casos clnicos planteados por el docente

UNIVERSIDAD DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA No 5 HEMOGRAMA I.-CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO El hemograma es una descripcin cuantitativa y cualitativa de las clulas sanguneas. El hemograma es utilizado como un procedimiento de screening de la salud del paciente, porque permite realizar el diagnstico de ciertas infecciones, evaluar la capacidad del organismo para reaccionar frente a la enfermedad y evaluar la progresin de la enfermedad. La muestra que se utiliza para el hemograma es sangre total, por lo tanto debe mezclarse con un anticoagulante para evitar la formacin de cogulos o micro cogulos que pueden alterar los elementos formes. El anticoagulante de eleccin es el EDTA (Etilendiamino tetra actico slido o lquido porque no altera la morfologa eritrocitaria y leucocitaria, conserva los elementos formes durante 24 horas y no permite la agregacin plaquetaria. Los parmetros que se consideran son: SERIE ROJA Los glbulos rojos son las clulas sanguneas que contienen en su interior la hemoglobina. Los glbulos rojos son los principales portadores de oxgeno a las clulas y tejidos del cuerpo. Tienen una forma bicncava para adaptarse a una mayor superficie de intercambio de oxgeno por dixido de carbono en los tejidos. Adems su membrana es flexible lo que permite a los glbulos rojos atravesar los ms estrechos capilares. Se utiliza ms para el diagnstico y clasificacin de anemias. de Es un pigmento respiratorio, de naturaleza proteica. A travs de la Hb, el hemate realiza su funcin transportadora de 02 desde los pulmones hasta los tejidos. La tasa de Hb junto con el hematocrito se utiliza para controlar anemias o diagnosticar sangrados masivos. Los valores normales de Hb varan segn la edad, sexo y localizacin geogrfica. Es la relacin entre el volumen ocupado por los hemates y el correspondiente a la sangre total, depende fundamentalmente de la concentracin de Hb. Es el espacio ocupado por los hemates en relacin al volumen de sangre total. de Consiste en determinar la velocidad con que sedimentan los hemates , al colocar la sangre en una columna durante una unidad de tiempo que depende de la presencia de protenas del plasma

Recuento de Hemates

Concentracin Hemoglobina (Hb)

% Hematocrito(Hto)

Velocidad eritrosedimentacin

ndices corpusculares Son valores que se calcular a partir de los datos de hematocrito, concentracin de Hb y nmero de eritrocitos VCM (Volumen Corpuscular Volumen promedio de los eritrocitos en femtolitros medio) (1 fL = 10-15 l). Hto____en %___ *10

N de GR/mm3 en millones Por ej., si el hematocrito es 45 % y hay 500000 de eritrocitos MCV = 450/5 = 90 fL. Rango normal: 80 a 95 fL. Cantidad promedio de hemoglobina en cada eritrocito en picogramos (1 pg = 10-12 g) __ Hb_en_g/dl___ *10 N de GR/mm3 en millones

HCM (Hb corpuscular media)

CHCM (concentracin corpuscular media)

de

Por ej., si hay 15 g/dl de Hb y 5000000 de eritrocitos por /mL, MCH = 150/5 = 30 pg/eritrocito. Rango normal: 27 a 31 pg. Hb Es la concentracin promedio de hemoglobina en gramos por dL de eritrocitos. Hb_en_g/dl___ *100 Hto en % Para el ejemplo antes dado, MCHC = 15/ 0.45 = 33.3 g/dL. Rango normal: 32 a 36 g/dL.

SERIE BLANCA La modificacin de la cantidad de leucocitos puede orientar al diagnstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, cncer y leucemias, y otros procesos. Por ello el recuento es muy orientativo en diferentes enfermedades. Recuento diferencial de leucocitos Estudia el porcentaje de cada uno de ellos en un frotis sanguneo Recuento de leucocitos

Recuento de plaquetas

SERIE PLAQUETARIA Sirve para diagnosticar o monitorizar hemorragia y los trastornos de la coagulacin.

la

II.- OBJETIVOS.A la conclusin de la prctica el alumno ser capaz de: Realizar correctamente una puncin venosa y capilar Realizar todas las pruebas cualitativas y cuantitativos del hemograma Realizar la lectura e interpretacin del resultado de un hemograma procesado en la prctica

III.- MATERIAL Y REACTIVOS.REACTIVOS- EQUIPOS CANTIDAD MATERIALES Cinta adhesiva Centrfuga Gradilla Microscopio Guantes de ltex. Reactivo de tincin Giemsa CANTIDAD 1 6 2

Agujas y jeringas desechables estriles de volumen entre 5 a 10 ml (Con agujas N 21 G para adultos) Lazo de goma o torniquete. Recipientes descartadores Torunda con alcohol. Torundas secas. Tubos de hemlisis con anticoagulante Hematocritos no heparinizados Pipetas de westergreen Portaobjetos Soporte de pipetas westergreen Pizetas Soporte para tincin Goteros Pro pipetas Plastilina Jabn antisptico Cola de Zorro

15 6 6

30 30 10 12 1 6 1 6 1 1

IV.-PROCEDIMIENTO.1. Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en grupos de 5 personas. 2. Desarrollo de la prctica: Cada grupo realizar el siguiente procedimiento Obtener 5 ml de muestra de sangre por puncin venosa considerando el procedimiento de la prctica anterior Vaciar la muestra de sangre en un tubo de hemlisis que contenga 3 gotas de EDTA Tapar el tubo con un tapn de goma y homogeneizar la muestra Realizacin de extensiones de sangre Depositar una gota de sangre en el extremo de un portaobjetos a unos 2cm del mismo Colocar otro portaobjetos sobre el porta anterior que contiene la gota de sangre, con una inclinacin de 45 inicialmente por la parte anterior de la gota de sangre Desplazar hacia atrs hasta entrar en contacto con la gota y permitir que por capilaridad la misma se extienda uniformemente Deslizar el segundo portaobjetos inclinado sobre el primero de manera suave y rpida Secar el portaobjetos a temperatura ambiente Tincin hematolgica Despus del extendido Poner el portaobjetos sobre un soporte universal Realizar la fijacin con etanol 1min. No lavar el portaobjetos Aadir el colorante diluido a utilizar (Giemsa) gota a gota hasta cubrir toda la extensin Dejar actuar 15 , lavar suavemente con agua destilada Limpiar la parte inferior y secar Observacin de placas al microscopio Examinar la muestra con objetivo de 100x y aceite de inmersin. Las distintas clulas presentarn las siguientes coloraciones: o Hemates color rosado o Grnulos neutrfilos: de rosa a lila

o Grnulos eosinfilos: de rojo a anaranjado o Grnulos basfilos: azul violceo oscuro o Ncleo linfocitos: violeta oscuro o Ncleo monocitos: prpura azulado Realizar la Frmula leucocitaria o Determinar el porcentaje de cada tipo de leucocito mediante la observacin directa al microscopio del frotis sanguneo teido con el objetivo de inmersin (100X)

Determinacin del hematocrito Llenar un tubo capilar no heparinizado, unas tres cuartas partes de su capacidad con la sangre por capilaridad Limpiar con papel o gasa el capilar Tapar el extremo limpio con plastilina Colocar los capilares en la micro centrfuga considerando el equilibrio de la misma Centrifugar guante 5 a unas 12000 rpm Extraer los capilares Proceder con la lectura con los lectores de hematocrito o con una regla milimetrada Determinacin de la Velocidad de eritrosedimentacin globular Aspirar la muestra de sangre anti coagulada con una pipeta de westergreen con la ayuda de una pro pipeta Enrazar a 0 Colocar la pipeta de westergreen apoyando la parte inferior de la misma en el disco de goma presionando fuertemente para evitar prdida de la muestra Fijar la parte superior de la pipeta con la pipeta del soporte para pipetas de westergreen Anotar la hora Calcular la alarma de reloj para la 1ra hora Leer el descenso de hemates que se haya producido en la pipeta anotar Si el tiempo permite volver a leer transcurrida la 2da hora Recuento de glbulos blancos Diluir la sangre con unas pipeta especial llamada Thoma que consiste en un tubo capilar graduado en dcimas con marcas de 0,5 en la quinta y 1,0 en la dcima; posee un bulbo que contiene una perla de vidrio que permite la mezcla de la sangre con un lquido dilutor llamado turk que es una solucin de 1 a 3ml de acido actico glacial, 100ml de agua y 1 ml de azul de metileno que destruye a los eritrocitos y permite observar los leucocitos. La pipeta est provista de un tubo de goma con una boquilla que facilita primero aspirar la sangre hasta la marca 0,5, limpiar la punta, aspirar el lquido dilutor hasta la marca 11 y mezclar. Proceder con la carga de una cmara de Neubauer que consiste en una lmina de vidrio atravesado transversalmente por dos surcos que limitan tres porciones que tiene el retculo donde se apoya un cubreobjetos, desechar las 2 primeras gotas, aplicar la punta de la pipeta al borde de la cmara, dejar salir 1 gota para cubrir toda la extensin de la cmara

Colocar la cmara en la platina del microscopio, observar con el objetivo x10 y contar los elementos distribuidos en cuatro cuadrados , obtener un promedio y multiplicar por 10 , que permite obtener el total de elementos por mm3 de la dilucin. V.- RESULTADOS.1. Registrar todos los valores obtenidos al finalizar el procesamiento de la prctica VI.- CONCLUSIONES.1. De acuerdo a los resultados obtenidos, plantear las conclusiones de la prctica de acuerdo al siguiente cuadro referencial VALORES DE REFERENCIA R nacidos: 5,0- 6,5 millones/mm3 Mujeres: 3,5 5,0 millones/mm3 Hombres: 4.0 5,5 millones/mm3 INTERPRETACIN Valores disminuidos: Alteraciones en la dieta Anemias de diversa ndole Cncer Enfermedades sistmicas Embarazo Fibrosis de mdula sea Hemorragias Valores aumentados: Cardiopatas Enfermedades pulmonares crnicas Estancias en lugares de gran altitud Poliglobulia de diferentes causas Valores disminuidos: Anemias primarias, hemorragias Cncer, embarazo Enfermedades renales Enfermedades autoinmunes Linfomas Problemas de alimentacin Valores aumentados: Cardiopatas , Deshidratacin Enfermedades pulmonares crnicas Estancias en lugares de mucha altitud Un ndice bajo de Hematocrito puede deberse a: Anemias, hemorragias Fallos en la mdula sea (Radiaciones, toxinas, fibrosis, tumores) Embarazo , hipertiroidismo Hemlisis por una transfusin Leucemia , Artritis reumatoide Un ndice alto de Hematocrito puede deberse a: Cardiopatas Deshidratacin Eclampsia (en el embarazo) Enfermedades pulmonares crnicas

Recuento de Hemates

Concentracin de Hemoglobina (Hb)

Al nacer: 16-23 g/100 ml A los 2 meses: 9-14 g/100 ml A los 10 aos: 12-14 g/100 ml Adultos: Mujeres: 12-14 g/100 ml Hombres: 14-17 g/100 ml

% Hematocrito

Recin nacido: 44 a 56% A los 3 meses : 32 a 44 % Al ao de edad: 36 a 41 % Entre 3 - 5 aos: 36 a 43 % Entre 5 - 15 aos: 37 a 45 % Hombre adulto: 40 a 54 % Mujer adulta: 37 a 47 %

VALORES DE REFERENCIA

Velocidad de eritro sedimentacin (VSG)

1 hora= 10 mm 2 hora= 20 mm

INTERPRETACIN Exceso de formacin de hemates Policitemia vera , shock La VSG se eleva en: Anemia intensa Artritis reumatoide Enfermedades renales Enfermedades autoinmunes (Lupus eritematoso) Enfermedades tiroideas Embarazo Fiebre reumtica Infecciones agudas Macroglobulinemia Polimialgia reumtica Sfilis Tuberculosis Vasculitis

VCM (Volumen Corpuscular medio)

HCM (Hb corpuscular media) CHCM (Concentracin de Hb corpuscular media)

La VSG puede aparecer disminuida en: Descenso de protenas en el plasma (por problemas hepticos renales) Disminucin del fibringeno Fallos cardiacos , policitemia ndices corpusculares Rango normal: 80 a 95 fL. Determina el volumen medio de los hemates es decir: Normocticos: tamao normal Macrocticos: tamao grande Microcticos: tamao pequeo Rango normal: 27 a 31 pg. Expresa el peso medio de Hb en el hemate. Rango normal: 32 a 36 Expresa la relacin entre el peso de la Hb g/dL. y el volumen del hemate. Indica si los hemates son: Normocrmicos: normalmente cargados de Hb Hipocrmicos: poco cargados de Hb Hipercrmicos: muy cargados de Hb Leucopenia 5000 a 9000/mm3 Fallo de la mdula sea (tumores, fibrosis, intoxicacin) - Enfermedades autoinmunes (Lupus eritematoso diseminado) Enfermedades del hgado o rin Exposicin a radiaciones Leucocitosis Dao de tejidos en quemaduras Enfermedades infecciosas, inflamatorias (por autoinmunidad-reumticas o alergias) Estrs, neoplasias, leucemia

Recuento de leucocitos

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

VALORES DE REFERENCIA Grupo de leucocitos Valor % Neutrfilos 55 a 70 % Linfocitos 20 a 40 % Monocitos 2a8% Eosinfilos 1a4% Basfilos 0a1%

INTERPRETACIN Neutroflia Neutropenia Estrs Anemia aplsica Infeccin bacteriana Enfermedad de Addison Enfermedades Infecciones virales inflamatorias crnicas Medicamentos Reumatismo Radio y quimioterapia Leucemia Traumatismos Sndrome de Cushing Linfocitosis Infecciones virales Leucemias Mononucleosis infecciosa Hepatitis Monocitosis Enfermedades inflamatorias crnicas Infecciones virales Tuberculosis Mononucleosis infecciosa Malaria Basoflia Leucemia Policitemia vera Eosinoflia Enfermedades alrgicas y autoinmunes Asma bronquial Urticaria Rinitis extrnseca Alergias alimentarias Colagenosis eosinoflica Infecciones y parasitosis Dermatitis atpica Leucemias Anemia perniciosa Enfermedad de Hodgkin Neoplasias Linfopenia Infecciones avanzadas HIV Inmunodeficiencias Leucemias Radioterapia Sepsis Monocitopenia Cortisona

Basopenia Anafilaxia Estrs Hipertiroidismo Eosinopenia Corticoides endgenos o exgenos Intoxicacin por alcohol

RECUENTO DE PLAQUETAS VALORES DE REFERENCIA 150.000 a 400.000/mm3

INTERPRETACIN Trombocitosis Enfermedades mieloproliferativas Policitemia vera Esplenectoma

Anemia con dficit de Fe+2 Artritis reumatoidea Trombocitopenia Alteraciones congnitas por disminucin de la produccin Fibrosis Falla medular Aplasia Radio y quimioterapia Sepsis Sndrome hemoltico-urmico Coagulacin intravascular diseminada Prtesis intravasculares Infecciones virales, bacterianas Sangrado

VII.- CUESTIONARIO.1. 2. 3. 4. Describa que son las anemias Describa el tratamiento de las anemias de acuerdo a la clasificacin Describa la frmula leucocitaria en forma relativa y su interpretacin Resuelva casos clnicos planteados por el docente

UNIVERSIDAD DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA No 6 DETERMINACIN DE BILIRRUBINA DIRECTA Y TOTAL EN SUERO I.-CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO.La bilirrubina se origina por degradacin del grupo hem de la hemoglobina o de otras hemoproteinas, que a su vez aparece en el plasma como consecuencia de la destruccin de los glbulos rojos en el sistema retculo endotelial. La hemoglobina, una vez liberada en el interior del eritrocito, se combina con las haptoglobinas, protenas plasmticas especficas para su transporte. En una primera etapa y tras su liberacin de la haptoglobina, se forma, por accin de una oxigenasa, un grupo formilo, con lo que se rompe el anillo tetrapirrlico del hem, formndose el compuesto denominado biliverdina, que en una etapa posterior y por accin de una reductasa se transforma en bilirrubina. La bilirrubina es lipoflica por lo tanto es transportada a travs del plasma unida a la albmina y es conjugada a nivel heptico con el cido UDP- glucurnico por la enzima UDP- glucuronil transferasa aumentando as su solubilidad; despus pasa al intestino donde es desconjugada por la flora bacteriana y forma urobilingenos que puede ser: el estercobilingeno que se oxida y se convierte en estercobilina que es eliminada por las heces y en urobilingeno que se reabsorbe al plasma, donde una fraccin vuelve al hgado y recircula en la bilis y la otra se excreta en orina en forma de urobilinas. Desde un punto de vista analtico y clnico, interesa conocer los niveles de bilirrubina total y diferenciar cuantitativamente la "bilirrubina libre" o preheptica que aumenta principalmente en procesos de tipo hemoltico, de la "bilirrubina conjugada" o heptica que est incrementada en la disfuncin heptica y ms concretamente en fallos de los mecanismos de su eliminacin, a travs del sistema biliar, cuyo primer paso es introducirse del hepatocito a los canalculos biliares. Metabolismo de la bilirrubina

TIPOS DE BILIRRUBINA Caractersticas principales Bilirrubina no conjugada Solubilidad No polar (alcohol) Reaccin con el diazoreactivo Precisa un acelerador Presencia en orina en pacientes No (est unida a la albmina) ictricos Afinidad por el tejido cerebral Alta Presencia en ictericias Si hemolticas Presencia en ictericia obstructiva Si y hepatocelular II.- OBJETIVOS.Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de: - Describir la actividad metablica de la bilirrubina - Determinar la concentracin srica de bilirrubina total, directa e indirecta - Interpretar los resultados obtenidos en la prctica y relacionarlos con patologas III.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.REACTIVOS- EQUIPOS CANTIDAD MATERIALES CANTIDAD Kit reactivo de Bilirrubina 1 Tubos de ensayo 20 Espectrofotmetro Gradilla 3 Agua destilada Micro pipetas 3 Bao Mara 1 Marcador de vidrio 2 1 Pipetas de 5 ml 12 Pipetas de 10 ml 6 Pro pipetas 5 Cola de zorro 5 Puntillas 12 Jabn antisptico-detergente Muestra: Suero de un paciente que no debe haber consumido alimentos durante un perodo de 8 horas antes de la determinacin, previa suspensin de medicamentos que pueden elevar la bilirrubina srica como ser: Alopurinol, esteroides, antibiticos, antimalricos, azatioprina, colinrgicos, codena, diurticos, metrotexate, metildopa, morfina, anticonceptivos orales, fenotiazinas, rifampicina, salicilatos, sulfonamidas y la teofilina y la suspensin de medicamentos que pueden disminuir la bilirrubina srica como ser: barbitricos, la cafena y la penicilina. Bilirrubina conjugada Polar (alcohol y agua) Directa Si Baja No Si

IV.-TCNICA.- (La tcnica puede variar de acuerdo al Kit de Bilirrubina disponible para la prctica) 1. Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn personas. 2. Desarrollo de la prctica: Cada grupo realizar el siguiente procedimiento Marcar tres tubos de ensayo en grupos de 5

Blanco Bil directa Bil total Suero 200 ul 200 ul 200 ul Agua destilada 2,5 ml 2,5 ml ***** Desarrollador ***** ***** 2,5 ml Acido sulfanlico 200 ul ***** ***** Diazoreactivo ***** 200 ul 200 ul Mezclar de inmediato cada tubo, luego de 5 min. leer en el espectrofotmetro a 530 nm llevando el aparato a 0 con agua destilada La bilirrubina reacciona especficamente con el cido sulfanlico diazotado produciendo un color rojo violceo, en cambio la indirecta requiere un desarrollador (benzoato de cafena). El color desarrollado se puede medir colorimtricamente a 530 nm. Bilirrubina - Winner V.- RESULTADOS.1. Expresar en forma ordenada los clculos efectuados durante la prctica mediante la siguiente relacin matemtica: [Bilirrubina total] mg/l= (Absorbancia del Total- Absorbancia del blanco) * factor [Bilirrubina directa] mg/l= (Absorbancia del desconocido Total- Absorbancia del blanco) * factor [Bilirrubina indirecta] mg/l=Bil total- Bil directa 2. Registrar todos los valores obtenidos al finalizar el procesamiento de la prctica VI.- CONCLUSIONES.1. De acuerdo a los resultados obtenidos, plantear las conclusiones de la prctica de acuerdo al siguiente cuadro referencial VALORES DE REFERENCIA Adultos: Bilirrubina directa : 0 a 0,4 mg/dl Bilirrubina total: 0-1 mg/dl Recin nacidos: Hasta las 24 hrs: 6 mg/dl Hasta las 48 hrs:75 g/dl Del 3er al 5to da:12mg/dl Niveles de bilirrubina indirecta superiores al normal Sobreproduccin por trastornos hematolgicos Hemlisis o eritropoyesis ineficaz Anemia hemoltica, eritroblastosis fetal Reabsorcin de grandes hematomas y transfusiones masivas Captacin defectuosa Sndrome de Gilbert Conjugacin disminuida Ictericias del recin nacido o Cligler-Najjar I o Cligler-Najjar II Ictericias familiares no hemolticas

o Sndrome de Gilbert Niveles de bilirrubina directa superiores al normal Trastornos hereditarios de la excrecin de bilirrubina Sndrome de Dubin-Johnson Sndrome de Rotor Colestasis intraheptica Sin obstruccin mecnica o Hepatopatas agudas o crnicas Enfermedades virales o autoinmunes Isquemia, txicas por frmacos Hereditarias- enfermedad de Wilson Lesin de conductos biliares intrahepticos, colestasis Con obstruccin mecnica o Infecciones o Neoplasias hepticas, cirrosis biliar Colestasis extraheptica Enfermedad litisica Lesiones quirrgicas del rbol biliar, neoplasia de conductos biliares Carcinoma de pncreas, pancreatitis

VII.- CUESTIONARIO.1. Expliqu porqu la determinacin de bilirrubina es considerada una prueba bioqumica indicadora de la funcin excretora heptica 2. Represente en forma de esquema el metabolismo de bilirrubina y urobilina 3. Describa la clasificacin y causas de las ictericias 4. Describa el procedimiento para disminuir la ictericia en neonatos 5. Resuelva casos clnicos planteados por el docente

UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA N 7 ENZIMAS PARA EL DIAGNSTICO CLNICO I.- CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO.Las enzimas permiten que las reacciones metablicas procedan con una velocidad mayor. La actividad enzimtica vara de acuerdo con la ubicacin celular. Por lo tanto, el patrn de elevacin enzimtica es til para detectar y diferenciar diversas enfermedades. Adems existen varias isoenzimas en las que se observa una leve diferencia estructural de la enzima que depende del tejido primario en el cual se sintetiza. Esta diferencia estructural permite separar las enzimas totales en todas sus formas isoezimticas. La determinacin srica de enzimas o de sustratos se basa en que los cambios de los niveles de enzimas plasmticas reflejan los cambios que se dan en un tejido u rgano especfico Las enzimas plasmticas son de dos tipos: Las enzimas especficas que son propias del plasma por ejemplo las que participan en el proceso de coagulacin Las enzimas no especficas que no se encuentran en gran cantidad en el plasma porque se encuentran en tejidos y rganos especficos y slo son liberadas al plasma cuando existe un proceso patolgico que puede provocar cambios en la permeabilidad de la membrana celular o incrementar la muerte celular y su liberacin al espacio extracelular. Las enzimas plasmticas no funcionales incluyen a las que existen en las secreciones exocrinas (amilasa pancretica, lipasa, fosfatasa alcalina, fosfatasa cida) y a las enzimas intracelulares verdaderas

UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA N 8

PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO PANCRETICO DETERMINACIN CUANTITATIVA DE AMILASA SRICA

I.- CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO.La alfa amilasa es una metaloenzima que necesita de calcio para romper los enlaces alfa 1-4 glucosdicos de los polisacridos (almidn, glucgeno). Existen dos isoenzimas principales de la amilasa que son: La salival (tipo S) y pancretica (tipo P), detectables en suero como fracciones independientes. La amilasa procedente de los rganos donde se sintetiza entra en la circulacin a travs de la sangre que per funde estos rganos; su vida media en el hombre es de alrededor de diez horas, de aqu la importancia de la deteccin precoz de amilasa en una pancreatitis aguda. En el 35%-55% de los pacientes con pancreatitis aguda la amilasa se normaliza entre el segundo y tercer da. La isoamilasa pancretica representa del 35% al 50% de la actividad amilasa total y se elimina por va renal de 1,6 a dos veces ms rpido que la salival. La amilasa salival (forma S), no slo refleja la actividad enzimtica dependiente de la glndula salival, sino la de cualquier origen (tumores de pulmn, ginecolgico). La amilasa filtrada por el glomrulo renal es reabsorbida en un 75% en el tbulo proximal. La actividad de amilasa alfa no es especfica para estos tejidos, ya que tambin se encuentra en el epitelio intestinal, trompas de Falopio, mucosa del cuello uterino, endometrio y tejido del seno durante la lactancia. La principal funcin de la amilasa alfa se debe a la fraccin pancretica, que ayuda a la digestin del almidn, glucgeno y sus productos de descomposicin en el intestino delgado. La alfa amilasa salival hidroliza el almidn en la cavidad oral, pero su accin termina con rapidez a consecuencia del pH cido del jugo gstrico durante la deglucin. La pancreatitis aguda es una de las principales emergencias mdicas; el alcoholismo y las enfermedades del tracto biliar son las causas predominantes, aunque slo tenemos algunas evidencias conjeturales de cmo se inicia una pancreatitis. Los cambios observados en las enzimas pancreticas como amilasa y lipasa pueden ser de moderados a intensos. La pancreatitis crnica generalmente es la secuela de mltiples brotes de la enfermedad aguda y los resultados de laboratorio normalmente no son muy tiles para el diagnstico. II.- OBJETIVOS.Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de: - Integrar los conocimientos tericos de la actividad enzimtica en la determinacin de amilasa srica - Determinar la concentracin srica de la amilasa - Interpretar los resultados obtenidos en la prctica y relacionarlos con patologas III.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.REACTIVOS- EQUIPOS CANTIDAD MATERIALES CANTIDAD Kit Reactivo Amilasa 1 Tubos de ensayo 10 Espectrofotmetro Gradilla 6 Agua destilada 1 Micro pipetas volumen variable 6 Bao Mara 1 Marcador de vidrio 2 Pipetas de 5 ml 12 Pipetas de 10 ml 6 Pro pipetas 5

Cola de zorro Puntillas Jabn antisptico-detergente

5 12

Muestra: Suero de un paciente que no debe haber consumido alimentos durante un perodo de 6 horas previa suspensin de los siguientes medicamentos: Asparaginasa, corticoesteroides, azatioprina, colinrgicos, cido etacrnico, codena, mercaptopurina, morfina, anticonceptivos orales, rifampicina, diurticos tiacdicos IV.-TCNICA.- (La tcnica puede variar de acuerdo al Kit de Amilasa disponible para la prctica) 1. Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en grupos de 5 personas. 2. Desarrollo de la prctica: Cada grupo realizar el siguiente procedimiento Marcar dos tubos de ensayo Conocido Desconocido Sustrato 1 ml 1 ml Suero ***** 20 ul Incubar a 37C en Bao Mara 7,5 minutos exactamente Reactivo de yodo 1 ml 1ml Mezclar por agitacin , retirar los tubos del bao y agregar Agua destilada 8 ml 8 ml Leer a 640 llevando el aparato a 0 con agua destilada En esta prueba la amilasa descompone especficamente el almidn (sustrato ,pero separa la hidrlisis con reactivo de Yodo, que da un color violeta con el almidn remanente Tcnica Amilo kit- Winner V.- RESULTADOS.1. Expresar en forma ordenada los clculos efectuados durante la prctica mediante la siguiente relacin matemtica: Absorbancia del Conocido- Absorbancia del desconocido ---------------------------------------------------------------------Absorbancia del Conocido

[Amilasa] UA/dl=

*1000

2. Registrar todos los valores obtenidos al finalizar el procesamiento de la muestra VI.- CONCLUSIONES.1. De acuerdo a los resultados obtenidos, plantear las conclusiones de la prctica de acuerdo al siguiente cuadro referencial VALORES DE REFERENCIA Normal: Menor a 120 Unidades Amilolticas/dl Niveles de amilasa superiores al normal Niveles de Amilasa inferiores al normal Enfermedades pancreticas Destruccin extensa del pncreas Pancreatitis aguda de cualquier origen Pancreatitis fulminante Pancreatitis crnica Fibrosis qustica avanzada Complicaciones de la pancreatitis Lesin heptica grave Fstulas, pseudoquistes absceso, ascitis Hepatitis Cncer de pncreas Toxemia del embarazo Traumatismos pancreticos Intoxicacin

Enfermedades salivales Parotiditis Radiacin Litiasis, traumatismos Enfermedades gastrointestinales Apendicitis aguda lcera duodenal Obstruccin intestinal Enfermedades hepticas y biliares Hepatitis virales, cirrosis Enfermedades ginecolgicas Rotura del embarazo ectpico Cncer de ovario Otros Insuficiencia renal Alcoholismo, traumatismos cerebrales Quemaduras, shock traumtico

VII.- CUESTIONARIO.1. Esquematice un algoritmo del diagnstico de pancreatitis aguda 2. Resuelva casos clnicos planteados por el docente

UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA N 9 DETERMINACIN DE LIPASA SRICA I.- CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO.La lipasa es una enzima tipo hidrolasa producida por el pncreas que opera en forma optima en el lumen del intestino delgado, donde bajo condiciones de pH ligeramente cido y en presencia de bilis hidroliza los triglicridos que se encuentran en forma micelar en las posiciones 1 y 3, generando los monoglicridos y cidos grasos libres que luego son absorbidos por la mucosa intestinal. Se observa actividad de lipasa tambin en mucosa intestinal, estmago, leucocitos y tejido adiposo. Sin embargo, slo la lipasa pancretica tiene significado clnico; su principal funcin consiste en hidrolizar los triglicridos de la dieta que han sido emulsificados por cidos biliares y ayudan as a la absorcin de grasas en el intestino delgado. II.- OBJETIVOS.Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de: - Integrar los conocimientos tericos de la actividad enzimtica en la determinacin de lipasa srica - Determinar la concentracin srica de lipasa - Interpretar los resultados obtenidos en la prctica y relacionarlos con patologas III.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.REACTIVOS- EQUIPOS CANTIDAD MATERIALES CANTIDAD Kit Reactivo Lipasa 1 Tubos de ensayo 20 Espectrofotmetro Gradilla 3 Agua destilada 1 Micro pipetas 3 Bao Mara 1 Marcador de vidrio 2 Pipetas de 5 ml 12 Pipetas de 10 ml 6 Pro pipetas 5 Cola de zorro 5 Puntillas 12 Jabn antisptico-detergente Muestra: Suero de un paciente que no debe haber consumido alimentos durante un perodo de 8 horas previa suspensin de los siguientes medicamentos: Colinrgicos, la codena, la indometacina, la meperidina y la morfina. IV.-TCNICA.- (La tcnica puede variar de acuerdo al Kit de Lipasa disponible para la prctica) 1. Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en grupos de 5 personas. 2. Desarrollo de la prctica: Cada grupo realizar el siguiente procedimiento Marcar dos tubos de ensayo Blanco Desconocido Reactivo de trabajo(lipasa reconstituida 3 ml 3 ml Suero 100 ul Mezclar inmediatamente, leer la absorbancia (A1) llevar otra vez al bao y leer la absorbancia a los 5 min.(A2) La lipasa srica hidroliza una emulsin de aceite de oliva Tcnica Lipasa-Orgenics

V.- RESULTADOS.1. Expresar en forma ordenada los clculos efectuados durante la prctica mediante la siguiente relacin matemtica: Absorbancia corregida/5min [Lipasa] UI/l= ------------------------------------ * 1953 Absorbancia inicial del blanco Absorbancia corregida/5min = Absorbancia desconocido- Absorbancia del Blanco 2. Registrar todos los valores obtenidos al finalizar el procesamiento de la prctica VI.- CONCLUSIONES.1. De acuerdo a los resultados obtenidos, plantear las conclusiones de la prctica de acuerdo al siguiente cuadro referencial VALORES DE REFERENCIA Adultos: 10-150 UI/l Niveles de lipasa srica superiores al normal Niveles de normales Pancreatitis aguda, clculos pancreticos Pancreatitis crnica Parotiditis Obstruccin del intestino delgado Insuficiencia renal aguda y crnica Trasplante de rgano( rin, hgado, corazn) Alcoholismo y cetoacidosis diabtica

lipasa

srica

VII.- CUESTIONARIO.1. Esquematice el comportamiento de la lipasa y amilasa en la pancreatitis aguda 2. Resuelva casos clnicos planteados por el docente

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PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO HEPTICO TRANSAMINASAS SRICAS

I.- CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO.Las transaminasas GOT y GPT son enzimas ampliamente difundidas en el organismo. La GOT se encuentra en el citoplasma y en las mitocondrias en cambio la GPT se encuentra en el citoplasma La GOT que se denomina glutmico oxalactico transaminasa o AST (Aspartato aminotransferasa) cataliza la siguiente reaccin reversible

La GPT que se denomina glutmico pirvico transaminasa o ALT (Alanina amiotransferasa) cataliza la siguiente reaccin reversible

En el hgado se encuentran los niveles ms altos de ALT, mientras que la AST se encuentra presente en el corazn, msculo esqueltico e hgado en cantidades similares. La actividad en el suero de tanto la AST como la ALT aumenta rpidamente durante el comienzo de la ictericia viral y permanece elevada por 1 a 2 semanas. En las hepatitis txicas tambin se elevan la ALT y la AST. En los pacientes con hepatitis crnica activa tambin se observan aumentos en la AST y ALT. La necrosis heptica aguda se acompaa por incrementos significativos en las actividades tanto la ALT y la AST. El aumento en la actividad de la ALT es generalmente mayor que el incremento en la actividad de la AST. En la cirrosis del hgado las actividades de las transaminasas sricas generalmente no se elevan por encima de 300 U/L, sin importar la causa de la enfermedad cirrtica. En el diagnstico de la enfermedad del hgado, la medicin de los niveles sricos de ASAT y ALAT es valiosa. Esto es importante cuando se establece el diagnstico puesto que la ALAT y la ASAT estn presentes en otros tejidos adems del hgado y la actividad srica de estas enzimas puede reflejar una enfermedad orgnica en tejidos distintos al hgado. Las actividades sricas de la ALT y la AST se elevan en el infarto del miocardio, infarto renal, distrofia muscular progresiva y otro gran nmero de enfermedades que solamente afectan al hgado de una manera secundaria, como la enfermedad de Gaucher, la enfermedad de NiemannPick, la mononucleosis infecciosa, la leucemia mieloctica, la cetoacidosis diabtica y el hipertiroidismo II.- OBJETIVOS.Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de: - Integrar los conocimientos tericos de la actividad enzimtica en la determinacin de transaminasas sricas - Determinar la concentracin srica de transaminasas - Interpretar los resultados obtenidos en la prctica y relacionarlos con patologas III.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.-

REACTIVOS- EQUIPOS CANTIDAD MATERIALES CANTIDAD Kit Reactivo de GOT 1 Tubos de ensayo 20 Kit Reactivo de GPT Gradilla 3 Espectrofotmetro Micro pipetas 3 Agua destilada 1 Marcador de vidrio 2 Bao Mara 1 Pipetas de 5 ml 12 Pipetas de 10 ml 6 Pro pipetas 5 Cola de zorro 5 Puntillas 12 Jabn antisptico-detergente Muestra: Suero de un paciente que no debe haber consumido alimentos durante un perodo de 4 horas previa suspensin de medicamentos que pueden aumentar su concentracin, los cules son: Paracetamol, alopurinol, ampicilina, azatioprina, carbamacepina, cefalosporinas, clorpropamida, clofibrato, cloxacilina, codena, indometacina, isoniacida, metrotexate, cido nalidixico, nitrofurantoina, fenitona, procainamida, propanolol. IV.-TCNICA.- (La tcnica puede variar de acuerdo al Kit de Transaminasas disponible para la prctica) 1. Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en grupos de 5 personas. 2. Desarrollo de la prctica: Cada grupo realizar el siguiente procedimiento Marcar tres tubos de ensayo Blanco GOT GPT Sustrato 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml Suero ***** 100 ul 100 ul Agua destilada 100 ul ***** ***** Dejar 30 minutos a temperatura ambiente para que se produzca la reaccin 2,4 Dinitrofenol hidracina 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml Diluyente para enzimas 5ml 5ml 5ml Leer en el espectrofotmetro a 505 nm llevando el aparato a cero con agua destilada El piruvato (el oxalacetato es inestable y se convierte a piruvato) reacciona con el 2, 4 dinitrofenol hidracina produciendo en medio alcalino un compuesto coloreado Tcnica Transaminasas 200 - Winner V.- RESULTADOS.1. Registrar todos los valores obtenidos al finalizar el procesamiento de la prctica 2. Determinar la concentracin de GOT y GPT llevando las lecturas a una curva de calibracin previamente construida con estndares de concentracin conocida para tener los resultados en U/L VI.- CONCLUSIONES.1. De acuerdo a los resultados obtenidos, plantear las conclusiones de la prctica de acuerdo al siguiente cuadro referencial

VALORES DE REFERENCIA: GOT 5 35 U/l GPT 5- 50 U/l Niveles de GOT superiores al normal Niveles de GPT superiores al normal Hepatopatas Hepatopatas Necrosis activa de las clulas Necrosis activa de las clulas parenquimatosas parenquimatosas Hepatitis vrica aguda Hepatitis vrica aguda Congestin insuficiencia cardiaca, Congestin insuficiencia cardiaca, cirrosis, obstruccin biliar, cncer cirrosis, obstruccin biliar, cncer metasttico, isquemia heptica metasttico, isquemia heptica Eclampsia Pre eclampsia grave Enfermedades msculo esquelticas Enfermedades msculo esquelticas Traumatismos Traumatismos Mioglobinurias Mioglobinurias Infarto agudo de miocardio Obesidad Otras Leucemia linfoblstica aguda Pancreatitis aguda Niveles de GPT inferiores al normal Infarto pulmonar Infarto cerebral Infecciones urinarias Quemaduras Neoplasias Agotamiento por calor Estados de dficit de piridoxal fosfato intoxicacin por plomo Anemia hemoltica Niveles de GOT inferiores al normal Azoemia Estados de dficit de piridoxal fosfato Cetoacidosis diabtica Embarazo Enfermedades renales

VII.- CUESTIONARIO.1. Describa la funcin y la utilidad de la - Glutamil transferasa y de la 5`nucleotidada en el diagnstico de patologas 2. Resuelva casos clnicos planteados por el docente

UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA N 11 DETERMINACIN CUANTITATIVA DE FOSFATASA ALCALINA- FAL SRICA

I.- CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO.La enzima ha sido identificada en la mayora de los tejidos corporales y se localiza generalmente en las membranas celulares. La actividad ms alta de la fosfatasa alcalina se observa en el hgado, los huesos, el intestino, el rin y la placenta, y se han identificado por lo menos 11 isoformas diferentes de la fosfatasa alcalina en el suero. La medicin de la fosfatasa alcalina srica es til para diferenciar la enfermedad hepatobiliar de la enfermedad osteognica. La actividad de la fosfatasa alcalina aumenta mucho (10 veces) como resultado de una sntesis localizada en la membrana despus de una obstruccin extrahepatobiliar tal como la colestasis o los clculos biliares. La obstruccin biliar intraheptica tambin se ve acompaada por una elevacin de la actividad de la fosfatasa alcalina srica, pero el grado de incremento es mucho menor (2 a 3 veces). La enfermedad heptica que produce necrosis de las clulas del parnquima no eleva la fosfatasa alcalina srica a menos que la enfermedad heptica est asociada con dao a los canalculos o con estasis biliar. Tambin se incrementa la actividad de la fosfatasa alcalina srica durante la pubertad debido al crecimiento acelerado de los huesos y durante el tercer trimestre del embarazo debido a la liberacin de la fosfatasa alcalina por la placenta. II.- OBJETIVOS.Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de: - Integrar los conocimientos tericos de la actividad enzimtica en la determinacin de fosfatasa alcalina srica - Determinar la concentracin srica de fosfatasa alcalina - Interpretar los resultados obtenidos en la prctica y relacionarlos con patologas III.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.CANTIDAD MATERIALES CANTIDAD 1 Tubos de hemlisis 20 Gradilla 6 1 Micro pipetas volumen variable 6 1 Marcador de vidrio 2 Pipetas de 5 ml 12 Pipetas de 10 ml 6 Pro pipetas 5 Cola de zorro 5 Puntillas 12 Jabn antisptico-detergente Muestra: Suero de un paciente que no debe haber consumido alimentos durante un perodo de 8 horas previa suspensin de los siguientes medicamentos: Metildopa, propanolol, alopurinol, antidepresivos tricclicos, clorpromacina, anticonceptivos orales, analgsicos, antiinflamatorios IV.-TCNICA.- (La tcnica puede variar de acuerdo al Kit de Fosfatasa alcalina disponible para la prctica) 1. Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en grupos de 5 personas. REACTIVOS- EQUIPOS Kit Reactivo FAL Espectrofotmetro Agua destilada Bao Mara

2. Desarrollo de la prctica: Cada grupo realizar el siguiente procedimiento Marcar tres tubos de ensayo Blanco Standard Desconocido Sustrato 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml Suero ***** 50 ul Standard ***** 50 ul ***** Incubar 10 min. a 37 C Reactivo de color 2,5 ml 2,5 ml 2,5 ml Leer el color desarrollado a una longitud de onda de 520 nm llevando el aparato a 0 con agua destilada La FAL desdobla el fenilfosfato de sodio en medio alcalino tamponado con aminometil propanol AMP liberando fenol que se determina por reaccin con 4 amino antipirina y ferri cianuro como agente oxidante. Tcnica Fosfatasa Alcalina Optimizada- Winner V.- RESULTADOS.1. Expresar en forma ordenada los clculos efectuados durante la prctica mediante la siguiente relacin matemtica: Absorbancia del desconocido [Fosfatasa alcalina] UI/l= ----------------------------------Absorbancia del Standard

* [Standard]

2. Registrar todos los valores obtenidos al finalizar el procesamiento de la prctica VI.- CONCLUSIONES.1. De acuerdo a los resultados obtenidos, plantear las conclusiones de la prctica de acuerdo al siguiente cuadro referencial VALORES DE REFERENCIA Adultos: 68-240 UI/l Nios: 100-400 UI/l Niveles de FAL superiores al normal Niveles de FAL inferiores al normal Origen seo Desnutricin-anemia Cnceres seos osteoblsticos Deficiencia de protena Enfermedad de Paget Acondroplasia Hiperparatiroidismo Hipotiroidismo Osteognesis imperfecta Cretinismo Fractura en recuperacin Escorbuto Enfermedad de Hodkin Dficit de Zn y de Mg Osteomalacia Mujeres posmenopusicas(Osteoporosis) Raquitismo Consumo de Frmacos (Corticoides, Hepatopatas hipolipemiantes) Obstruccin biliar Clculos biliares Carcinoma biliar Ndulos hepticos Tumor metastsico

Infiltracin heptica Hepatitis vrica, txica, alcohlica Fisiolgicamente En el perodo de crecimiento en los nios En el primer trimestre del embarazo

VII.- CUESTIONARIO.1. Describa que son las isoenzimas 2. Describa las reacciones bioqumicas en las que participa la fosfatasa cida y su utilidad en el diagnstico de patologas 3. Describa las pruebas bioqumicas que se recomiendan en forma paralela a la determinacin de fosfatasa alcalina en problemas seos 4. Resuelva casos clnicos planteados por el docente

UNIVERSIDAD DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA No 12 METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS GLICEMIA

I.-CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO.La glucosa es el hidrato de carbono esencial para la vida, que se forma por la fotosntesis que hacen los vegetales y luego se transforma en almidn en los cereales y hortalizas, o en fructosa en las frutas y miel. La principal funcin bioqumica de la glucosa es la de proporcionar energa para los procesos de la vida. El sistema para regular los niveles de glucosa sangunea funciona para lograr dos fines. El primero es para almacenar glucosa en exceso en relacin a las necesidades corporales inmediatas en un reservorio compacto (glucgeno) y el segundo es para movilizar la glucosa almacenada de manera que mantenga el nivel de glucosa sangunea. La regulacin de la glucosa sangunea es esencial para mantener al cerebro, cuya fuente energtica primaria es la glucosa, abastecido por una cantidad constante de la misma. La funcin de la insulina es desviar la glucosa extracelular a los sitios de almacenamiento intracelular en la forma de macromolculas (como el glucgeno, lpidos y protenas). Es as que la glucosa es almacenada en tiempos de abundancia para los momentos de necesidad. En respuesta a la baja glucosa en sangre, como en perodos de ayuno, una serie de agentes hiperglucemiantes acta en las vas metablicas intermediarias para formar glucosa a partir de las macromolculas almacenadas. De esta forma las protenas y el glucgeno son metabolizados para formar glucosa-6-fosfato (gluconeognesis), la cual es hidrolizada a glucosa en el hgado y liberada a la sangre para mantener los niveles de glucosa sangunea. Los agentes hiperglucemiantes ms importantes son el glucagn, la epinefrina, el cortisol, la tiroxina, la hormona de crecimiento y ciertas hormonas intestinales. El comportamiento de cada uno de estos agentes es diferente en la regulacin de la glucosa sangunea; mientras que la insulina favorece el metabolismo anablico (sntesis de macromolculas), estas hormonas, en parte, inducen el metabolismo catablico para romper grandes molculas. Las reservas glucdicas del organismo oscilan entre 1200-2400 Kcal. y se localizan principalmente en el tejido muscular (79%) y en el tejido heptico (14%) bajo forma de glucgeno, pero tambin en las clulas sanguneas (7%) en forma de glucosa MECANISMOS DE REGULACIN DE LA GLICEMIA Disminucin de glicemia Aumento de glicemia Sntesis de glucgeno heptico y Absorcin intestinal de glucosa muscular Paso de glucosa del hgado a la sangre Entrada de glucosa a las clulas Glucogenlisis Eliminacin de glucosa por el rin Gluconeognesis La determinacin de glucosa es til para el diagnstico y control de diabetes mellitus e hipoglicemia II.- OBJETIVOS.Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de: - Analizar el metabolismo de carbohidratos para comprender las alteraciones de los carbohidratos en el organismo - Determinar la concentracin srica de glucosa - Interpretar los resultados obtenidos en la prctica y relacionarlos con patologas III.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.-

REACTIVOS- EQUIPOS CANTIDAD MATERIALES CANTIDAD Kit Reactivo de Glicemia 1 Tubos de ensayo 20 Espectrofotmetro Gradilla 3 Agua destilada 1 Micro pipetas 3 Bao Mara 1 Marcador de vidrio 2 Pipetas de 5 ml 12 Pro pipetas 5 Cola de zorro 5 Puntillas 12 Jabn antisptico-detergente Muestra: Suero de un paciente que no debe haber consumido alimentos durante un perodo de 8 horas antes de la determinacin, previa suspensin de medicamentos que pueden elevar la glicemia srica como ser: Corticoides, estrgenos, alcohol, fenitona, tiacidas, propanolol. IV.-TCNICA.- (La tcnica puede variar de acuerdo al Kit de Glicemia disponible para la prctica) 1. Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en grupos de 5 personas. 2. Desarrollo de la prctica: Cada grupo realizar el siguiente procedimiento Marcar tres tubos de ensayo Blanco Standard desconocido Reactivo de color 2ml 2ml 2ml Standard ***** 20 ul ***** Suero del paciente ***** ***** 20ul Agitar ligeramente e incubar en Bao Mara a 37 C durante 10 minutos al cabo de los cuales se lee en el espectrofotmetro a 505 nm las respectivas absorbancias Tcnica Glicemia enzimtica- Winner V.- RESULTADOS.Determinar la concentracin de glucosa srica mediante la siguiente relacin matemtica: Absorbancia del desconocido ---------------------------------------x [Standard] Absorbancia del Standard

[Glucosa] mg/dl=

Registrar e interpretar todos los valores obtenidos durante la prctica VI.- CONCLUSIONES.De acuerdo al resultado obtenido a que conclusiones podramos arribar, explique, el porqu VALORES DE REFERENCIA: 70 a 110mg/dl Niveles de glicemia superiores Niveles de glicemia inferiores al normal al normal Alteraciones pancreticas Diabetes mellitus Tumor Hemocromatosis Hiperplasia clulas de los islotes del pncreas Sndrome de cushing Tumores extra pancreticos Acromegalia Carcinoma gstrico o de la glndula suprarrenal Gigantismo Hepatopatas Aumento de adrenalina circulante Hepatitis, cirrosis

Inyeccin de adrenalina Estrsemociones quemaduras, shock, anestesia Encefalopata de wernick Lesiones en el sistema nerviosos central- convulsiones

Endocrinopatas Insuficiencia hipofisaria Enfermedad de Addison Hipotiroidismo Anomalas peditricas Prematuridad Lactante de madre diabtica Hipoglicemia cetsica Hipoglicemia espontnea del lactante Enzimopatas Enfermedad de Von Gierke Galactosemia Intolerancia a la fructosa Defectos del metabolismo de cidos grasos Dficit de carnitina Defectos de Acil Co A deshidrogenada Desnutricin Alcoholismo

VII.- CUESTIONARIO.1. Resuelva casos clnicos planteados por el docente 2. Realice un mapa conceptual de las vas metablicas de la glucosa

UNIVERSIDAD DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA No 13 HEMOGLOBINA GLUCOSILADA HbA1c-SEMINARIO I.- CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO La diabetes Mellitus (DM) es una de las condiciones metablicas con mayor prevalencia en el mundo y causa importante de morbilidad y de mortalidad, por lo cual, es fundamental investigar mtodos ms sensibles que permitan su diagnstico, pronstico y tratamiento, con el fin de prevenir el surgimiento de secuelas tales como las angiopatas, nefropatas, retinopatas y complicaciones cardiovasculares. La hemoglobina de los seres humanos est compuesta por tres variedades principales de hemoglobina llamadas: hemoglobina A, hemoglobina A2 y hemoglobina F. La hemoglobina A es la ms abundante porque representa el 97%. Dentro de esta misma fraccin hay varios grupos, tambin conocidos como fracciones menores (HbA1a, HbA1b y HbA1c), las cuales se diferencian entre s de acuerdo con la velocidad de movimiento durante el proceso de electroforesis. La hemoglobina glicosilada, conocida tambin, como Hb rpida, es una fraccin de la HbA correspondiente a la entidad molecular N-(1-desoxifructosil) hemoglobina, originada por la reaccin entre la glucosa y el grupo amino N-terminal de la cadena de la hemoglobina. Su fraccin de sustancia o de masa en sangre, respecto a la hemoglobina, es directamente proporcional a la concentracin de la glucosa y a la duracin de la exposicin de la hemoglobina a la glucosa. La HbA1c es la ms abundante de los componentes menores de la hemoglobina en los eritrocitos humanos que se forma por unin de la glucosa a la cadena beta de la hemoglobina. Puesto que los glbulos rojos tienen una vida de 120 das, es posible saber de esta forma como han estado sus concentraciones de glucosa durante los ltimos tres meses. La HbA1c revela el control a largo plazo de su glucosa en los ltimos tres meses. Los valores de HbA1c empiezan a reflejar cambios importantes en la dieta y terapia aproximadamente de 3 a 4 semanas despus del cambio. La hemoglobina glicosilada es el tanto por ciento de hemoglobina que se encuentra unido a la glucosa, alrededor del 5% en condiciones normales. Un valor mayor al 6,5% es diagnstico de diabetes. Cuando se utiliza este valor para el control del paciente diabtico, un resultado mayor a 7% indica que hay que realizar una vigilancia ms estricta de los niveles de glucosa del paciente, ya que de no ser as podra desarrollar complicaciones como ceguera, fallo renal o neuropata.

Valores de referencia:

GLUCEMIAS MED IAS 60 90 120 150 180 210 240 270 300 330 360

PORCENTAJE DE HbA1c 4% 5% 6% 7% 8% 9% 10 % 11 % 12 % 13 % 14 %

RIESGO DE COMPLICACIONES

Riesgo bajo (se considera normal hasta 6,5%)

Riesgo moderado (control aceptable hasta 7,5%)

Riesgo aumentado Riesgo alto Se considera mal control a partir de 9,5% Riesgo critico

Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de: - Entender la importancia del control de la diabetes a travs de la hemoglobina glucosilada

UNIVERSIDAD DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA No 14 DETERMINACIN DE FRUCTOSA- SEMINARIO I.- CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO La glucosa presente en el plasma humano reacciona con diversas protenas formando glucoprotenas estables siendo la principal de ellas la albmina. Esta reaccin se da a travs de la ligacin covalente de la glucosa con residuos de lisina de las protenas sanguneas dando origen a bases de Schiff, las cuales, en un segundo momento, se transforman irreversiblemente en cetoaminas estables (fructosaminas). Luego, la determinacin de fructosamina se trata bsicamente de la medicin de estas glucoprotenas en el suero. De esta forma, los niveles de fructosamina en la sangre son un reflejo directo dos niveles de glucosa sanguneos teniendo su determinacin gran utilidad en el control glicmico de pacientes diabticos o de pacientes hipoglicmicos. La concentracin de fructosamina refleja el ndice de variacin de glucosa durante las ltimas dos a tres semanas previas a la colecta de la muestra. Por lo tanto, el dosaje de fructosaminas es una medida del estado metablico retrospectivo del paciente, es que conviene incluirlo dentro del esquema de monitoreo del paciente diabtico. La fructosamina aumenta en diabetes, diabetes gestacional, hemlisis o anormalidades de los eritrocitos y puede disminuir en la obesidad. Valor normal: El valor normal de fructosamina es de: 1,9 a 2,9 mmol/L Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de: - Entender la importancia del control de la diabetes a travs de la determinacin de fructosamina

UNIVERSIDAD DEL VALLE SERVICIOS DE LABORATORIO LABORATORIO DE BIOQUMICA I PRACTICA No 15 CURVAS DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA-SEMINARIO I.- CONOCIMIENTO TERICO REQUERIDO La concentracin de glucosa en la sangre ( glucemia) se eleva durante la ingestin de alimentos, durante la absorcin digestiva, pero sin sobre pasar 160 mg/dl en las personas normales. Si un sujeto en ayunas se le administra por va oral 50 a 100 gramos de glucosa o 1 gramo de glucosa por kilo, se observa un aumento de la glicemia para luego descender lentamente hasta alcanzar el nivel inicial. Esta curva glucmica producida por ingestin se llama curva de tolerancia a la glucosa, y es una herramienta para el diagnostico de diabetes Mellitus.

La prueba se realiza despus de una noche de ayuno, el paciente ingiere una solucin que contiene una cantidad conocida de glucosa. Se toma una muestra de sangre antes de que el paciente ingiera la solucin de glucosa y de nuevo cada 30 a 60 minutos despus hasta por tres horas. Los niveles de glucosa en la sangre que superen los lmites normales en los momentos en que se hacen las mediciones se pueden utilizar para diagnosticar diabetes Tipo 2 o la diabetes gestacional (altos niveles de glucosa durante el embarazo). Tambin se pueden medir los niveles de insulina (hormona producida por el pncreas que mueve la glucosa desde el torrente sanguneo hasta las clulas). El examen oral de tolerancia a la glucosa se utiliza para evaluar a las mujeres embarazadas por diabetes gestacional entre las semanas 24 y la 28 de embarazo. Este examen tambin se puede utilizar para diagnosticar diabetes mellitus en estudios de investigacin que involucren a los diabticos y en casos en los que se sospeche la presencia de esta enfermedad, a pesar de haber realizado un examen en ayunas de glucosa en sangre, con resultados normales. Factores que interfieren: Estrs agudo (por ejemplo, por una ciruga o una infeccin) Ejercicio vigoroso Algunos medicamentos pueden producir intolerancia a la glucosa, entre otros:

Los diurticos tiazdicos (como por ejemplo, la hidroclorotiazida) Los betabloqueadores (como el propanolol) Los anticonceptivos orales Los corticosteroides (como la prednisona) Algunos medicamentos psiquitricos Valores normales: Para una prueba de tolerancia a la glucosa oral con 75 gramos, utilizada para detectar diabetes Tipo 2, los valores sanguneos normales (no diabticos) son: Ayunas: 60 a 110 mg/dl 1 hora: menos de 200 mg/dl 2 horas: menos de 140 mg/dl. Entre 140 y 200 se considera que existe deterioro en la tolerancia a la glucosa y es un grupo que est en mayor riesgo de desarrollar diabetes. Los niveles por encima de 200 mg/dl indican un diagnstico de diabetes mellitus. II. - CUESTIONARIO. 1. 2. 3. 4. Describa la diabetes, su clasificacin Describa el diagnstico de la diabetes mellitus tipo 2 Describa el tratamiento de la diabetes mellitus tipo 2 Resuelva casos clnicos planteados por el docente

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