Cuestionario Evaluativo-1 de “Taller de Inmunología”

Horas Mixtas: Seminario sobre Técnicas de Inmunoensayo: ELISA

NOMBRE Y APELLIDOS: SAMIRA ANAIS PAREDES PAREDES

PUNTAJE NOTA

FECHA DE ENTREGA LUNES 22 DE MAYO

(a) ¿En que se basa la técnica de ELISPOT? (5 puntos)

La técnica ELISPOT es una técnica enzimática-colorimétrica altamente específica y sensible que
permite cuantificar células del sistema inmune secretoras de una determinada proteína (anticuerpo o
citoquina) a partir de los puntos (spots) que genera la reacción enzimática colorimétrica que detecta
las citoquina/anticuerpos secretados por una simple célula. Esta técnica permite la individualización
de cada una de las células secretoras o activadas, en base a la visualización de su producto
secretorio.
Esta se basa en el test de ELISA.
(b)Realice un cuadro con las principales diferencias entre la técnica ELISPOT y el ELISA
Directo, Indirecto, Sandwish y competitivo (10 puntos)

Técnicas Diferencias

ELISPOT Para la detección de células productoras de

citoquina se realiza utilizando un ELISA
sándwich que utiliza dos Acs específicos
contra diferentes epitopes de la misma
molécula de citoquina. Esta técnica genera
puntos (spots) basados en una reacción
enzimática -colorimétrica que detecta las
citoquinas secretadas por una simple célula.
Los spots son detectados visualmente o
mediante el uso de una lupa.
Considera la realización de Elisa, pero de
manera más refinada.
Es altamente sensible.

DIRECTO La enzima conjugada con el anticuerpo se une

directamente al antígeno.

INDIRECTO En el fondo se encuentra un antígeno, donde

luego se incorpora un anticuerpo primario de
captura y luego un segundo anticuerpo que
actúa como anticuerpo de detección, se
encuentra unido a una enzima.

SANDWISH En el ELISA tipo sándwich el antígeno queda

inmovilizado entre dos anticuerpos, uno de
captura y otro de detección también conocidos
como pares de anticuerpos, los que se unen a
diferentes epítopos.

COMPETITIVO El ELISA competitivo es una variante más

compleja de la técnica ELISA, también
conocido como ELISA de inhibición debido al
uso de un antígeno de referencia que competirá
con el antígeno de la muestra por unirse al
anticuerpo primario.
Se utiliza generalmente para detectar y/o
cuantificar antígenos presentes en muy bajas
cantidades.
a. ¿Que tipo de ELISA es aquel en el que el anticuerpo específico del antígeno primario es
reconocido por un anticuerpo conjugado secundario? (solo Responda el nombre del
ELISA). (3 puntos)
Corresponde a Elisa Indirecto.

b. ¿Cuál es el tipo de ELISA en el cual la muestra experimental se “se intercala” entre un

anticuerpo de captura no conjugado y un anticuerpo de detección conjugado, ambos
específicos de la misma proteína, pero en diferentes epítopos?? (3 puntos)
Corresponde a Elisa tipo Sándwich.

c. Teniendo en cuenta su capacidad de investigar podría usted diseñar un Test de ELISA

para detectar Antígenos contra todas las variantes del virus COVID-19. SEA LO MAS
DETALLADO POSIBLE. (15 puntos).
Para desarrollar un test de Elisa para la detección de todas las variantes del covid-19, se debería
realizar un test tipo Sándwich, para de esta manera en primer lugar obtener el anticuerpo del covid-
19 y luego con el de detección poder determinar la variante.
Por lo que se debería disponer de un suero previamente preparado con el anticuerpo primario, en el
cuál se agregue la muestra (en este caso sanguínea) del paciente, lo que hará que se una al epítopo
de interés (en este caso la detección del covid)
En segundo lugar, se integraría el anticuerpo secundario, el que se uniría al otro epítopo (el que
correspondería a la variante del virus).
En último lugar el sustrato, generará la tinción de la solución, permitiendo cuantificar y cualificar la
ELISA
(a) ¿Porque actualmente se usa la técnica de PCR y no el ELISA en la detección del
COVID-19? Fundamente (10 puntos)
Hoy en día es más utilizado el PCR, puesto que el tiempo de espera es menor que con Elisa (el
primero tarda 24 horas, mientras que el segundo de 3 a 4 días). Asimismo, la muestra que se toma
de cada uno es distinta, puesto que la del PCR es muestra de mucosa, mientras que la de ELISA
hace necesaria la extracción sanguínea, los costos son menores con el PCR.