Universidad Nacional Autónoma de Honduras

Escuela de Microbiología
Internado rotatorio II Periodo académico 2012
MB 344 Pasantía en Serología y Pruebas Especiales

ELISA
(Enzyme Linked Immunosorbent
Assay)
Presentado por:
Susan Denice Flores
Mario Roberto Mendoza

Catedrático supervisor:
Dra. Gina Laitano.

Tegucigalpa M.D.C., 28 de Junio de 2012

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 Principio
Ag o Ac fijado a una fase
Esta técnica utiliza una enzima sólida
para analizar reacciones
antígeno-anticuerpo sobre una
fase sólida o
Ag o Ac en la muestra
inmunoabsorbente.

ELISA utiliza un anticuerpo o un

Conjugado
antígeno conjugado a una
(Anticuerpo unido a enzima)
enzima, la cual reacciona con
su sustrato para formar un
producto coloreado que
absorbe luz. Sustrato

Puede ser utilizado para medir COLOR

tanto el antígeno como el
ELISAanticuerpo. 2
(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
 ELISA
SANDWICH

ELISA 3
(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
 Preparación del conjugado
enzimático, soluciones de lavado
y sustratos
 Conjugado enzimático:  Solución de Lavado:
1. Purificación de los • Solución salina con Tween 20
anticuerpos como agente tensoactivo:
2. Marcación de los anticuerpos ClNa + Tween 20 +Agua
con la enzima mediante un destilada.
agente puente
(Glutaraldehído u otra
sustancia)
 Sustratos:
• Nitrofenil-fosfato (FA)
Enzimas utilizadas: • Ortofenilendiamina (P)
• Fosfatasa alcalina
• Peroxidasa
ELISA 4
(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
 Fase de Lavado
Lavar la placa con el buffer de lavado, para eliminar el
exceso de antígeno o anticuerpo libre (Eliminar
interferencias y evitar falsos positivos).

Remover el exceso de líquido golpeando la placa invertida

sobre papel absorbente.

Manual 5
Automático
 ¿Qué es el cut-off? ¿Cómo se
obtiene?
El cut-Off o punto de corte, se
Valores
considerados
refiere al valor mínimo de
positivos confianza. Se utiliza para
distinguir entre los resultados
positivos y negativos.
CUT-
OFF Cálculo:
Valores El método para determinarlo no
considerados
siempre es el mismo, ya que existen
negativos
diferentes criterios según el productor
de la prueba.

ELISA 6
(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
 Informe de Resultados (lectura
visual e instrumental)

Automático: Lector de
ELISA
(espectrofotometría).

COLOR
Visual: observar el
cambio de color.

ELISA 7
(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
 Diferencias entre Pruebas de Primera,
Segunda, Tercera y Cuarta Generación
Primera Segunda
Generación Generación

Detección de anticuerpos Detección de anticuerpos

mediante EIA indirecto con mediante EIA indirecto con
antígeno obtenido de lisado antígeno obtenido de lisado
vírico y anticuerpos vírico y anticuerpos
policlonales.
ELISA monoclonales. 8
(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
 Diferencias entre Pruebas de Primera,
Segunda, Tercera y Cuarta Generación

Tercera Cuarta
Generación Generación

Detección de anticuerpos mediante

EIA tipo sandwich o de • Disponibles en el mercado desde 1997,
inmunocaptura, con antígeno permiten la determinación simultánea
obtenido de proteínas de antígenos y anticuerpos (HIV con el
recombinantes y/o péptidos objetivo de bajar el período ventana
sintéticos y detección conjunta de mediante un solo ensayo).
anticuerpos específicos IgG, IgM e
ELISA 9
IgA. Linked Immunosorbent Assay)
(Enzyme
Gracias por su
Atención...

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