Universidad Nacional Autónoma de Honduras

Facultad de Ciencias
Escuela de Microbiología
Departamento de Bioanálisis

Clase:
Pasantía en Serología y Pruebas Especiales

Catedrático:
Dra. Elsy Matute

Asignación:

Portafolio De Bioquímica y Serología

Presentado Por:
Grupo No. 2

Fecha:
23 de septiembre del 2019

“En el campo de la observación, la oportunidad sólo favorece a la mente preparada.”

Louis Pasteur
 PRUEBAS ESPECIALES SEROLOGICAS

Prueba Colección de mx. Valores de Principio del método Utilidad Interferencias

Consideraciones referencia Clinica/interpretación
especiales de resultados
ANA La determinación se Titulos Diferentes laboratorios pueden Medicamentos
realiza a partir de normales 1:40 emplear diferente metodología para alteran los títulos
una muestra de o 1:80 detectar los ANA. Dos de los La prueba de los de esta prueba.
sangre venosa.No métodos más comunes son el anticuerpos Los niveles de
necesita una inmunoensayo y laantinucleares o ANA se anticuerpos
preparación inmunofluorescencia indirecta.solicita para detectar antinucleares
especial para esta Algunos laboratorios realizan un trastornos autoinmunes tienden a
prueba.(1) cribado por inmunoensayo y que pueden afectar a aumentar con la
posteriormente aplican varios tejidos y edad.
inmunofluorescencia indirecta para órganos, siendo una de
confirmar los resultados positivos o las pruebas que
equívocos. generalmente se utiliza
para el diagnóstico de
Inmunofluorescencia indirecta - se lupus eritematoso
mezcla sangre del afectado con sistémico (LES).
células que están adheridas sobre
una superficie. En caso de que en la
sangre existan autoanticuerpos,
estos reaccionarán con las células.
Se trata el conjunto con un reactivo
que contiene un anticuerpo
fluorescente y se examina toda la
preparación al microscopio para
 observar presencia o ausencia de un
determinado patrón de
fluorescencia.

Inmunoensayos - son métodos que

suelen realizarse en instrumentos
más o menos automatizados,
aunque pueden ser menos sensibles
que el método anterior para detectar
ANA.

Además, suelen solicitarse otras

pruebas de laboratorio asociadas a
inflamación como velocidad de
sedimentación globular (VSG) y/o
proteína C reactiva (PCR).

ANCA La determinación se Valor de inmunofluorescencia indirecta (IFI), Los anticuerpos Interferentes:

realiza a partir de referencia: enzimoinmunoensayo (ELISA). anticitoplasma de anticuerpos
ANTICUERPOS una muestra de negativo En esta prueba se mezclan la sangre neutrófilos fueron antinucleares
ANTICITOPLASMA DE sangre venosa. Se de la persona en cuestión con detectados por primera (ANA) positivos
NEUTROFILOS utiliza el Suero neutrófilos, y la mezcla se trata con vez en 1982, asociados dan resultado
Para esta prueba un colorante fluorescente (tinción a glomerulonefritis y falsos positivos
no se necesita fluorescente). En caso de que enfermedades con la técnica de
ninguna existan ANCA se observará al sistémicas. IFI, estos se
preparación microscopio un patrón de Los ANCA son absorben a partir
especial. fluorescencia determinado. El patrón anticuerpos contra los de extracto de
puede ser de tipo citoplasmático gránulos primarios y timo vacuno que
(cANCA), perinuclear (pANCA), o secundarios del elimina la
atípico (X-ANCA). El laboratorio citoplasma de los interferencia que
puede además evaluar los neutrófilos y de los produce el ANA,
anticuerpos mieloperoxidasa o los lisosomas de los DNA, histonas y
anticuerpos proteinasa 3 monocitos. otros
directamente empleando un ensayo Se encuentran anticuerpos
de tipo ELISA (ensayo por involucrados en la antinucleares
inmunoabsorción ligado a enzimas). patogénesis de las pudiendo
Cuando se sospecha la existencia de diferentes formas de neutralizarse en
una vasculitis, a menudo se vasculitis autoinmunes gran parte de los
combinan ambos tipos de pruebas, y son marcadores casos la imagen
fluorescencia y ELISA. serológicos muy útiles de ANCA-p.-
para el diagnóstico y hCG
control evolutivo de
determinadas formas
de vasculitis
sistémicas.
Están relacionados con
insuficiencia renal en el
lupus eritematoso
sistémico (LES)
pediátrico no así en la
artritis reumatoidea
(AR). También se
encuentra ANCA en los
pacientes con
glomerulopatías (sin
evidencia de vasculitis),
glomerulopatía
diabética,
glomerulopatía IgA
membrana
proliferativa,
glomerulopatía
mesangial,
glomerulopatía
membranosa,
nefroesclerosis,
esclerosis focal y
segmentaria. Todas
ellas asociadas a
microhematuria y/o
proteinuria en
diferentes grados. No
es posible determinar si
estos anticuerpos en
títulos bajos, tanto en
LES como en las
demás
glomerulopatías,
constituyen un
epifenómeno de las
enfermedades
inflamatorias o están
relacionados con la
fisiopatogenia de la
enfermedad.
Los IgM ANCA se
describen en pacientes
con hemorragias
pulmonares mientras
que IgA ANCA se
encuentra en títulos
bajos en pacientes con
púrpura de Schönlein-
Henoch.
La unión de los ANCA-
c a PR3 se realiza
sobre sitios de elevada
afinidad y la misma
está relacionada con
determinantes
conformacionales.
Quizá esto explique el
pobre reconocimiento
de PR3 en Western
Blot y otros ensayos de
fase sólida.
CARDIOLIPINAS Sangre Venosa. Anticuerpos Metodo: enzimoinmunoanálisis. Diagnóstico de En pacientes
Suero anticardiolipina Los anticuerpos anticardiopilinas síndrome con SIDA (todos
ANTICUERPOS s IgG están asociados con tromboembolia antifosfolipídico, éstos con títulos
(CLASE IgG, IgM, IgA) Negativo: recurrente arterial, pérdida fetal que se define como más bajos).
menor de 20 recurrente, trombocitopenia, anemia la presencia de
GPL U/ml hemolítica autoinmune, enfermedad anticuerpos
Positivo bajo: neurológica y tal vez, otras como antifosfolipídicos
20-30 GPL tiroiditis autoinmune. La unión de y/o inhibidor lúpico,
U/ml estos anticuerpos a la cardiolipina en cuyas
Positivo pacientes con enfermedades manifestaciones
moderado: 31- autoinmunes depende de un cofactor clínicas son las
50 GPL U/ml proteico: beta-2- glicoproteína I (beta siguientes:
Positivo alto: –2-GPI), también conocido como - Trombosis
mayor 50 GPL lipoproteína H. Esta proteína inhibe arteriales o
U/ml ``in vitro´´ la ruta intrínseca de la venosas
coagulación, la agregación - Abortos
Anticuerpos plaquetaria dependiente de adenosin -Trombocitopenias
anticardiolipina difosfato (ADP) y la actividad
s IgM protrombinasa de las plaquetas Monitoreo: en
Negativo: activadas. Se propone que el blanco pacientes con LES
menor de 7 de los anticuerpos de los pacientes que presentan
MPL U/ml con síndrome antifosfolipídicos títulos altos de
Positivo bajo: puede ser la beta-2-GPI unida a anticuerpos
7-10 MPL U/ml fosfolípidos (esta unión provoca un anticardiolipinas se
Positivo cambio conformacional en la beta-2- utiliza como
moderado: 11- GPI nativa). El antígeno también seguimiento, ya
15 MPL U/ml podría ser un epitope que es marcador
Positivo alto: estructuralmente definido por de riesgo
mayor 15 MPL ambas: beta-2-GPI y cardiolipinas. tromboembólico.
/ml En los pacientes con enfermedades
infecciosas (por ejemplo: de Lyme o Diagnóstico
Anticuerpos tuberculosis)., la unión de estos diferencial de
anticardiolipina anticuerpos con los fosfolípidos es trombosis
s IgA independiente de la presencia del recurrente,
Negativo: cofactor beta-2- GPI y por lo tanto síndromes lupus
menor de 10 U pueden presentarse anticuerpos like, pérdida fetal
arb /ml antifosfolípidicos en forma recurrente,
Positivo bajo: transitoria.. Se han desarrollado hemorragia severa.
10-20 U arb /ml ELISA que detectan beta-2-GPI y
Positivo miden directamente los anticuerpos
moderado: 21- que reaccionan con la misma
30 Uarb/ml permitiendo diferenciarlos de los que
Positivo alto: se unen a cardiolipinas solamente.
mayor de 30 Desde el conocimiento de la
Uarb/ml importancia de la beta-2-GPI en la
unión de los anticuerpos
anticardiolipinas, los ensayos para
investigar la presencia de estos
anticuerpos utilizan, para mejorar su
sensibilidad y especificidad, beta-2 -
GPI en la fase sólida y en el
diluyente.
ANTICUERPOS ANTI Muestra de sangre, Negativo < Método: hemaglutinación pasiva, Hipogamaglobuli
Sm suero. No se 0.80 contrainmunoelectroforesis, nemia,
requiere ayuno. Indeterminado precipitación Utilidad
inmune, clínica: tratamiento con
0.80-1.25 immunoblotting, Diagnóstico de LES. esteroides.
Positivo > 1.25 enzimoinmunoensayo Altamente específico
(ELISA).
Unidades ENA (99%), pero es poco
La frecuencia de estos anticuerpos
sensible
varía en función de la técnica de (30%).
detección. Evaluación y
pronóstico: se relaciona
Los anticuerpos Sm detectados por
con la actividad de la
immunoblotting son específicos de
enfermedad,
lupus eritematoso sistémico (LES).
independientemente de
La técnica de ELISA detecta estos
las fluctuaciones de los
anticuerpos en pacientes con
títulos de anticuerpos
esclerosis sistémicas, enfermedad
anti-DNA y se lo asocia
mixta del tejido conectivo (EMTC),
polimiositis (PM) con enfermedad renal
o artritis
leve, enfermedad del
reumatoidea (AR), aparecen también
sistema
en pacientes con neoplasias, nervioso,
infecciones o enfermedad más activa
enfermedades
aunque
autoinmunes y en individuos sanos. no se
encuentra
Esto depende del antígeno si su esta
asociación con los
origen es natural, péptido sintético o
recombinante. pacientes que no tienen
anticuerpos anti-DNA.
Suero o plasma El rango Inmunoturbidimetrico. La medida de C3 y C4 sueros
C3 heparinizado. normal es de La proteína C3 del complemento se utiliza para hemolizados o
88 a 201 reacciona con el anticuerpo determinar si ciertas contaminados.
Si la medida de miligramos por específico anti-C3 formando anormalidades o
colesterol se solicita decilitro inmunocomplejos insolubles. La deficiencias en el
junto a un perfil (mg/dL) (0.88 a turbidez provocada por estos sistema del
lipídico, es 2.01 g/L). inmunocomplejos es proporcional a complemento están
necesario mantener la concentración de C3 en la muestra causando o
un ayuno mínimo de y puede medirse contribuyendo a la
entre 9 y 12 horas espectrofotométricamente. enfermedad o trastorno
antes de la del paciente. La
obtención de la actividad total del
muestra. Es complento (CH50 o
importante seguir CH100) puede
las instrucciones solicitarse para mirar la
proporcionadas. integridad de toda la vía
clásica del
complemento. Los
otros componentes del
complemento se
solicitan para
determinar
déficits hereditarios.

Las pruebas del

complemento pueden
solicitarse para ayudar
a diagnosticar la causa
de infecciones
microbianas
recurrentes, angioede
ma o inflamación.
Puede utilizarse para
facilitar el diagnóstico y
para controlar la
actividad de
enfermedades
autoinmunes agudas o
crónicas como
el Lupus Eritematoso S
istémico (LES). Puede
determinarse de
manera seriada para
monitorizar
enfermedades
relacionadas con la
presencia de
inmunocomplejos y
otras situaciones como:
glomerulonefritis
(trastorno renal),
enfermedad
del suero, artritis
reumatoide y vasculitis
(inflamación de vasos
sanguíneos). Cuando
se forman
 inmunocomplejos, el
sistema del
complemento
contribuye a eliminarlos
de la sangre, y por lo
tanto los niveles de
complemento
disminuyen.

C4 Recolección: 10 - 40 mg/dl Método inmunoturbidimétrico para la Los componentes del La turbidez y la

obtener la muestra (0,1 - 0,4 g/l). determinación del componente C4 complemento que se presencia de
de la manera usual. Cada del complemento miden con mayor partículas en las
b) Aditivos: en caso laboratorio La proteína C4 del complemento frecuencia son C3 y C4. muestras,
de que la muestra a debe reacciona con el anticuerpo Cuando el sistema de pueden interferir
emplear sea establecer sus específico anti-C4 formando complementos se con la prueba.
plasma, se propios valores inmunocomplejos insolubles. La enciende durante la
recomienda no de referencia. turbidez provocada por estos inflamación, los niveles
emplear niveles en inmunocomplejos es proporcional a de proteínas del
exceso de heparina la concentración de C4 en la muestra complemento pueden
como y puede medirse disminuir. La actividad
anticoagulante. c) espectrofotométricamente. del complemento se
Sustancias puede medir para
interferentes determinar qué tan
conocidas: no grave es una
emplear sueros enfermedad o si un
tratamiento está
funcionando.

Un examen del
complemento se puede
utilizar para vigilar a
personas con
un trastorno
autoinmunitario. Por
ejemplo, las personas
con lupus
eritematoso activo
pueden tener niveles
de proteínas del
complemento C3 y C4
por debajo de lo
normal.
La actividad del
complemento varía a lo
largo del cuerpo. En
personas con artritis
reumatoidea, la
actividad del
complemento puede
ser normal o superior a
lo normal en la sangre,
pero mucho más bajo
 de lo normal en el
líquido articular.

Tacrolimus La determinación se Si existe La determinación de tacrolimus se La determinación de Si la muestra no

realiza a partir de presencia o utiliza para medir la cantidad de tacrolimus suele es tomada
una muestra de ausencia fármaco en sangre para determinar solicitarse al principio después de las
sangre venosa si la concentración ha alcanzado un del tratamiento, a 12 horas de
La determinación se El nivel de nivel terapéutico y si está por debajo menudo diariamente haber ingerido el
realiza a partir de tacrolimus en del nivel tóxico. Existen diversas para establecer el fármaco, habran
una muestra de sangre debe razones por las cuales es importante régimen de dosificación resultados
sangre venosa mantenerse monitorizar los niveles de tacrolimus: adecuado. Una vez erróneos.
dentro de un establecida y tolerada
estrecho rango No existe una buena correlación la dosis, la
terapéutico. Si entre la dosis de tacrolimus monitorización de
la administrada y su concentración tacrolimus puede
concentración en sangre espaciarse. La prueba
es demasiado La absorción y también puede
baja, puede el metabolismo de tacrolimus solicitarse cuando hay
ocurrir el administrado por vía oral puede una modificación de la
rechazo; y si es variar dependiendo del momento dosis y siempre que la
demasiado en que se ha tomado y de la persona
elevada, el comida con la que se ha tomado presente síntomas que
individuo Tacrolimus puede producir daño sugieran efectos
puede renal (nefrotoxicidad), secundarios, toxicidad
experimentar especialmente a dosis elevadas. o rechazo
síntomas Medir las concentraciones en
personas que han recibido
asociados a la un trasplante de riñón puede ser del órgano trasplantad
toxicidad. de utilidad para distinguir entre o.
daño renal debido a un rechazo
(debido a que la dosis de Los signos y síntomas
tacrolimus es demasiado baja) o que sugieren toxicidad
daño renal debido por tacrolimus varían
a toxicidad por tacrolimus (la dependiendo del
dosis es demasiado elevada) órgano trasplantado y
Tacrolimus puede incrementar el pueden ser:
riesgo de sufrir infecciones
bacterianas, víricas, fúngicas o Daño renal
parasitarias severas debido a (nefrotoxicidad)
que disminuye la respuesta del Temblores, dolor
sistema inmunológico del de cabeza
individuo (neurotoxicidad)
Hipertensión
Náuseas y vómitos
Trastornos
electrolíticos
como hiperpotase
mia
Ruidos
intermitentes o
persistentes en los
oídos (tinnitus)
Ataques
epilépticos
 Aumento de la
frecuencia
cardíaca
Visión borrosa

La monitorización de
tacrolimus es
imprescindible
mientras se esté
tomando dicho
fármaco.

ANTICUERPO ANTI- Muestra de sangre. Negativo < Precipitación inmune, Evaluación y LES, Esclerosis
SSA (Ro) No se requiere 0.80 contrainmunoelectroforesis, pronóstico: sistémica
ayuno. Indeterminado inmunofluorescencia indirecta (IFI), En el lupus eritematoso progresiva, SS,
0.80-1.25 inmunoblotting, sistémico se asocian AR.
Positivo > 1.25 enzimoinmunoanálisis (ELISA), con el desarrollo de
Unidades ENA inmunodifusión (57% de sensibilidad lesiones cutáneas
clínica), Western Blot (WB). fotosensibles, SS y
Producen un patrón de IFI factores reumatoideos
citoplasmático aunque en la interfase y en el SSP con la
celular predomina el patrón nuclear. presencia de
manifestaciones
extraglandulares como
vasculitis, tumefacción
parotidea y alteración
de SNC.
La mitad de los sueros
que contienen
anticuerpos anti SSA
/Ro contienen
anticuerpos anti
SSB/La.
Los anticuerpos anti
SSA /Ro y SSB/ La en
madres y recién
nacidos están asociado
con lesiones cutáneas
y con bloqueo cardíaco
congénito, la
característica de los
que tienen estos
anticuerpos es la de
estar relacionados con
fotosensibilidad,
trombopenia, presencia
de factor reumatoideo y
vasculitis cutánea.
En SS, los anticuerpos
anti SSA /Ro y SSB/ La
están asociados
clínicamente a alta
frecuencia de púrpura,
hipergammaglobulinem
ia, disfunción severa de
la glándula salival, altos
títulos de factores
reumatoideos,
leucopenia y citopenia.
La detección de éstos
anticuerpos en las
distintas enfermedades
reumáticas depende de
la técnica empleada, ya
que poseen distinta
sensibilidad.

Son característicos de
pacientes con el
síndrome de Sjögren
primario (SSP), (70-
100%) o lupus
eritematoso sistémico
(LES) (24-60 %) y son
característicos del
lupus eritematoso
neonatal (LEN), (95-
100%), lupus
eritematoso cutáneo
subagudo (70-90%) y
del lupus eritematoso
asociado a déficit de
complemento,
deficiencias de C2/C4
(90%).
Los anticuerpos anti
SS-A /Ro precipitan los
ARN citoplasmáticos
humanos HY1-HY5.Se
unen a una
glucoproteína de 60 KD
y no directamente a la
partícula Ro-RNP. Los
antígenos son al menos
dos componentes
polipeptídicos: 52kD y
60kD.
Los anticuerpos anti
RO 60 KD y anti RO 52
KD suelen ser de clase
IgG, en particular IgG1
aunque pueden
detectarse anticuerpos
IgA e IgM.
Los factores genéticos
son muy importantes
en el desarrollo de
estos anticuerpos.
Los anticuerpos SS-A
/Ro se asocian con
HLA-DR3 en pacientes
con LES, SS o lupus
eritematoso cutáneo
subagudo y en las
madres de niños con
LEN.
La presencia
simultánea de
anticuerpo anti SSA
/Ro y anti SSB/La se
asocia con HLA-DR2
en LES, y está
relacionado con el
déficit homocigota de la
fracción C2 de sistema
de complemento.
Se puede observar LES
con ANA negativos y
SSA /Ro positivo por
diferencias de
concentración y
especie de las
diferentes células
 utilizadas como
sustrato.
Estos anticuerpos
atraviesan la placenta y
reconocen un epitope
en el haz de
conducción del corazón
y en el pulmón del
bebé, producen falla
cardíaca, los de clase
IgG pasan placenta
(todas las
subclases),los isotipos
IgM e IgA no la
atraviesan.

PRUEBAS SEROLOGICAS DE RUTINA

Prueba Colección de mx. Valores de Principio del método Utilidad Interferencias

Consideraciones especiales referencia Clinica/interpretación
de resultados
Ra test Suero libre de hemólisis, sueros Suero 0 - 20 Los factores reumatoideos La prueba de FR se - La turbiedad y
hiperlipemicos y turbios puede UI/ml presentes en la muestra usa a menudo para el partículas en las
afectar los resultados. son capaces de aglutinar diagnostic de la artritis muestras pueden
La muestra de no procesar dentro las partículas de látex reumatoide. La artritis interferir con la prueba.
de las 48 hs de obtenida debe recubiertas con γ-globulina reumatoide es un tipo Por lo tanto, las
congelarse a -20° C. humana. La turbidez de trastorno partículas que puedan
causada por la autoinmune que causa resultar de una
 aglutinación de las dolor,hinchazón y coagulación
partículas de látex es rigidez en las incompleta o de una
proporcional a la articulaciones. desnaturalización de
concentración de FR en la las proteínas, deben
muestra y puede ser Los factores ser removidas por
medida reumatoideos también centrifugación antes de
pueden ser un signo proceder a su ensayo.
espectrofotométricamente.
de otros trastornos
autoinmunitarios -Es aconsejable que
como artritis juvenil, las muestras con una
ciertas infecciones y excesiva cantidad de
algunos tipos FR sean diluidas con
de cáncer. solución fisiológica y
ensayadas
nuevamente.
Pruebas de La hCG es un test rápido Positivo: Dos La hCG tira es un La gonadotropina -hCG TIRA únicamente
embarazo inmunocromatográfico para la líneas rosas o inmunoensayo cualitativo coriónica es una detecta la presencia de
detección cualitativa de la rojas aparecerán para la detección de hormona que se hormona en la
en la zona muestra (detección
gonadotropina coriónica humana hormona gonadotropina detecta en las mujeres cualitativa). Ni la
central, una línea
en muestras de orina y suero, de control y una coriónica humana en embarazadas desde cantidad ni el aumento
para la detección precoz del línea de test muestras de suero y orina. los primeros días del de concentración de la
embarazo. (marcada con la Se fijan a la membrana embarazo. Es un hormona pueden
letra T). anticuerpos monoclonales indicador del estado de determinarse por este
Negativo: Una test.
frente a la hormona hCG gestación y en su
única línea rosa en la zona de línea del test. detección se basan los -Muestras de orina
o roja aparece
Durante la prueba, la kits de embarazo, ya muy diluidas, pueden
en la zona de
control marcada muestra reacciona con las no contener niveles de
hormona
con la letra C partículas de oro coloidal que su aparición está representativos. En
(línea de fijadas con anticuerpos asociada al embarazo. este caso, se
control). anti-hCG previamente recomienda repetir la
Invalido: prueba transcurridas
secados en la tira de
Ausencia de la 48 horas y con la
línea de control a reacción. La mezcla primera orina de la
pesar de que formada se mueve hacia la mañana.
aparezca o no la parte contraria de la
línea del test. membrana por acción -Resultados Falsos
Nota: Las Negativos pueden
capilar. En el caso de que
causas más darse cuando los
se de un resultado niveles de hCG se
comunes por las
positivo, los anticuerpos encuentran por debajo
que puede
aparecer un específicos presentes en del nivel de
resultado la membrana reaccionarán sensibilidad del test.
con la mezcla formada y En este caso, se
inválido son: una
recomienda repetir la
forma de aparecerán unas líneas prueba transcurridas
proceder coloreadas. Una línea roja 48 horas y con la
incorrecta o un siempre aparece en la primera orina de la
deterioro de los
zona de la línea de control mañana.
reactivos. Si
ocurriera esto, y sirve como verificación
- Niveles muy bajos de
debe revisarse el de que el volumen de
hCG (menos de
procedimiento y muestra añadido ha sido 50mUI/mL) pueden
repetir la prueba suficiente, el flujo ha sido detectarse en
con un nuevo el adecuado y como muestras de orina y
test. Si
control interno de los suero al poco tiempo
persistiese el de ocurrir la
problema, debe reactivos.
implantación. Sin
contactar con su embargo, debido a que
proveedor y durante el primer
 dejar de utilizar trimestre del
la prueba. embarazo existe un
número significativo
de embarazos que no
progresan por causas
naturales, un
resultado positivo
débil debería
confirmarse usando la
primera orina de la
mañana transcurridas
48 horas.
PCR Suero de la manera usual. No se Adultos y niños: La PCR se detecta en Si sus resultados Ver Sustancias
requieren adictivos. Los sueros 0.068-8.2 mg/l suero por reacción con un muestran un nivel alto interferentes conocidas
marcadamente lipémicos o
mediana 0.58 anticuerpo específico de PCR, eso en muestra. Tiempos
contaminados pueden dar
resultados falsamente positivos. mg/l adsorbido sobre un probablemente de reacción mayores
Estabilidad e instrucciones de Recién nacido y soporte inerte de látex. La significa que tiene de dos minutos pueden
almacenamiento: el suero debe sangre de PCR se une a los alguna clase de producir reacciones
ser preferentemente fresco. En cordón: < ó =0.6 anticuerpos adsorbidos inflamación en el falsamente positivas
caso de no procesarse en el mg/l produciendo la cuerpo. La prueba de por efectos de secado
momento puede conservarse
Infantes de 4 aglutinación de las PCR no explica la de los reactivos.
hasta 24 horas en refrigerador
(2-10o C) y hasta 4 semanas días a 1 mes < ó partículas de látex. causa ni indica el lugar
congelado a -20o C. = 1.6 mg/l de la inflamación. Así
que si sus resultados
no son normales, su
médico o profesional de
la salud podría pedir
más pruebas para
 averiguar por qué tiene
inflamación.
ASO Suero de la manera usual. Los Negativo: Los anticuerpos El anticuerpo Tiempos de reacción
sueros marcadamente lipémicos suspensión antiestreptolisina O se antiestreptolisina O se mayores de 2 minutos
o contaminados pueden dar homogénea. detectan en suero por su encuentra presente en pueden producir
resultados falsamente positivos. Positivo: reacción con la casi todas las personas reacciones falsamente
aglutinación que estreptolisina O adsorbida en títulos bajos, debido positivas por efecto del
Estabilidad e instrucciones de aparece dentro sobre soporte inerte de a que las infecciones secado de los
almacenamiento: la de los 2 minutos. látex. Los anticuerpos estreptocócicas son reactivos.
antiestreptolisina en suero es Se califica de 1 a antiestreptolisina comunes. Sin embargo -Se pueden producir
estable 24 horas refrigerada (2- 4 +. Título: reaccionan con la un título alto o creciente falsos negativos en
10o C) o congelada por períodos inversa de la estreptolisina produciendo de antiestreptolisina O, niños mayores de 6
prolongados. máxima dilución una aglutinación visible indica una infección meses y menores de 6
a la que se macroscópicamente. reciente producida por años o en infección
produce un estreptococo beta reciente.
aglutinación hemolítico de grupo A, - Debe tenerse en
visible como amigdalitis, cuenta que en este tipo
macroscópicam escarlatina, sepsis de infecciones, un
ente. El nivel puerperal, erisipela. resultado aislado sólo
aproximado de constituye un dato
antiestreptolisina auxiliar, por lo que se
O en la muestra, recomienda efectuar
puede ser determinaciones
calculada por la seriadas cada 15 - 20
fórmula días durante 4 ó 6
siguiente: ASO semanas.
(UI/ml) = Título x
 Sensibilidad de - Cualquier alteración
la reacción (200 en la proporción
UI/ml) Ejemplo: Muestra/Reactivo,
la muestra puede conducir a
presenta un resultados erróneos.
título de 1:2. El
nivel de ASO es
de 2 x 200 = 400
UI/ml
V.R
Hasta 200 UI/ml
RPR Suero fresco o plasma. Estable 7 -Agregados En la prueba rápida para La sífilis es una Bilirrubina (20 mg/dL),
días a 2-8ºC ó 3 meses a -20ºC. grandes o reaginas plasmáticas enfermedad venérea hemoglobina (10 g/L) y
Las muestras con restos de medianos (RPR), las "reaginas" causada por el lípidos (10 g/L), no
fibrina deben ser centrifugadas (Reactivo) presentes en el suero de Treponema pallidum, interfieren.
antes de la prueba. No utilizar -Agregados individuos infectados con que invade las Los factores
muestras altamente hemolizadas pequeños Treponema pallidum, se mucosas intactas o la reumatoides (300
o lipémicas. (Reactivo debil). detectan por acción de las piel en áreas de UI/mL), interfieren.
-Ningún mismas con antígeno de abrasiones. El contacto Otras sustancias
agregado o cardiolipina, lecitina y sexual es la forma más pueden interferer.
ligera rugosidad colesterol adsorbido sobre común de transmisión.
(No rectivo) partículas de carbón. La La detección y La mononucleosis
reacción produce una tratamiento de la infecciosa, neumonía
aglutinación visible enfermedad en sus viral, toxoplasmosis,
macroscópicamente, estadios tempranos es embarazo y
favorecida por las fundamental a fin de enfermedades
partículas de carbón. Las evitar complicaciones autoinmunes pueden
reacciones inespecíficas graves como sífilis causar falsos
se evitan con el empleo de cardiovascular, resultados positivos.
antígeno altamente neurosífilis y sífilis
purificado y el agregado de congénita
cloruro de colina, por lo
que no es necesario
inactivar la muestra.
 MARCADORES TUMORALES

Prueba Muestras. Valores Principio del método Utilidad Interferencias

Consideraciones terapéuticos/ Clínica/Interpretación de resultados
especiales valores críticos
MX: Suero Valor terapéutico: La prueba AFP CLIA es un• La elevación de suero de AFP a los • Muestras ictéricas,
0.5–5.5 UI/ml Inmunoensayo sólido de dos valores anormalmente altos se produce hemolizadas o
Las muestras posiciones. Un anticuerpo en varias enfermedades malignas, sobre lipemicas pueden dar
pueden Valor crítico: N/A monoclonal cubre la superficie de todo cáncer testicular no seminomatoso falsos resultados
almacenadas hasta los pocillos y otro anticuerpo y el carcinoma hepatocelular primario.
48 horas de 2 ~ 8℃. monoclonal es etiquetado con Aproximadamente el 70% de pacientes • Pacientes con
AFP Durante más tiempo peroxidasa equina la cual es usada con carcinoma hepatocelular primario carcinoma
de almacenamiento como rastreadora. Las moléculas muestran niveles elevados de AFP. hepatocelular
congelar a -20℃. de AFP presentes en el estándar o• Parámetro complementario de
el suero son emparedadas entre evaluación del riesgo de trisomía 21
Las muestras los dos anticuerpos. Siguiendo la• La elevación de las concentraciones
descongeladas formación del complejo anticuerpo séricas de AFP se ha medido en
deben mezclarse recubierto-antígeno-anticuerpo- pacientes con otras enfermedades no
antes de la prueba enzima Las etiquetas des cancerosas, como la ataxia
adheridas anticuerpo- enzima son telangiectasia, tirosinemia hereditaria y,
removidas mediante el lavado. La neonatal hiperbilirrubinemia, hepatitis
peroxidasa equina adherida en los viral aguda, hepatitis crónica activa y
pocillos es analizada por cirrosis.
reacciones quimioluminiscentes.• Durante el embarazo la elevación de la
La Unidad de Luz Relacionada AFP puede indicar:
(RLU) es proporcional a la • Alteraciones fetales
concentración de AFP presente en • Anencefalia
la muestra. • Espina bífida
• Embarazo múltiple
• Falta de formación del duodeno
(atresia duodenal)
 • Onfalocele
• Tetralogía de Fallot (defecto congénito
del corazón)
• Síndrome de Turner

Mx: Suero Valor terapéutico: Es un ensayo secuencial • Aumentado: neoplasias malignas • Evite muestras
Las muestras 0–33 U/ml inmunometrico con dos sitios de (estómago, hígado, colon y recto) y excesivamente
pueden unión quimioluminiscente en fase patologías benignas bilio-pancreáticas, hemolíticas,
almacenadas hasta Valor crítico: N/A sólida. como pancreatitis, colangitis y lipémicas o
48 horas de 2 ~ 8℃. coledocolitiasis turbias.
CA 19 9 Durante más tiempo muestra con un anticuerpo
de almacenamiento monoclonal biotinilado anti-CA 19- • Muestras con
congelar a -20℃. 9 y un anticuerpo monoclonal anti- bilirrubina >200
Las muestras CA 19-9 marcado con un quelato mg/L
descongeladas de rutenio, reaccionan para formar
deben mezclarse un complejo sándwich
antes de la prueba Después de incorporar las
microparticulas recubiertas de
No emplear plasma estreptavidina, el complejo
con citrato de sodio formado se fija a la fase solida. La
mezcla de reacción es trasladada a
la célula de lectura

Mx: Suero Valor terapéutico: Es un ensayo secuencial • Pueden existir aumentos en las • Las muestras de
Se recomienda el <21 U/ml inmunometrico con dos sitios de concentraciones de CA 125 en plasma con EDTA,
uso de una unión quimioluminiscente en fase aproximadamente el 1% y el 2% de heparina u oxalato
ultracentrífuga para Valor crítico: N/A sólida. individuos sanos, y en individuos con pueden interferir con
 aclarar muestras patologías no malignas, tales como los procedimientos
lipèmicas. cirrosis, hepatitis, endometriosis, de prueba y debe ser
Las muestras primer trimestre de embarazo, quistes evitado.
pueden ováricos y enfermedad pélvica • Evite muestras
almacenadas hasta inflamatoria. También se han excesivamente
CA 125 48 horas de 2 ~ 8℃. publicado aumentos en la hemolíticas,
Durante más tiempo concentración de CA 125 durante el lipémicas o turbias
de almacenamiento ciclo menstrual. Entre los tumores no
congelar a -20℃. ováricos en los que se han observado
aumentos en las concentraciones de
El paciente requiere CA 125 se incluyen carcinomas
estar en ayunas de endocervicales, hepáticos,
12 horas. pancreáticos, pulmonares, de colon,
estomacales, del tracto biliar, uterinos,
de las trompas de Falopio, de mama y
carcinomas endometriales.

Mx: Suero Valor terapéutico: Es un ensayo inmunometrico • Esútil principalmente en la detección • Bilirrubina > a 200
La muestra puede 6.4-58 U/ml secuencial de dos pasos precoz de recidivas de cáncer de mg/dl
ser conservada: 5 quimioluminiscentes. mama previamente tratado que se
 días a 2-8 ºC y dos Valor crítico: N/A encuentra en estadios II y III, así como • Hemolisis > 381
meses a -20 ºC para controlar la respuesta al mg/dl
Volumen de la tratamiento de pacientes con cáncer
muestra: 5µ de de mama metastático. Cuando se • Lipemia > 3000 mg/dl
suero. valoran una concentración de CA15.3
discretamente elevada este
incremento puede estar asociado a • Pacientes con
diferentes patologías benignas tratamiento de altas
CA 153 (hepatopatía, insuficiencia renal, dosis de biotina no
enfermedad ginecológica, mamaria recoger muestras
benigna y uropatías). antes transcurridas
como mínimo 8
horas.

Suero Valor terapéutico:

Es un ensayo secuencial • Niveles elevados de CEA son • Evite muestras
inmunometrico con dos sitios de observados en más del 30% de los excesivamente
Centrifugar la Fumadores: hasta unión quimioluminiscente en fase pacientes con cáncer de pulmón, hemolíticas,
CEA muestra una vez 9.8 ng/ml sólida. hígado, p páncreas, mama, cabeza o lipémicas o
que se haya No fumadores: cuello, vejiga, cérvix y próstata. turbias.
formado el coagulo. hasta 4.1 ng/ml Niveles elevados de plasma están
Se puede conservar relacionados con la etapa y la
7 días a 2-8 ºC Valor critico: N/A extensión de la enfermedad, el grado
durante y para de diferenciación del tumor y la
periodos más posición de la metástasis. CEA
prolongados también puede ser encontrado en
congeladas a -20 ºC tejido normal.
 El paciente requiere
estar en ayunas de
12 horas.
Mx: Suero No Hasta 4.0 ng/ml Es un ensayo inmunometrico • Valores elevados, ayudan en la • Muestras con
caliente la muestra. quimioluminiscente en fase sólida. detección del cáncer de próstata hemolisis manifiesta,
Valor crítico: N/A La fase solida está recubierta por cuando se utiliza junto con la hiperlipidemia no
Para una adecuada un anticuerpo policlonal de cabra exploración mediante tacto rectal en deben ser
comparación y frente PSA. La muestra del varones a partir de 50 años de edad, analizadas.
establecer los paciente y el reactivo son este ensayo esta además indicado
valores normales, la incubados junto con la bola como test complementario y de • Partículas
muestra debe recubierta con anticuerpo ayuda en el control de los pacientes suspendidas de
tomarse en la policlonal frente a PSA. El PSA de con cáncer de próstata. fibrina o agregados
mañana y en la muestra del paciente se una a un • También se encuentra elevado en pueden conducir a la
ayunas. anticuerpo monoclonal de ratón hipertrofia benigna de próstata y obtención de falsos
frente a PSA conjugado con enfermedades inflamatorias de resultados.
PSA Las muestras fosfatasa alcalina tejidos genitourinarios adyacentes,
TOTAL pueden ser pero no se detecta en varones sanos,
almacenadas a 2- ni mujeres.
8ºC por no más de
72 horas; pueden
ser congeladas a -
20ºC. Evite los
ciclos repetidos de
congelación/descon
gelación.
 % PSA Mx: Suero Valor terapéutico: El método es un inmunoensayo • La probabilidad de detectar un • Las muestras de
LIBRE 0.1 - 4.0 ng/ml que utiliza dos anticuerpos con una carcinoma de próstata aumenta con el plasma con EDTA,
Las muestras reacción tipo sándwich. La incremento del nivel de PSA. Los heparina u oxalato
pueden Favorable: >12% reacción que se produce es una resultados de PSA total situados en el pueden interferir con
almacenadas hasta reacción de intervalo de 3-20 ng/ml se documentan los procedimientos
48 horas de 2 ~ 8℃. Desfavorable: electroquimioluminiscencia como “dudosos” para el diagnóstico. Y de prueba y debe ser
Durante más tiempo <12% es en este rango de PSA total, donde evitado.
de almacenamiento radica la principal utilidad de aplicar el
congelar a -20℃. Valor critico: N/A cociente entre el PSA libre y el PSA total. • Evite muestras
Las muestras Porque, la probabilidad de encontrar excesivamente
descongeladas cáncer de próstata frente a valores de hemolíticas,
deben mezclarse PSA total dentro del intervalo dudoso (3- lipémicas o turbias
antes de la prueba 20 ng/ml) aumenta con la edad y cuanto
menor sea el cociente PSA libre/PSA
El paciente requiere total.
estar en ayunas de
12 horas
DROGAS TERAPÉUTICAS

Prueba Muestra Valores Principio del método Utilidad Interferencias

/Consideraciones terapéuticos Clínica/Interpretación de
especiales resultados

Mx: suero plasma Valor Es un ensayo enzimático quimio • Es un anticonvulsivo que • Los anticuerpos
heparinizado o con terapéutico: luminiscente competitivo en fase sólida. se emplea principalmente heterofilicos en el suero
EDTA 50-100 ug/ml en el tratamiento de humano pueden
Se recomienda ayuno Valor crítico: convulsiones primarias y reaccionar con las
de 12 horas. > 100 ug/ml secundarias inmunoglobulinas de los
 Ácido Este análisis se basa en la enzima generalizadas, siendo componentes del ensayo
Valproico bacteriana -galactosidasa, que se ha también efectivo para provocando interferencias
Estabilidad: En frasco preparado tratar convulsiones de con los inmunoanálisis in
tapado: 2 días (20- genéticamente dividiéndola en dos ausencia. Actúa con vivo
25°C), 7 días (4-8°C), fragmentos inactivos: un aceptor particular eficacia en los
3 meses a -20°C. enzimático (AE) y un donante mioclonos y constituye el • Bilirrubina> 200 mg/dl
enzimático (DE). Estos fragmentos se fármaco por excelencia en • Hemolisis>512 mg/dl
vuelven a asociar espontáneamente el tratamiento de la • Lipemia >3000 mg/dl
para formar epilepsia fotosensible
una enzima totalmente activa que, en el • Monitorización de la
formato del análisis, descompone un terapia.
sustrato y genera un cambio de color • Evaluar el cumplimiento.
que puede medirse mediante • Evaluar la posible
espectrofotometría. toxicidad.
Carbamazepin Suero o plasma Valor En el análisis, el analito de la muestra • Ayuda al control de la • Hemolisis
a (heparina de sodio o terapéutico: compite con el analito conjugado con un administración terapéutica • Ictericia
litio; ácido edético 4-14 ug/ml fragmento inactivo de -galactosidasa de esta droga. • Lipemia
[EDTA] con sodio). Valor crítico: por los lugares de unión de los • La carbamazepina es un
Sangre con > 14 ug/ml anticuerpos. Si la muestra anticonvulsivo que se
anticoagulante contiene analito, éste se fija al emplea especialmente en
(heparina de Litio). anticuerpo y deja libres los fragmentos el tratamiento de la
Contenedor: Tubo de enzimáticos inactivos, que forman neuralgia trigeminal1 de
tapón verde para enzimas activas. Si la muestra no todo tipo de epilepsias
Bioquímica Urgente. contiene analito, el anticuerpo se fija al parciales, de convulsiones
El momento de la analito conjugado en el fragmento tonicoclónicas
recogida de la inactivo e inhibe la recombinación de los generalizadas y de
muestra dependerá fragmentos de
 de si se desean medir -galactosidasa inactivos, impidiendo la convulsiones parciales
momentos pico o formación de una enzima activa. La simples y complejas.
valle de la droga. cantidad de enzima
activa formada y el cambio de
Mx: suero o plasma Valor absorbencia resultante son • La fenitoína es un fármaco • Las muestras de los
heparinizado terapéutico: directamente proporcionales a la antiepiléptico. El uso de la pacientes que
El paciente no 10-20 ug/ml cantidad de fármaco que contenga la fenitoína frecuentemente están
necesita estar en muestra. (difenilhidantoína) se expuestos a animales o a
ayunas, no son Valor crítico: Es un ensayo enzimático encuentra ampliamente productos séricos animales
Fenitoína necesarios ningún >20 ug/ml quimioluminiscente competitivo en fase difundido en el control de pueden presentar
tipo de preparativos sólida. las convulsiones de interferencia por la
especiales En el análisis, el analito de la muestra pacientes que sufren tanta presencia de anticuerpos
compite con el analito conjugado con un epilepsia con crisis heterofilicos que pueden
fragmento inactivo de -galactosidasa tonicoclónicas reaccionar con las
por los lugares de unión de los generalizadas inmunoglobulinas de los
anticuerpos. (especialmente motoras), componentes del ensayo.
descargas corticales • Bilirrubina> 200 mg/dl
focales y epilepsia del • Hemolisis>512 mg/dl
lóbulo temporal. • Lipemia >3000 mg/dl
• La medición de la
concentración de fenitoína
en el plasma es útil para
optimizar su posología.

Mx: suero o plasma Valor • El fenobarbital es un • Bilirrubina> 200 mg/dl

heparinizado terapéutico: fármaco antiepiléptico. Es • Hemolisis>512 mg/dl
Fenobarbital 15-40 ug/ml uno de los medicamentos • Lipemia >3000 mg/dl
Usar ultracentrífuga más comunes para el
para aclarar muestras tratamiento de las
lipemicas. Valor crítico: convulsiones tónico
Muestra se puede >40 ug/ml clónicas generalizadas, la
conservar 2 días de 2- epilepsia psicomotora y
8 ºC o 1 mes a -20 ºC otras manifestaciones de
la epilepsia focal.
• El seguimiento de las
concentraciones séricas
del medicamento es
fundamental para
conseguir un control
máximo de las crisis
epilépticas, así como para
mantener al mínimo los
niveles sanguíneos del
fármaco y evitar con ello
sus efectos secundarios
negativos.
• La medición de la
concentración de
fenobarbital en el plasma
es útil para optimizar su
posología.
 Mx: suero o plasma Valor • La digoxina se prescribe • Muchos factores
heparinizado terapéutico: con frecuencia en el farmacológicos,
La muestra se puede 0.8-2-4 ug/ml tratamiento de la patológicos y genéticos
conservar de 2-8 ºC Valor crítico: insuficiencia cardíaca pueden afectar la
durante 7 días o hasta >4 ug/ml congestiva y en distintos interpretación de los
dos meses a -20 ºC trastornos del ritmo resultados.
En caso de cardíaco. • Factores inmunorreactivos
sobredosis la muestra • La acción terapéutica de semejantes a digoxina
Digoxina debe obtenerse antes la digoxina radica en endógenos en el suero de
de administrar el tonificar las contracciones pacientes con falla renal y
preparado de antídoto miocárdicas, produciendo hepática pueden dar falsos
con anticuerpos anti- así efectos beneficiosos, resultados.
digoxina. como el aumento del
caudal cardíaco, la
reducción del tamaño del
corazón o la reducción de
la presión venosa y del
volumen sanguíneo.
• La determinación de
digoxina se emplea para
diagnosticar y tratar las
sobredosis del fármaco,
así como para el
seguimiento
farmacoterapéutico, con
el fin de garantizar un
• tratamiento adecuado.
 Evaluacion de adrenales

Prueba COLECCIÓN DE MX. Valores de Principio del método Utilidad Interferencias

Consideraciones referencia Clínica/Interpretación de
especiales resultados

Muestra: 7-10 am: El método para la determinación
Plasma con EDTA <5-46 pg/mL cuantitativa de la ACTH es un
ensayo inmunológico de tipo
Transportada en Hielo 8 pm: sándwich basado en el principio
hasta 20 pg/mL de la quimioluminiscencia. Un
ACTH es oxidada anticuerpo monoclonal de ratón
fácilmente, se adsorbe específico (dirigido contra el
fuertemente a superficies fragmento N-terminal) recubre
de vidrio y degradada por las partículas magnéticas (fase
proteasas durante sólida) y otro anticuerpo
congelación y monoclonal (dirigido contra el
descongelación. fragmento C-terminal de la
Influenciada por estrés ACTH) está enlazado a un
ACTH derivado del isoluminol
(conjugado anticuerpo-
isoluminol). Durante la
incubación, la ACTH presente
en los calibradores, en las
muestras o en los controles se
une al anticuerpo monoclonal en
fase sólida, y el anticuerpo
conjugado reacciona en seguida
con la ACTH ya unida a la fase
sólida.
Diagnóstico diferencial de Estudios controlados de
los distintos síndromes de factores potencialmente
hipercortisolismo. interferentes han
-Nivel inferior a 30 pg/ml= demostrado que la
Síndrome de Cushing por eficacia del ensayo no
tumor suprarrenal depende de las
concentraciones de:
-Nivel normal o bilirrubina < 0,1 mg/mL,
moderadamente elevado (20- de hemoglobina < 500
200 pg/ml)= Enfermedad de mg/dL o de triglicéridos <
Cushing (Cushing hipofisario) 30 mg/mL.
-Nivel superior a 200 pg/ml Evitar stress por la
Neoplasia productora de venopunción
ACTH=(Cáncer de pulmón, Evitar administración de
síndrome carcinoide, etc) esteroides antes de la
mx
Diagnóstico etiológico en
hipocortisolismo.
-Nivel superior a 100 pg/ml
(Aún con cortisol normal)=
Insuficiencia adrenal primaria
-Niveles menores a 50 pg/m=
Insuficiencia suprarrenal
secundaria.
Cortisol Suero Cortisol AM El inmunoensayo enzimático Las condiciones patológicas Los niveles de cortisol
Plasma 5-25 Ug/dl sobre fase sólida (ELISA) está que producen pueden verse
(Heparina) basado en el principio de la hipercortisolismo o síndrome aumentados en ciertas
Orina 24 horas Cortisol PM competencia. Una de Cushing, condiciones como el
Saliva ½ del valor AM cantidad desconocida de pueden originarse a nivel estrés, enfermedades
antígeno presente en la muestra hipofisario (hiperproducción) agudas, cirugía mayor,
Las muestras en suero y y una cantidad fija de antígeno de ACTH, hipoglicemia, síndrome
plasma pueden marcado también llamado enfermedad febril entre otros
almacenarse durante enzimáticamente compiten por de Cushing), a nivel
1 día a una temperatura los sitios de unión de los suprarrenal
entre 2 y 8 oC, siendo anticuerpos que recubren los (producción autónoma de
necesaria su pozos. Tras la cortisol) o por tejidos que
congelación para reacción del sustrato los pozos producen
periodos superiores se lavan para detener la ACTH o sustancias ACTH-
reacción de competencia. símiles (secreción ectópica de
Las muestras de orina de Después de la reacción ACTH).
24 horas deben del sustrato la intensidad del En todas ellas existe una falla
permanecer color desarrollado es en la regulación normal del
refrigeradas durante la inversamente proporcional a la eje.
recogida cantidad de antígeno de Frente a la sospecha clínica de
la muestra. Los resultados de las hipercortisolismo, los objetivos
Las muestras en saliva muestras se pueden determinar del estudio son confirmar la
son estables durante 1 directamente usando la curva hiperproducción de cortisol e
semana a 4 estándar Intentar establecer la causa u
origen de éste.
 oC, y hasta 4 meses en
condiciones de
congelación a -20 oC.
Aldosterona Suero Valor de El principio de la siguiente La medición de los niveles de Los cambios posturales,
Plasma referencia: prueba de inmunoensayo de aldosterona en el suero el estrés y el ejercicio
(EDTA o De pie: 55-310 enzimas sigue el típico conjuntamente con los afectan su
Heparina) pg/ml escenario de unión competitiva. niveles de renina en el plasma Valoración.
Orina Acostado: 12-160 La competencia ocurre entre un pueden ser usados para la Se requiere un periodo
pg/ml antígeno sin diferenciación entre de reposo de 30 minutos
Se recomienda mantener Aldosterona marcar (presente en muestras aldosteronismo primario y previos a la extracción
el suero o plasma a una urinaria (dieta de calibradores, de control y de secundario.
temperatura normosódica): 6- pacientes) y el Los fármacos
de 4 oC hasta su 25 µg/24 horas antígeno (conjugado) de una hipotensores, tales como
almacenamiento, que se (dieta enzima marcada para un diuréticos,
realizará a -20 oC. hiposódica): 17- número limitado de sitios inhibidores del enzima
La estabilidad de las 44 µg/24 horas de unión de anticuerpos en la convertidor de la
muestras congeladas es microplaca. Los procesos de angiotensina y
de 2 años. lavado y decantación antagonistas de la
remueven material suelto. Luego aldosterona modifican la
La orina de 24 horas debe del lavado, el sustrato de la concentración de
ser mantenida en frio, enzima es aldosterona y renina, por
utilizándose adicionado. La reacción lo que deben ser
el ácido bórico como enzimática termina con la suprimidos entre
conservante. adición de la solución stop. La 2 y 6 semanas previas a
El almacenaje de la absorbancia es medida con un la extracción.
lector de microplacas. La El tratamiento con
intensidad del color
muestra se realiza a - 20 formado es inversamente esteroides y
oC, acidificando el pH proporcional a la concentración antiinflamatorios debe
entre 2 y 4 de Aldosterona en la ser suprimido durante las
Con ácido acético. muestra. Un conjunto de 4 semanas previas a la
calibradores es usado para extracción.
trazar una curva de
calibración en la cual la cantidad
de Aldosterona en las muestras
de los pacientes y
de control pueden ser
directamente leídas
 Evaluación Gasometría

Analíto Método (s) Interferencias (indicar si Valor de Desempeño Utilidad clínica Pruebas adicionales y / o
es pre, post o analítica) referencia y analítico complementarias
unidades (Sens. Espec. (explicar)
Linealidad,Etc.)

pH -Métodos Pre-analítica: Coeficiente de -Evalúa estado de -pCO2

potenciómetricos -Muestras coaguladas 7.35- 7.45 Variación acidemia y alcalemia -pO2
-hemolisis Analítico: -HCO3
-Gasometría -burbujas de aire en la 0,06% -Diagnosticar el trastorno - %SO2
jeringa acido-base primario
-Ecuación de - almacenamiento Sensibilidad 92% como acidosis o alcalosis Junto con niveles
Henderson incorrecto Especificidad 90% aumentados o
Hasselbalch -homogenización disminuidos del pH
inadecuada ayudan a diferenciar la
acidosis y alcalosis de
Analíticas: origen metabólico o
-calibración incorrecta respiratorio
-falla en el control de la
temperatura
-cámara de muestra
sucia y coagulo
-fibrina en la membrana

-Gasometría Pre-analítica: 35-45 mmHg Coeficiente de Útil para evaluar -pH

Variación desordenes respiratorios -PO2
pCO2 -Método indirecto, -Muestras coaguladas Analítico 1,8% por aumento o -HCO3
través de electrodos -hemolisis disminución de bióxido - %SO2
colocados sobre la piel -burbujas de aire en la Sensibilidad 92% de carbono
de los pacientes. jeringa Especificidad 90% Junto con niveles
- almacenamiento - Buen marcador de aumentados o
incorrecto correcta microcirculación disminuidos del pH
-Exposición al aire y por tanto indicador de ayudan a diferenciar la
ambiental buen pronóstico en la acidosis y alcalosis
respiratoria
 Analíticas: evolución del paciente
-calibración incorrecta con shock séptico Si el pH y la PCO2
-falla en el control de la varían en direcciones
temperatura opuestas, el disturbio
-cámara de muestra primario es respiratorio,
sucia y coagulo mientras que, si lo
-fibrina en la membrana hacen en la misma
dirección, el disturbio
primario es metabólico

-Gasometría Pre-analítica: Coeficiente de Se utiliza para evaluar -pCO2

p02 80-105 Variación enfermedades -pH
-Método indirecto, -Muestras coaguladas mmHg Analítico 0,6% respiratorias que afectan -HCO3
través de electrodos -hemolisis los pulmones y ayuda a - %SO2
colocados sobre la piel -burbujas de aire en la Sensibilidad 92% determinar la efectividad
de los pacientes. jeringa Especificidad 90% de la oxigenoterapia. Juntos con estas
- almacenamiento pruebas ayuda a
incorrecto diagnosticar desordenes
-Exposición al aire del equilibrio acido
ambiental básico

Analíticas:
-calibración incorrecta
-falla en el control de la
temperatura
-cámara de muestra
sucia y coagulo
-fibrina en la membrana

Pre analítica: -pH

HCO3 -Gasometría Sensibilidad 92% Útil para evaluar -pCO2
-medicamentos Especificidad 90% desordenes metabólicos -pO2
-El bicarbonato se -Muestras coaguladas 22-26 por aumento o -HCO3
puede calcular a partir -hemolisis mmol/L disminución de HCO3 - %SO2
del pH y la PCO -burbujas de aire en la
mediante la ecuación jeringa En la investigación de Junto con niveles
de Henderson- - almacenamiento trastornos del equilibrio aumentados o
Hasselbalch incorrecto ácido-base disminuidos del pH
ayudan a diferenciar la
Analíticas acidosis metabólica de
(gasometría) : la alcalosis metabólica
-calibración incorrecta debido a un exceso
-falla en el control de la de ácido o de base
temperatura
-cámara de muestra En conjunto con las
sucia y coagulo concentraciones de
-fibrina en la membrana sodio, potasio, cloruros
ayudan al diagnóstico
de un desequilibrio
electrolítico.

-Mediante cálculo Pre-analíticos: Sensibilidad 90% Provee un estimado de la

-Medición directa
mediante un oxímetro
Saturación de -Métodos indirectos
oxigeno (transcutáneos)
(%SO2)
95-98%
-valores de saturación
de oxígeno abajo del
70%
-pigmentación de la piel
-niveles elevados de
carboxi-
presión parcial de o2 el -PCO2
Especificidad 88% cual esta disminuida en -PO2
la hiperventilación -pH
-Detección precoz de junto con niveles de
hipoxemia en diversas presión parcial de 02
situaciones evalúan estados de
hiperventilación
 hemoglobina, -Monitorizar la ocurrencia
metahemoglobina y de hipoxemia inducida La afinidad de la Hb por
bilirrubina por el ejercicio el O2 depende de la
temperatura, del pH y la
Analítica: concentración de PCO2

-movimiento del sensor

-sensor no compatible
con el aparato
-falta de calibración

.
Prueba COLECCIÓN DE Valores de Principio del método Utilidad Interferencias
MX. referencia Clínica/Interpretación de
Consideraciones resultados
especiales
Suero o Plasma Hombres Inmunoensayo de • Evaluación del eje • Muestras de plasma
Presenta ritmo 1 – 8 UI/L electroquimioluminiscencia hipotálamo-hipofiso-gonada recogidas en tubos que
circadiano. Mujeres Mediante la Técnica sándwich contienen EDTA, heparina u
Fase Folicular con una duración total de 18 • Diagnóstico de falla ovárica oxalato pueden interferir
Es estable durante 8 3 – 20 UI/L minutos prematura (FOP) con los procedimientos.
días a temperatura Fase Ovulatoria
FSH ambiente. 9 – 26 UI/L • En el hombre la FSH induce • No utilice muestras
Fase Lútea el desarrollo de hemolizadas, ictéricas o
En mujeres de edad 1 – 12 UI/L espermatogonios. lipémicas.
reproductiva se
indica en ciertos
días del ciclo
menstrual.
Suero Diferentes Técnica ELISA es un método en • Evaluación del eje • Interferencias por sueros
Presenta ritmo valores de fase sólida sándwich directo. hipotálamo-hipofiso- hemolizados, lipémicos e
circadiano referencia en Principio: Las muestras diluidas gonadal. La determinación ictéricos.
No requiere ayuno, función de la con el conjugado anti-LH-HRP se de los niveles séricos de LH
tener en cuenta la edad y el sexo añaden a los pocillos recubiertos y FSH proporciona un índice • El uso de anticonceptivos
fecha de la última Hombres con anticuerpo monoclonal de LH importante de la función orales.
LH menstruación y si 2 -12 UI/L subunidad beta. LH en el suero hipotálamo-hipofisaria y
está usando Mujeres del paciente se une al anticuerpo permite diferenciar entre los • Transcurrido a menos 8
anticonceptivos Fase Folicular monoclonal anti-LH, un segundo síndromes de disfunción horas para la toma de
2 -15 UI/L anticuerpo también y anti-LH se gonadal primarios y muestra en pacientes con
Fase Ovulatoria une a la LH. secundarios. tratamiento de biotina.
22 – 105 UI/L • Diagnóstico de ovulación.
Fase Lútea Un pico de LH en la mitad
0.6 – 19 UI/L del ciclo indica que la
Mujeres ovulación ocurrirá
Postmenopausia en 24 horas.
 16 – 64 UI/L Diagnóstico
• de
hipogonadismo
hipergonadotrófico (LH y
FSH aumentados) o
hipogonadismo
hipogonadotrófico (LH y
FSH disminuidos).
• Evaluación de pacientes
con poliquistosis ovárica
(SOP). Una relación de
LH/FSH >2 puede ser
indicativo de SOP
Suero o plasma Hombres Al incubar la muestra con un • Evaluación de la función • Haber transcurrido al menos
EDTA o Heparina <20 pg/ml anticuerpo biotinilado anti- gonadal en la mujer. 8 horas para la toma de
Mujeres estradiol se forma un muestra en pacientes con
Almacenado a 2- Fase Folicular inmunocomplejo cuya cantidad • Evaluación de la función tratamiento de biotina.
Estradiol 8°C por 2 días. Por 20 – 145 pg/ml depende de la concentración de gonadal en el hombre • Aumentado:
períodos mayores a Fase Ovular analito en la muestra. estrógenos. • Ovulación, embarazo.
–20°C 112 – 443 pg/ml Reacción quimioluminiscente • Monitoreo hormonal en Tumores ováricos
Fase Lútea inducción de la ovulación. ,obesidad tumores
20 – 241 pg/ml • Monitoreo de la terapia drenales, alcoholismo
hormonal de reemplazo en • Disminuido:
las mujeres • menopausia, fumar, post-
postmenopaúsicas. parto,
• Evaluación en caso de
sospecha de tumores
 Suero o plasma con Hombres Al incubar la muestra con un• Evaluación de la función• Aumentado: En fase lútea,
EDTA. Estable 7 0.2 – 1.4 ng/ml anticuerpo biotinilado monoclonal ovárica. Confirmar que embarazo, ovulación.
días a 4-8°C, 3 a 6 Mujeres específico anti-progesterona y un ocurrió la ovulación• Disminuido: Ejercicio, Post
meses a –20°C Fase Folicular derivado de la progesterona (progesterona mayor de 5,0 parto. Vegetarianismo.
0-2 – 1.5 ng/ml marcado por los puntos de ng/ml). Heparina
Progesterona Fase Ovulatoria fijación del anticuerpo. • Evaluar la función del cuerpo
0.8 – 3.0 ng/ml Después de incorporar las lúteo y placentaria • Aumentado:
Fase Lútea macropartículas recubiertas de• Diagnóstico de tumores Clomifeno, mifepristona,
1.7 – 27 ng/ml estreptavidina, el complejo productores de progesterona tamoxifeno, pregnanediona
formado se fija a la fase solida por (reacción cruzada)
interacción entre la biotina y la
estreptavidina. • Muestras excesivamente
hemolíticas, lipémicas o
turbias.
• Evitar congelar y descongelar
la muestra.

Suero o Plasma Hombres 20 – 49 Test competitivo que utiliza un• Evaluación de la función• Lipemia, hemolisis
heparinizada años anticuerpo monoclonal de oveja testicular en el hombre y del• Muestras de plasma con
recogidos 2.49 – 8.36 ng/ml de alta afinidad hirsutismo EDTA heparina u oxalato.
Mediante el Mujeres >50 años
procedimientos 0.029 – 0.408 Específicamente dirigido contra Aumentado: Poliquistosis
estándar. ng/ml la testosterona. La testosterona ovárica, tumores ováricos
endógena liberada de la muestra virilizantes, hiperplasia
Testosterona El mejor momento por el 2-bromoestradiol compite adrenal congénita,
para hacerse tomar con el derivado de testosterona precocidad sexual idiopática,
una muestra de añadido marcado con un quelato tumores adrenocorticales,
sangre es entre las de rutenio por los sitios de fijación tumores extra-gonadales
7 a.m. y las 10 a.m. del anticuerpo biotinilado. productores de
A menudo se gonadotrofinas, enfermedad
necesita una trofoblástica en el embarazo,
segunda muestra feminización testicular,
para confirmar un hirsutismo idiopático,
resultado que sea arrenoblastoma, luteoma
más bajo de lo virilizante.
esperado Disminuido: Hipogonadismo
primario y secundario, cirrosis
hepática, síndrome de Down,
uremia, distrofia miotónica,
insuficiencia hepática,
criptorquidia, hipo-
pituitarismo, síndrome de
Klinefelter.
 Prueba Muestras. Valores de Principio del método Utilidad Interferencias
Consideraciones referencia Clínica/Interpretación de resultados
especiales
Suero o Plasma 0-1 año: 1.36- Técnica Sandwich: • Screening de la función tiroidea en la • Muestras
(EDTA, heparina, 8.8 uUi/ml El ensayo utiliza un población general. excesivamente
citrato, oxalato y 2-6 años: 0,85- anticuerpo monoclonal • Screening de hipotiroidismo congénito. hemolíticas,
fluoruro de sodio. 6.5uUi/ml biotinilado anti TSH y un • Diagnóstico de las patologías tiroideas lipémicas o turbias.
7-12 años: anticuerpo monoclonal anti (hipo o hipertiroidismo)
0,28-4.3 TSH marcado con rutenio. • Puede presentarse: • La presencia de auto
Estabilidad: 7 días de uUi/ml El antígeno del paciente se 1. SUBCLINICO: TSH  Y T3/FT4 normal, anticuerpos puede
2-8°C, 1 mes a -20°C. Mayores de 12 une a estos anticuerpos, asintomático formar complejos de
años: 0.27- formando un complejo. Luego 2. CLINICO: TSH  Y T3/FT4 aumentado alto peso molecular
TSH Su secreción es 4.2uUi/ml se incorpora partículas de causantes de valores
pulsátil de entre 6 y 12 estrepatavidina. elevados
horas con picos El complejo se une a la inesperados de TSH
máximos al tiempo de estreptavidina por medio de
iniciarse el sueño y la biotina. • El tratamiento con
mayor amplitud de La mezcla es trasladada a la dopamina y
ciclos durante la célula de lectura glucocorticoides
noche dismiyen la secrecion
de TSH, La
amiodarona induce
descensos de T3 e
incrementos de TSH
Y T4

Suero o Plasma 5.1 – 14.1 Principio de competición: En • Diagnóstico de los desórdenes tiroideos. • oclusión venosa.
(Heparina, EDTA, μg/dl la primera etapa, la muestra y Depresión
citrato de sodio) micro partículas • Es útil para el control de la mayoría de los • Obesidad
paramagnéticas con pacientes con hiper o hipotiroidismo, • Uremia
T 4 TOTAL recubrimiento anti-T4 se suponiendo que no existen anormalidades • Haber transcurrido al
combinan. en las proteínas fijadoras del suero (ej.: el menos 8 horas para
 Estabilidad: 7 días a T4 unido se retira de los sitios aumento de T4 total por aumento de TBG la toma de muestra
2-8°C, 30 días a - de unión en la tiroxina en el embarazo, con T4 libre normal) en pacientes con
20°C. globulina de unión, pre tratamiento de
albúmina y albúmina. T4 • para controlar la terapia supresora de biotina.
presente en la muestra se TSH. •
une a los micros partículas • No aplicarse en
con recubrimiento anti-T4. pacientes bajo
tratamiento con
hipolipemiantes
Suero o Plasma Adultos 0.93 – Por una fase sólida de • Diagnóstico de disfunción tiroidea, sobre • Haber transcurrido al
(EDTA, heparina de 1.7 ng/dl enzima en inmunoensayo todo en los casos de variación en la menos 8 horas para
litio) incluye el anticuerpo concentración de la TBG (por ejemplo la la toma de muestra
1–6 años inmovilizado, enzima- elevación de la TBG durante el embarazo, en pacientes con
0.96-1.77 ng/dl antígeno conjugado y terapia estrogénica o administración de tratamiento de
antígeno nativo. Mezclando anticonceptivos orales). biotina.
6–11 años con el antígeno nativo, una • Diagnóstico del hipotiroidismo central, en
0.97-1.6 ng/dl reacción de la competición el cual la actividad biológica de la TSH • Presencia de
resulta entre el antígeno circulante es reducida pero no autoanticuerpos
nativo y la conjugación del necesariamente su potencia
T 4 LIBRE enzima-antígeno para un inmunológica, por lo cual se pueden
limitado número de insolubles obtener valores normales de TSH con T4 • No aplicarse en
sitios obligatorios libre disminuida. pacientes bajo
La actividad enzimática, • Diagnóstico de hipertiroidismo en tratamiento con
determinada por la reacción pacientes con niveles de TBG bajos hipolipemiantes que
con un sustrato que genera debido a malnutrición, por ejemplo. contienen D-T4
luz, la fracción del anticuerpo-
limite es inversamente
 proporcional a la • Evaluación del estado tiroideo en el
concentración nativa del período que precede a la total respuesta
antígeno libre. pituitaria a las hormonas tiroidea
Suero o Plasma 0.8 – 2.0 ng/ml Al incubar la muestra con un • Evaluación del perfil tiroideo • Haber transcurrido al
(EDTA, heparina, anticuerpo especifico anti-T3 menos 8 horas para
citrato y fluoruro de marcado con un complejo de • La T3 es más útil en el diagnóstico de la toma de muestra
sodio) rutenio, reaccionan con el hipertiroidismo porque se secreta de en pacientes con
ANS (ácido 8-anilino-1- modo preferente al inicio de la tratamiento de
T3 Estabilidad: 7 días a naftalensulfonico) para liberar enfermedad de Graves o bocio tóxico biotina.
2-8°C, 30 días a - la T3 unida a proteínas de la nodular.
20°C. muestra. • Formación de
espuma en
reactivos o
muestras

• Tratamiento con
amiodarona induce
descensos de T3 e
incrementos de
TSH y T4

• hemodialisis
Suero o plasma <115 UI/ml Los anticuerpos contra la • Diagnóstico etiológico de las • Haber transcurrido al
tiroglobulina (Tg) presentes enfermedades tiroideas. (Autoinmunes) menos 8 horas para
en el suero se unen al la toma de muestra
Acs antitiro antígeno adsorbido a la  Ca, adenoma, tiroiditis de Hashimoto y en pacientes con
Globulina superficie de los pocillos de la enfermedad de Graves
 microplaca. A continuación, tratamiento de
se incuba con un anticuerpo Mediciones seriadas son muy utiles para biotina.
anti-IgG humanas conjugado detectar recurrencia de Cancer despues de
con peroxidasa. Finalmente, cirugia • Factor Reumatoide
se añade el sustrato 3,3',5,5'- >300 UI/ml
tetrametilbencidina (TMB) en Se recomienda primero
presencia de H2O2, que al hacer screening de Acs
ser degradada por la anti Tg antes de medir
peroxidasa da lugar a un Tg y asi alertar a clinicos
producto de color azul. La para una adecuada
reacción enzimática se interpretacion del
detiene con una solución de resultado
ácido sulfúrico y la formación
de producto se mide a 450
nm. La concentración de
anticuerpos en la muestra es
proporcional a la absorbancia
del producto de la reacción.
Suero o Plasma. <35 UI/ml Los pocillos de la microplaca • Los anticuerpos contra la Peroxidasa de • Hemolisis
contienen antígeno TPO tiroides humana están presentes en • Lipemia
Las muestras pueden recombinante humano pacientes con enfermedad de
Acs antimicro almacenarse hasta 48 purificado. Se añaden Hashimoto (90-100% de los pacientes), • No deben utilizarse
Somales horas de 2 ~ 8℃. controles y muestras hipotiroidismo primario o mixedema muestras
Tiroideos convenientemente diluidas (80%), enfermedad de Grave (50-80%). contaminadas,
en pocillos separados, tratadas por calor o
uniéndose durante la que contengan
incubación los anticuerpos partículas visibles.

Suero o plasma 3.5-77 ng/ml
(EDTA, heparina de
litio) . anticuerpo biotinilado
anti TPO al antígeno que los
recubre.
El resto de componentes no
unidos se elimina mediante
lavado y se añade conjugado
anti-IgG humana a cada
pocillo.
Un segundo paso de
incubación permite que el
conjugado se una a los
anticuerpos presentes. Tras
un lavado que elimina el
conjugado sobrante, se
añade un sustrato
cromogénico y tras
incubación la actividad
enzimática presente en el
pocillo es proporcional a la
intensidad de color
desarrollado.
Técnica sándwich: • Monitoreo: es útil como marcador tumoral • Pacientes con
La Tg (en la muestra), un en el seguimiento de la tiroidectomía total. tratamiento de altas
• Evaluación del carcinoma papilar y dosis de biotina
Específico y otros folicular de tiroides y de la tiroiditis
anticuerpos monoclonales destructiva • Anticuerpos
marcados con rutenio forman antitiroglobulina
un complejo sándwich.
 Después se agregan • Evaluar casos de tirotoxicosis facticia • anticuerpos
moléculas de estreptavidina. donde se encuentra disminuida y aumenta heterofílicos
El complejo se une a la en hipertitoidismo.
estreptavidina por medio de • Evaluar junto con la centellografía con
la biotina. I131 casos de malignidad recurrente o
La mezcla de reacción es persistente
Tiroglobulina trasladada a la célula de
lectura donde, por
magnetismo, las
microparticulas se fijan a la
superficie del electrodo.
Los elementos no fijados se
eliminan posteriormente con
el reactivo ProCell/ProCell M.
Al aplicar una corriente
eléctrica definida se produce
una reacción
quimioluminiscente cuya
emisión de luz se mide con un
fotomultiplicador
Objetivos

Objetivo General
Adquirir una visión global sobre la técnica de inmunofluorescencia, sus aplicaciones y los
patrones de tinción.

Objetivos Específicos:
- Conocer la metodología del método directo e indirecto.

- Saber interpretar y definir los resultados tras la visualización de los patrones.

Introducción

La inmunofluorescencia es una poderosa técnica de inmunomarcaje que utiliza anticuerpos unidos

covalentemente a moléculas fluorescentes para identificar blancos específicos en muestras
celulares fijadas sobre un soporte sólido.
Esta técnica la observación microscópica con la especificidad inmunológica, haciendo posible la
observación de células vivas o muertas que pueden presentar minúsculas cantidades de
antígenos. Es ampliamente utilizada tanto en el campo de la investigación como en el diagnóstico
clínico de diversas patologías.
Esta técnica, principalmente cualitativa (con algunas variantes cuantitativas), tiene que ver
específicamente con la visualización de una muestra por la señal producto de un fluorocromo, que
es una molécula fluorescente unida a un anticuerpo y que es capaz de excitarse a determinada
longitud de onda.
En el contexto celular resulta de gran utilidad para estudiar la presencia/ausencia y ubicación
subcelular de proteínas. La técnica fue empleada en sus inicios en el ámbito clínico para el
diagnóstico de virus como la influenza y subsecuentemente para el de muchas otras enfermedades
infecciosas.
Es una técnica de gran sensibilidad, y con el equipo adecuado de microscopía, puede tener muy
buena resolución. Requiere, para su observación, del uso de microscopios confocales o de
epifluorescencia.
Inmunofluorescencia
FUNDAMENTO:
La inmunofluorescencia se basa en la explotación del fenómeno biológico de la reacción de
interacción entre un anticuerpo y un antígeno. Tiene que ver concretamente con la visualización o
detección de esta reacción al excitar las moléculas fluorescentes a una longitud de onda
específica.
Un anticuerpo es una proteína inmunoglobulina secretada a partir de células B activas, y que es
generado específicamente contra un antígeno, al cual puede unirse con gran afinidad y
especificidad. La inmunofluorescencia hace uso de las inmunoglobulinas IgG, que se encuentran
de forma soluble en el suero sanguíneo.
Los anticuerpos son moléculas de hasta 950 Kpa compuestas por dos cadenas peptídicas cortas
(ligeras) y dos largas en forma de “Y” (pesadas). Tanto las cadenas ligeras como las pesadas se
dividen en dos dominios: uno variable, capaz de reconocer el antígeno, y otro constante o
conservado, característico de cada especie.
Los antígenos se definen funcionalmente como las moléculas que pueden ser reconocidas por un
anticuerpo y son, en su mayoría, proteínas. Cuando un animal es expuesto a un antígeno, los
linfocitos del sistema inmune se activan, produciendo anticuerpos específicos contra este y que
funcionan como sistema de defensa.
Un antígeno, como una proteína, por ejemplo, puede tener más de un epítope o lugar de
reconocimiento por un anticuerpo, por lo que el suero del animal expuesto a un antígeno puede
tener anticuerpos policlonales contra diferentes regiones de la misma proteína.
La inmunofluorescencia, entonces, explota la capacidad de un animal para producir anticuerpos
policlonales contra un antígeno específico en aras de purificarlo y emplearlo posteriormente para
la detección del mismo antígeno en otros contextos.

TIPOS DE INMUNOFLUORESCENCIA:

1. Inmunofluorescencia Directa o Primaria

Tiene que ver con la detección de antígenos mediante el uso de
anticuerpos fluorescentes. La ventaja principal del empleo de esta técnica
es su rapidez, sin embargo, muchos casos de unión inespecífica pueden
darse en el proceso, particularmente al estudiar sueros humanos, pues
son ricos en anticuerpos muy heterogéneos.

2. Inmunofluorescencia Indirecta o Secundaria

La inmunofluorescencia indirecta (IFI) es una de las técnicas más utilizadas en los estudios de
autoinmunidad debido a su fácil manejo y estandarización. Sin embargo, la lectura e interpretación
requieren de amplia experiencia. La técnica se basa en el reconocimiento de los anticuerpos que
reconocen estructuras antigénicas celulares nativas. La interacción se evidencia por medio de un
anticuerpo anti inmunoglobulina humana, producido en conejo, cabra o cobayo, dirigido contra las
fracciones constantes (Fc) de las inmunoglobulinas IgG, IgA y/o IgM. Este anticuerpo anti
inmunoglobulina humano está conjugado o acoplado a un fluorocromo (generalmente isotiocianato
de fluoresceína [FITC]). Los resultados del reconocimiento de los antígenos por los
autoanticuerpos presentes en el suero, plasma o cualquier otro líquido, se evalúan en un
microscopio de epifluorescencia. Actualmente, la IFI se utiliza en los estudios de autoinmunidad
para la detección de anticuerpos anti-DNA de doble cadena (DNAcd) o DNA nativo (DNAn)
utilizando como sustrato Crithidia luciliae. Para la detección de anticuerpos que reconocen
antígenos nucleares se utilizan como sustratos líneas celulares epiteliales humanas como las
células HEp-2 o las células HeLa. En el caso de los anticuerpos contra componentes de los
gránulos primarios y específicos de los polimorfonucleares o anticuerpos anti citoplasma de
neutrófilos (ANCA), se utilizan neutrófilos fijados con etanol y formalina; y para los anticuerpos que
reconocen antígenos órgano-específicos, se utilizan como sustratos cortes de tejidos específicos
(v. g. tiroides, esófago, estómago, glándulas suprarrenales, glándulas salivales, etc.).

3. Detección de Anticuerpos Anti-Dnan Con Crithidia Luciliae como Sustrato

El ensayo se fundamenta en el reconocimiento de los anticuerpos que reaccionan contra el DNAn
de la mitocondria gigante (cinetoplasto) del parásito Crithidia luciliae1. La prueba solo se considera
positiva cuando se tiñe el cinetoplasto independientemente de la tinción en el núcleo, debido a que
en el núcleo puede existir reactividad contra otros componentes, lo que da resultados falsos
positivos. La técnica es altamente específica, pero poco sensible, por lo que es conveniente en
ciertos casos confirmar los resultados con otras pruebas más sensibles como el ELISA.

4. Anticuerpos Antinucleares
La identificación y cuantificación de los anticuerpos antinucleares (ANA) no solo incluye antígenos
que se localizan en el núcleo de células HEp-2, sino también antígenos del citoplasma. La
importancia de usar células HEp-2 como sustrato se fundamenta principalmente en que tienen un
núcleo más grande de lo normal debido a su gran cantidad de antígenos nucleares (v. g. más de
46 cromosomas, más de 3 nucleolos, abundantes ribonucleoproteínas, etc.) y citoplásmicos (v. g.
mitocondrias, lisosomas, ribosomas, etc.) lo que permite hacer una fácil detección e identificación
de los antígenos reconocidos por los autoanticuerpos presentes en los sueros de los pacientes
con enfermedades autoinmunes. Además, por ser una línea celular muy activa, se pueden
observar todas las fases del ciclo celular en los cultivos, con lo que se facilita la identificación de
antígenos presentes solo en las fases de división, como los centrómeros o aquellos conocidos
como proliferating cell nuclear antigens (PCNA) La detección de ANA mediante IFI utilizando como
sustrato células HEp-2 es útil como prueba de tamizado inicial, debido a que los patrones de tinción
más comunes se relacionan con una gran variedad de antígenos sin embargo, resulta necesario
realizar pruebas más sensibles y específicas como el ELISA para identificar el antígeno o
antígenos reconocidos por los autoanticuerpos. También se pueden observar patrones de tinción
específicos para antígenos, como: proteínas de la lámina nuclear, centríolos, Jo-1 y Scl-70, en
cuyos casos el patrón observado es de gran utilidad para identificar específicamente al antígeno
reconocido, el cual puede ser confirmado mediante ELISA o EIT.
Antígenos reconocidos por los autoanticuerpos que dan los patrones de tinción de los ANA

Patrón Antígeno
Nuclear Homogéneo DNAcd, histonas, Ku
Moteado grueso RNP, Sm, Scl-70, SSB, RNA
Perinuclear DNAcd, DNAcs
Ciclo celular Nucleolar RNA, RNP
Citoplásmico Citoplásmico SSA, Clatrina
Mitocondrial Mitocondriales, fosfolípidos de la mitocondria
Filamentos intermedios Vimentina, actina, desmina, etc.
DNAcd: DNA de cadena doble; DNAcs: DNA de cadena sencilla; RNP: ribonucleoproteínas.

5. Anticuerpos Anti Citoplasma Del Neutrófilo

Para la detección de los ANCA, la IFI se utiliza también como prueba de tamizado inicial, debido
a que en ella se observan los 3 patrones de tinción que se relacionan con manifestaciones clínicas
de autoinmunidad. Los patrones son: el citoplásmico o cANCA, el perinuclear o pANCA y el atípico
o xANCA. El patrón cANCA se caracteriza por presentar
una tinción citoplásmica en neutrófilos fijados con etanol
o acetona. Los anticuerpos que dan el patrón cANCA
reconocen proteínas débilmente catiónicas o neutras
como la proteinasa-3 (PR-3) y la proteína catiónica de
57kDa (CAP-57), las cuales se liberan de los gránulos
específicos por el tratamiento de las células con alcohol
o acetona y se distribuyen de manera homogénea en el
citoplasma de los neutrófilos.

Patrón cANCA. Los anticuerpos que reconocen las proteínas débilmente catiónicas proteinasa-3
(PR-3) y proteína catiónica de 57kDa (CAP-57) dan el patrón citoplásmico en neutrófilos fijados
con alcohol o acetona.
El patrón pANCA se observa en neutrófilos fijados con etanol o acetona y es perinuclear
homogéneo. El patrón está dado por los anticuerpos que reconocen proteínas fuertemente
catiónicas como: mieloperoxidasa (MPO), elastasa y azurocidina, las cuales cuando son liberadas
de los gránulos primarios y específicos del neutrófilo se reorganizan en la periferia del núcleo, el
cual tiene carga negativa por el DNA (fig. 2A). El patrón pANCA se debe confirmar en neutrófilos
fijados con formalina. La formalina es un solvente orgánico que reduce el efecto de atracción de
las proteínas catiónicas (MPO, elastasa y azurocidina) hacia el DNA, con lo que quedan
distribuidas en el citoplasma. Los anticuerpos que las reconocen dan un patrón citoplásmico en la
IFI.
Patrón pANCA. A) Los anticuerpos que reconocen las proteínas fuertemente catiónicas
mieloperoxidasa (MPO) elastasa y azuricidina dan el patrón periférico del núcleo en neutrófilos
fijados con alcohol o acetona. B) Estos mismos anticuerpos cuando se prueban en neutrófilos
fijados con formalina dan un patrón citoplásmico.
El patrón xANCA o atípico es el resultado del reconocimiento de las proteínas: catepsina G,
lisozima y lactoferrina. Dichas proteínas se liberan de los gránulos específicos de los neutrófilos y
se redistribuyen en la periferia del núcleo cuando son tratados con etanol, acetona o formalina. Es
importante enfatizar que el efecto de reacomodo
perinuclear de las proteínas mencionadas no se ve
modificado en los neutrófilos fijados con formalina (fig. 3).
Por ser un patrón perinuclear se puede confundir con el
patrón pANCA, por lo que es importante estudiar las
muestras de los pacientes que presentan dicho patrón en
neutrófilos fijados con alcohol o acetona y en neutrófilos
fijados con formalina.

Patrón xANCA o atípico. Los anticuerpos que reconocen las proteínas catepsina G, lisozima y
lactoferrina dan el patrón xANCA o atípico en neutrófilos fijados con alcohol, acetona o formalina.

6. Anticuerpos Órgano Específico

Mediante IFI se identifica la reactividad de los autoanticuerpos presentes en las muestras de
pacientes con enfermedades autoinmunes, los cuales reconocen antígenos específicos de
determinados órganos. Para caracterizar el o los antígenos específicos reconocidos por los
anticuerpos, es necesario utilizar ELISA que contienen los antígenos específicos. Para la detección
de anticuerpos órgano específico, se emplean laminillas que contienen cortes de tejidos de
órganos, en su mayoría de primates. Entre estos cortes se cuentan: glándulas adrenales, músculo
cardiaco, esófago (para identificar anticuerpos antiendomisio), riñón (para identificar anticuerpos
antimembrana basal glomerular) y páncreas (para identificar anticuerpos anticélulas de los islotes
pancreáticos).
Patrones convencionales de ANA y su relación con autoanticuerpos según el primer
consenso internacional de nomenclatura estandarizada
Patrón
Nuclear
Homogéneo (AC-1)
Moteado (AC-2, 4, 5)
Moteado denso fino (AC-2)
Moteado fino (AC-4)
Moteado grueso (AC-5)
Puntos nucleares discretos
Centromérico (AC-3)
Múltiples puntos nucleares
(AC-6)
Pocos puntos nucleares
(AC-7)
Nucleolar (AC-8, 9, 10)
Homogéneo (AC-8)
Grumoso (AC-9)
Punteado (AC-10)
Membrana nuclear (AC-11, 12)
Membrana lisa nuclear (AC-
11)
Membrana punteada nuclear
(AC-12)
Pleomórficos (AC-13, 14)
PCNA-like (AC-13)
CENP-F-like (AC-14)
Citoplasmáticos
Fibrilar (AC-15, 16, 17)
Actina/lineal (AC-15)
Filamentoso/microtúbulos
(AC-16)
Antígeno específico
relacionado
ADN de doble cadena,
cromatina, histonas,
nucleosomas
DFS-70, LEDGF
SS-A/Ro, SS-B/La, ARN
polimerasa II y III, Ku, Ki, Mi-2,
topo 1(Scl-70)
hnRNP, U1RNP, Sm, ARN
polimerasa III
Anticentrómero CENP-A
y CENP-B
Sp100, proteína de leucemia
promielocítica
p80 coilina, SMN
PM/Scl-75, PM/Scl-100, Th, To,
nucleolina, U3-
snoRNP/fibrilarina
U3-snoRNP/fibrilarina
ARN polimerasa I
Lámina A, B, C nuclear o
proteínas asociadas a láminas
Proteínas asociadas al poro
nuclear
PCNA
CENP-F
Actina, miosina no relacionada
con el músculo
Vimentina, citoqueratina
Enfermedad o condición
clínica relacionada
LES, lupus inducido por
medicamentos, artritis idiopática
juvenil
Prevalente en individuos sanos
LES, SS, SSc, miopatías
inflamatorias, EMTC
LES, EMTC, SSc
Esclerosis cutánea limitada, CBP
CBP, enfermedades autoinmunes
sistémicas, polimiositis,
dermatomiositis
LES, SSc, polimiositis, SS,
individuos asintomáticos
SSc, polimiositis con
sobreposición de SSc
SSc
SS, SSc
LES, SS, artritis seronegativa
CBP
LES
Cáncer
EMTC, hepatitis crónica activa,
cirrosis hepática, miastenia gravis,
enfermedad de Crohn, CBP,
hemodiálisis
Condiciones inflamatorias o
infección, hemodiálisis,
hepatopatía alcohólica, psoriasis,
controles sanos
 Segmentario (AC-17)
Moteado (AC-18, 19, 20)
Puntos discretos (AC-18)
Moteado denso fino (AC-19)
Moteado fino (AC-20)
Reticular/AMA (AC-21)
Polar/Golgi-like (AC-22)
Barras y anillos (AC-23)
Alfa-actina, vinculina,
tropomiosina
GW182, Su/Ago2, Ge-1
PL-7, PL-12, proteína p
ribosomal
Jo-1/histidil-ARNt sintetasa
PDC-E2/M2, BCOADC-E2,
OGDC-E2, E3BP/proteína X
Giantin/macrogolgin, golgin-
95/GM130, golgin-160, golgin-
97, golgin-245
IMPDH2
Miastenia gravis, enfermedad de
Crohn, colitis ulcerativa
CBP, enfermedades autoinmunes
del SNC
Síndrome antisintetasa,
polimiositis, dermatomiositis, LES,
lupus neuropsiquiátrico
Síndrome antisintetasa,
polimiositis, dermatomiositis,
esclerosis cutánea limitada
CBP, SSc
SS, LES, AR, EMTC, ataxia
cerebelar idiopática, infecciones
virales
Hepatitis C posterapia con
IFN/rivabirina, LES, tiroiditis de
Hashimoto

Mitóticos
Centrosoma (AC-24) Pericentrina, nineina, Cep250, SSc, fenómeno de Raynaud,
Cep110, enolasa infecciones (virales y
micoplasma)
Fibras del huso (AC-25) HsEg5 SS, LES
NuMA-like (AC-26) Centrofilina SS, LES, otros
Puente intracelular (AC-27) Aurora cinasa B, CENP-E, SSc, fenómeno de Raynaud,
MSA-2, KIF-14, MKLP-1 malignidad
Capa del cromosoma Histona modificada H3, MCA-1 Lupus discoide, leucemia
mitótico (AC-28) linfocítica crónica, SS, polimialgia
AR: artritis reumatoide; CBP: cirrosis biliar primaria; EMTC: enfermedad mixta del tejido conectivo;
IFN: interferón; LES: lupus eritematoso sistémico; SNC: sistema nervioso central; SS: síndrome
de Sjögren; SSc: esclerosis sistémica.

7. Inmunofluorescencia Indirecta Amplificada Por Complemento

Se usa para detectar Ac fijadores del complemento. En el segundo paso, después de añadir el Ac,
se añade complemento fresco, que se fija alrededor de donde se han fijado los Ac. Debido a los
pasos de amplificación de la vía clásica del complemento, una molécula de Ac puede fijar muchas
moléculas de C3b al Ag, que se revelan con Ac anti C3b fluoresceinado. Es una técnica mucho
más sensible.
En los tres casos, los IC formados se ponen de manifiesto por observación del porta en un
microscopio provisto de luz ultravioleta (los Ac se ven con fluorescencia verde). El patrón de
fluorescencia es característico de cada Ag.
 Protocolo
El protocolo de inmunofluorescencia varía en dependencia de muchos factores, sin embargo y en
líneas generales, engloba una secuencia lineal de pasos que consisten en:
➢ Preparación de las láminas y de las células
➢ Fijación de las muestras
➢ Permeabilización
➢ Bloqueo
➢ Inmunotinción o inmunomarcaje
➢ Montaje y observación

a. Preparación
De las muestras
La preparación de las muestras dependerá de su naturaleza y del tipo de experiencia a realizar. A
continuación, se explicará el caso más sencillo, que implica el uso de células en suspensión.
Las células en suspensión, es decir, en un medio de cultivo líquido, deben primero separarse de
este por centrifugación y luego deben ser lavadas con una solución tampón o “buffer” isosmótico,
que preserve su integridad.
Normalmente se emplea un tampón fosfato-salino conocido como PBS, en el que se resuspenden
las células y esta mezcla vuelve a centrifugarse para obtener las células libres del medio de cultivo,
que puede tener sustancias interferentes.
De las láminas
Las láminas empleadas para la observación microscópica, donde posteriormente serán fijadas las
células para los tratamientos correspondientes aguas abajo, también deben ser preparadas
cuidadosamente.
Estas son cubiertas o “sensibilizadas” con una solución de poli-lisina, un polímero sintético que
hará las veces de “pegamento molecular” entre las células y el soporte sólido, gracias a la
interacción electrostática entre las cargas positivas de sus grupos amino y las cargas negativas de
las proteínas que recubren a las células.
b. Fijación de las muestras
Este proceso consiste en inmovilizar las proteínas que se encuentran en el interior celular con la
finalidad de mantener intacta su ubicación espacial. Las moléculas que se emplean deben ser
capaces de atravesar todos los tipos de membranas celulares y de formar entramados con las
proteínas covalentes.
Son muy utilizados el formaldehído y paraformaldehído, el glutaraldehído e incluso el metanol, con
el cual se incuban las muestras celulares por un tiempo determinado para luego lavarlas con una
solución tampón de carácter isosmótico.
Después de la fijación de las células se prosigue a unirlas a las láminas previamente sensibilizadas
con poli-lisina.
c. Permeabilización
Dependiendo del tipo de ensayo que se realice será necesario permeabilizar o no las células en
estudio. Si lo que se busca es conocer la ubicación, presencia o ausencia, de determinada proteína
en la superficie celular, la permeabilización no será necesaria.
En cambio, si se quiere conocer la localización de una proteína en el interior celular, la
permeabilización es indispensable y consistirá en incubar las muestras con Tritón X-100, un
detergente capaz de permeabilizar las membranas celulares.

d. Bloqueo
Un paso fundamental en todas las técnicas inmunológicas es el bloqueo. En esta etapa del
procedimiento, el bloqueo consiste en cubrir, en las láminas sensibilizadas, todos los sitios con
moléculas de poli-lisinas a los que no se adhirieron células. Es decir, previene cualquier unión
inespecífica.
Normalmente para el bloqueo se utilizan soluciones con albúmina de suero bovina (BSA) en
tampón PBS y los mejores resultados se obtienen mientras más largo es el tiempo de incubación
con esta solución. Tras cada paso, incluyendo el del bloqueo, es menester remover mediante
lavados la solución remanente.

e. Inmunotinción o inmunomarcaje
El procedimiento de inmunotinción o inmunomarcaje dependerá principalmente si se trata de una
inmunofluorescencia directa o indirecta (ver más adelante).
Si se trata de una inmunofluorescencia primaria o directa, las muestras se incubarán con los
anticuerpos deseados, que deberán están acoplados a los tintes fluorescentes. El procedimiento
de incubación consiste en hacer una dilución del anticuerpo en una solución que también
contendrá BSA pero en una menor proporción.
Cuando el caso es el de una inmunofluorescencia secundaria o indirecta deben realizarse dos
incubaciones consecutivas. Primero con los anticuerpos deseados y luego con los anticuerpos que
son capaces de detectar las regiones constantes de las inmunoglobulinas primarias. Son estos
anticuerpos secundarios los que están unidos covalentemente a los fluoróforos.
La técnica resulta muy versátil, permitiendo hacer marcajes simultáneos de más de un antígeno
por muestra, siempre y cuando se tengan anticuerpos primarios acoplados a diferentes fluoróforos,
en el caso de la inmunofluorescencia directa.
Para los marcajes simultáneos en la inmunofluorescencia indirecta es necesario asegurarse de
que cada anticuerpo primario sea producido en un animal diferente, así como también de que cada
anticuerpo secundario esté acoplado a un fluoróforo distinto.
Al igual que el bloqueo, la incubación con los anticuerpos da mejores resultados mientras mayor
sea el tiempo de esta. Después de cada paso es necesario lavar el exceso de anticuerpos que no
se unieron a las muestras y en la inmunofluorescencia secundaria es necesario bloquear antes de
añadir el anticuerpo secundario.
Ciertas técnicas emplean otros tintes que no tienen que ver con inmunomarcaje, como por ejemplo
la tinción del ADN nuclear con el fluoróforo DAPI.

f. Montaje y observación
Durante el tiempo de incubación final con los fluoróforos es necesario que las muestras
permanezcan en la oscuridad. Para la observación al microscopio es común emplear algunas
sustancias para la preservación de la fluorescencia de los fluoróforos acoplados a los anticuerpos.
Conclusiones

Los ANA son un grupo de autoanticuerpos que reconocen macromoléculas integradas en la

estructura del núcleo celular y algunos componentes citoplasmáticos.
Para la interpretación correcta de los ANA se debe tener en cuenta el consenso internacional de
nomenclatura estandarizada.
La inmunofluorescencia es una técnica de inmunomarcación que hace uso de anticuerpos unidos
químicamente a una sustancia fluorescente para demostrar la presencia de una determinada
molécula, técnica utilizada de manera diagnostica y confirmando cualquier patrón positivo con una
ELISA
Para detectar la presencia de autoanticuerpos frente antígenos propios del se aplican las técnicas
antes mencionadas de inmunofluorescencia, tras analizar las muestras bajo el microscopio de
fluorescencia, podemos detectar diferentes patrones de marcaje celular dependiendo de los
autoantígenos reconocidos y relacionarlos con algún tipo de enfermedad autoinmune
 Caso Clínico
Pruebas Serológicas
Jane C, una mujer de 38 años de edad, visita su médico por fatiga, fiebre y dolor de articulaciones
(interfalanges, muñeca, y rodillas). Ella también nota sensibilidad al sol y reporta tener un rash
después que se expuso al sol. El médico nota un rash en forma de mariposa en su nariz y mejillas.
Los resultados del laboratorio se describen en las tablas 4-8 a 4-11.

Hemograma (Tabla 4-8)

Valor de
Parámetros Jane C. Parámetros Jane C. Valor de Referencia
Referencia

WBC 4.5 5 x 10 9/L Plaquetas 100,000 150,000-400,000 mm3

RBC 3.5 4-5 x 1012 /L Neutrófilos 85 25-60%

Hb 10.5 12-16 Bandas 0 0-10%
Hct 32 36-46 Linfocitos 13 20-50%
VCM 91.7 80-100 Monocitos 2 2-11%
HCM 30 26-34 Eosinófilos 0 0-8%
CHCM 33 31-37 Basófilos 0 0-2%
Morfología
normal
Rojos

Uroanálisis (Tabla 4-9)

Jane C Valores de Referencia

Macroscópico
Color Amarillo Incoloro a ámbar
Apariencia turbia Transparente
Gravedad especifica 1.022 1.001-1-035
pH 7.0 5-7
Proteína 4+ Neg
Glucosa Neg Neg
Cetonas Neg Neg
Bilirrubina Neg Neg
Sangre 1+ Neg
Urobilinógeno Normal Normal
Nitritos Pos Neg
Esterasa leucocitaria 2+ Neg
Microscópico
Leucocitos 0-3/c 0-5/c
Eritrocitos 7-10 /c 0-2/c
 C Epiteliales Escamosas …raras Pocas a moderadas
Renales…......raras
Cilindros Hialinos…0-3/c
Eritrocitarios…0-1/c
Granulares …0-1/c
Grasos………0-1/c

Perfil bioquímico (Tabla 4-10)

Test Jane C. Valores de Test Jane C. Valores de

Referencia referencia
Sodio 140 136-145 mEq/L AST 26 5-40 UI/L
Potasio 3.6 3.6-5 mEq/L ALT 53 6-37 UI/L
Cloruros 106 101-111 mEq/L Proteínas T 6.8 6-8.4 g/dL
CO2 29 24-34 BUN 50 7-24 mg/dL
Glucosa 116 70-110 Creatinina 2.5 0.5-1.2 mg/dL
Bilirrubina T 0.2 0.2-1-2 mg/dL

Tests Serológicos (Tabla 4-11)

Jane C Valor de referencia

Acs Antinucleares Positivo 1:160 Negativo
Factor reumatoide < 10 <1:80
Proteína C reactiva 3.1 < 1 mg/dL
Prealbúmina 30 10-40 mg/dL
Albúmina 4000 3500-5200 mg/dl
Alfa-1-antitripsina 150 115-200 mg/dL
Haptoglobina 80 40-175 mg/dL
Orosomucoide 101 55-140 mg/dL
Alfa2 macroglobulina 205 130-300 mg/dL
Transferrina 300 215-380 mg/dL
C3 50 83-177 mg/dL
C4 20 29-68 mg/dL
IgG 3020 565-1765 mg/dL
IgA 330 40-350 mg/dl
IgM 420 50-300 mg/dL
Apolipoproteína B 99 63-133 mg/dL
Apolipoproteína A 103 94-175 ug/dL
Hierro 80 65-175 ug/dL
% saturación de transferrina 25 20-50%
 Preguntas

a) Encierre o indique los resultados anormales:

Hemograma
- 100,000 PLT/mm3
- Neutrófilos: 85%
- Linfocitos: 13%
- Hb: 10.5g/dL
- Hct: 32%

Uroanálisis
- Proteína: 4+
- Sangre: 1+
- Nitritos: 1+
- Esterasa Leucocitaria: 2+
- Eritrocitos 7-10/campo

Perfil Bioquímico
- ALT: 53 UI/L
- BUN: 50 mg/dL
- Creatinina: 2.5mg/dL

Serología
- Acs Antinucleares: +1:160
- Proteína C. Reactiva: 3.1 mg/dL
- IgG: 3020 mg/dL
- IgM: 420 mg/dL

b) Dados los síntomas de Jane C, (rash y dolores articulares) enumere al menos cuatro
condiciones que podrían considerarse.
- Exposición a la luz provocando un Rash en la cara en forma de mariposa
- Inflamación que provoca dolores en las articulaciones
- Brote de una enfermedad inflamatoria
- Fiebre y fatiga sin explicaciones.

c) ¿Después de revisar los resultados del laboratorio y los signos clínicos, cual es el
diagnóstico más probable?
Lupus Eritematoso Sistémico, Síndrome de Sjögren, Artritis Reumatoide.

d) Brevemente, describa la fisiopatología de esta enfermedad. ¿Qué está pasando en el

cuerpo de Jane?
El (LES) es una enfermedad inflamatoria de carácter crónico, caracterizada por daño
órgano-específico o sistémico.
 La genética, el ambiente, y las hormonas son factores que desempeñan un papel
importante en la predisposición a esta enfermedad. Se caracteriza por la producción de
anticuerpos producidos por Linfocitos B mediados por secreción de citosinas producidas
por los Linfocitos T. Los principales indicadores de la enfermedad son los anticuerpos,
complejos inmunes, factores de complemento y células autorreactivas

Lo que le pasa al cuerpo de Jane es que el LES produce inflamación e incremento de

apoptosis, se disminuye la eliminación de restos celulares o cuerpos apoptóticos por los
fagocitos, los que son transportados en vesículas para ser liberados, produciéndose así
los autoantígenos modificados (estos son eliminados en una persona sana) que son
expuestos al sistema inmune. Esto llevará a la producción de autoanticuerpos que se unen
a estos antígenos propios formando inmunocomplejos, los cuales son llevados a las
membranas basales activando complemento, lo que provoca la aparición del proceso
inflamatorio y en consecuencia las manifestaciones clínicas.

e) Si el Factor reumatoide estuviese positivo, Ud. cambiaria su respuesta a la pregunta #3?

¿Porque o porque no?
No, pues el factor reumatoideo puede aparecer positivo en enfermedades como Síndrome
de Sjögren, Lupus Eritematoso Sistémico y principalmente Artritis Reumatoide.

f) A. enumere 6 criterios de la American College of Rheumatology para el diagnostic de esta

condicion.
- Rash Malar
- Lupus discoide
- Fotosensibilidad
- Artritis
- Alteración renal
- Alteración Hematológica

a. B. Cuantas son necesarias para el diagnóstico?

b. Al menos 4 o más criterios.

c. 7. Cuántos criterios enumerados en la pregunta anterior se cumplen en Jane?

Rash malar, fotosensibilidad, artritis, alteración renal, alteración hematológica,
alteración de anticuerpos antinucleares.

d. 8. Describa o defina el anticuerpo antinuclear (ANA). Enumere al menos 4 tipos

diferentes de ANAs.
ANA: son inmunoglobulinas que reconocen componentes celulares autólogos
Estos pueden ser: infecciosos, naturales, autoinmunes
- Anti-DNA
- Anti-ENA
 › Anti-Ro
› Anti-La
› Anti-Sm
› Anti-Scl70

e. 9. Cuales dos ANAs son específicos para esta condición?

- Anti-sdDNA
- Anti-Ro/SS-A
- Anti-La/SS-B
- Anti-histonas
- Anti-Sm

f. 10. Cuál es el significado de los resultados anormales del uroanálisis y la

bioquímica.
Al inflamarse las nefronas se le conoce como Glomerulonefritis o nefritis, esto
provoca que los riñones no puedan eliminar correctamente los desechos de la
sangre o controlar la cantidad de líquidos, esto puede tener como consecuencia
sangre en la orina, lo que explica la presencia de eritrocitos en sangre, también
hay excreción de proteínas en orina, lo que explica la presencia de cilindros. Al
no poder filtrar correctamente puede llevar a una hinchazón de las extremidades
como pies, tobillos, piernas, rodillas, etc.

La nefritis puede llevar a cicatrización y daño permanente del riñón por lo que las
pruebas bioquímicas del perfil renal (urea, BUN, creatinina) se verán alteradas
debido a la incapacidad del riñón de filtrar.

En el caso de la transaminasa ALT se encuentra levemente alterada. Si bien el

hígado no es un órgano blanco puede verse ligeramente afectado, aunque estos
no están incluidos dentro de los criterios clasificatorios de LES por lo que no se
toman en cuenta

Es más estas alteraciones pueden deberse al uso de fármacos, infecciones virales

u otras enfermedades autoinmunes

g. 11. Los resultados del complemento son consistentes con su diagnóstico? Si es SI,
porqué
Los niveles bajos de C3 y C4 pueden indicar que el Lupus esté activo, los
resultados de Jane muestran niveles bajos. Existe una nueva combinación de
prueba usando c4d, que ayuda a los médicos a diagnosticar Lupus y descartar
otras enfermedades

La proteína C reactiva es una proteína de fase aguda que se eleva en procesos

inflamatorios agudos, es producida en el hígado, se encuentra elevada en
enfermedades como Lupus
h. 12. Enumere y describa brevemente cuatro factores que pudieran tener un rol en el
Lupus Eritematoso Sistémico (LES).
› Genéticamente y ambientales: un individuo susceptible necesita de múltiples
estímulos ambientales. Los alelos asociados a la enfermedad, están presentes
en personas sanas, pero cuando se encuentran en forma combinada y
expuestos a estímulos estresantes como la radiación ultravioleta, metales
pesados, entre otros.

› Hormonas: Las hormonas juegan un papel importante en LEG, ya que se ha

observado su mayor incidencia en mujeres de edad reproductiva, donde se
observa una agresión mayor durante los ciclos menstruales, en los periodos
postparto y en la gestación. La prolactina y estrógenos son los que juegan un
papel importante asociado a la clínica del LES.

› Infecciosos: la deficiencia de C3 se asocia a infecciones recurrentes y este es

otro factor de riesgo para el LES (deficiencia de complementos).
 Grupo C
Resumen de la Pasantía
Laboratorio CIDE S. de R L.

I. Introducción
Las Pruebas Especiales en Bioquímica es una rama de las ciencias de la salud integra las bases
fundamentales de la química, bioquímica relacionada con los mecanismos de patología y fisiología,
permitiéndonos comprender y aplicar conceptos a los mecanismos celulares y moleculares
(órganos y sistemas), para evaluar los cambios normales y patológicos que ocurren en el
organismo. El propósito de la pasantía es de introducir al estudiante al trabajo diario en un
laboratorio especializado en estas pruebas. Durante nuestra estancia nos centramos en Los ANA’s
que son inmunoglobulinas que reaccionan contra diferentes componentes autólogos nucleares, es
decir, atacan antígenos propios. Estos a su vez son detectados por varias técnicas como ser
ELISA, Western Blot e Inmunofluorescencia. Esta última técnica se basa en el inmunomarcaje que
usa anticuerpos unidos covalentemente a moléculas fluorescentes para identificar blancos
específicos en muestras celulares como Hep-2 y HeLa fijadas en un soporte sólido. La detección
específica de diversos autoanticuerpos (anti-ENA, ADNcd, etc.) resulta útil en el diagnóstico y
seguimiento de pacientes con enfermedades autoinmune.

II. Pruebas serológicas

Las Pruebas serológicas son Técnicas de diagnóstico de laboratorio con fundamento inmunológico
basadas en la detección de una reacción Antígeno-Anticuerpo. Son muy útiles porque nos
permiten identificar Antígenos en una muestra disponiendo de Anticuerpos conocidos y viceversa.
Las pruebas de determinación de Anticuerpos permiten el diagnóstico microbiológico indirecto, se
refiere a que el diagnóstico no se hace por aislamiento e identificación del microorganismo
causante de la infección, sino a través de la respuesta inmune del huésped. Las pruebas
serológicas también permiten diagnóstico directo si lo que se determina es Antígeno del
microorganismo, ejemplo: el Ag p24 de VIH ó el HBs Ag que es el Ag de superficie del VHB.
Permiten determinar Patrones de infección como el Patrón de infección aguda ya que como norma
general se considera que hay infección aguda con:

• La demostración de Ac de clase IgM específica para el microorganismo.

• La observación de un incremento en la concentración de IgG específica en dos muestras
separadas en el tiempo, habitualmente dos semanas que nos indica la presencia de un
 estímulo antigénico en ese momento, o lo que es lo mismo la existencia de una infección
aguda.
Propiedades de la Prueba Serológica

• Especificidad: Capacidad que presenta un antisuero para reaccionar con un antígeno

específico que es el que se quiere determinar, discriminando entre de estructura similar.
Los errores: Falsos positivos: por detectar antígenos/ac que no son los específicos que se
quieren determinar. Se puede definir como el porcentaje de verdaderos negativos que
serán detectados en pacientes sanos con esa prueba. Existen muchas pruebas
serológicas con especificidades casi del 100%.

• Sensibilidad: Cantidad mínima de anticuerpo o antígeno que es capaz de detectar.

Cuanta menor cantidad de Ag/Ac detecte, mayor es la sensibilidad. Los errores: Falsos
negativos por no detectar Ag ó Ac presentes en el ensayo. Cuantos más resultados
positivos se produzca en este grupo de enfermos más sensibilidad tendrá la prueba y
menos resultados falsos negativos obtendremos.

a. Inmunofluorescencia
La inmunofluorescencia o técnicas de anticuerpos fluorescentes es un procedimiento
especializado que consiste en una reacción antígeno/anticuerpo hecha visible por la
incorporación de un colorante fluorescente al anticuerpo, y una vez hecha la reacción, se
expone a la luz ultavioleta emitida por el microscopio para ser evidenciado por el fenómeno
de fluorescencia. El desarrollo de la inmunofluorescencia precisa de un equipo que consta
de un buen microscopio provisto de un condensador de campo oscuro, de una fuente
luminosa especial con bombillo de mercurio que produzca luz ultravioleta y de varios filtros
específicos. La fluorescencia alcanza la máxima excitación a 490 nm y emite luz
fluorescente alrededor de 520 nm.

En la actualidad estas técnicas se aplican con éxito en la investigación de gran cantidad

de microorganismos, como ser: bacterias, espiroquetas, virus, hongos, levaduras y
parásitos, para lo que se usa la inmunofluorescencia directa, y en la determinación de
anticuerpos específicos contra estos microorganismos, en donde la inmunofluorescencia
indirecta tiene mayor aplicación.
Tipos de inmunofluorescencia
1. Inmunofluorescencia directa: es un procedimiento de un solo paso que permite la
detección de antígenos virales en las células utilizando únicamente un anticuerpo marcado
con un fluorocromo.
 2. Inmunofluorescencia indirecta: es una técnica de dos pasos que se utiliza para la
demostración de anticuerpos circulares en muestras clínicas generalmente suero o
plasma.

Aplicaciones

• En técnicas analíticas.
• Métodos inmunológicos de diagnóstico médico.
Ventajas de la inmunofluorescencia

• Alta especificidad y sensibilidad.

• La principal ventaja de ésta consiste en la rapidez con lo que se obtienen los datos.
• Los cultivos y pruebas biológicas pueden ser omitidas.
• Pequeñas cantidades de antígenos se encuentran fácilmente, aun en muestras muy
contaminadas.
• Las posibilida de dar un diagnóstico correcto, aun con organismos no viales es alta.
Desventajas de la inmunofluorescencia

• Alto costo de equipo y reactivos.

• Requiere personal debidamente entrenado.
• Resultados no son 100% específicos pero es ayuda efectiva para el diagnóstico.

b. ELISA
Es uno de los métodos inmunoenzimaticos empleados por las detección de antígenos o
anticuerpo. Se fundamenta básicamente en dos principios:
1. En el hecho de que moléculas, como la constituyen los antígenos y los anticuerpos, puedan
ser absorbidos a una fase sólida, sin perder su reactividad inmunológica.
2. Que tanto antígenos como anticuerpos pueden ligarse a una enzima, formando un conjugado
con actividad inmunológica y enzimática simultánea.
Las muestras que se pueden emplear son muy variables. Van desde plasma o suero hasta
cualquier fluido biológico, saliva, lagrimas, orina, etc., siempre y cuando dentro de sus
componentes no se encuentren sustancias que inhiban la unión antígeno-anticuerpo.
Las enzimas más empleadas son:
1. La fosfatasa alcalina con un substrato p-nitrofenil fosfato: presenta alta estabilidad, es
la enzima de elección en muchos procedimientos.
2. La peroxidasa con substrato ortofenilendiamina: la estabilidad de los productos es
muy corta.
3. La beta-galactosidasa con substrato o-nitofenil-beta-
galactosidasa: es la más estable en sí misma y la que libera
un producto de alta calidad de medición.

Tipos de ELISA
1. ELISA directo: es el ensayo más simple y rápido,
donde todo anticuerpo primario marcado con una
enzima se unirá directamente al antígeno de interés
permitiendo la detección y cuantificación del mismo.

2. ELISA indirecto: ensayo que se realiza en dos pasos, lo que permite amplificar la señal
obtenida. En este caso se utilizan dos anticuerpos, uno primario
y otro secundario.

3. ELISA tipo sándwich: en este tipo de ELISA el antígeno

queda inmovilizado entre dos anticuerpos, uno de captura y otro
de detección que se unirán a dos epítopos distintos de un mismo
antígeno.

4. ELISA competitivo: es una variante más

compleja de la técnica de ELISA, también
conocido como ELISA de inhibición debido al uso de un antígeno de referencia que
competirá con el antígeno de la muestra por unirse al anticuerpo primario.
 Sensibilidad: En muchas ocasiones ELISA directo suele resultar menos sensible ya que
la conjugación del anticuerpo a la enzima puede comprometer la inmunoreactividad del
mismo.
Por lo contrario, el ELISA indirecto suele ofrecer una mayor sensibilidad debido a que no
es el anticuerpo primero el que va marcado con la enzima, lo que permite mantener intacta
su inmunoreactivdad.

Especificidad: También a nivel de especificidad existen diferencias entre tipos de ELISA.

Podría decirse que el ELISA directo es el menos específico de los cuatro, ya que al
analizar muestra heterogéneas la probabilidad de uniones inespecíficas y de alto ruido de
fondo es más alta.

El ELISA que ofrece mayor especificidad es ELISA tipo sándwich, porque al utilizar dos
anticuerpos distintos dirigidos frente a un mismo antígeno, este es capturado e
inmovilizado de manera más selectiva, reduciendo la probabilidad de uniones no
específicas y minimizando el ruido de fondo.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS

Tipos Ventajas Desventajas

• El protocolo es simple y sencillo. • No hay amplificación de la

• No hay posibilidad de reactividad
cruzada con el anticuerpo
secundario.
ELISA directo • Menor probabilidad de error debido
al uso de un menor número de
reactivos.
• Alta sensibilidad.
• Alta flexibilidad por el hecho de
que un mismo anticuerpo
secundario puede emplearse
con diferentes anticuerpos
primarios.
ELISA indirecto • El anticuerpo primario mantiene
intacta su inmunoreactividad al
no ir conjugado.
señal ya que no se emplean
anticuerpos secundarios.
• El anticuerpo primario debe ir
marcado, lo que resta
flexibilidad al ensayo.
• Protocolo más complejo
que el ELISA directo.
• El uso de anticuerpos
secundarios puede dar
lugar a reactividad
cruzada.
 • Alta flexibilidad. • No siempre es fácil contar
• Alta sensibilidad y especificidad. con pares de anticuerpos
que funcionen bien en
este tipo de ensayo.
• El antígeno debe tener un
tamaño lo
ELISA sándwich suficientemente grande
para permitir la unión al
mismo de dos
anticuerpos de manera
simultánea.

• Alta sensibilidad. • Protocolo relativamente

• Alta flexibilidad.
• Permite la detección de
antígenos de pequeño tamaño.
ELISA • No requiere el procesamiento
competitivo previo de las muestras analizar.
complejo.
• Requiere el uso de
antígeno de inhibición.

c. Western Blot
Es una técnica que se basa en la separación de proteínas mediante electroforesis en gel
de poliacrilamida y la posterior transferencia por medio de corriente eléctrica de las
proteínas a una membrana de nitrocelulosa. Este método se basa en la movilidad
electroforética de las proteínas e implica poner en contacto directo la membrana de
nitrocelusosa en el gel de poliacrilamida que contiene las proteínas.
Es un ensayo de Inmuno-transferencia sobre membranas para proteínas. El ensayo es el
de confirmación más utilizado para la detección de anticuerpos, confirmación HIV, HCV,
Borrelia, Treponema. Son membranas ó tiras de nitrocelulosa que contienen antígenos
proteicos que han sido separados en bandas por electroforesis en gel según su peso
molecular y luego transferidos a éste soporte.
Se incuban las tiras con muestras y reactivos Si en la muestra a analizar existen
anticuerpos específicos se unen a sus antígenos correspondientes. Tras la adición de un
conjugado y sustrato la bandas se colorean.
 Tipos de Western Blot
1. Metodo directo: el anticuerpo primario marcado con una enzima se une al
antígeno de la membrana y reacciona con el sustrato originando una señal
detectable.

2. Método indirecto: el anticuerpo primario sin marcar

reacciona con el antígeno. Luego, un anticuerpo
secundario marcado con la enzima se une al anticuerpo primario y reacciona con
el sustrato.

Ventajas

• Alta sensibilidad.
• Diagnostico eficaz temprano.
• Multiples muestras de estudio.

Desventajas

• Costo elevado.
• Problemas en las proteínas de fácil degradación.
• Variabilidad reaccional en las bandas.
https://epidemiologiamolecular.com/inmunofluorescencia/#_Toc255664705
 d. Inmunocromatografia
La inmunocromatografía se basa en la migración de una muestra a través de una
membrana de nitrocelulosa. La muestra es añadida en la zona del conjugado, el cual está
formado por un anticuerpo específico contra uno de los epítopos del antígeno a detectar
y un reactivo de detección. Si la muestra contiene el antígeno a problema, éste se unirá al
conjugado formando un complejo inmune y migrará a través de la membrana
denitrocelulosa. Sino, migrarán el conjugado y la muestra sin unirse.
La zona de captura está formada por un segundo anticuerpo específico contra otro epítopo
del antígeno. Al llegar la muestra a esta zona los complejos formados por la unión del
antígeno y conjugado quedarán retenidos y la línea se coloreará. En el caso contrario las
muestras son negativas.
La zona control está formada por un tercer anticuerpo que reconoce al reactivo de
detección. Cuando el resto de muestra alcanza esta zona, el anticuerpo se unirá al
conjugado libre que no ha quedado retenido en la zona de captura. Esta línea es un control
de que el ensayo ha funcionado bien, porque se colorea siempre con muestras positivas
y negativas.

https://es.scribd.com/doc/72121733/Inmunocromatografia-o-Prueba-Rapida
Aplicaciones

• Screening para marcadores tumorales.

• Diagnóstico rápido de infecciones bacterianas como ser Chlamydia, Streptococo A, B y
Helicobacter pylori.
• Diagnóstico rápido en infecciones virales: antígeno de superficie de Hepatitis B,
rotavirus.
• Detección de drogas de abuso: TCH-Marihuana, cocaína, morfina, anfetaminas.
Ventajas

• Buena sensibilidad.
• Económicas y rapidas.
 Desventajas

• Bajo en especificidad nesecita de otras pruebas para ser corroborada.

III. Actividades realizadas

Test de inmunofluorescencia
Fundamento
Los anticuerpos anti-nucleares (ANA) del suero se unen a sus correspondientes antígenos
presentes en las células HEp-2. Una vez unidos, los anticuerpos se ponen de manifiesto mediante
la incubación con un anticuerpo contra las inmunoglobulinas humanas conjugado con fluoresceína
y se visualizan por microscopía de fluorescencia .
Preparación de reactivos
portaobjetos y glicerol: listo para usar
PBS: disuelva el contenido de un paquete en 1 litro de agua destilada o desionizada y 1ml de
tween 20. sellar el recipiente para evitar la contaminación o evaporación.
Controles: viales cuentagotas listos para usar con 1.0 ml cada uno de control líquido en la dilución
de trabajo.
Conjugado: viales cuentagotas listos para usar con 2.0 ml de conjugado en dilución de trabajo.
Procedimiento de la prueba
1. Retire el portaobjetos y los reactivos necesarios del refrigerador y permita que alcancen
la temperatura ambiente (15 a 20 minutos).
2. Retire el portaobjetos de la bolsa justo antes de usar y etiquetar.
3. Diluya la muestra con el PBS a la dilución de detección 1: 40 o prepare diluciones dobles
en serie para la determinación cuantitativa, comience con la dilución de detección 1:40.
4. Es necesario probar 1 de cada control positivo, 1 control negativo y 1 control de tampón
PBS para cada lote de portaobjetos probado.
5. Cubra cada pocillo con muestras diluidas o controles (10-20 ul por pocillo).
6. Incubar en una cámara humidificada a 23 ± 2° C durante 30 minutos.
7. Enjuague los portaobjetos brevemente en una pequeña corriente de PBS. No dirija la
corriente hacia los pozos.
8. Enjuague bien el portaobjetos durante 7 minutos en un plato de tinción de PBS. Cambie
el tampón y lave durante 8 minutos adicionales.
Maneje el portaobjetos suavemente. es necesaria una agitación suave del tampón para
un lavado de portaobjetos eficiente.
 9. seque la máscara pintada del portaobjetos con los secantes provistos. No permita que los
pozos se sequen antes de la adición del conjugado.
10. Se cubre cada pocillo con una gota (˜10 uL) de conjugado FITC
11. Incubar en una cámara humidificada a 23 ± 2ºC durante 30 minutos. proteger de la luz
intensa.
12. Repita los pasos 7 y 8. seque la máscara pintada del portaobjetos con los secantes
provistos. no permita que los pozos se sequen antes de agregar glicerol.
13. Coloque una pequeña gota de glicerol tamponado en cada pocillo y cubra con un
cubreobjetos.
14. Para obtener los mejores resultados, la diapositiva debe leerse inmediatamente con un
aumento de 200-500X. alternativamente, las diapositivas se pueden leer dentro de las 24
horas. sin embargo, deben almacenarse a 2-8ºC en la oscuridad y sellarse para evitar que
se seque el fluido de montaje.
Informes de Resultados
Esta determinación debe ser considerada semicuantitativa, informando la dilución a punto final. De
ser un resultado positivo se debe informar el título y el patrón fluorescente observado, nuclear
homogéneo, granular, etc., incluyendo, de observarse, el patrón citoplasmático y el aparato
mitótico.
Resultado negativo: un resultado se considera negativo cuando no se discrimina un patrón
fluorescente definido. Se debe tener en cuenta que la no determinación de anticuerpos en la
prueba no implica ausencia de enfermedad. Esto puede deberse a la baja concentración del
antígenos en el sustrato.
resultado positivo: un resultado debe ser considerado positivo cuando se observa una prueba
reactiva por encima de la dilución de corte (cut off) donde se puede distinguir perfectamente un
patrón fluorescente. Es muy importante recordar que un resultado positivo no implica
enfermedad, pudiendo ocurrir en individuos adultos sanos. Por lo tanto el resultado debe ser
interpretado en el contexto clínico de cada paciente.
Características de diagnóstico:
ANA: La determinación de anticuerpos anti-nucleares tiene una sensibilidad superior al 95% para
el lupus eritematoso sistémico, y una baja especificidad.
Homogéneo: Indicativo de lupus eritematoso sistémico.
Periférico: En pacientes con enfermedades del tejido conectivo.
Moteado: Asociado al lupus eritematoso sistémico, enfermedad mixta del tejido conectivo,
síndrome de Sjögren, polimiositis o escleroderma.
 Nucleolar: En aproximadamente un 50-70% de pacientes con solapamiento de escleroderma y
polimiositis/dermatomiositis. Se presenta en hasta un 33% de pacientes con escleroderma
sistémica, especialmente con complicaciones renales.
Centromérico: En pacientes con esclerosis sistémica, especialmente en la forma de la enfermedad
con implicación cutánea (80%). Ocasionalmente, en otras enfermedades conectivas .

IV. Control de calidad

El Control Positivo debe proporcionar el marcaje específico.
El Control Negativo no debe proporcionar marcaje específico alguno.
En el CIDE los controles se realizan 1 vez por semana o cuando los resultados no son
concluyentes.
El CIDE tiene su propio programa de Control de Calidad interno, así como procedimientos de
corrección en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias aceptables.
Recolección y Almacenamiento de las Muestras
La determinación debe hacerse en suero. La muestra puede ser refrigerada a 4°C si la
determinación se realizara dentro de las 72 hs. Si la determinación se realizara después de las 72
hs, el material debe ser refrigerado a -20°C o menos. Sucesivas congelaciones y
descongelaciones puede alterar el resultado.
Elección del Sustrato
El sustrato más ampliamente recomendado es la HEp-2.

V. Experiencias adquiridas durante la pasantía

• A través de la realización del procedimiento de inmunofluorescencia utilizando sustancias
con fluorocromo nos reflejó un patrón que permite identificar la presencia de ciertas
enfermedades como lupus eritematoso, síndrome de sjögren, artritis reumatoide

• Los conocimientos adquiridos en la teoría fueron validados en esta pasantía

• Siguiendo las indicaciones que trae el inserto de cada prueba se evita cometer errores
que podrían ocasionar desconfianza y poca credibilidad en un profesional de microbiología
al momento de brindar un resultado incorrecto

• Durante el desarrollo de las tres fases pre analítica, analítica y postanalitica se debe estar
en un ambiente que permita la concentración al 100%

• La base fundamental para brindar un resultado confiable en un laboratorio está en

desarrollar de manera detallada la fase preanalitica porque es aquí donde surgen una
diversidad de variables que pueden afectar el resultado de la muestra.
VI. Conclusiones
1. Los ANA’s son inmunoglobulinas que reconocen antígenos propios que se encuentran en
el núcleo de la célula, de ahí su nombre, sin embargo, también pueden reconocer
antígenos que se encuentran en el citoplasma de la célula.
2. La técnica más utilizada o la que se considera como un estándar para el tamizaje es la
prueba de inmunofluorescencia para enfermedades autoinmunes, mientras que ELISA y
Western Blot ayudan a la confirmación del diagnóstico.
3. La inmunofluorescencia utiliza células Hep-2 como sustrato, pues, estas celulas poseen
ciertas características que las hacen esenciales para esta prueba como que poseen 46
cromosomas, más de 2 nucléolos y mitocondrias muy activas, ya que son muy
metabólicamente activas
4. Debido a la falta de tiempo en el laboratorio por la rotación de la práctica no se pudieron
poner en práctica todas las pruebas disponibles en el laboratorio, lo que hubiera permitido
ampliar mucho más la destreza y conocimiento de las mismas.
5. Este tipo de pruebas deberían ser del conocimiento de cada microbiólogo en formación,
pues ayudan mucho al diagnóstico de muchas enfermedades autoinmunes presenten en
la población, sin embargo, no muchos laboratorios disponen de estos métodos.
 Grupo A-B
Resumen de la Pasantía
Instituto Hondureño De Seguridad Social

I. Introducción

Es de gran relevancia e importancia conocer y aplicar los conocimientos adquiridos en Bioquímica

Clínica, sobre todo en el área de Pruebas Especiales, ya que esta se encuentra vinculada a su
totalidad con la fisiología anatómica del ser humano; la cual se encuentra presente de manera
cotidiana.

En el presente resumen se detallarán los procesos para la realización del respectivo análisis
bioquímico en el laboratorio clínico del IHSS, incluyendo:
- Técnicas diagnósticas.

- Experiencias adquiridas.

- Actividades desarrolladas.

- Sugerencias para mejorar la pasantía.

- Apreciación del control de calidad.

Se dará a conocer la forma de trabajo empleada en este laboratorio clínico, destacando la ardua
labor realizada por el personal de salud (Microbiólogos y Técnicos en Laboratorio) empleados en
esta área, para garantizar fiabilidad en los resultados enviados al médico en beneficio de la salud
de la población.

II. Técnicas Diagnósticas

Las técnicas empleadas para pruebas especiales se realizan mediante equipos automatizados con
una alta especificidad y sensibilidad, brindando resultados de calidad en un corto periodo de
tiempo; beneficiando así, al profesional de la salud y al paciente.
 Las pruebas especiales se hacen mediante quimioluminiscencia, inmunofluorescencia, ensayos
inmunoenzimaticos, ensayos luminométricos múltiples y electroinmunotransferencia.

III. Experiencias Adquiridas

Se comprobó la eficiencia que se obtiene al emplear equipos automatizados en un laboratorio

clínico, los cuales ayudan a eliminar ciertos errores que normalmente se obtendrían al realizar
estos procedimientos manualmente; como ser, el pipeteo manual, tiempos de incubación y ahorro
de tiempo, entre otros.

Se evaluó la capacidad que tiene el laboratorio en cuanto a la afluencia de pacientes que se

abocan a dicho centro médico. También es importante recalcar que si bien el laboratorio es
totalmente automatizado no viene a reemplazar el trabajo del microbiólogo, ya que este es quien
tiene el criterio para aceptar o rechazar ciertos valores obtenidos en algunos análisis. Así como
también se encarga de la etapa preanalítica, que es una de las áreas donde más errores se pueden
dar, y también se encarga de la etapa postanalítica.

IV. Actividades Desarrolladas

Fase Pre Analítica:
a. Revisión de los requerimientos de insumos por parte de los equipos cada día, ya que se debe
de dar abasto para todos los análisis que se presenten durante la jornada. Entre estos esta:
agua destilada, ventilación, reactivos, puntas, pre clean, etc.

b. La corrida de controles y calibradores se realiza todos los días antes de empezar la jornada.
Se deben verificar los valores obtenidos en los controles, si hay algún error debe ser corregido
inmediatamente; debido a que no se debe comenzar a trabajar sin antes haber realizado
correctamente dicha corrida.

c. Revisar cada una de las muestras para retirar el coágulo que se forma en cada una de ellas
(en caso de ser necesario).

d. Revisar las alarmas que pueden afectar el correcto procesamiento de las muestras.

e. Verificar la causa del por qué el equipo no ha procesado ciertas muestras, ya sea por falta de
reactivo, error en la lectura del código de barra o un mal etiquetado del tubo.

Fase Analítica:
a. Durante el procesamiento de las muestras se estar alerta a que todo se desarrolle con
normalidad, y en el caso de alguna alarma por parte del equipo se debe solventar con la mayor
brevedad.
 b. Se debe revisar el total de número de muestras en el sistema, y en caso de falla en el
procesamiento alguna muestra, por ejemplo: problemas de etiquetado; volver a imprimir
etiqueta correspondiente a la prueba faltante y reintroducir al equipo para su posterior
ejecución.

c. Al finalizar la ejecución de los análisis, se procede a validar los resultados. Tomando en cuenta
la edad, sexo, estado de gestación e historial de exámenes anteriores (si los hay). Así como,
si se observase valores o resultados muy anormales, realizar por duplicado para validarlos.

Fase Post Analítica:

a. El microbiólogo encargado hace la correcta validación de los resultados obtenidos para cada
muestra.

b. Se envían los resultados validados desde el laboratorio por la base de datos o host ha
ventanilla, donde son impresos y pueden ser reclamados por el paciente o por el personal
autorizado.

V. Sugerencias Para Mejorar

› Impartir charlas que se enfoque en el manejo del equipo automatizado, previo al inicio de la
pasantía como también, la correcta manipulación del mismo, para adquirir habilidades técnicas
y sea más provechosa la semana asignada para Pruebas Especiales.

› Asignación de temas (diferentes pruebas consideradas como especiales en el área de

bioquímica clínica) a los estudiantes del bloque II, para presentación en mesa redonda; en
donde de manera dinámica el estudiante enfatiza lo aprendido en los diferentes lugares donde
realiza su práctica.

VI. Apreciación Del Control De Calidad

El control de calidad en el laboratorio de bioquímica clínica es un área que se rige bajo un control
sumamente estricto, ya que cada mañana al inicio de la jornada lo primero que se hace es la
corrida de controles y calibradores antes del procesamiento de las muestras. Es importante
destacar que se hace una revisión semanal de cada lote de reactivo, este se calibra correctamente
y se mantiene contacto directo con los proveedores de los equipos. De esta forma se asegura que
el equipo tenga un constante mantenimiento y calibración, para que no se presente ninguna falla
y todo se desarrolle con normalidad, con la mayor eficiencia y calidad posible.
VII. Conclusiones

› Después de culminar la semana de la Pasantía en Pruebas Especiales se adquirió nuevas

experiencias en el laboratorio, en el cual se tuvo la oportunidad de desarrollar destrezas
manuales, y poder aplicar todos los conocimientos adquiridos en el transcurso de la carrera.
Por otra parte, obtuvimos nuevos conocimientos en cuanto al uso de equipos automatizados
y toma de decisiones en situaciones adversas.

› Adquirimos una postura profesional para trabajar con eficiencia bajo presión y emitir resultados
confiables, con la ayuda de los supervisores de la pasantía, quienes aportar sus enseñanzas
y depositan su confianza a la hora de trabajar las diferentes pruebas realizadas.

› Se comprendió lo importante que es aplicar el control de calidad en el área laboratorio para

obtener resultados confiables, con precisión y exactitud en beneficio de la población que busca
asistencia médica.

› El trabajo en equipo en el laboratorio es muy importante. Se debe tener en cuenta la

responsabilidad y toma de decisiones en equipo, con el fin de obtener un óptimo rendimiento;
ya que la gran cantidad de muestras que llegan diariamente puede no ser posible ser
procesadas por una sola persona.
 Caso Clínico
Pruebas Serológicas
Jane C, una mujer de 38 años de edad, visita su médico por fatiga, fiebre y dolor de articulaciones
(interfalanges, muñeca, y rodillas). Ella también nota sensibilidad al sol y reporta tener un rash
después que se expuso al sol. El médico nota un rash en forma de mariposa en su nariz y mejillas.
Los resultados del laboratorio se describen en las tablas 4-8 a 4-11.

Hemograma (Tabla 4-8)

Valor de
Parámetros Jane C. Parámetros Jane C. Valor de Referencia
Referencia

WBC 4.5 5 x 10 9/L Plaquetas 100,000 150,000-400,000 mm3

RBC 3.5 4-5 x 1012 /L Neutrófilos 85 25-60%

Hb 10.5 12-16 Bandas 0 0-10%
Hct 32 36-46 Linfocitos 13 20-50%
VCM 91.7 80-100 Monocitos 2 2-11%
HCM 30 26-34 Eosinófilos 0 0-8%
CHCM 33 31-37 Basófilos 0 0-2%
Morfología
normal
Rojos

Uroanálisis (Tabla 4-9)

Jane C Valores de Referencia

Macroscópico
Color Amarillo Incoloro a ámbar
Apariencia turbia Transparente
Gravedad especifica 1.022 1.001-1-035
pH 7.0 5-7
Proteína 4+ Neg
Glucosa Neg Neg
Cetonas Neg Neg
Bilirrubina Neg Neg
Sangre 1+ Neg
Urobilinógeno Normal Normal
Nitritos Pos Neg
Esterasa leucocitaria 2+ Neg
Microscópico
Leucocitos 0-3/c 0-5/c
Eritrocitos 7-10 /c 0-2/c
 C Epiteliales Escamosas …raras Pocas a moderadas
Renales…......raras
Cilindros Hialinos…0-3/c
Eritrocitarios…0-1/c
Granulares …0-1/c
Grasos………0-1/c

Perfil bioquímico (Tabla 4-10)

Test Jane C. Valores de Test Jane C. Valores de

Referencia referencia
Sodio 140 136-145 mEq/L AST 26 5-40 UI/L
Potasio 3.6 3.6-5 mEq/L ALT 53 6-37 UI/L
Cloruros 106 101-111 mEq/L Proteínas T 6.8 6-8.4 g/dL
CO2 29 24-34 BUN 50 7-24 mg/dL
Glucosa 116 70-110 Creatinina 2.5 0.5-1.2 mg/dL
Bilirrubina T 0.2 0.2-1-2 mg/dL

Tests Serológicos (Tabla 4-11)

Jane C Valor de referencia

Acs Antinucleares Positivo 1:160 Negativo
Factor reumatoide < 10 <1:80
Proteína C reactiva 3.1 < 1 mg/dL
Prealbúmina 30 10-40 mg/dL
Albúmina 4000 3500-5200 mg/dl
Alfa-1-antitripsina 150 115-200 mg/dL
Haptoglobina 80 40-175 mg/dL
Orosomucoide 101 55-140 mg/dL
Alfa2 macroglobulina 205 130-300 mg/dL
Transferrina 300 215-380 mg/dL
C3 50 83-177 mg/dL
C4 20 29-68 mg/dL
IgG 3020 565-1765 mg/dL
IgA 330 40-350 mg/dl
IgM 420 50-300 mg/dL
Apolipoproteína B 99 63-133 mg/dL
Apolipoproteína A 103 94-175 ug/dL
Hierro 80 65-175 ug/dL
% saturación de transferrina 25 20-50%
 Preguntas

g) Encierre o indique los resultados anormales:

Hemograma
- 100,000 PLT/mm3
- Neutrófilos: 85%
- Linfocitos: 13%
- Hb: 10.5g/dL
- Hct: 32%

Uroanálisis
- Proteína: 4+
- Sangre: 1+
- Nitritos: 1+
- Esterasa Leucocitaria: 2+
- Eritrocitos 7-10/campo

Perfil Bioquímico
- ALT: 53 UI/L
- BUN: 50 mg/dL
- Creatinina: 2.5mg/dL

Serología
- Acs Antinucleares: +1:160
- Proteína C. Reactiva: 3.1 mg/dL
- IgG: 3020 mg/dL
- IgM: 420 mg/dL

h) Dados los síntomas de Jane C, (rash y dolores articulares) enumere al menos cuatro
condiciones que podrían considerarse.
- Exposición a la luz provocando un Rash en la cara en forma de mariposa
- Inflamación que provoca dolores en las articulaciones
- Brote de una enfermedad inflamatoria
- Fiebre y fatiga sin explicaciones.

i) ¿Después de revisar los resultados del laboratorio y los signos clínicos, cual es el
diagnóstico más probable?
Lupus Eritematoso Sistémico, Síndrome de Sjögren, Artritis Reumatoide.

j) Brevemente, describa la fisiopatología de esta enfermedad. ¿Qué está pasando en el

cuerpo de Jane?
El (LES) es una enfermedad inflamatoria de carácter crónico, caracterizada por daño
órgano-específico o sistémico.
 La genética, el ambiente, y las hormonas son factores que desempeñan un papel
importante en la predisposición a esta enfermedad. Se caracteriza por la producción de
anticuerpos producidos por Linfocitos B mediados por secreción de citosinas producidas
por los Linfocitos T. Los principales indicadores de la enfermedad son los anticuerpos,
complejos inmunes, factores de complemento y células autorreactivas

Lo que le pasa al cuerpo de Jane es que el LES produce inflamación e incremento de

apoptosis, se disminuye la eliminación de restos celulares o cuerpos apoptóticos por los
fagocitos, los que son transportados en vesículas para ser liberados, produciéndose así
los autoantígenos modificados (estos son eliminados en una persona sana) que son
expuestos al sistema inmune. Esto llevará a la producción de autoanticuerpos que se unen
a estos antígenos propios formando inmunocomplejos, los cuales son llevados a las
membranas basales activando complemento, lo que provoca la aparición del proceso
inflamatorio y en consecuencia las manifestaciones clínicas.

k) Si el Factor reumatoide estuviese positivo, Ud. cambiaria su respuesta a la pregunta #3?

¿Porque o porque no?
No, pues el factor reumatoideo puede aparecer positivo en enfermedades como Síndrome
de Sjögren, Lupus Eritematoso Sistémico y principalmente Artritis Reumatoide.

l) A. enumere 6 criterios de la American College of Rheumatology para el diagnostic de esta

condicion.
- Rash Malar
- Lupus discoide
- Fotosensibilidad
- Artritis
- Alteración renal
- Alteración Hematológica

a. B. Cuantas son necesarias para el diagnóstico?

b. Al menos 4 o más criterios.

c. 7. Cuántos criterios enumerados en la pregunta anterior se cumplen en Jane?

Rash malar, fotosensibilidad, artritis, alteración renal, alteración hematológica,
alteración de anticuerpos antinucleares.

d. 8. Describa o defina el anticuerpo antinuclear (ANA). Enumere al menos 4 tipos

diferentes de ANAs.
ANA: son inmunoglobulinas que reconocen componentes celulares autólogos
Estos pueden ser: infecciosos, naturales, autoinmunes
- Anti-DNA
- Anti-ENA
 › Anti-Ro
› Anti-La
› Anti-Sm
› Anti-Scl70

e. 9. Cuales dos ANAs son específicos para esta condición?

- Anti-sdDNA
- Anti-Ro/SS-A
- Anti-La/SS-B
- Anti-histonas
- Anti-Sm

f. 10. Cuál es el significado de los resultados anormales del uroanálisis y la

bioquímica.
Al inflamarse las nefronas se le conoce como Glomerulonefritis o nefritis, esto
provoca que los riñones no puedan eliminar correctamente los desechos de la
sangre o controlar la cantidad de líquidos, esto puede tener como consecuencia
sangre en la orina, lo que explica la presencia de eritrocitos en sangre, también
hay excreción de proteínas en orina, lo que explica la presencia de cilindros. Al
no poder filtrar correctamente puede llevar a una hinchazón de las extremidades
como pies, tobillos, piernas, rodillas, etc.

La nefritis puede llevar a cicatrización y daño permanente del riñón por lo que las
pruebas bioquímicas del perfil renal (urea, BUN, creatinina) se verán alteradas
debido a la incapacidad del riñón de filtrar.

En el caso de la transaminasa ALT se encuentra levemente alterada. Si bien el

hígado no es un órgano blanco puede verse ligeramente afectado, aunque estos
no están incluidos dentro de los criterios clasificatorios de LES por lo que no se
toman en cuenta

Es más estas alteraciones pueden deberse al uso de fármacos, infecciones virales

u otras enfermedades autoinmunes

g. 11. Los resultados del complemento son consistentes con su diagnóstico? Si es SI,
porqué
Los niveles bajos de C3 y C4 pueden indicar que el Lupus esté activo, los
resultados de Jane muestran niveles bajos. Existe una nueva combinación de
prueba usando c4d, que ayuda a los médicos a diagnosticar Lupus y descartar
otras enfermedades

La proteína C reactiva es una proteína de fase aguda que se eleva en procesos

inflamatorios agudos, es producida en el hígado, se encuentra elevada en
enfermedades como Lupus
h. 12. Enumere y describa brevemente cuatro factores que pudieran tener un rol en el
Lupus Eritematoso Sistémico (LES).
› Genéticamente y ambientales: un individuo susceptible necesita de múltiples
estímulos ambientales. Los alelos asociados a la enfermedad, están presentes
en personas sanas, pero cuando se encuentran en forma combinada y
expuestos a estímulos estresantes como la radiación ultravioleta, metales
pesados, entre otros.

› Hormonas: Las hormonas juegan un papel importante en LEG, ya que se ha

observado su mayor incidencia en mujeres de edad reproductiva, donde se
observa una agresión mayor durante los ciclos menstruales, en los periodos
postparto y en la gestación. La prolactina y estrógenos son los que juegan un
papel importante asociado a la clínica del LES.

› Infecciosos: la deficiencia de C3 se asocia a infecciones recurrentes y este es

otro factor de riesgo para el LES (deficiencia de complementos).
1) Datos generales:

Caso Clínico

Grupo 2

20/09/2019

Pasantía En Pruebas Especiales

2) Presentación clínica: deben presentarse los datos demográficos del paciente (no
poner el nombre), describir la historia clínica del paciente y el motivo principal de su
visita al centro asistencial.

• Edad: 40 años
• Sexo: Femenino.
• Lugar de origen: El Chaparral, Lempira.
• Estado civil: Casada.
• Ocupación: Ama de casa.
• Religión: Evangélica.

Historia Clínica:

Síntoma Principal: Temblores y Nerviosismo.

▪ Se presenta paciente con historia, que desde aproximadamente un año presenta

taquicardia, nerviosismo, temblores en las manos, sudoración (por lo cual se refiere al
servicio de endocrinología para ingreso).
▪ Al ser ingresada, se encuentra con tratamiento desde julio del 2019, sigue con temblores,
nerviosismo, agitada, con sudoración febril, hipertensa.

3) Antecedentes Personales

• Paciente hipertensa, desde aproximadamente un año.

• Afirma que una tía presento diabetes mellitus.

4) Estudios realizados en el centro asistencial: exámenes de laboratorio, exámenes

radiológicos etc. paralelamente deberán interpretar, analizar y asociar los datos del
paciente.

• Hemograma
Serie Roja: Microcitica-Normocromica
 Serie Blanca: Leucocitosis Leve,
Serie Plaquetaria: sin alteraciones morfológicas ni cuantitativas

• Bioquímica
Se observa la Glucosa moderadamente Elevada.
Se observa el Sodio ligeramente disminuidos.

• Bioquímica Especial
TSH Críticamente Disminuido.
T4 Libre Críticamente Aumentado.
5) Diagnóstico Final: a continuación, el estudiante deberá resaltar el diagnóstico
definitivo y concluir como llego a ello.

• Diagnóstico del Paciente:

1. Tormenta Tiroidea Autoinmune.

2. Bocio Toxico Difuso.
3. Cervicitis Severa.

• Discusión

Se evalúa paciente con Tormenta Tiroidea autoinmune, que presenta bocio y es consistente
con la evaluación de laboratorio; los resultados de estos exámenes y su sintomatología dio
como diagnostico final la Tormenta Tiroidea.

La paciente al tener estas hormonas en descontrol, produjo un problema en su ciclo

menstrual y esta sería la causa probable de la cervicitis.

6) Descripción breve de la patología (s) y los hallazgos laboratoriales usuales

(investigación)

Tormenta Tiroidea Autoinmune

La tormenta tiroidea es un estado crítico y poco frecuente que condiciona la disfunción de

múltiples órganos por el efecto del exceso de las hormonas tiroideas, esta disfunción endócrina
tiene una elevada mortalidad y genera manifestaciones típicas como la taquicardia, fiebre,
alteraciones gastrointestinales, cardiovasculares y del sistema nervioso central.

El diagnóstico es fundamentalmente clínico y puede apoyarse por la escala de Burch y Wartofsky.

Las concentraciones séricas de las hormonas tiroideas no tienen correlación con la severidad de
los síntomas, pero su medición es útil para confirmar el diagnóstico. Otras pruebas que pueden
ayudar a complementar el diagnóstico son: el ultrasonido de tiroides, la obtención de marcadores
cardiacos y la valoración de la función hepática y renal.

Bocio Tóxico Difuso

El bocio tóxico difuso (BTD) constituye la forma más frecuente de hiperfunción de la glándula
tiroidea (70 % de los casos), puede aparecer a cualquier edad, aunque por lo general aparece
entre la tercera o cuarta década de la vida. Esta enfermedad es más frecuente en la mujer que
en el varón, se caracteriza por la presencia de hipertiroidismo, bocio difuso y elástico, así como
oftalmopatía, dermopatía, acropaquía tiroidea y onicosis.

Es una enfermedad autoinmune en la cual los anticuerpos para el receptor de la tirotropina

estimulan al receptor de la tirotropina (TSH), e incrementan la producción de hormona tiroidea.
Como criterios diagnósticos se consideran todos aquellos pacientes con la sospecha clínica, o
con el diagnóstico previo de BTD.

Cervicitis Severa

La cervicitis aguda generalmente es producto de una infección; la cervicitis crónica usualmente

no es causada por una infección. La cervicitis puede ascender y causar endometritis y
enfermedad inflamatoria pélvica (EIP).

La causa infecciosa más común de cervicitis es Chlamydia trachomatis, seguido por Neisseria
gonorrheae. Otras causas incluyen el virus del herpes simple (VHS), Trichomonas vaginalis, y
Mycoplasma genitalium. Frecuentemente no se logra identificar un patógeno. El cuello uterino
también puede estar inflamado como parte de una vaginitis (p. ej., vaginosis bacteriana,
tricomoniasis).

Las causas no infecciosas de cervicitis incluyen procedimientos ginecológicos, cuerpos extraños

(p. ej., pesarios, dispositivos anticonceptivos de barrera), productos químicos (p. ej., en duchas o
cremas anticonceptivas), y los alérgenos (p. ej., látex).

7) Bibliografía: favor utilizar google académico como buscador o Pubmed.