ELISA DE COMPETICIÓN

En este sistema también es muy utilizado para la detección de anticuerpos específicos. Se

parte de un anticuerpo (monoclonal o policlonal), frente a un antígeno conocido, que
previamente ha sido inmovilizado en la placa. Se denomina de competición ya que el suero
problema es incubado previamente con el antígeno, antes de incubarlo con el antisuero
fijado en la placa, y por tanto compite con él.

El primer paso consiste en añadir el suero problema a una cantidad constante de virus, que
actúa como antígeno. Tras incubar, se añade la mezcla a los pocillos tapizados con
anticuerpos. Si había muchos anticuerpos en la muestra habrá poco virus libre para unirse a
los anticuerpos de la placa. El último paso consiste en añadir un conjugado anti-virus, y
obviamente, el sustrato de la enzima. En el caso de una muestra positiva con alto título,
habrá poca señal luminosa en el pocillo, por eso se llama competitivo.

ELISA directo.

Consta de las siguientes etapas:

 Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para los anticuerpos objeto de

estudio.

Lavado para eliminar los antígenos fijados o no fijados.

 Adición de anticuerpos marcados con una enzima; si los anticuerpos reaccionan con
los antígenos, el complejo quedará solubilizado.

Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.

 Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora.

 Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.