Informe de laboratorio

Karen valentina Jiménez López

Bioquímica
Desarrollo Ambiental

Universidad Manuela Beltrán

Bogotá
2022
Pre-Informe

1) Consulte acerca de los tipos de ELISA

 Elisa directo, este es el más sencillo y rápido donde un anticuerpo primario

marcado con una enzima se unirá directamente al antígeno de interés permitiendo
la detección y/o cuantificación del mismo.
 Elisa indirecto, en este caso se utilizan dos anticuerpos, uno primario y otro
secundario, este último de unión a la enzima.
 Elisa tipo sándwich se inmoviliza un antígeno entre dos anticuerpos,
uno para captura y otro para detección, también llamado par de anticuerpos, que
se unirá a dos epítopos diferentes del mismo antígeno.
 Elisa competitivo, esta es una variante más complicada del método ELISA,
también conocida como ELISA de inhibición, ya que el uso de un antígeno de
referencia competirá con el antígeno de muestra para unirse al anticuerpo
primario. (Abyntek,2019)

2) ¿Qué diferencia hay entre el ELISA y el PCR RT?

Fuente: https://scancotec.com/blog/pcr-vs-elisa-en-el-analisis-de-alergenos/
 3) Cómo es la detección del virus de SAR-COV 2 por PCR

El ADN constituye nuestro material genético, pero el SARS-CoV-2 no contiene

ADN bicatenario sino ARN monocatenario. Dado que las pruebas de PCR solo pueden
hacer copias de ADN, primero se debe convertir el ARN en ADN. El ARN viral se extrae
de la muestra purificada y se mezcla con una enzima llamada transcriptasa inversa, que
convierte el ARN monocatenario en ADN. ADN retorcido. El ADN viral se agrega al tubo
de ensayo junto con cebadores, fragmentos cortos de ADN diseñados para unirse al virus,
nucleótidos, los componentes básicos del ADN y la enzima que produce el ADN.
La máquina PCR calienta la mezcla. Esto rompe el ADN de doble cadena y el
cebador puede unirse al ADN a medida que se enfría, proporcionando un punto de partida
para que la enzima que construye el ADN lo copie. El proceso
continúa calentando y enfriando continuamente hasta que se hacen millones de copias
del ADN. Esto explica cómo la PCR refuerza el código genético del virus, pero
no explica cómo detectarlo. Esto es lo que se refiere a los tintes fluorescentes, que se
agregan al tubo de ensayo durante la replicación del ADN. Se unen al ADN
copiado, aumentando su fluorescencia, haciendo que emitan más luz, lo que confirma la
presencia del virus.
La fluorescencia aumenta a medida que se hacen más copias, y si supera cierto
umbral, el resultado es una prueba positiva. Si no hay virus en la muestra, la
prueba de PCR no producirá una copia, por lo que no se alcanzará el umbral
de fluorescencia, en cuyo caso la prueba será negativa.
 Informe de laboratorio

Introducción

La técnica ELISA ("ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas") se basa en la detección

de antígeno inmovilizado en la fase sólida con anticuerpos que directa o
indirectamente desencadenan la reacción, sus productos, por ejemplo, colorantes, por
ejemplo, pueden medirse espectrofotométricamente. Este principio tiene muchas de las
propiedades de un inmunoensayo ideal: es flexible, confiable, fácil de realizar,
utiliza reactivos económicos y permite una fácil separación de la fracción residual de la
fase libre. Además, se han propuesto y desarrollado diferentes métodos de amplificación
de señal (luminiscencia, cascada enzimática,) que pueden aumentar la sensibilidad de
algunos ELISA para RIA (radioinmunoensayo) hormonal obtenido por hormonas.
Este método tiene una excelente aplicación en todas las áreas donde se requiere la
cuantificación de productos mediante anticuerpos: diagnóstico clínico, detección de
virus, clasificación de anticuerpos en isotipos, búsqueda de anticuerpos
monoclonales, etc.
Se han probado muchas etapas permanentes, desde tubos de vidrio que se originan
hasta el microplame existente con densidad óptica en algunas herramientas y medidores
espectrofotecópicos de lectura de ladrillos, llamados lectores de Elisa. Actualmente, se
están desarrollando dispositivos con mayor capacidad, como 384 y
1536 pozos adecuados para sistemas de robots gigantes (HTS, "sistema de alto hielo")

Los lectores de ELISA son el medidor espectral que puede realizar la lectura constante de

cada ELISA. A diferencia de un espectrofotómetro convencional que
puede leer continuamente todas las longitudes de onda en las bandas UV y visible, un
lector ELISA tiene un sistema de filtro que puede leer solo una o unas pocas longitudes de
onda. Corresponden a los necesarios para determinar la densidad óptica de
los colorantes más utilizados.

Objetivos
  Conocer la metodología de Elisa
 Conocer las aplicaciones de este técnica y las recomendaciones para emplearla
 Saber interpretar e identificar correctamente los resultados obtenidos  al realizar
esta técnica

Marco teórico
La identificación de infecciones recientes es fundamental para comprender los
patrones de transmisión del VIH en una comunidad o población. En las primeras
etapas de la infección se observan títulos bajos de anticuerpos y anticuerpos de
baja afinidad; A medida que avanza la infección, aumentan los niveles de anticuerpos y su
ansia. Las técnicas de detección de anticuerpos para diferenciar infecciones crónicas
recientes se incorporaron al término STARHS (Serological Algorithms for the Detection of
Recent HIV Infection), que se basa en el uso de dos métodos ELISA para la detección de
anticuerpos contra el VIH, uno de los cuales ha sido
modificado para ser menos susceptible. Se considera infección reciente si la muestra es
positiva por ELISA convencional y negativa por ELISA modificado de baja
sensibilidad9. Las infecciones recientes también pueden identificarse mediante el índice
de afinidad. Para ello, el suero se procesa en dos copias (diluido con PBS y tratado
con guanidina, que evita que el antígeno de baja afinidad se una al anticuerpo).
Después de tratar ambos sueros, se calculó el índice de afinidad dividiendo la señal por
los sueros tratados con PBS/guanidina. Si este índice es < 0,6, es probable que la
infección haya ocurrido en los últimos 6 meses15. Cabe señalar que estos métodos se
utilizan con fines epidemiológicos para comprender los patrones de transmisión del VIH
y desarrollar medidas de prevención adecuadas.
El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmune sistémica
caracterizada por la producción de autoanticuerpos y la formación y depósito de
complejos inmunes. Estos autoanticuerpos, dirigidos principalmente contra componentes
del núcleo celular, son un síntoma serológico del LES.

Los anticuerpos antinucleares (ANA) son autoanticuerpos contra

antígenos nucleares como el ácido desoxirribonucleico monocatenario y bicatenario
(dsDNA y pcDNA, respectivamente), histonas y antígenos nucleares extraíbles (ANEA).

Uno de los criterios diagnósticos de AAR para SLE incluye la presencia de anticuerpos

antifosfolípidos, anticuerpos anti-Sm y anti-dsDNA. El segundo tipo es la impronta
biológica más utilizada en LES. 3

Si se descubre contra ADNDC, una serie de métodos como la inmunidad

fluorescente indirecta con Crithidia luciae (Clift), una prueba larga, una radio de radio y
a fines del siglo pasado, comenzaron a usar pruebas. Solución
inmobiliaria en una fase (ELISA (ELISA ).
El antígeno en el apoyo continuo de ELISA anti -ADNDC puede
tener diferentes tipos, como el ADN en plasma, el ADN bacteriano, el fraude concreto y
el ADN del genoma humano, 5, obtenido por métodos cristalinos. Diferente
procesamiento. Optimizar el diagnóstico de LES mejorará la atención al
paciente y ayudará a reducir la morbilidad y la mortalidad.
Los kits de diagnóstico anti-dsDNA comerciales son difíciles de obtener y caros. La
mayoría de los laboratorios de inmunología del país no cuentan con un método para
detectar estos anticuerpos. Por esta razón, es importante introducir un método de alta
calidad, reproducible y de bajo costo como ELISA, que permita la detección de anti-
dsDNA, reemplace la importación de reactivos y permita diagnosticar y monitorear a los
pacientes con LES. Este estudio demuestra la viabilidad de la normalización ELISA
utilizando ADN plasmídico como antígeno de cubierta para detectar anticuerpos anti-
dcDNA en LES.

Metodología
Esta práctica inicia centrifugando las muestras de sangre durante 15 minutos, para la fase
2 se prepara tres disoluciones con el suero A de la siguiente forma;
Tome 1 ml de suero del paciente A y agregue 1 ml de solución salina tamponada con
fosfato (PBS). Esta es una dilución 1:2.
Tome 1 ml de suero del paciente A y agregue 9 ml de PBS. Esta es una dilución 1:10.
Tome 0,1 ml de suero del paciente A y agregue 9,9 ml de PBS. Esta es una dilución
1:100.
Este mismo paso se usa para B y C
En la tercera fase se prepara una placa de Elisa con 0,1ml de las diferentes disoluciones
haciendo uso de una pipeta
Este mismo paso se usa para B y C
En la cuarta fase se añade a la placa ELISA diluciones de 0,1 ml para cada título de
anticuerpo primario anti-ADN (control positivo) y un tampón (control
negativo),posteriormente en la fase cinco se incuba la placa ELISA a 37°C durante 15
minuto.
En la sexta fase se retira el líquido de cada pocillo con la pipeta y lave con 0,1 ml de
PBS,ya en la séptima fase se agrega 0,1 ml de solución tamponada que contenga
un anticuerpo secundario que reconozca anticuerpos producidos en humanos. Tenga en
cuenta que este anticuerpo secundario se fabrica en un conejo y tiene una enzima adjunta
( HRP ) que interactuará con el sustrato en el siguiente paso
En la octava fase se incuba la placa ELISA a 37°C durante 15 minutos, posteriormente se
añade 0,1 ml de solución tamponada que contenga el sustrato químico (sustrato HRP). Si
hay anticuerpos humanos presentes, el sustrato transparente se volverá amarillo.
Resultados

Esto muestra que el paciente A tenga Lupus y el paciente c es probable que no y

para el B se requieren mas pruebas
 Bibliografía

Debesa Padilla, A., & Hernández Betancourt, O. (2012). Estandarización de un

ensayo inmunoenzimático para la detección de anticuerpos anti-ADN doble
cadena en el lupus eritematoso sistémico. Revista cubana de investigaciones
biomédicas, 31(4), 467–479. http://scielo.sld.cu/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0864-03002012000400007

Coronavirus - Guía para entender las diferencias entre los principales test de
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Recuperado el 11 de septiembre de 2022, de
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