CROMATOGRAFÍA

LÍQUIDA DE ALTA
EFICIENCIA
(HPLC)
UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO
Presented by: José Contreras & Merary Fernández
Introducción
 ¿QUÉ ES LA
CROMATOGRAFÍA?
Técnica de separación de mezclas
CROMATOGRAFÍA
¿Qué es la
HPLC?
Dentro de la cromatografía ,
tenemos la técnica conocida
como HPLC, la cual hace
referencia a High pressure
liquid Chromatography o
High perfomance liquid
Chromatography
(Cromatografía líquida de
alta eficiencia)
PARTES DEL EQUIPO
 Ventajas
• Amplio rango de aplicabilidad debido a la alta disponibilidad de equipos, columnas y demás
materiales, que la hacen capaz de analizar casi cualquier mezcla deseada (Snyder, Kirkland y
Dolan, 2010).

• Alta precisión en sus resultados (±0.5 % o menor) (Snyder et ál., 2010).

• Variedad de técnicas, entre las cuales están la cromatografía por partición, adsorción,
intercambio iónico y exclusión molecular (Fallon et ál., 1987).

• No es destructiva, es decir, los compuestos separados en la columna pueden ser recolectados, lo

que permite el uso de la HPLC como una técnica de preparación o purificación de muestras
(Fallon et ál., 1987).

• Tiempo de separación menor a 30 min por muestra analizada (Fallon et ál., 1987).

• Alta reproducibilidad en los análisis cuantitativos (Dong, 2013).

• Alto poder de separación con detección sensible (Dong, 2013).

• La operación es flexible, personalizable y automatizada (Dong, 2013).

• No está restringida por la volatilidad o estabilidad térmica de la muestra (Ozores, s. f.).
 Desventajas
Es difícil de detectar coelución (dos compuestos que escapan de la tubería a la vez) con HPLC,
lo que puede dar a la categorización de compuesto incorrecto.

Existe un alto costo para el equipo necesario para llevar a cabo HPLC.

Su funcionamiento puede ser complejo y requiere un técnico entrenado para operar.

Debido a la velocidad del proceso, el equipo tiene una baja sensibilidad a algunos
compuestos.
 Procedimiento para la
determinación de compuestos
bioactivos en aceitunas mediante
HPLC
UNIVERSIDAD DE SEVILLA
ESCUELA POLITÉCNICA SUPERIOR DE SEVILLA
 Aceitunas
Drupa oleaginosa bicarpelar, con una sola
semilla generalmente.
Tiene forma elipsoidal o globosa, que
dependiendo de la variedad, tiene un
tamaño medio de 1 a 4 centímetros de
longitud y de 0.6 a 2 centímetros de
diámetro.
 COMPUESTOS BIOACTIVOS DE LA
ACEITUNA

Compuestos fenólicos Compuestos triterpénicos

representan entre el 1-5% del peso seco de este pentacíclicos
fruto.
representa aproximadamente un 0.2% del peso
los principales compuestos fenólicos presentes
seco. El ácido maslínico es el componente
son ácidos fenólicos, alcoholes fenólicos,
claramente mayoritario
flavonoides, lignanos y secoiridoides.

Azúcares y Polioles
El manitol y la glucosa, representan más del 90%
de los carbohidratos solubles totales en la
aceituna
 MATERIAL Y MÉTODOS

Cromatógrafo líquido Cromatógrafo líquido

HPLC-PAD HPLC-UV

Cromatógrafo líquido
HPLC-IR
 fraccionamiento de los
Método basado en la Método basado en la grupos de biocompuestos
homogeneización extracción en mayoritarios en extractos
en seco (Método 1) húmedo (Método 2) etanólicos de aceituna.
 Análisis de
los
componentes
bioactivos
 Determinación de Extracción e identificación de
compuestos fenólicos por los compuestos bioactivos de
HPLC-PDA la aceituna

El análisis fue llevado a cabo mediante un

programa de elución en gradiente,
utilizando:
- agua Mili-Q (0,1% de ácido fórmico)
(eluyente A)
-metanol: ACN (50:50 v/v en 0,1% de ácido
fórmico) (eluyente B)
- velocidad de flujo constante de 1 mL/min.
Aplicación de los procedimientos a frutos
de las variedades Picual y Arbequina
 CONCLUSIÓN
Los análisis de los extractos obtenidos con frutos
sembrados mostraron una relación lineal entre las
áreas de los picos y las concentraciones de los
compuestos, en el rango ensayado

las técnicas cromatográficas HPLC utilizadas en el

análisis de los diferentes grupos de compuestos han
demostrado su adecuación y sencillez
Gracias por su
atención
 References:
HTTPS://IDUS.US.ES/BITSTREAM/HANDLE/11441/6438
6/TFM_LVG_PROCEDIMIENTO.PDF

PRINCIPIOS BÁSICOS DE LA CROMATOGRAFÍA

LÍQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO PARA LA
SEPARACIÓN Y ANÁLISIS DE MEZCLAS MORALES Y.,
SUAREZ M. FUNDACIÓN UNIVERSIDAD DE AMÉRICA
REVISTA SEMILLEROS: FORMACIÓN INVESTIGATIVA,
VOL. 4 N.O 1 ENERO – DICIEMBRE DE 2018