LABORATORIO # 3

CATÁLISIS ENZIMÁTICA Y ESPECTROFOTOMETRÍA

Efecto de la concentración y catalizadores sobre la velocidad de reacción

Objetivos

Observar y determinar la variación de la velocidad de reacción con la concentración.

Observar y explicar el efecto de un catalizador sobre la velocidad de una reacción.

Diferenciar el efecto de diferentes tipos de catalizadores.

Materiales y reactivos

Solución A: KIO3 0,02 M (PM: 214,00 g/mol; Pureza: 99%; 50 mL)

Solución B: NaHSO3 0,02 M (PM: 104,07 g/mol; Pureza: 99%; 50 mL)

Solución de H2SO4 5% (v/v)-(PM: 98,08 g/mol; Pureza: 98%; Densidad: 1,84 g/mL; 50 mL)

Solución de CuSO4 .5H2O 5% (p/v)-(PM: 249,69 g/mol; Pureza: 99%; 50 mL)

Solución de almidón  Granallas de zinc  H2O2 100 vol.  1 g de Iodo  1 g de cinc  Peróxido de
hidrógeno 100 vol  Ioduro de potasio  Solución de tartrato de sodio y potasio 1M  Solución de
CoCl2·6H2O 0,25M-(PM: 237,93 g/mol; Pureza: 99%; 100 mL)  Solución de CuSO4·5H2O 0,4M-
(PM: 249,69 g/mol; Pureza: 99%; 100mL)  Catalasa: papa, hígado y espinaca  Sal de Fe (III) 
Tubos de ensayo  Pipetas  Cronómetro  Termómetro  Mechero  Trípode y tela metálica 
Erlenmeyer  Vaso de precipitado  Varilla de vidrio  Mechero.

Desarrollo experimental

Experiencia 1:

Efecto de las distintas concentraciones sobre la velocidad de reacción

En estas experiencias se estudiarán los cambios que producen la variación en la concentración de

los reactivos y/o en la temperatura sobre la velocidad de reacción 1 (a) y (b).

Etapa lenta: 𝐼𝑂3 − + 3𝐻𝑆𝑂3 − → 𝐼 − + 3𝑆𝑂4 2− + 3𝐻 + (1.a)

Etapa rápida: 5𝐼 − + 6𝐻 + + 𝐼𝑂3 − → 3𝐼2 + 3𝐻2𝑂 (1.b)

La reacción se lleva a cabo mezclando las soluciones A (𝐼𝑂3 −) y B (𝐻𝑆𝑂3 −).

La misma se realiza en presencia de almidón para poder observar la intensidad del color según la
concentración 𝐼2 en el medio, según el complejo coloreado observado en la Figura 1.
 1) Tomar 4 tubos de ensayo, numerarlos y proceder según el siguiente Tabla 1:

2) Agregar al Tubo N°1: 5,0 mL de solución B, agitar y simultáneamente cronometrar para medir el
tiempo que tarda en aparecer el color azul por el agregado de almidón. Este será el tiempo t1 en
segundos.

3) Proceder de igual modo con los restantes tubos de ensayos (N°2, N°3, N°4 y N°5), para obtener
los tiempos t2, t3, t4 y t5 (en segundos).

4) Graficar tiempo versus concentración.

Experiencia 2:

Descomposición del agua oxigenada Colocar 30 mL de agua oxigenada en una probeta de 100 mL e
introducir la misma en una fuente plástica de mayor volumen.

Luego, añadir detergente y dióxido de manganeso, ioduro de potasio.

Preguntas:

1. Escribir la reacción

2. ¿Cómo puede denotar la formación de oxígeno?

3. ¿Cómo se podría detectar que el gas que se produce es oxígeno?

4. ¿Qué sustancia actúa como catalizador?

Experiencia 3: Oxidación del tartrato de sodio y potasio con agua oxigenada

Disolver 2,5 g de tartrato de sodio y potasio en 60 mL de agua destilada. Mezclar con 20 mL de

peróxido de hidrógeno, calentar a 70°C y observar lo que ocurre.

A continuación, añadir aproximadamente 5 mL de agua de solución de cloruro de cobalto (II), con

mucho cuidado porque inmediatamente se activa la reacción.

Anotar y explicar lo sucedido.

Experiencia 4: Funcionamiento de la catalasa

En los experimentos siguientes se estudiará el funcionamiento de la enzima catalasa.

La misma pertenece a la categoría de las oxidorreductasas y está presente en casi todas las células
aeróbicas. Esta enzima utiliza como cofactor al grupo hemo y al manganeso y actúa
descomponiendo peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno, según la reacción (2).

En esta experiencia se prepararán varios homogenados para obtener partículas pequeñas y

uniformes al mezclarlas con el agua.

1. Para preparar los homogenados, corte en pedazos por separado las muestras de papa, hígado y
espinaca.

2. Usando una licuadora o mortero, muela el material con un poco de agua hasta diluir parte de la
muestra; no muela excesivamente para que no queden pedazos muy pequeños del material (al
final la papa ya que se oxida fácilmente).

3. De ser necesario, filtre el macerado con una gasa.

4. Coloque cada homogenado en un tubo de ensayo.

5. Tome cinco tubos de ensayo y agregue 5 mL de agua oxigenada deje uno de blanco, a otro
añádale alguna sal de Fe (III) y a los tres restantes adiciónele respectivamente cada uno de los
homogeneados.

6. Observe los tubos y comente lo que puede estar ocurriendo.

II PARTE PRINCIPIOS DE EDPECTROSCOPIA UV-VIS

1. Lave cuidadosamente las celdas con agua destilada procurando tocarlas solamente por la
parte opaca para no interferir en las mediciones.
2. Encienda el espectrofotómetro y espere los 15 minutos.
3. Coloque una celda con agua destilada para corregir el blanco a analizar.
4. Prepare 0.25 ppm de cada colorante agregando 25 microlitros de colorante en matraces de
100 mL.
5. Coloque la muestra de cada colorante en la celda y mida en barrido para obtener la
máxima absorbancia de cada colorante.
6. Presente los resultados.

III PARTE. Determinación de vitamina C en los alimentos por yodometría

Fundamentos del método

¿Qué es la yodometría?

La yodometría es un tipo particular de volumetría redox. A su vez, la volumetría redox es una

técnica que se basa en la reacción rápida y cuantitativa entre un agente oxidante y un agente
reductor, pudiendo ser cualquiera de los dos el analito y cualquiera el titulante.

El agente titulante

En el caso de la yodometría, el agente titulante es una disolución de yodo molecular (I 2) de

concentración conocida, el cual se ha solubilizado en l forma del ion triyoduro (I 3–). Esto se logra
por medio de la reacción del yodo con iones yoduro, lo que aumenta su solubilidad en agua:

A pesar de que esta reacción facilita la disolución del yodo elemental en agua, el triyoduro
generalmente se genera in situ  por medio de la oxidación de iones yoduro utilizando yodato de
potasio como agente oxidante, según la siguiente reacción:

Esta reacción se puede utilizar para generar triyoduro de manera cuantitativa para obtener así una
disolución de concentración conocida de esta especie oxidante para utilizar como agente titulante
del ácido ascórbico.

El analito – ácido ascórbico o vitamina C

El ácido ascórbico es un compuesto orgánico de fórmula molecular C 6H8O6. Su estructura se

muestra en la siguiente figura:
Es compuesto es fácilmente oxidable gracias a la estructura que posee dos enoles vecinales que
son fácilmente oxidables a las respectivas cetonas, incluso con agentes oxidantes leves.

La reacción de la titulación

Como toda volumetría, la yodometría se basa en una reacción química rápida que transcurre de
manera cuantitativa. Esto quiere decir que la reacción progresa hasta completarse, consumiendo
completamente todo el reactivo limitante, lo que permite lleva a cabo cálculos estequiométricos
exactos.

En el caso del presente experimento, el agente oxidante es el yodo, el cual se encuentra en la

disolución en forma de triyoduro, como se mencionó anteriormente. La semirreacción de
reducción del yodo es:

Por su parte, el analito es el ácido ascórbico, el cual se oxida a ácido dehidroascórbico por medio
de la oxidación de dos de sus grupos hidroxilo y liberando dos electrones y dos protones, como se
muestra a continuación:

Funcionamiento del indicador

Como en toda titulación, se debe tener alguna forma de detectar el punto final de la misma. Para
esto, se suelen utilizar indicadores, los cuales son sustancias químicas que reaccionan con el exceso
de titulante o que sufren algún otro cambio observable al alcanzar el punto de equivalencia. En el
caso de las yodometrías, el indicador consiste en una disolución de almidón. Este compuesto
forma un complejo con los iones triyoduro que posee un color azul oscuro muy intenso, casi negro.

Durante la titulación, el triyoduro agregado desde la bureta reacciona con el analito

transformándose en yoduro, evitando así la formación del complejo coloreado con el almidón. Sin
embargo, al alcanzar el punto de equivalencia y consumir todo el ácido ascórbico presente, la
siguiente gota de titulante tendrá un exceso de triyoduro que no se reducirá a yoduro, por lo que
inmediatamente se formará el complejo negro dando un cambio de color dramático a la
disolución.
Materiales y reactivos

Para la determinación de vitamina C en los alimentos utilizando la titulación con yodo se requieren
los siguientes reactivos:

 Yodato de potasio (KIO3)

 Yoduro de potasio (KI)

 Ácido sulfúrico 1 M

 Almidón

 Muestras de alimentos. Estas pueden ser jugos de frutas cítricas, vegetales, pulpa de fruta,
etc.

Además de los reactivos, también se necesitan los siguientes materiales e instrumentos de

laboratorio:

 Matraces Erlenmeyer de 250 mL.

 Balones aforados de 100 mL, 200 mL y 500 mL.

 Pipetas volumétricas de 10mL y 20 mL.

 Pipeta graduada de 50 mL.

 Vasos de precipitado de 500 mL y 100 mL.

 Bureta de 25 mL.

 Mortero de porcelana.

 Embudo de vidrio.

 Papel de filtro.

 Balanzas

 Balanza analítica.

 Plancha de calentamiento.

Protocolo de titulación de ácido ascórbico por yodometría

Preparación del agente titulante (I2 0,01 M)

Se prepararán 500 mL de disolución de triyoduro de potasio 0,005 M como sigue:

1. Pesar 7 g de yoduro de potasio y transferirlos a un beaker  o vaso de precipitado de 500mL

que contenga 200mL de agua desionizada. Agitar hasta disolver completamente.

2. Utilizando una pipeta graduada, transferir al beaker  anterior 100 mL de ácido sulfúrico 1 M
a la disolución anterior y agitar.
 3. Pesar con exactitud 1,0700 g de yodato de potasio en un pesa sustancias y transferirlos al
mismo beaker, asegurando de arrastrar toda la sal con agua desionizada utilizando una
piseta. Disolver completamente.

4. Transferir la disolución cuantitativamente a un balón aforado de 500 mL, asegurándose de

enjuagar bien las paredes del beaker  con agua desionizada repetidas veces.

5. Llenar el balón hasta la marca de aforo utilizando primero un vaso de precipitado y luego
una piseta. Agitar, tapar con un tapón de vidrio y reservar.

NOTA: Para resultados más exactos, se recomienda estandarizar esta disolución antes de titular las
muestras o después de ello. Esto se puede hacer, por ejemplo, valorando una disolución de
vitamina C de concentración conocida.

Preparación del indicador

El indicador es una disolución de almidón al 0,25 % m/V. Esta se debe preparar poco antes de la
titulación de la siguiente manera:

1. Pesar 0,25 g de almidón y se transfieren a un vaso de precipitado de 100 mL.

2. Se agregan, con una pipeta graduada, 50 mL de agua desionizada.

3. Se calienta hasta la ebullición sobre una plancha de calentamiento bajo agitación

constante hasta disolver completamente.

4. Se deja enfriar y se reserva para su uso durante la titulación. Si se desea, se puede

transferir a un recipiente cerrado para evitar su contaminación.

Preparación de las muestras a analizar

El presente protocolo se puede utilizar para determinar la concentración de vitamina C tanto en

muestras de tabletas de vitamina C, jugos o extractos líquidos de frutas y otros vegetales, o
también de muestras sólidas tales como pulpa de fruta, raíces, etcétera.

El proceso de preparación de la muestra varía según el caso. A continuación, se presenta el

procedimiento para tres casos típicos:

Muestra de tabletas de vitamina C

1. Pesar una tableta de vitamina C, triturarla y transferirla a un vaso de precipitado de 200

mL.

2. Agregar 150 mL de agua y agitar hasta disolver completamente. Es esencial asegurarse de

que no queden residuos en el fondo del beaker.

3. Llenar el balón aforado hasta la marca de aforo, tapar, revolver y reservar para su análisis
en un lugar oscuro, ya que la vitamina C es sensible a la luz solar.

4. Transferir esta disolución cuantitativamente a un balón aforado de 200 mL, enjuagando

con agua desionizada mediante una piseta. Asegúrese de no agregar demasiada agua
durante el enjuague para evitar pasarse de 200mL
Muestra de jugo de fruta

Los jugos y extractos de fruta se pueden titular directamente sin llevar a cabo la dilución. Sin
embargo, independientemente de que se trate de jugos naturales o industriales, se aconseja filtrar
la disolución antes de titular, para evitar que cualquier resto de pulpa pueda obstruir las pipetas
utilizadas durante el procedimiento experimental.

NOTA:

1. Realizar el procedimiento para 4 marcas de jugos industriales de diferentes

marcas.

Muestras de fruta fresca o de pulpa de fruta

1. Cortar y pesar 100 g de pulpa de fruta y agregarlos a un mortero triturando

enérgicamente.

2. Agregar porciones de 10 mL de agua desionizada mientras se tritura, decantando la

disolución sobrenadante en un beaker  de 100 mL pasándolo primero por un filtro.

3. Repetir el procedimiento anterior por lo menos 5 o 6 veces, asegurándose de triturar bien

entre una y otra adición de agua desionizada.

4. Transferir el extracto filtrado a un balón aforado de 100 mL y llenar hasta la marca de aforo
con agua desionizada haciendo uso de la piseta.

NOTA: Realizar el procedimiento para 2 muestras de fruta fresca (puede ser naranja y toronja o
alguna otra de su elección que contenga vitamina C.

Procedimiento de la titulación

1. Transferir una alícuota de 10 mL de la muestra respectiva (preparada según los pasos

anteriores) a un erlermeyer de 250 mL utilizando una pipeta volumétrica.

2. Agregar 100 mL de agua desionizada y 1 mL del indicador de almidón.

3. Titular la alícuota con la disolución de triyoduro utilizando una bureta hasta que la
disolución en un erlermeyer hasta que cambie de color a un color azul oscuro, casi negro.

4. Tome nota del volumen de titulante gastado y repita el procedimiento 2 veces más para
obtener así un volumen promedio de titulante.
Cálculos del contenido de ácido ascórbico en las muestras

Dado que la relación estequiométrica entre el titulante y el analito es de 1:1, en el punto de

equivalencia podemos decir que los moles de ambos son iguales, es decir:

En la fórmula anterior se debe colocar el volumen del titulante en mL. Esta concentración puede
transformarse a un porcentaje o a un contenido por unidad según el tipo de muestra que se trate,
como se demuestra a continuación.

Muestra de tabletas de vitamina C

La concentración de la alícuota obtenida gracias a la titulación se puede convertir en la cantidad de

vitamina C en la tableta tomando en cuenta que la misma se disolvió en un volumen total de 200
mL y que la masa molar del ácido ascórbico es de 176,12 g/mol:

Muestra de jugo de fruta

En este caso, la concentración molar de la vitamina C en el jugo es directamente la obtenida para la

alícuota, así que la masa por cada 100 mL de jugo se puede obtener de la siguiente forma:

Esta fórmula da como resultado los gramos de vitamina C por cada 100 mL de jugo o extracto.

Muestras de fruta fresca o de pulpa de fruta

Al igual que en el caso de la tableta, en este caso se toma en cuenta que la vitamina C de los 100 g
de pulpa está disuelta en 100 mL de disolución, de los cuales se tomaron las alícuotas para su
análisis. Entonces, la concentración de vitamina C por cada 100 g de pulpa viene determinada por:

Si se desea transformar esta cantidad a gramos de vitamina C por cada unidad de una fruta, se
debe multiplicar el resultado anterior por la masa total de pulpa de una unidad de fruta y dividir
entre 100 g.
Referencias

Ikewuchi, C. J. (2011). Iodometric determination of the ascorbic acid (Vitamin c) content of some

fruits consumed in a university community in Nigeria | Global Journal of Pure and Applied Sciences.
Global Journal of Pure and Applied
Sciences. https://www.ajol.info/index.php/gjpas/article/view/78733

Royal Society of Chemistry. (2018, agosto). Measuring the amount of vitamin C in fruit drinks.
RSC.org. https://edu.rsc.org/download?ac=11742

Se, C. (s. f.). Yodimetria – PDF Free Download. Qdoc.Tips. https://qdoc.tips/yodimetria-pdf-

free.html

Silva, C. R., Simoni, J. A., Collins, C. H., & Volpe, P. L. O. (1999). Ascorbic Acid as a Standard for
Iodometric Titrations.  An Analytical Experiment for General Chemistry. Journal of Chemical
Education, 76(10), 1421. https://pubs.acs.org/doi/10.1021/ed076p1421

Skoog, D. (2021). Quimica Analitica (7.a ed.). MCGRAW HILL EDDUCATION.

University of Canterbury. (s. f.). Determination of Vitamin C Concentration by Titration.

www.canterbury.ac.nz. https://www.canterbury.ac.nz/media/documents/science-outreach/
vitaminc_iodine.pdf