COMPLEJO MULTIFUNCIONAL

AVANZADO DE PRÁCTICAS Y
SIMULACIÓN

EQUIPOS DE LABORATORIO ENFERMERÍA V2.1-Enero-2020

TABLA DE CONTENIDO

GUÍA DE PRÁCTICA
COMPLEJO MULTIFUNCIONAL AVANZADO
DE PRÁCTICAS Y SIMULACIÓN

Título de la Guía 2
1. Problema 2
2. Justificación 2
3. Objetivo Principal 2
3.1. Objetivos Específicos 3
4. Precauciones 3
5. Material Necesario 3
6. Procedimiento 3
7. Actividades de Aprendizaje 4
8. Cuestionario 5
9. Bibliografía 5

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GUÍA DE PRÁCTICA COMPLEJO MULTIFUNCIONAL AVANZADO

DE PRÁCTICAS Y SIMULACIÓN

EQUIPOS DE LABORATORIO

1. PROBLEMA
Para determinar la concentración de glucosa de un paciente se debe
tomar una muestra de sangre y realizar dicha determinación. Como
sabemos dentro de la sangre encontramos varios tipos de células,
entre ellas los eritrocitos o glóbulos rojos. Estas células captan la
glucosa que se encuentra en la sangre ya que la necesitan para su
funcionamiento bioquímico.

Si se toma la muestra de sangre y se deja en el tubo para hacer la

determinación de glucosa, los glóbulos rojos consumirán la glucosa
presente en la sangre y por lo tanto se obtendrá una medida errónea
de este carbohidrato en sangre.

2. JUSTIFICACIÓN
Un laboratorio es un lugar equipado con diversos instrumentos de
medida o equipos donde se realizan experimentos o investigaciones
diversas, según la rama de la ciencia a la que se dedique. También puede
ser un aula o dependencia de cualquier centro docente acondicionada
para el desarrollo de clases prácticas y otros trabajos relacionados con
la enseñanza.

Su importancia, sea en investigaciones o a escala industrial y en

cualquiera de sus especialidades (química, dimensional, electricidad,
biología, etc.) radica en el hecho de que las condiciones ambientales
están controladas y normalizadas, de modo que: Se puede asegurar que
no se producen influencias extrañas (a las conocidas o previstas) que
alteren el resultado del experimento o medición: Control. Se garantiza
que el experimento o medición es repetible, es decir, cualquier otro
laboratorio podría repetir el proceso y obtener el mismo resultado:
Normalización.

3. OBJETIVO PRINCIPAL

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- Identificar los principales equipos del laboratorio clínico, su

funcionamiento, cuidados y aplicación en la práctica.

3.1. OBJETIVOS ESPECÍFICOS

- Conocer los fundamentos de la centrifugación y su aplicación en el
laboratorio.
- Identificar los diferentes tubos utilizados en el laboratorio y su utilidad
en la obtención de las muestras (plasma, suero y sangre total).
- Conocer los principios de espectrofotometría y su aplicación en el
análisis de muestras biológicas.
- Aprender a manipular una pipeta automática.
- Identificar las principales partes de un microscopio, manejo y
cuidados.

4. PRECAUCIONES
Aplicar debidamente las pautas y normas de bioseguridad antes, durante
y después de cada uno de los procedimientos a realizar en el laboratorio.

5. MATERIAL NECESARIO
- Elementos de protección personal (guantes de manejo, gafas y
tapabocas).
- Guía de laboratorio.
- Tubos vacutainer tapa lila, tapa amarilla, tapa azul, tapa gris, tapa
verde, tapa crema, etc.
- Todo el equipo para toma de muestra por venopunción.
- Gradillas, Tubos de vidrio.
- Centrífuga, espectrofotómetro, pipetas automáticas, microscopio,
balanza.
- Solución Concentrada azul de metileno u otro colorante.

6. PROCEDIMIENTO
-CENTRIFUGACIÓN:
Toma de muestra de sangre: Observe detenidamente la venopunción
que realizará el facilitador. Se tomarán dos muestras de sangre:

a. En tubo sin anticoagulante.

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b. En tubo con anticoagulante (Leer en la etiqueta del tubo el

anticoagulante que contiene).
c. Centrifugar (preste atención a las indicaciones que dará el facilitador
sobre el manejo de este equipo).
d. Observe y discuta con sus compañeros lo sucedido y obtenido en
cada uno de los tubos.

-ESPECTROFOTOMETRÍA:
a. Se tienen soluciones de diferentes concentraciones diluyendo el azul
de metileno con agua destilada.
b. El blanco de reactivo será agua destilada para la lectura en el
espectrofotómetro.
c. Lea la Absorbancia de cada una de las concentraciones de la solución
contra el blanco.
d. Con los datos obtenidos construya en papel milimetrado la curva de
calibración graficando concentraciones de Azul de Metileno en la abscisa
(eje X) y absorbancias obtenidas en la ordenada (eje Y).
e. Calcular la concentración de las muestras problema mediante la
gráfica y mediante la fórmula.

-BALANZA:
I- Prepare 100ml de una solución 0.5M de NaCl. Rotular el recipiente
con la siguiente información:
*Nombre de la solución
*Concentración
*Fecha de preparación

II- Preparar 100ml de una solución de NaCl al 0.9%, NaCl al 0.2%,

NaCl al 1.5%.

-MICROSCOPÍA:
1. Ubicar en su microscopio cada una de las partes.
2. Encendido del microscopio.
3. Obtención de la muestra en fresco (ej. células epiteliales de la
mucosa oral).
a. Con un bajalenguas limpio y nuevo raspe suavemente el
interior de la mejilla.

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b. Coloque el material obtenido sobre una gota de solución salina

en una lámina limpia.
c. Coloque una laminilla cubreobjetos, poniéndola en un ángulo
de 45 grados.
d. Añada una gota de azul de metileno por un lado de la laminilla
y permita que el tinte penetre la preparación.
4. Ajuste los lentes y enfoque la muestra en “fresco” a diferentes
aumentos. Discuta lo observado.
5. Ajuste los lentes y enfoque una preparación citológica teñida
(facilitada por el docente) a diferentes aumentos, hasta llegar al objetivo
de inmersión ó 100X. Discuta lo observado.
6. Apagado y revisión de cuidados.

-PIPETEO:
Teniendo en cuenta lo revisado en la literatura y las instrucciones del
facilitador:
a. Dispense en tubos de ensayo cantidades decrecientes de
solución de Azul de Metileno: 2ml, 1.5ml, 1ml, 0.5ml y 250l.
b. Preparar 1ml de una solución de NaCl al 0.9%, partiendo de
una solución stock de NaCl que se encuentra al 1.5%.

7. ACTIVIDADES DE APRENDIZAJE
- Evaluación: Al iniciar la práctica el estudiante debe resolver un pre test
de 1 ó 2 preguntas, teniendo en cuenta los parámetros establecidos para
su planteamiento con el fin de valorar y estimular la preparación
conceptual del tema de la práctica.

- Socialización del tema: En la primera parte de la práctica, el docente y

los estudiantes socializan el tema a desarrollar en el laboratorio con el
objetivo de aclarar los procedimientos y las dudas del tema. Si es
necesario, el docente hará la demostración directa ó a través demedios
audiovisuales (si están disponibles), del procedimiento propiode la
práctica.

- Alineamiento de las guías con el PDI: Teniendo en cuenta los

requerimientos del Plan de Desarrollo Institucional trazado por la
universidad, se instaura en la bibliografía libros o artículos en segunda

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lengua (inglés) que deberán ser revisados por el estudiante ya que son
susceptibles de tener control de lectura (pre test).

8. CUESTIONARIO ORIENTACIÓN
Permite al estudiante reflexionar el tema desarrollado en la práctica.
Teniendo en cuenta el problema de ambientación, lo aprendido en la
práctica y la bibliografía relacionada, desarrolle la siguiente actividad:

1. Haga un cuadro relacionando las distintas clases de tubos

recolectores de muestras sanguíneas, su constitución e identificación
y ejemplos de exámenes a realizar con cada uno ellos.

2. Con base a lo observado y al conocimiento previo determine cuáles

son las diferencias entre el suero y el plasma.

3. Consulte: ¿Cuáles clases de centrífugas existen y cuál es su

aplicabilidad en el área de la salud?.

4. Consulte ¿Cuáles clases de pipetas existen y cuál es su aplicabilidad

en el área del laboratorio clínico?.

5. Plasme el esquema de un microscopio óptico con sus principales

partes y funcionalidades.

6. ¿Cuáles son las características singulares, sus diferencias más

notables y los principales componentes del Microscopio Óptico y del
Microscopio Electrónico?.

7. De manera resumida describa la utilidad de la espectrofotometría en

el laboratorio clínico y explique con un ejemplo. ¿Qué diferencia hay
entre absorbancia y transmitancia?.

9. MARCO TEÓRICO

MICROSCOPÍA:
El descubrimiento y estudio temprano progresó con la invención y
mejora de los microscopios en el siglo XVII. Los microscopios de varios
tipos son aún herramientas indispensables para el estudio de las

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células. Los microscopios primero usados en el Renacimiento tanto como

los que son utilizados en los laboratorios hoy, son microscopios ópticos.
La luz visible pasa a través de la muestra y de las lentes de vidrio por
donde la luz es refractada (“doblada”) de tal manera, que la imagen del
espécimen es amplificada cuando se proyecta en el ojo.

Dos valores importantes en microscopía son el Aumento y el Poder de

Resolución. Entendemos por aumento a las dimensiones aparentes de
los objetos comparados con su tamaño real. El poder de resolución es
la medida de la nitidez de la imagen; es la capacidad del instrumento
para brindar imágenes distintas de dos puntos cercanos.

El microscopio óptico nunca puede resolver detalles menores a 0,2m,

la medida de una pequeña bacteria. Esta resolución es limitada por la
longitud de onda de la luz visible usada para iluminar la muestra. Los
microscopios ópticos o de luz pueden aumentar efectivamente alrededor
de 1000 a 1500 veces el tamaño de la muestra real; si se incrementase
el aumento la imagen proyectada sería borrosa. La mayoría de las
mejoras en microscopía de luz del comienzo de este siglo ha involucrado
nuevos métodos para aumentar el contraste. Sin estas técnicas sería
imposible para el ojo humano el conocimiento del mundo celular.

Se pueden utilizar ingeniosamente las propiedades ondulatorias de la luz

aumentando el contraste de las estructuras transparentes. Asísurgieron
varias clases de microscopios ópticos convirtiéndose en herramientas
destacadas en el estudio de la célula. Más aún, si se considera la
posibilidad de que algunos componentes de la célulapuedan perderse o
distorsionarse durante la preparación de la muestra.En consecuencia, el
examen de la célula viva (sin fijación ni congelación) resulta útil.

La mayoría de las organelas son demasiado pequeñas para ser

visualizadas por la microscopía de luz. La Biología Celular avanzó
rápidamente hace un poco más de cincuenta años con la introducción
del Microscopio Electrónico. En lugar de luz visible, el microscopio
electrónico utilizó un haz de electrones a través de la muestra. El poder
de resolución está inversamente relacionado con la longitud de onda (l)

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de la radiación que un microscopio usa y un haz de electrones tiene

longitudes de onda mucho más cortas que la luz visible. Para mayores
precisiones al respecto.

El desarrollo de la biología celular y molecular se produce en forma

paralela a la invención de instrumentos y técnicas biofísicas y
bioquímicas que extienden los sentidos a nuevos límites y acrecientan
el conocimiento de la estructura y funcionamiento de la célula. El
acceso a este tipo de conocimiento resulta dificultoso pues las células
son pequeñas y transparentes. El ojo humano sólo puede discriminar dos
puntos separados por más de 0,1mm ó 100 micrómetros (m). La
mayoría de las células son mucho más pequeñas y se necesita del
microscopio óptico cuyo límite de resolución es de 0,2 m. Para
estructuras más pequeñas, que midan entre 0,4 y 200 nm, se requiere
del microscopio electrónico.

-Medidas en Microscopía:
Unidad Símbolo Equivalencia en Metro Utilización en Citología
(m)
Centímetro cm 0,01 m Objetos macroscópicos a simple
vista. Huevos grandes.
Milímetro mm 0,001 m Objetos macroscópicos a simple
vista. Células muy grandes.
Micrómetro m 10-6 m Microscopia de luz (óptica).
Casi todas las células y
organelos grandes.
Nanómetro nm 10-9 m Microscopia electrónica.
Organelas pequeñas,
macromoléculas grandes.
Angstrom Å 10-10 m Microscopia electrónica. Métodos
de difracción de rayos X.
Moléculas y átomos.

Por lo tanto: 1m = 102cm = 103mm = 106m = 109nm

La mayoría de los componentes de la célula viva son transparentes

debido a su alto contenido de agua. Al disecarla no presenta un
significativo contraste. Entonces la tinción selectiva de ciertos
componentes celulares resuelve el problema del contraste. Sin embargo
la mayoría de estas técnicas conduce a la muerte de la célula y aún más,
a cambios químicos y morfológicos que no se encuentran

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en las células activas y en la matriz extracelular. Algunos pigmentos

del citoplasma y de organoides vegetales pueden absorber determinadas
longitudes de onda (l) y no necesitan de previo tratamiento para su
observación al microscopio óptico.

Para el estudio de la célula viva se emplean técnicas ópticas especiales

como, por ejemplo, la microscopia de contraste de fase o la de
interferencia. Los microscopios de contraste de fase y de interferencia
son sistemas ópticos especiales que logran intensificar la escasa
interferencia y proporcionan mayor contraste que el obtenido con un
microscopio óptico común.

En el microscopio de campo oscuro, el haz luminoso se proyecta

oblicuamente y los sistemas de lentes detectan la luz reflejada por la
muestra que se ve como un objeto brillante contra un fondo oscuro,
lográndose un gran relieve de rasgos de la célula que son invisibles en
el microscopio óptico.

El microscopio de luz polarizada puede proveer datos sobre la estructura

a nivel molecular de las células y los tejidos no sólo en las células vivas
sino en preparados post-mortem. Ciertos componentes celulares y
tisulares se comportan peculiarmente cuando la luz polarizada (luz que
gira únicamente en un plano) los atraviesa.

Cuadro comparativo de Niveles de Organización a Nivel

Microscópico

En el nivel macromolecular, la difracción de rayos X resulta ser la

técnica más adecuada para estudiar la configuración molecular de

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proteínas, de ácidos nucleicos y de algunos entes prebióticos tales

como los virus.

La mayoría de los microscopios electrónicos modernos pueden lograr una

resolución de 0,2nm, unas 1000 veces mejor que la obtenida conel
microscopio óptico. Los biólogos usan el término ultraestructura
celular para referirse a la anatomía celular cuando se resuelve por un
microscopio electrónico. Hay dos tipos de microscopio electrónico: el
microscopio electrónico de transmisión (MET) y el microscopio
electrónico de barrido (MEB):

- El MET permite develar la ultraestructura de las células y de la matriz

extracelular. El haz de electrones es desviado por un campo
electromagnético (que actuaría como lente). En este tipo demicroscopia
se requiere que las muestras tengan un grosor de 100 nm.

- El MEB es especialmente útil para estudios de superficie del

espécimen. El haz de electrones explora la superficie de la muestra la
que usualmente se recubre con una película de oro. El haz excita a los
electrones sobre la superficie de la misma muestra y estos electrones
secundarios se recolectan y enfocan sobre una pantalla. Esto forma
una imagen de la topografía del espécimen. Un importante atributo del
MEB es su gran profundidad de campo, la cual resulta en una imagen
tridimensional.

El ME revela muchas organelas que son imposibles de resolver con MO.

Pero el MO ofrece muchas ventajas especialmente para el estudio de la
célula viva. Una desventaja de ME es que los métodos químicos y
físicos usados para preparar la muestra, no sólo matan a las células sino
que puedan introducir artefactos, estructuras peculiares vistas en
micrografías que no existe en una célula viva.

CENTRIFUGACIÓN:
Los compuestos químicos que constituyen la célula pueden ser
detectados, descritos y localizados dentro y fuera de la célula mediante
métodos adaptados de la Química Analítica. Las técnicas aislamiento y
separación específica de células, organelas y macromoléculas y el
preparado de cultivos celulares para el estudio detallado son

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herramientas invalorables para el avance de la biología celular y

molecular.

La centrifugación es un método que utiliza la propiedad de

sedimentación de partículas con base en la masa de las moléculas para
la separación de partículas de una solución. Una vez obtenido el lisado
o homogenizado celular se ha de proceder a su fraccionamiento. Una
de las técnicas más empleadas es la centrifugación. Se basa en hacer
girar el tubo a gran velocidad de forma que se produzca la acumulación
en el fondo del mismo de las partículas que tienden a hundirse por tener
una densidad menor que la del medio en que se encuentran.

Así, después de la centrifugación la muestra, homogénea, se habrá

separado en dos fracciones: Sobrenadante (supernatant), fracción
homogénea que no ha sedimentado, y el Sedimento (pellet) que ha
quedado adherida al fondo del tubo. La fuerza centrífuga es aplicada a
cada partícula de la muestra la cual será sedimentada en un índice que
es proporcional a la fuerza centrífuga aplicada.

Las centrífugas son instrumentos que permiten someter a las muestras

a intensas fuerzas que producen la sedimentación en poco tiempo de
las partículas que tienen una densidad mayor que la del medio que las

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rodea. En general se diferencian en función de los márgenes de

aceleración a que someten a las muestras en: Centrífugas (de pocas g
a aprox. 3000g), super-centrífugas (o centrífugas de alta velocidad,
rango de 2000g a 20000g) y ultracentrífugas (de 15000g a 600000g).

En las centrífugas se suele controlar la temperatura de la cámara para

evitar sobrecalentamiento de las muestras debido a la fricción. En las
ultracentrífugas, la velocidad extrema (más de 100000rpm), hace que
sea necesario hacer un intenso vacío en la cámara de la centrífuga para
evitar el calentamiento de rotor y muestra. En una centrífuga el
elemento determinante es el rotor, dispositivo que gira y en el que se
colocan los tubos. Existen varios tipos de rotor:

• Rotor basculante: Los tubos se colocan en un dispositivo (cestilla)

que, al girar el rotor, se coloca en disposición perpendicular al eje de
giro. Así pues los tubos siempre giran situados perpendicularmente
al eje de giro.
• Rotor de ángulo fijo: Los tubos se insertan en orificios en el interior
de rotores macizos. El caso extremo es el de los rotores verticales en
los que el tubo se sitúa paralelo al eje de giro. Este tipo de rotores es
típico de ultracentrífugas y se emplea en separaciones de moléculas
en gradientes de densidad autogenerados (por ej. decloruro de cesio).

Los parámetros a tener presentes en cualquier centrifugación, que

determinarán las condiciones son:
• Volumen de solución a centrifugar, que determinará el tipo de tubos
y rotores a emplear.
• Naturaleza química de la solución, que determinará la naturaleza del
tubo a emplear.
• Diferencial de densidad entre la partícula a sedimentar y la densidad
del medio en el que se encuentra. En general cuanto mayor sea esa
diferencia antes, menor tiempo y menor fuerza de aceleración habrá que
aplicar al sedimentar. Cuando el diferencial es muy pequeño se pueden
aplicar centrifugaciones de cientos de miles de g durantehoras.

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Todo rotor tiene unas propiedades que determinan las condiciones en

que se podrá centrifugar la muestra. Son especialmente importantes el
ángulo de giro, el radio mínimo, medio y máximo, y la velocidad
máxima de giro. La relación entre la velocidad de giro, medida en
revoluciones por minuto (rpm) y la fuerza de aceleración (fuerza
centrífuga relativa, RCF: relative centrifuge force) a que se somete la
muestra (g) se recoge en la expresión siguiente:

RCF = 1.118 * 10-5 * r * (rpm)2

Centrifugación Diferencial: La centrifugación diferencial se basa en la

existencia de diferentes partículas en la suspensión que difieren en su
densidad de la del medio. Si se centrifuga en condiciones suaves (poco
tiempo, poco fuerza de aceleración) sedimentarán las partículas mayores
y/o más densas.

Cuando el sobrenadante de la primera centrifugación es centrifugado

de nuevo en condiciones de más tiempo y más fuerza de aceleración,
sedimentan de nuevo las partículas más densas presentes y así
sucesivamente. Se pueden aplicar condiciones crecientes de severidad
en la centrifugación y obtener una colección de sedimentos que
corresponden sucesivamente a fracciones de partículas de diferente
tamaño y/o densidad.

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BALANZA:
Es un aparato basado en métodos mecánicos tiene una sensibilidad de
una décima de gramo. La balanza analítica es un instrumento utilizado
en Química, que sirve para medir la masa. Su característica más
importante es que poseen muy poca incertidumbre, lo que las hace
ideales para utilizarse en mediciones muy precisas. Las balanzas
analíticas generalmente son digitales, y algunas pueden desplegar la
información en distintos sistemas de unidades. Por ejemplo, se puede
mostrar la masa de una sustancia en gramos, con una incertidumbre
de 0.00001g. (0,01mg).

La masa de un cuerpo se mide corrientemente comparando el peso del

cuerpo con el peso de cuerpos de masas conocidas, denominadas
pesas. Dependiendo del trabajo que se quiera realizar, se selecciona el
tipo de balanza más adecuada en cuanto a sensibilidad y rapidez en la
pesada. La sensibilidad de una balanza depende de su capacidad: Una
balanza diseñada para pesar kilogramos difícilmente tendrá la
sensibilidad necesaria para tener reproducibilidad en pesadas de
miligramo.

Clases de Velocidad de
Capacidad Sensibilidad Tipos
balanzas pesada
triple
granataria 2600g 0.1 – 0.01g moderada
brazo
analítica 200g 0.1mg un platillo alta
semimicro 100 0.01mg un platillo alta
micro 30g 1g un platillo alta

Dependiendo de la forma de construcción de

la balanza, éstas pueden ser de doble plato o
de un solo plato. Las balanzas de doble plato
tienden al desuso, las balanzas de un solo
plato, tienen un peso fijo a un lado de la
balanza llamado contrapeso y unas pesas
cambiables al otro lado.

Al usar la balanza deben tenerse en cuenta las siguientes normas:

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• Manejar con cuidado la balanza ya que es costosa y sumantenimiento

también.
• No pesar sustancias químicas directamente sobre el platillo; usar una
pesa sustancias, un beaker, un papel para pesar, un vidrio de reloj o
algún otro recipiente.
• No derramar líquidos sobre la balanza.
• Ajustar el cero de la balanza, solicitar instrucción al profesor o al
técnico pues cada balanza tiene su modo de operar.
• Después de pesar, regresar todas las pesas a cero (descargar la
balanza).
• Pesar el objeto o sustancia a la temperatura ambiente. ¿Por qué?.
• Limpiar cualquier residuo de productos químicos que estén en la
balanza o en el área de la balanza.

PIPETEO:
Revisar: Clases de pipetas y Forma de
pipeteo.

Los resultados del pipeteo pueden verse

fácilmente afectados por la técnica delusuario.
Para obtener los mejores resultados es
necesario adquirir una buena técnica en el
pipeteo. El pipeteado es una de las actividades que más se llevan a
cabo en el laboratorio. La elección de la pipeta
adecuada es decisiva para la realización exacta y sin
esfuerzos de estas actividades repetitivas.

Algunos concejos al momento de pipetear:

- Mantenga la pipeta siempre en posición vertical al
aspirar, si no la columna de líquido es más baja que en
la calibración y se aspira demasiado líquido. Al
dispensar manténgala pipeta algo inclinada hacia el
borde del recipiente para garantizar que el líquido se
escurra totalmente. Más consejos acerca de la
dispensación en nuestro próximo boletín electrónico.

Los resultados se pueden mejorar hasta un 2%, especialmente con

pipetas de microvolumen.

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- Ajuste el micrómetro siempre en el mismo sentido. Preferiblemente,

siempre desde arriba hacia abajo: Para reducir el volumen, ajuste el
micrómetro en el sentido de las agujas del reloj hasta el volumen
deseado. Para aumentar el volumen, gire con cuidado el micrómetro tres
puntos sobre el volumen deseado. A continuación, vuelva a situarlo en
el volumen deseado. Un ajuste correcto del volumen mejorala precisión
hasta un 0.5%.

ESPECTROFOTOMETRÍA:
Revisar: Colorimetría y Espectrofotometría, Transmitancia y
Absorbancia, Curva Espectral y Curva de Calibración, Ley de Lambert-
Beer.

La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más

utilizadas para la detección específica de moléculas. Se caracteriza por
su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta
naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc) y estado de agregación
(sólido, líquido, gas). Los fundamentos físico-químicos de la
espectrofotometría son relativamente sencillos. Las moléculas pueden
absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna.
Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre
ellos el de la fotosíntesis en plantas y bacterias. La Mecánica Cuántica
nos dice que la luz está compuesta de fotones cada uno de los cuáles
tiene una energía.

Se refiere a la medida de cantidades relativas de luz absorbida por una

muestra, en función de la longitud de onda. Cada componente de la
solución tiene su patrón de absorción de luz característico. Comparando
la longitud de onda y la intensidad del máximo de absorción de luz de
una muestra versus soluciones standard, es posible determinar la
identidad y la concentración de componentes disueltosen la muestra
(solución incógnita). Las ventajas de la espectrofotometría sobre otros
métodos analíticos de laboratorio son varias: es rápida, precisa,
versátil, fácil de usar y eficiente en costo.Los espectrofotómetros se
han mejorado en precisión y versatilidad en los últimos años con los
avances de tecnología, y hoy se consideran indispensables en un
laboratorio de química analítica.

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La espectrofotometría se usa para diversas aplicaciones, como: Análisis

cuantitativo y cualitativo de soluciones desconocidas en un laboratorio
de investigación, estandarización de colores de diversos materiales,
como plásticos y pinturas, detección de niveles de contaminación en aire
y agua, y determinación de trazas de impurezas en alimentos y en
reactivos.

Un espectrofotómetro típico posee cuatro componentes básicos: Una

fuente de radiación que tiene intensidad constante en el rango de
longitud de onda que cubre (usualmente es lámpara de tungsteno para
luz visible, y deuterio para ultravioleta), un compartimiento para la
muestra, un monocromador que separa la banda de longitud de onda
deseada del resto del espectro y la dispersa al compartimiento de la
muestra, y un fotodetector, que mide cuantitativamente la radiación que
pasa por la muestra.

En general, los espectrofotómetros miden en % de Transmitancia (%T)

y absorbancia (A). El % de transmitancia se refiere a la cantidad de
radiación que pasa a través de la muestra y alcanza el detector. Una
solución límpida, no absorbente, mostrará una lectura de 100% de
transmitancia en un espectrofotómetro calibrado. Las unidades de
absorbancia van de 0 a 2. La absorbancia se relaciona con la
transmitancia como: A = - log 1/T, (logaritmo decimal).

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Espectro Electromagnético

POTENCIÓMETRO: (o pHmetro)

Se utiliza para obtener la medida precisa del

pH de las disoluciones. Cuando sólo interesa
una medida aproximada se utiliza el papel
indicador.

10. BIBLIOGRAFÍA

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1. Karp G. Biología Celular y Molecular. Conceptos y Experimentos.

Cuarta Edición. 2005. Mc. Graw Hill. Cap.18, pg.789-805.
2. Cooper G. M. La Célula. Segunda Edición. Marban-España. 2002.
Cap. 1, pg. 20-31.
3. Henry J. B. El Laboratorio en el Diagnóstico Clínico. Marbán-
España. 2005. Cap.3, pg. 60-78.
4. Pagana KD. Pagana TJ. Pagana TN. DIAGNOSTIC AND
LABORATORY TEST. Mosby. 12ª Edición. Pag. 17. Elsevier. 2015.

ELABORADO POR:
Nubia Ponce Zapata y Orlando Gualdrón López. Docentes Laboratorio
Clínico – CMAPS.

APROBADO POR:
Jorge Martínez Bernal (Director UME).

FIN DE GUÍA PRÁCTICA CLÍNICA

CONTROL DE ACTUALIZACIONES

Versión Breve Comunicación

Tema
que se Descripción del
Modificado Solicitada Aprobada
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 COMPLEJO MULTIFUNCIONAL
AVANZADO DE PRÁCTICAS Y
SIMULACIÓN

EQUIPOS DE LABORATORIO ENFERMERÍA V2.1-Enero-2020

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