Guía de Práctica de Laboratorio - Bioquímica I 2023-2

Manual de Práctica de Bioquímica I
Manual de Práctica
CURSO
BIOQUÍMICA I
1
CONTENIDO
Pág.
Instrucciones generales 3
Medidas de bioseguridad y preparación de soluciones amortiguadoras 13
Espectrofotometría 23
Determinación de ácido úrico en suero sanguíneo 29
Extracción del ADN 34
Determinación de proteínas plasmáticas totales y fraccionadas 39
Determinación de vitamina C en alimentos vegetales 45
Factores que afectan la actividad enzimática 50
Determinación de hemoglobina y urea 57
Digestión enzimática del almidón 65
Cálculo del balance energético 70
Concentración de glucosa en condición de ayuno y en condición de 80

alimentación normal en un tiempo de 24 horas
Hidrólisis de lípidos 90
Determinación de colesterol, triglicéridos y lipoproteínas: Perfil 93

lipídico mínimo
2
NORMAS GENERALES PARA EL ESTUDIANTE DEL

CURSO DE BIOQUÍMICA I
1. LABORATORIO DE QUÍMICA 1, 2, 3 y 4 UCSUR
El Laboratorio es un ambiente físico estratégico y debidamente equipado donde se

desarrolla diferentes experimentos con la finalidad de complementar los conocimientos
teóricos, generar habilidades y destrezas en la manipulación de materiales, equipos e
instrumental de laboratorio y desarrollar el hábito de usar el método científico a través
de la observación de los fenómenos que ocurren en los ensayos respectivos y la toma de
datos necesarios para obtener resultados confiables.
2. INSTRUCCIONES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO

• Llegar puntual a las prácticas (tolerancia 5 minutos).
• Leer con anticipación la práctica a realizar.
• Cada sesión de laboratorio genera un informe; el que será entregado en la siguiente
práctica en su respectivo horario. Es la única fecha y la entrega es de carácter
obligatorio. El informe se debe desarrollar de acuerdo al formato que se encuentra
en la Guía de Práctica.
• La inasistencia injustificada a cualquier práctica impide al alumno la presentación
del informe correspondiente y por lo tanto tendrá la nota mínima de cero.
• El alumno con inasistencia justificada deberá recuperar la práctica durante la misma
semana para lo que recabará de su profesor de prácticas el formato de autorización
correspondiente.
3. TOMA DE DATOS
• Manipular c los diferentes materiales de laboratorio en forma adecuada,
siguiendo las indicaciones del docente.
3
• Desarrollar los experimentos en forma ordenada y con mucha

responsabilidad.
• Observar con mucho cuidado los fenómenos que ocurren durante el
desarrollo de los experimentos.
• Realizar las mediciones con precisión y efectuar las anotaciones pertinentes,
para obtener resultados satisfactorios disminuyendo el margen de error. “Un
error mínimo al principio puede ser máximo al final” (Aristóteles).
• Todo alumno deberá contar con una calculadora personal que contenga como
mínimo funciones de potencia y logaritmo. No se permitirá usar celulares
como calculadora personal.
4
INTRODUCCIÓN
La química es una ciencia activa y en continuo movimiento; tiene una importancia

fundamental para nuestro mundo, tanto en el ámbito de la naturaleza como de la sociedad.
Sus orígenes son muy antiguos, pero como se verá en este curso, es también una ciencia
moderna y en continua renovación.
La enseñanza de la Bioquímica equilibra el desarrollo teórico de sus conocimientos con el

trabajo experimental de Laboratorio como curso básico que se imparte a los estudiantes de
las diferentes Facultades de la Universidad Científica del Sur, motivo por el cual la "GUÍA
DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I" está orientada exclusivamente hacia el
desarrollo de prácticas experimentales, con la finalidad de que el alumno complemente
conocimientos, genere habilidades y destrezas en la manipulación de materiales, equipos e
instrumental de Laboratorio, incentivando así la adquisición de los hábitos del método
científico mediante la observación de los fenómenos que ocurren en los ensayos respectivos
y la toma de datos necesarios para obtener resultados y conclusiones confiables.
Al término de cada práctica se propone un cuestionario de preguntas teóricas y problemas

variados, con el objetivo de reforzar los conocimientos adquiridos en el desarrollo de las
prácticas de laboratorio realizadas.
Los Autores
5
INSTRUCCIONES PARA EL DESARROLLO DE LOS

INFORMES DE EXPERIENCIAS PRÁCTICAS
PARTES DEL INFORME DE LABORATORIO
Apellidos Nombres N° Mesa Fecha
INTRODUCCIÓN
En esta sección el grupo debe investigar para proporcionar un background del tema que se está trabajando en la
práctica. También se puede mencionar de manera resumida el principio de la(s) técnica(s) a utilizar.
OBJETIVOS
En esta sección se debe mencionar los objetivos de la práctica, es decir, qué se estima lograr al final de la
práctica.
RESULTADOS
En esta sección se debe presentar de manera organizada y entendible los datos colectados durante
el experimento.
DISCUSIÓN
En esta sección, se debe presentar algunas deducciones que se desprenden de los resultados,
comparar los diferentes grupos analizados entre sí y explicar las diferencias y/o comparar los
resultados obtenidos con lo conocido en la literatura
CONCLUSIONES
En esta sección, se debe colocar lo más importante que se ha obtenido o aprendido de esta
práctica.
RECOMENDASIONES
En esta sección, se debe describer recomendaciones sobre la práctica vista.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Las referencias bibliográficas deben ser descrita en formato Vancouver.
6
CRITERIOS QUE SE TOMARÁN EN CUENTA PARA LA

EVALUACIÓN DE LOS INFORMES DE PRÁCTICA
Rúbricas que se usarán para la evaluación de las tareas asignadas en los talleres prácticos
Investigación I1: Define un problema de investigación, la pregunta y las hipótesis.
COMPETENCIA (S) SP1: Identifica un problema, especificando las variables que lo
Solución de problemas
constituyen.
ASPECTO / CRITERIO
A EVALUAR
Logrado En proceso No logrado
Carátula Elaboran la carátula en la primera Elaboran la carátula en una página No elaboran la carátula en el
página del informe siguiendo el distinta a la primera o cuenta con la informe o los datos solicitados
modelo presentado en la guía, mayoría de los datos solicitados, son escasos.
adicionalmente los integrantes van pero no está completa.
en orden de apellidos, nombres y se
incluye correo institucional de los
mismos.
1,5 puntos 1 punto 0,5 puntos
Objetivos Mencionan los objetivos de la sesión Mencionan la mayoría de los No mencionan los objetivos de
y estos son congruentes con el tema objetivos de la sesión, pero algunos la sesión o los objetivos
del curso desarrollado. no fueron mencionados. establecidos no guardan
relación alguna con la sesión.
1,5 puntos 1 punto 0 puntos
Resultados Presentan los resultados correctos Presentan los resultados obtenidos Presentan los resultados con
obtenidos en la sesión mediante el en la sesión son mediante el uso de alto grado de error en tablas o
uso de tablas que son fáciles de tablas, aunque con algunos errores, no se presentan resultados.
entender y gráficos estadísticos y gráficos estadísticos cuando sea
cuando sea oportuno. oportuno.
3 puntos 2 puntos 0 puntos
Discusión Cumplen con tres criterios: Cumplen con dos de los tres Cumplen con uno de los tres
▪ Explican cómo se relacionan los criterios indicados. criterios indicados.
resultados con el principio teórico.
▪ Reconocen las fuentes de error.
Esto incluye mencionar el
porcentaje de error si hubiese.
▪ Indagan cómo se relacionan los
resultados obtenidos con una o
varias de las carreras de los
integrantes del equipo.
5 puntos 3 puntos 1 punto
Conclusiones Explican si se cumplieron los Explican, aunque con poco detalle, No explican si los objetivos de la
objetivos de la sesión y los si los objetivos de la sesión se sesión se cumplieron. Tampoco
aprendizajes del equipo. cumplieron. No mencionan mencionan los aprendizajes.
aprendizajes.
Recomendaciones Describe al menos tres Describe una recomendación de No describe recomendaciones
recomendaciones de acuerdo con la acuerdo con la actividad práctica. de acuerdo con la actividad
actividad práctica. práctica.
Referencias Incluyen tres referencias Incluyen dos referencias No Incluyen una referencia
bibliográficas bibliográficas confiables y las cita en bibliográficas confiables y las cita en bibliográfica.
el formato adecuado. el formato adecuado o presentan
tres referencias bibliográficas con
error en el citado.
7
Orden y ortografía Ordenan el informe según las Ordenan el informe según la No ordenan el informe según la
secciones establecidas, tipo y disposición en la mayoría de las disposición en la mayoría de las
tamaño de letra, entre otros, y no secciones, tipo y tamaño de letra, secciones y existen errores
existen errores ortográficos. entre otros, y existen errores ortográficos mayores.
ortográficos mínimos.
2 puntos 1 punto 0 puntos
*Cuestiones éticas de evidenciarse plagio en informe, los estudiantes tendrán automáticamente la nota de 00
en el concepto de tareas establecidas para la evaluación continua 1 de acuerdo a lo establecido en sílabo.
Además, tal conducta será reportada con el responsable del curso y carrera.
8
Práctica 1
Medidas de bioseguridad y Soluciones amortiguadoras
1. MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
a) Higiene personal
• Queda terminantemente prohibido fumar, comer y/o beber durante las
prácticas en el laboratorio. Así mismo el uso de celulares y otros equipos
electrónicos.
• Se debe lavar las manos al finalizar el trabajo de laboratorio y cada vez
que se sospecha que ha estado en contacto con algún material
contaminado.
• Al entrar en contacto la piel con ácidos o bases fuertes, lavarse
inmediatamente con abundante agua. Para el caso de ácidos aplicarse una
solución saturada de bicarbonato, para las bases utilice una solución al
5% de ácido acético (vinagre).
• Para quemaduras leves el área afectada se debe aplicar inmediatamente
una crema de picrato de Butesín.
• Mantener limpio el área de trabajo. Al derramar alguna sustancia limpiar
inmediatamente. Al final de la práctica dejar todo el material limpio y
ordenado.
b) Comportamiento de los alumnos durante las prácticas

• Está terminantemente prohibido ingresar a l Laboratorio mochilas,
carteras o bolsos, teléfonos celulares, animales domésticos, etc.
• Una vez que el alumno haya ingresado al laboratorio no puede salir por
ningún motivo.
• El trabajo con sustancias volátiles se debe realizar haciendo uso de la
campana extractora.
• Para diluir ácidos, siempre se debe agregar los ácidos al agua, y no
9
en sentido contrario.
• Cuidar como propio todo bien que encuentre o utilice en el laboratorio.
El alumno es responsable de los materiales asignados para el desarrollo
de la práctica, el deterioro implica su reposición obligatoria.
• El manejo de materiales, reactivos y el desarrollo de los experimentos
sólo se realizan con autorización del profesor. Los experimentos no
autorizados están prohibidos.
• Observar cuidadosamente que los frascos con reactivos estén
etiquetados indicando el contenido y la concentración respectiva, antes
de ser usados.
• Obtener las sustancias químicas de los frascos de reactivos, en un vaso
de precipitados o en u n tubo de ensayos limpio, cuidando de no usar
cantidades mayores que las necesarias, está terminantemente prohibido
regresar sustancia alguna no utilizada al frasco original.
• Al encender el mechero Bunsen, primero encender el fósforo y luego
abrir la llave de gas.
c) Eliminación de residuos
• Los desechos sólidos, líquidos y las sales solubles, deben ser depositados
en los recipientes indicados por el profesor para su posterior tratamiento.
• Todo desperdicio de papel o residuo sólido debe dirigirse al respectivo
recipiente de basura situados en ambas paredes laterales de
cada Laboratorio
• No se debe arrojar residuos sólidos al lavadero.
2. ELEMENTOS DE PROTECCIÓN PERSONAL Y DE LOS EQUIPOS
a) Mandil
• Para cada sesión de prácticas el estudiante debe llevar un mandil
(guardapolvo), el cual es de carácter obligatorio. Cuando el experimento
lo amerite, los estudiantes usarán lentes de seguridad industrial tipo
MERCK.
10
• Los estudiantes vestirán sus mandiles antes de ingresar al Laboratorio y

dejarán de vestirlos a la finalización de las actividades correspondientes.
b) Lentes de seguridad y respiradores

• Se debe usar lentes de seguridad cuando sea necesario proteger la cara
de salpicaduras y/o sustancias corrosivas. Igualmente se utilizará
respiradores cuando sea necesario. El estudiante tiene a disposición estos
materiales y los solicitará al responsable del laboratorio.
• En la parte lateral central del Laboratorio se encuentra la ducha española,
la que será usada para casos de salpicaduras o derrames en el cuerpo de
la víctima con sustancias ácidas, básicas o corrosivas. Así mismo a la
entrada parte izquierda se encuentra un kit lavador de ojos que se aplicará
directamente al ojo de la víctima en caso de salpicadura de alguna
sustancia dañina al ojo.
c) Extinguidores contraincendios
• El alumno debe conocer el uso y la ubicación de los extintores contra
incendios que en caso de emergencia se descolgará de la pared con
cuidado. El extintor, en la parte superior tiene una palanca circular que
se saca (se tira) para activar y se presiona la manija con la mano
derecha y con la mano izquierda se coge la manguera la cual se
orientará hacia la fuente de peligro.
• En el caso de incendiarse la ropa de una persona, se deberá pedir ayuda
inmediatamente, se debe estirar en el piso y rodar sobre sí mismo
para apagar las llamas. No se recomienda utilizar el extintor sobre el
cuerpo o rostro de una persona.
d) Botiquín de primeros auxilios

• Existe un botiquín perfectamente identificado y de fácil acceso cono los
elementos necesarios para prestar primeros auxilios en el laboratorio.
• Será responsabilidad de todos los usuarios del laboratorio conocer la
ubicación y el uso del botiquín y de los elementos de protección personal.
11
Bittencourt J. (2018). The Power of Carbohydrates, Proteins, and Lipids. Disponible en:
https://www.researchgate.net/publication/322473648
Macías Alvia, A., Hurtado Astudillo, J. R., Cedeño Holguín, D. M., Cedeño Holguín, F. A.,
Scott ÁLava, M., Vallejo Valdivieso, P. A., Macías Alvia, M. J., Santana Sornoza, J. W.,
Espinoza Macías, M. J., Ubillús Saltos, S. P., Arteaga Espinoza, S. X., Torres Macías, O. E.,
Pigüave Reyes, J. M., Pigüave Reyes, Chavarría Cedeño, D. I., & Intriago Sánchez, K. J.
(2018). INTRODUCCIÓN AL ESTUDIO DE LA BIOQUÍMICA (Primera edición) [Libro
electrónico]. Editorial Área de Innovación y Desarrollo, S.L.
https://doi.org/10.17993/CcyLl.2018.28
Nelson, D. L., & Cox, M. M. (2017). Lehninger Pinciples of Biochemistry (SEVENTH

EDITION) [Libro electrónico]. W.H Freeman Macmillan Learning.
Salazar, J, Salazar Y. Guía de prácticas de laboratorio. Bioquímica I. UCSUR. Lima. Edición

2021.
12
Práctica 1
Preparación de soluciones amortiguadoras
El poder amortiguador de los cambios de pH en un determinado sistema; es una expresión

simple de reacciones fundamentales reversibles que se establecen en el equilibrio y que se
basan en la teoría ácido – base. Nuestro organismo cuenta con sistemas amortiguadores tanto
intracelular como extracelular.
I. Objetivos
✓ Determinar el pH teórico y práctico de diferentes soluciones
✓ Determinar la influencia del pH en la solubilidad de sustancias

orgánicas
✓ Identificar la naturaleza amortiguadora de la albúmina
II. Fundamento teórico
El poder amortiguador de los cambios de pH en un determinado sistema es una

expresión simple de reacciones fundamentales reversibles que se establecen en
el equilibrio y que se basan en la teoría ácido – base. Nuestro organismo cuenta
con un sistema amortiguador intracelular y un sistema amortiguador extracelular.
El sistema amortiguador dentro de las células es el fosfato, está formado por el

par de iones (H2PO4)1- y (HPO4)1- es la especie química de este par que tiene
mayor capacidad de neutralizar la base. Cualquier adición de (OH)1- la neutraliza
el (H2PO4)1- evitando que el pH se incremente.
(𝐻2 𝑃𝑂4 )1− (𝑎𝑐) + (𝑂𝐻)1−. (𝑎𝑐) → (𝐻𝑃𝑂4 )2− (𝑎𝑐) + 𝐻2 𝑂
13
El receptor de protón o base en el fosfato es la base conjugada del (H2PO4)1-, el

ion (HPO4)1-. Este puede neutralizar (H)1+ y de este modo evitar que el pH
disminuya.
(𝐻𝑃𝑂4 )2− (𝑎𝑐) + (𝐻)1+ (𝑎𝑐) → (𝐻𝑃𝑂4 )1− (𝑎𝑐)
El sistema amortiguador extracelular es el carbonato, está formado por el par

conjugado, H2CO3 y (HCO3)1-, el ácido carbónico y el ion bicarbonato. En
realidad, el ácido carbónico en la sangre se encuentra casi enteramente en la
forma de CO2 (ac). Pero cualquier demanda de H2CO3 (ac) la satisface casi
instantáneamente la capacidad de la anhidrasa carbónica para desplazar el
equilibrio; dicha enzima cataliza las reacciones directa e inversa en el siguiente
equilibrio:
𝐶𝑂2 (𝑎𝑐) + 𝐻2 𝑂 → 𝐻2 𝐶𝑂3 (𝑎𝑐)
El ácido carbónico del amortiguador carbonato de la sangre neutraliza el (OH)1-,

y así evita el incremento del pH. Si se tuviera algún problema metabólico o
respiratorio tendiente a aumentar el nivel de (OH)1- de la sangre, el H2CO3
neutraliza el (OH)1- y así evitaría la alcalosis.
(𝐻𝐶𝑂3 )1− (𝑎𝑐) + (𝐻)1+ (𝑎𝑐) → 𝐻2 𝐶𝑂3 (𝑎𝑐)
Las soluciones amortiguadoras son muy importantes, se usan:
✓ Preparación de soluciones estándar (determinación potenciométrica

del pH).
✓ Mantenimiento una concentración de H+ necesaria para la actividad

óptima de una reacción química o bioquímica, Esta función es
importante en la acción de las enzimas, tanto in vivo como in vitro.
14
✓ Ecuación de Henderson – Hasselbach
La ecuación de Henderson – Hasselbach, ha sido derivada de la Ley de

acción de masas de Gulberg y Waage, del concepto de constante de
equilibrio y de la ionización de ácidos y bases débiles. Se utiliza para
calcular el pH teórico de una mezcla de ácidos débiles y sus sales.
Para el siguiente sistema en equilibrio:
Calculando Ka para el ácido débil, HA:
𝐻1 𝐴1
𝐾𝑎 =
𝐻𝐴
Despejando la concentración iones hidrógeno se tiene:
𝐻𝐴 𝑥 𝐾𝑎
𝐻1 =
𝐴1−
Aplicando logaritmo y multiplicando por (-1), se obtiene:
𝐻𝐴
𝑙𝑜𝑔𝐻1 = −𝑙𝑜𝑔𝐾𝑎 (−𝑙𝑜𝑔 )
𝐴1−
Reemplazando:
𝐴1
𝑝𝐻 = 𝑝𝐾𝑎 + log
𝐻𝐴
Expresión conocida como ecuación de Henderson – Hasselbach para un

ácido débil.
15
✓ Tampones biológicos
Es un sistema endógeno (producido por un organismo vivo) capaz de

contrarrestar un cambio violento de en el pH corporal, el cual está dado
por la [H+] en los líquidos corporales pH = 7,3 unidades.
Como se mencionó, la potencia máxima de un tampón es cuando el pH

coincide con el pH del medio y la capacidad amortiguadora se mantiene
hasta +2 unidades de pH, después de la cual el tampón pierde su
capacidad.
1. Tipos de amortiguadores biológicos:
✓ Sistema amortiguador bicarbonato
𝐻𝐶𝑂3
𝑝𝐾𝑎 = 6,1
𝐻2 𝐶𝑂3
✓ Sistema amortiguador fosfato
𝐻𝑃𝑂4
𝑝𝐾𝑎 = 7,4
𝐻2 𝑃𝑂4
✓ Sistema amortiguador hemoglobina – proteínas plasmáticas
MATERIALES
MATERIALES EN LA MESA DE LOS ESTUDIANTES
• 01 gradilla
• 07 tubos de ensayo 13x100mm
• 05 beaker 100mL
• 01 bagueta
• 12 cintas indicadoras de pH (PANPEHA)
• 01 piseta con agua destilada
• 03 pipeta graduada 10mL
16
• 01 probeta 25mL
• 03 micropipeta de 100 a 1000µL y/o 5 a 50µL
REACTIVOS EN LA MESA DE LOS ESTUDIANTES
• 01 hidróxido de sodio ~ NaOH 0.01M frasco 20mL

• 01 ácido clorhídrico ~ HCl 0.1M frasco 20 mL
• 01 hidróxido de sodio ~ NaOH 0.1M gotero 25mL
• 01 ácido acético ~ CH3COOH 0.05M frasco 20mL
• 01 hidróxido de bario ~ Ba (OH)2 0.01M gotero 20mL
• 01 ácido sulfúrico ~ H2SO4 0.02M frasco 20mL
• 01 benzoato de sodio ~ NaC6H5CO2 sobre 10mg
• 01 anaranjado de metilo gotero 25mL
• 01 fenolftaleína gotero 25mL
• 01 Solución de albúmina 0.5 mg/dL
MATERIALES EN LA MESA CENTRAL DEL PROFESOR
• 01 ácido clorhídrico concentrado ~ HCl gotero 25 mL

• pH – metro
17
PROCEDIMIENTOS
Parte experimental
✓ Determinar el pH teórico y práctico de las siguientes soluciones
Determinar el valor del pH teórico según la ecuación de Henderson –

Hasselbach. Tomar 10 mL de cada solución y determinar el valor del pH
práctico empleando el pH – metro y/o las tiras de pH.
REACTIVO [] pH PRÁCTICO pH TEÓRICO
NaOH 0.01 M
HCl 0.1 M
CH3COOH 0.05 M
Ba(OH)2 0.01 M
H2SO4 0.02 M
NaOH 0.1 M
✓ Influencia del pH en la solubilidad de sustancias orgánicas –

solubilidad del benzoato de sodio
En un vaso precipitado de 100 mL de capacidad disolver 10 mg de

benzoato de sodio con 10 mL de agua destilada, inmediatamente medir
su pH, luego adicionar 5 gotas de HCl concentrado, agitar y observar.
Medir nuevamente el pH de la solución final.
✓ Naturaleza amortiguadora de la albúmina
Preparar 4 tubos de prueba con los siguientes reactivos:
18
TUBO REACTIVOS
1 gota de HCl 0.1M + 1 gota de anaranjado de

1
metilo + 2 mL de H2O
1 gota de NaOH 0.1M + 1 gota de anaranjado

2
de metilo + 2 mL de H2O
1 gota de NaOH 0.1M + 1 gota de

3
fenolftaleína + 2 mL de H2O
1 gota de HCl 0.1M + 1 gota de fenolftaleína +

4
2 mL de H2O
A los tubos 1 y 3: Agregar 3 mL de solución de albúmina, agitar y observar.
A los tubos 2 y 4: Agregar 3 mL de H2O, agitar y observar.
19
ACTIVIDAD AUTONOMA COMPLEMENTARIA EVALUADA DE

LA PRÁCTICA N°1
INDICACIONES PARA EL INFORME DE PRÁCTICA N°1
Tema: Preparación de soluciones amortiguadoras

1. La actividad se desarrollará en grupos que serán conformados el primer día de clases.
Cada grupo elegirá un responsable que será el encargado de subir éste y los futuros
informes en formato PDF a las carpetas asignadas en el aula virtual.
2. Leer la rúbrica correspondiente de la calificación de los informes.
3. Búsqueda de información: Cada grupo deberá buscar fuentes de información válidas y

confiables. Utilizar las Bases de Datos disponibles en la Biblioteca Virtual de la UCSUR
(HINARI, SCOPUS, E-LIBRO, WILEY ONLINE LIBRARY, EBSCOhost, etc.).
Enlace de acceso: https://biblioteca.cientifica.edu.pe/
4. La fecha y hora de entrega del informe será establecida por el docente a través de una
carpeta virtual correspondiente a la semana de emisión del informe. No se aceptarán
entregas de informes fuera de fecha.
5. El esquema de los informes es el siguiente:

• La primera página corresponde a la carátula (ubicar el archivo en el aula virtual).
• Introducción (Máximo media página).
• Objetivos
• Materiales y métodos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
• Referencias (formato Vancouver)
20
6. Cada contenido debe ser citado y la lista de referencias bibliográficas deben ser
colocadas después de las conclusiones y elaboradas de acuerdo con el sistema de
Vancouver (mínimo una referencia por cada integrante del grupo).
7. El tipo y tamaño de letra serán Arial y 12.
21
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
electrónico]. Editorial Área de Innovación y Desarrollo,S.L.

Salazar, J, Salazar Y,. Guía de prácticas de laboratorio. Bioquímica I. UCSUR. Lima.

Edición 2021.
22
PRÁCTICA Nº 2
Espectrofotometría
Entre los diversos métodos de análisis de tipo cuantitativo que se utilizan para la
determinación de moléculas o elementos constitutivos de los organismos se encuentra la
espectrofotometría, que utiliza la medición de la intensidad de la luz transmitida y/o
absorbida, a determinada longitud de onda, por compuestos químicos en solución.
I. Objetivos
✓ Describir el uso y aplicación del espectrofotómetro.
✓ Aplicar la Ley de Lambert – Beer en el empleo del espectrofotómetro.
✓ Determinar una curva de calibración, usando la solución de azul de metileno.
Cuando un haz de luz de longitud de onda determinada (luz monocromática)
pasa a través de una solución, la mayor fracción de este haz es absorbida por la
sustancia disuelta, mientras que la otra porción es reflejada. La cantidad de luz
absorbida es proporcional a la concentración del soluto.
La propiedad de una sustancia para absorber radiación de una determinada

longitud de onda es dependiente de su estructura química. La ley de Lambert y
Beer expresa las relaciones antes mencionadas mediante la siguiente ecuación:
𝐼𝑜
𝐿𝑜𝑔 = 𝜀. 𝐼. 𝑐
𝐼𝑡
Io Luz incidente
It Luz transmitida
ɛ Coeficiente de extensión
23
Distancia recorrida por la luz a través de la

I
solución
c Concentración del absorbente
El log Io/It también se conoce como densidad óptica (D.O.) o absorbancia de la

solución y es directamente proporcional a la concentración del soluto.
Para determinar la concentración de una determinada sustancia puede hacerse

uso del factor de calibración o de una curva de calibración.
La preparación de una curva de calibración se realiza utilizando concentraciones

conocidas de la sustancia cuya concentración deseamos conocer. Luego se
determina la absorbancia de cada una de dichas concentraciones y se procede a
preparar un gráfico, donde en el eje de abscisas se disponen las concentraciones
de la sustancia y en el eje de ordenadas la absorbancia.
✓ Factor de calibración
Se define como la relación que existe entre la concentración del estándar
y su respectiva absorbancia. Este factor puede obtenerse de la siguiente
manera:
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 =
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎
La concentración del estándar puede expresar como: mg/dL, µg/dL,

mEq/L, U/L, etc. Para encontrar la concentración de una sustancia
problema se multiplica el factor de calibración por la absorbancia del
problema, operación que se realiza de acuerdo al siguiente
procedimiento que se aplicará en el desarrollo del experimento.
24
MATERIALES
• 01 gradilla
• 03 pipeta graduada 5 mL
• 01 micropipeta 100-1000 µL y/o de 5-50µL
• 12 cubetas para espectrofotometría
• 12 puntas descartables respectivas
• 01 solución de azul de metileno 1mg/dL frasco 100mL
• 01 espectrofotómetro
25
PROCEDIMIENTOS
Parte experimental
✓ Preparación de una curva de espectro de absorción del azul de metileno

Para elaborar una curva de absorción se preparará el siguiente sistema:
Solución de azul de metileno 1mg/dL 1mL
Agua destilada 4mL
Luego se procederá a realizar lecturas en el espectrofotómetro a las siguientes

longitudes de onda: 560, 580, 600, 620, 640, 660, 680 y 700 nm.
Graficar utilizando papel milimetrado las absorbancias (eje Y) en función de
las longitudes de onda (eje X) y determinar el pico de máxima absorción de
azul de metileno, el cual corresponde al mayor valor de la absorbancia.
✓ Preparación de una curva de calibración
Preparar el experimento de la siguiente manera:
1 2 3 4 5
mL Azul de metileno 0.5 1 2 3 4
mL Agua destilada 4.5 4 3 2 1
Llevar el espectrofotómetro a cero. Luego leer los tubos a una longitud de

onda de 660 nm.
Graficar en un papel milimetrado los resultados, disponiendo las
concentraciones en el eje de abscisas en el eje de las ordenadas, luego trazar
una recta a través de los puntos obtenidos experimentalmente.
Utilizando la curva de calibración o el factor de calibración determinará la
concentración de la sustancia problema en la presente práctica.
26

LA PRÁCTICA N°2
Tema: Espectrofotometría



• Objetivos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
27
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS


2021.
28
PRÁCTICA Nº 3
Determinación del ácido úrico en suero sanguíneo
El ácido úrico es un compuesto que se forma en el organismo como producto de excreción

de las purinas. Los niveles séricos se encuentran elevados en diversas enfermedades tales
como: insuficiencia cardiaca crónica, leucemia, gota, síndrome de Lesch – Nyhan, etc.
I. Objetivos
- Determinación de la concentración en suero del ácido úrico
- Describir la técnica para determinar la concentración sérica de ácido úrico
- Interpretar los resultados de acuerdo con los valores de referencias según la
condición clínica.

La determinación de ácido úrico en suero se realiza utilizando dos enzimas, la
uricasa que transforma el ácido úrico en alantoína y la enzima peroxidasa, que en
presencia de 4 – aminofenazona forma quinonimina de color rojo.
uricasa
Ácido úrico + 2H2O + O2 Alantoína + H2O2 + CO2
POD roja
2H2O2 + 4 – AF Quinonimina
MATERIALES
• 01 gradilla
• 04 tubos de ensayo 13 x 100mm
• 01 piseta de agua destilada
• 03 pipetas de 5mL
• 03 propipetas
29

• 01 muestra de suero comercial o biológico

• 01 Estuche comercial para determinar la concentración de ácido úrico en suero
(estándar de ácido úrico y reactivo de trabajo)
• 01 baño maría 37°C
• 01 vórtex
• Cronómetros y/o timer
30
PROCEDIMIENTOS
Parte experimental
Preparar los siguientes medios de ensayo:
(https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/%C3%81cido-%C3%BArico.-
Inserto.pdf)
Mezclar suavemente e incubar durante 5 minutos en baño maría a 37°C. Enfriar y leer la
densidad óptica en el espectrofotómetro a 505 nm.
(https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/%C3%81cido-%C3%BArico.-
Inserto.pdf)
31

LA PRÁCTICA N°3
Tema: Determinación del ácido úrico en suero sanguíneo



• Objetivos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
32

Salazar, J, Salazar Y. Guía de prácticas de laboratorio. Bioquímica I. UCSUR. Lima.

Edición 2021.
33
PRÁCTICA Nº 4
Extracción del ADN
El descubrimiento del ADN y la elaboración y refinamiento de técnicas para el estudio del

ADN han permitido grandes avances en el conocimiento del ADN y el análisis de su
secuencia con fines de investigación y de conocer, entre otros, las causas genéticas y
moleculares de ciertas patologías. Dichas técnicas han mostrado ser bastante versátiles,
teniendo aplicación en investigación, diagnóstico, ingeniería genética, análisis forense, entre
otros.
I. Objetivos
✓ Extraer ADN del hígado de pollo a través de un método casero.

✓ Reconocer los componentes y procesos involucrados en la Reacción de Cadena de
la Polimerasa y el gel de agarosa a través de videos y explicaciones dadas por el
docente.
Fundamento teórico
Extracción de ADN
Se basa en la separación del ADN de los demás componentes de la célula. Existen una gran
variedad de métodos de extracción, entre los que se encuentran métodos comerciales y
caseros.
Los kits de extracción comerciales utilizan matrices inorgánicas compactas cargadas

positivamente capaces de retener varios microgramos de ADN y separarlos del resto de las
biomoléculas, permiten obtener un extracto libre de inhibidores. Las membranas de sílice o
perlas magnéticas, las primeras están formadas por una resina y las segundas consisten en
un centro de hierro recubierto por resina. La membrana está insertada dentro de un microtubo
de polipropileno y las microesferas se encuentran suspendidas en una solución
amortiguadora.
34
Durante la extracción, el ADN cargado negativamente se adsorbe o une a la matriz selectiva

de manera reversible y se mantiene unido a ésta durante la remoción de lípidos, proteínas y
metabolitos secundarios, posteriormente la molécula se libera de la matriz.
La cantidad de ADN que se extrae es un volumen en unidades de microlitros y con estos

métodos se obtienen un ADN de muy buena calidad de ADN en cuanto a pureza y este se
puede emplear de una vez para realizar pruebas de biología molecular.
En los métodos de extracción caseros, la cantidad de volumen es mayor y solo se puede

visualizar, la pureza del ADN es pobre en comparación a los métodos comerciales.
Electroforesis en gel de agarosa (video)
Se basa en la separación de moléculas (ADN) por acción de un campo eléctrico en un gel

según su tamaño, su peso y su carga. Las moléculas de ADN tienen carga negativa, por lo
tanto, se desplazarán hacia el polo positivo. En su estructura, el gel de agarosa tiene poros.
Las moléculas más grandes tendrán mayor dificultad para pasar por los poros, por lo tanto,
van a migrar más lento y no avanzarán una gran distancia. Por otro lado, las moléculas más
pequeñas pasarán a través de los poros con mayor facilidad y migrarán más rápido, por lo
tanto, recorrerán una distancia mayor.
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (video)
Consiste en la producción de un gran número de copias (amplificación) de un determinado

fragmento de ADN (ADN molde). Dicho fragmento es delimitado por los primers o
cebadores y es copiado por la polimerasa. Este proceso se da en tres etapas:
La desnaturalización (95oC), durante la cual se separan las cadenas de ADN
Hibridación, anillamiento o annealing (55 – 65oC), durante la cual los primers se unen al
ADN molde
Elongación (72oC), durante la cual la ADN polimerasa extiende los primers agregando uno
a uno los nucleótidos. Así se sintetiza la nueva cadena de ADN.
MATERIALES
• PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN
35
• Papel toalla
• Marcadores indelebles para vidrio
• 01 piceta con agua destilada

• 03 beacker de 250 mL
• 04 probetas de 100ml
• 1 mortero (grande) con pilón
• Agitador de vidrio
• Balanza de precisión
• 100 mL de NaCl al 2M
• 1 embudo grande
• 1 luna de reloj
• 100 ml de alcohol al 96° (refrigerado a 4°)
• Gasa (20x 20)
• Muestra: hígado de pollo (debe ser traido por los estudiantes)

• 1g de Lauril sulfato de sodio
PROCEDIMIENTOS
Parte experimental
EXTRACCIÓN DE ADN
- Pesar en una balanza de precisión, 60 g de hígado de pollo. Apoyándose en una luna

de reloj.
- Triturar el hígado pollo en un mortero, hasta obtener fragmentos pequeños y con
apariencia de un puré. Al triturar se pueden romper las membranas y se liberan los
núcleos sueltos.
- Añadir al triturado 30 mL de agua destilada. Remover hasta homogenizar.
- A la mezcla obtenida, añadirle 30mL de cloruro sódico al 2M. Con esto conseguimos
producir el estallido de los núcleos para que queden libres de las fibras de cromatina.
36
- A continuación, añadir 1 g de Lauril sulfato de sodio, mezclar por inversión, así nos
quedará el ADN libre de las proteínas que tiene asociadas.
- Filtrar sobre una gasa para separar los restos de tejidos que hayan quedado sin
romper.
- Medir el volumen del filtrado en una probeta.
- Añadir por las paredes, el alcohol (previamente refrigerado a 4°C), hasta alcanzar 60
mL, para obtener dos fases claramente identificables. En la interfase precipita el
ADN
- Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. <sobre la
varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el
resultado de la agrupación de muchas fibras de ADN.
37

LA PRÁCTICA N°4
Tema: Extracción de ADN



• Objetivos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
• Referencias
38


Edición 2021.
39
PRÁCTICA Nº 5
Determinación de la concentración sérica de proteínas

totales y fraccionadas
Las proteínas plasmáticas cumplen diversas funciones muy importantes para un apropiado
funcionamiento de los diversos tejidos del organismo. La cuantificación de dichas proteínas
es muy útil para el diagnóstico de algunas patologías como: desnutrición, deshidratación,
cirrosis, etc.
I. Objetivos
✓ Determinar el nivel de las proteínas plasmáticas total en el suero sanguíneo.
✓ Determinar el nivel de albúmina en el suero sanguíneo y de globulinas
✓ Interpretar los resultados obtenidos de acuerdo con los intervalos de referencia
e indicar posibles condiciones clínicas presente en el paciente

Los grupos químicos presentes en las proteínas (por ejemplo, el grupo amino)
son capaces de reaccionar con diferentes reactivos (por ejemplo, el cobre presente
en el reactivo de Biuret o el verde de bromocresol). Como resultado, se forman
complejos coloreados que pueden ser detectados y cuantificados por son
proporcionales a la cantidad de proteína en la muestra.
40
MATERIALES
• 01 gradilla
• 08 tubos de ensayo 13 x 100mm
• 01 piseta de agua destilada
• 03 pipetas de 5mL
• 03 propipetas
• puntas descartables respectivas
• cubetas para espectrofotometría
• 01 muestra de suero comercial

• 01 estuche comercial para determinar la concentración de proteínas totales y
albúmina
• 01 vórtex
PROCEDIMIENTOS
Parte experimental
✓ Determinación de proteínas plasmáticas total (Método de Biuret)

La determinación de las proteínas totales se realiza utilizando iones cúpricos
que en medio alcalino reacciona con las proteínas formando compuestos de
coordinación de color violeta, cuyo pico de máxima absorción es de 540 nm
y su intensidad es proporcional a la concentración de proteínas.
Preparar los siguientes medios de reacción:
41
B x St
Suero o plasma (µL) - 20 -
Estándar de proteínas (µL) - - 20
Reactivo EDTA/Cu (mL) 1 1 1
(https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/Proteina-Total.-
Inserto.pdf)
Incubar durante 15 minutos a 37°C y leer en el espectrofotómetro a 540 nm.
VALORES DE REFERENCIA:
6.0 – 8.3 g/dL
✓ Determinación de albúmina
La albúmina reacciona con el bromo cresolftaleína a pH 3.8 formando un compuesto
coloreado que absorbe a 625 nm. Preparar el siguiente sistema:
B x St
Estándar de albúmina (µL) - - 10
Reactivo BCF (mL) 1 1 1
(https://www.valtek.cl/wp-content/uploads/2020/02/Alb%C3%BAmina-BCG.-Inserto.pdf)
Colocar los tubos en una gradilla a temperatura ambiente durante 10 minutos y leer en el
espectrofotómetro a 625 nm.
3.0 – 5.0 g/dL
La determinación de la concentración de globulinas se realizará con la siguiente fórmula:

𝐺𝑙𝑜𝑏𝑢𝑙𝑖𝑛𝑎𝑠 = [𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠] − [𝑎𝑙𝑏ú𝑚𝑖𝑛𝑎]
42
La Relación albúmina/globulinas se obtendrá de la división de la concentración de albúminas

entre la concentración de globulinas.
43

LA PRÁCTICA N°5
Tema: Determinación de la concentración sérica de proteínas totales y fraccionadas



• Objetivos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
• Referencias
44
• Bittencourt J. (2018). The Power of Carbohydrates, Proteins, and Lipids. Disponible en:
• Macías Alvia, A., Hurtado Astudillo, J. R., Cedeño Holguín, D. M., Cedeño Holguín, F.
A., Scott ÁLava, M., Vallejo Valdivieso, P. A., Macías Alvia, M. J., Santana Sornoza, J. W.,
• Nelson, D. L., & Cox, M. M. (2017). Lehninger Pinciples of Biochemistry (SEVENTH

• Salazar, J, Salazar Y. Guía de prácticas de laboratorio. Bioquímica I. UCSUR. Lima.

Edición 2021.
45
PRÁCTICA Nº 6
Determinación de vitamina C en alimentos vegetales
La vitamina C es un compuesto que el ser humano debe ingerir necesariamente en su dieta

habitual, debido a que no dispone de las enzimas esenciales para sintetizarlo (a diferencia de
otras especies como las ratas).
I. Objetivos
✓ Determinar la cantidad de vitamina C en diversas frutas
✓ Determinar el efecto de la temperatura sobre la estabilidad de la vitamina C en frutas
El reactivo de Folin-Ciocalteu contiene molibdato y tungstato sódico, que reaccionan

con cualquier tipo de fenol, formando complejos fosfomolíbdico-fosfotúngstico. La
vitamina C (Ácido Ascórbico + Acido dehidroascórbico), en condiciones ácidas
reacciona rápidamente con el polifosfotungstato, dando color azul antes de la adición de
un álcali.
MATERIALES
• 01 gradilla
• 03 pipeta graduada 2mL
• 02 propipetas
• 02 beaker 50mL
• 01 pinza de madera
46
• 01 jugo de fruta diluido (puede emplearse “Tampico”)

• 01 Folin – Ciocalteu 10% frasco 8mL
• 01 ácido tricloroacético 10% frasco 200mL
• 01 estándar de ácido ascórbico 0.1mg/mL
• 01 micropipeta 10 – 100 µL o 100 a 1000 µL
• 01 centrífuga
• 01 baño maría a 100°C o planchas de calentamiento y termómetros
PROCEDIMIENTOS
Parte experimental
✓ Determinación de vitamina C en frutas cítricas

La vitamina C puede determinarse cuantitativamente utilizando el reactivo de Folin
– Ciocalteu de la siguiente manera:
a) Preparación de la muestra:
Se procederá a extraer jugo de una fruta cítrica como el limón o la naranja y se
procederá a diluir (1:2) con ácido tricloroacético al 10%, luego se filtrará si se usa
alguna fruta y centrifugará a 2500 rpm durante 10 minutos.
Para la determinación cuantitativa de vitamina C se procederá de la siguiente manera:
B x St
Jugo de fruta diluido (mL) 0.1 0.1 -
Reactivo de Folin – Ciocalteu 10% (mL) 0.2 0.2 0.2
Estándar de ácido ascórbico 0.1mg/dL (mL) - - 0.1
Agua destilada (mL) 1.7 1.7 1.7
47
Dejar en reposo durante 10 minutos y proceder a leer en el espectrofotómetro a 750nm. Para

realizar los cálculos, es necesario considerar la dilución de la muestra problema.
✓ Efecto de la temperatura sobre la estabilidad de la vitamina C

En un tubo de ensayo adicionar 2mL del jugo de fruta diluido y luego colocarlo en un
baño maría a 100°C. Determinar el contenido de vitamina C de acuerdo con la técnica
antes descrita a los 20 minutos y luego a los 40 minutos de incubación, para cuyo
propósito se tomarán alícuotas de 0.1mL.
En un papel milimetrado, graficar el % del contenido de vitamina C en función del tiempo.
Contenido de vitamina C en función del tiempo

70
Porcentaje del contenido de vitamina C
60
50
40
30
20
10
0
20 40
Tiempo (min)
48

LA PRÁCTICA N°6
Tema: Determinación de vitamina C en alimentos vegetales



• Objetivos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
• Referencias
49


Edición 2021.
50
PRÁCTICA Nº 7
Factores que afectan la actividad enzimática
Las enzimas son compuestos de naturaleza proteica que tienen la propiedad de acelerar las
reacciones químicas sin modificar la constante de equilibrio del sistema. Su actividad es
afectada por diversos factores: concentración de sustrato, pH, concentración de enzima,
temperatura, inhibidores, fuerza iónica, constante dieléctrica, etc.
I. Objetivos
✓ Determinar el Km y Vmáx experimental de la pepsina para la albúmina a

partir de la gráfica de Vi contra [S] (gráfica de Michaelis-Menten).
✓ Determinar el Km y Vmáx experimental de la pepsina para la albúmina a
partir de la gráfica de dobles recíprocas 1/Vi contra 1/[S].
Los biocatalizadores específicos sintetizados por el organismo, llamados

enzimas, son proteínas que intervienen en las reacciones biológicas, acelerando
la velocidad de reacción hasta alcanzar su punto de equilibrio. Las enzimas son
sumamente específicas en las reacciones que catalizan y en los compuestos
(llamados substratos) sobre los que actúan.
La cinética enzimática es el estudio del comportamiento de la velocidad en

reacciones catalizadas por enzimas. Las mediciones de la cinética proporcionan
una herramienta bioquímica muy útil para calcular la concentración de una
enzima en una muestra biológica y comparar su actividad catalítica con la de
otras enzimas. Además, las mediciones cinéticas permiten describir de manera
cuantitativa el efecto de un veneno o medicamento sobre la actividad de una
enzima.
La velocidad a la que procede una reacción enzimática está controlada en parte

por las concentraciones de la enzima y el substrato. A medida que progresa la
51
reacción, aumenta la concentración de los productos a expensas de la

desaparición de los correspondientes substratos, en tanto que la concentración de
la enzima no se altera.
La actividad enzimática puede expresarse:

a) Por la desaparición del Substrato (S)
b) Por la aparición de Productos (P)
c) Por modificación de Cofactores (C)
El mecanismo de reacción enzima-sustrato puede simbolizarse así:
[E] + [S] → [E] + [P]
Diversos factores modifican la actividad enzimática, tales como:
1) Concentración de Substrato [S]
2) Concentración de la Enzima [E]
3) pH del medio
4) Influencia de la temperatura
5) Efecto de inhibidores y activadores
En las siguientes prácticas estudiaremos el efecto de estos factores sobre la

actividad enzimática de la pepsina en presencia de albúmina.
La pepsina es un enzima proteolítico (proteasa ácida) segregada por las células

principales de las glándulas gástricas, tiene un peso molecular de 34 644 Da.
Hidroliza los enlaces peptídicos, descomponiendo así las proteínas en
aminoácidos. La pepsina solo realiza la proteólisis en medio ácido, actúa a un pH
bajo, por lo que es precisa la presencia de ácido clorhídrico para la realización de
la digestión gástrica de las proteínas. Las células de las glándulas gástricas no
52
producen directamente pepsina, sino que su producto es el pepsinógeno,

sustancia precursora sin capacidad digestiva que se convierte en pepsina al entrar
en contacto con el ácido clorhídrico y con la pepsina ya producida.
MATERIALES
• 01 gradilla
• 01 termómetro
• 02 pipetas graduadas o volumétricas 10mL
• Propipetas
• 01 Beaker de 50 mL
• Planchas de calentamiento
• Beaker 200 mL
• 01 solución de albúmina al [5%] 25 mL

• 01 pepsina 2% frasco 5 mL
• Solución de HCl 1N
• 01 baño maría 37°C o plancha de calentamiento

• 01 beaker 250 mL
• 01 termómetro
• Micropipetas 100-1000 uL
• Espectrofotómetro
• Cubetas
53
PROCEDIMIENTOS
Parte experimental
✓ La actividad enzimática se medirá por la desaparición del substrato

(disminución de la turbidez en los tubos con albúmina), la cual se
determinará en el espectrofotómetro a 450 nm.
✓ Para realizar el experimento se prepararán los siguientes medios de
reacción:
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Agua
destilada 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 -
(mL)
HCl 1N (mL) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 -
Albúmina 5%
0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 -
(mL)
Pepsina 2%
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 4
P/V (mL)
- Leer los tubos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8 en el espectrofotómetro.

Considerar las absorbancias como Lectura Inicial.
- Luego, incubar los nueve tubos a 37ºC por 5 min. Añadir 0.5 ml de
pepsina a cada tubo (del tubo 9 a los tubos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8).
Incubar a 37ºC por 5 min o hasta que el tubo 1 este claro.
- Detener la reacción colocando los tubos en un baño de hielo o

colocar en agua a temperatura ambiente.
- Leer los tubos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8 en el espectrofotómetro.

Considerar las Absorbancias como Lectura Final.
✓ Determinar la actividad enzimática:
54
Actividad Enzimática = Lectura Final – Lectura inicial.
✓ Graficar en papel milimetrado:
Actividad Enzimática en el eje Y versus [S] en el eje X.
✓ Realizar la gráfica de las dobles recíprocas.
✓ Calcular el Km y Vmáx de la pepsina una partir de las gráficas
55

LA PRÁCTICA N°7
Tema: Factores que afectan la actividad enzimática



• Objetivos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
• Referencias
56


Edición 2021.
57
PRÁCTICA Nº 8
Determinación de la concentración de hemoglobina y

urea
La hemoglobina es una proteína que tiene un papel muy importante en el transporte de gases
en todo el organismo. Sus niveles en sangre pueden verse alterados por condiciones como la
anemia, policitemia o deshidratación.
I. Objetivos
✓ Determinar la concentración de hemoglobina en sangre.
✓ Describir las técnicas para determinar la concentración hemoglobina y urea.
✓ Interpretar los resultados de acuerdo con los valores de referencias según la
II. Fundamento teórico (Método de Drabkin)
La determinación de hemoglobina se realiza utilizando el reactivo de Drabkin, en cuya

composición se encuentra el ferricianuro de potasio, cianuro de potasio y bicarbonato de
sodio. El ferricianuro transforma las hemoglobinas en metahemoglobina, compuesto que
luego reacciona con el cianuro de potasio para formar cianometahemoglobina, que tiene
la propiedad de absorber a 540 nm.
MATERIALES PARA LA DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE

HEMOGLOBINA
• 01 gradilla
• 01 pipeta volumétrica o graduada 5 mL
• 02 propipetas
58

• 01 muestra de sangre de sangre en un tubo de ensayo con EDTA (tubo de ensayo
tapa lila)
• 01 estuche comercial para determinación de hemoglobina (estándar de
hemoglobina frasco 1mL+ reactivo de trabajo para hemoglobina)
• 01 micropipeta 10 – 100 µL y/o de 5 – 50 µL
• 01 vórtex
• Timer
PROCEDIMIENTOS
Parte experimental
-Leer en el espectrofotómetro a 540 nm para obtener las absorbancias y luego determinar la

concentración de hemoglobina.
El estándar de hemoglobina es proveido en el kit listo para su uso y se lee la absorbancia

directamente contra el blanco.
59
VALORES DE REFERENCIAS:
Hombres = 14 – 18 g/dL
Mujeres = 12 – 16 g/dL
60
Manual de Práctica de Biología Celular y Molecular
61
Determinación de urea
INTRODUCCIÓN
La urea es un compuesto nitrogenado que se sintetiza en el hígado a partir del ion amonio,
bicarbonato y ATP. La enzima que cataliza esta primera reacción es carbamoil fosfato
sintetasa I, cuya actividad es regulada por el N – acetil glutamato. La excreción de urea por
la orina depende fundamentalmente de la ingesta proteica. Un incremento de urea en sangre
puede ocurrir a causa de una probable disfunción renal.
Objetivos
✓ Determinar el nivel de urea en suero.
✓ Interpretar los valores de urea de acuerdo con los intervalos de referencias e
indicar posibles patologías asociadas con los valores obtenidos.
I. Fundamento teórico
La urea presente en la muestra es desdoblada a amonio por acción de la enzima

ureasa, según la proposición de Faucet y Scott:
ureasa
(NH2)2CO + 2H2O 2NH3 + CO2 + H2O
El amonio producido reacciona con salicilato e hipoclorito en ambiente alcalino,

formándose un complejo de color verde.
MATERIALES PARA DETERMINAR LA CONCENTRACIÓN DE UREA
• 01 gradilla
• 03 pipeta graduada 5 mL
• 02 propipetas
61
• 01 muestra de sangre 3 mL
• 01 estuche comercial para determinar la concentración de urea (estándar + reactivos
de trabajo)
• 01 vórtex
II. Parte experimental
Preparar el siguiente sistema:
- Mezclar y medir a 540 nm en el espectrofotómetro.

- Anote las absorbancias del estándar y desconocido
- Obtenga la concentración por medio de las siguientes fórmulas:
[𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟]
1. 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑙𝑖𝑏𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 (𝐹𝐶) =
𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 (𝐴𝑏𝑠)𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
2. [𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑢𝑟𝑒𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑎𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒] = 𝐹𝐶 𝑥 𝐴𝑏𝑠 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑎𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒
- Interprete los resultados obtenidos tome en cuenta los intervalos de
62
referencias.
Valores de referencias:
63

LA PRÁCTICA N°8
Tema: Determinación de hemoglobina y urea



• Objetivos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
• Referencias
64


2021.
65
PRÁCTICA Nº 9
Digestión enzimática del almidón
El almidón constituye un importante componente de la dieta de los seres humanos. El

proceso de digestión de este nutriente se inicia en la cavidad oral, lugar en que actúa la α –
amilasa salival, enzima que tiene la propiedad de hidrolizar los enlaces α 1,4 del almidón y
forma polisacáridos de menor peso molecular.
I. Objetivos
✓ Hidrolizar el almidón por efecto de la amilasa salival

✓ Explicar el proceso de digestión de la amilasa salival
✓ Describir los factores que afectan la actividad enzimática de la amilasa salival
La amilasa salival degrada el almidón progresivamente a carbohidratos cada vez más

pequeños y simples. El yodo contenido en el lugol (en forma de moléculas de triyoduro)
interactúa con las cadenas del almidón, incorporándose en el interior de la estructura
helicoidal del almidón, resultando un complejo de inclusión de color azul oscuro. Conforme
la amilasa degrada el almidón, la cadena glucosídica se hace cada vez más pequeña y menos
ramificada, por lo tanto, las moléculas de triyoduro del lugol ya no pueden formar el
complejo de inclusión. Conforme la amilasa degrada el almidón, se forman carbohidratos
cada vez más pequeños y complejos que al reaccionar con el lugol forman complejos de
diferente color, que (de menos a más degradado) va de azul oscuro a rojizo, luego a naranja
y finalmente al color ámbar original del lugol.
MATERIALES
• 01 gradilla
66

• 02 pipetas graduadas 5mL
• 02 pipetas graduadas o volumétricas 10mL
• 01 pipeta graduada de 2 mL
• Propipetas
• 01 beaker de 50 mL
• 01 almidón 1% frasco 6 mL
• Tampón fosfato 0.1 M (pH 6.5), 5 mL
• 01 Cloruro de sodio 0.05N 10 mL
• 01 solución de Lugol en frasco con gotero
• Timer
PROCEDIMIENTOS
Parte experimental
✓ Hidrólisis del almidón por efecto de la amilasa salival
Para realizar el experimento se prepararán los siguientes medios de reacción:
1 2 3
Tampón fosfato 0.1M pH 6.5 (mL) 0.5 0.5 0.5
Almidón 1% (mL) 1.0 1.0 1.0
Cloruro de sodio 0.5N (mL) - - 1.5
Agua destilada (mL) 2.0 1.5 -
67
Colocar los tubos de ensayo en el baño maría a 37°C durante 2 minutos, luego
adicionar:
1 2 3
Solución de saliva (mL) - 0.5 0.5
Colocar nuevamente los tubos en baño maría a 37°C y sacar alícuotas de

0.5mL de cada uno de los tubos a los 3, 6, 9 minutos, y adicionarlos a los
tubos previamente preparados que contienen 1.0 mL de ácido clorhídrico
0.5N para detener la reacción, de acuerdo con el siguiente esquema:
1 2 3
Ácido clorhídrico 0.5N (mL) 1.0 1.0 1.0
Luego adicionar a cada tubo:
1 2 3
Solución de Lugol (gota) 1 1 1
- Dejar en reposo durante 1 minuto y observar el color formado.

- Durante el desarrollo del experimento se observarán modificaciones del color
inicial de los tubos como consecuencias de la acción de la α – amilasa salival.
- El experimento concluye cuando uno de los tubos muestre un color pardo
claro.
68
69

LA PRÁCTICA N°9
Tema: Digestión enzimática del almidón



• Objetivos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
• Referencias
70


2021.
71
PRÁCTICA Nº 10
Cálculo del balance energético
El Balance Energético es el equilibrio que debe existir entre el gasto energético diario de un
individuo, de acuerdo con su metabolismo basal, edad, sexo, actividad física y la ingesta
energética diaria a través de los macronutrientes de los alimentos consumidos.
Si predomina el gasto energético sobre la ingesta energética, en un tiempo prolongado, el

individuo tiende a perder sus reservas, y como consecuencia se adelgaza. Por otro lado, si
predomina la ingesta, el exceso de energía se acumulará en el cuerpo, en forma de
triglicéridos, en el tejido adiposo, observándose un aumento de peso.
Para realizar este balance, es necesario, calcular, en forma independiente, el gasto energético
en las 24 horas de cualquier día rutinario, de acuerdo a la tasa metabólica basal (TMB) y la
actividad física realizada, luego compararlo con la ingesta energética que proporcionaron los
alimentos consumidos el mismo día, utilizando la Tabla de composición química de los
alimentos peruanos y Tabla auxiliar de alimentos peruanos.
I. Objetivos
✓ Calcular las propias necesidades energéticas (gasto energético) del alumno

✓ Calcular la ingesta energética del alumno
✓ Determinar el balance energético del alumno
✓ Determinar el % de adecuación de la dieta del alumno
✓ Interpretar el balance energético del alumno
En base a los alimentos ingeridos y las actividades realizadas en un día ordinario, se calculará la ingesta
y el gasto de energía (es decir, las calorías provenientes de los alimentos y las consumidas por las
actividades). De esto se concluye si el consumo es adecuado al gasto.
72
MATERIALES
Esta práctica no requerirá de materiales ni reactivos de Laboratorio. Únicamente del Manual

de laboratorio de Bioquímica I.
El docente podrá solicitar materiales adicionales, previo requerimiento anticipado.
PROCEDIMIENTOS
Parte experimental
✓ Calcular la ingesta energética, utilizando:
✓ Tabla de trabajo
✓ Listado de alimentos consumidos en 24 horas
✓ Tabla de composición química de alimentos peruana
✓ Tabla auxiliar de alimentos peruana
DISPONIBLE EN:
-Tablas Auxiliares para la Formulación y Evaluación de Regímenes Alimentarios (CENAN)
http://www.ins.gob.pe/repositorioaps/0/5/jer/doc_tec_norm/TAFERA_1_compressed.pdf
- Tablas Peruanas de Composición de Alimentos (CENAN)
http://www.ins.gob.pe/insvirtual/images/otrpubs/pdf/Tabla%20de%20Alimentos.pdf
73
“CÁLCULO DE LA INGESTA ENERGÉTICA”
a) En la lista de consumo de alimentos, desglosar las preparaciones de todo el día en

cada uno de sus constituyentes (desayuno, almuerzo, merienda, cena). Calcular
mediante regla de tres el contenido de proteínas, grasas y carbohidratos de cada
alimento respectivamente, según la cantidad que se haya consumido.
Ejemplo 1:
• Ingesta de leche fluida de vaca = 250 mL
• Leche fluida de vaca, por cada100 mL contiene 3.1gr de proteínas
Para calcular la cantidad de proteína que existe en 250 mL:
Leche fluida de vaca en 250 mL “x”
Leche fluida de vaca en 100 mL 3.1gr de proteínas
X = 7.75gr de proteínas
Ejemplo 2:
• Ingesta de pulpa de carne vacuno = 90gr
• Pulpa de carne vacuno, por cada100gr contiene 21.3gr de proteínas
• Para calcular la cantidad de proteína que existe en 90gr:
Pulpa de carne de vacuno en 90gr “x”
Pulpa de carne de vacuno en 100gr 21.3gr de proteínas
X = 19.17gr de proteínas
La tabla de Composición química de los alimentos

indica los valores en 100 g de porción comestible
cruda (a menos que se indique que los valores
corresponden al alimento cocido).
74
b) Organizar los valores obtenidos en una columna por biomolécula y totalizar los
valores de cada una de las tres columnas. Luego, el valor obtenido en gramos de
cada macronutriente se multiplica por el factor respectivo para obtener la energía
(kcal) que aportan.
Proteína x 4.0 Kcal
Grasa x 9.0 Kcal
Carbohidratos x 4.0 Kcal
c) Sumar los totales, y el resultado obtenido corresponde a la cantidad de energía

(Kilocalorías) que aportan los alimentos consumidos ese día.
TABLA DE TRABAJO
Cantidad en Proteína (gr) Grasa CHO

Energía
ALIMENTO medida Cantidad (gr) (gr) (gr)
(Kcal)
casera
Desayuno
SUB – TOTAL
ALMUERZO
SUB – TOTAL
CENA
SUB – TOTAL
MERIENDAS
SUB – TOTAL
FACTOR x4 x9 x4
TOTAL (Kcal)
75
Ingesta Energética = Ʃ (kcal)/d
✓ Calcular el gasto energético, utilizando:

✓ Ecuaciones para calcular la tasa metabólica basal (TMB)
✓ Tabla de categorías y factores de la actividad física
“CÁLCULO DEL GASTO ENERGÉTICO”
G.E. = TMB x FACTOR DE ACTIVIDAD
a) Se calcula la tasa metabólica basal (TMB) o gasto en reposo, aplicando la fórmula de

la siguiente tabla:
Ecuaciones para calcular la tasa metabólica basal (TMB) a partir del peso corporal (P).
RANGO DE EDAD (años) Kcal/día
HOMBRES
0–3 60.9 (P) – 54
3 – 10 22.7 (P) + 495
10 – 18 17.5 (P) + 651
18 – 30 15.3 (P) + 679
30 – 60 11.6 (P) + 879
> 60 13.5 (P) + 487
MUJERES
0–3 61.0 (P) – 51
3 – 10 22.5 (P) + 499
10 – 18 12.2 (P) + 746
18 – 30 14.7 (P) + 496
30 – 60 8.7 (P) + 829
76
> 60 10.5 (P) + 596
Fuente: Organización Mundial de la Salud (OMS). 1985.
Ejemplo 1:
La TMB para una estudiante de 19 años de edad, con 55 kg. de peso, será:
TMB = 14.7 (P) + 496

TMB = 14.7 (55) + 496
TMB = 1305 Kcal/d
b) Se realiza la lista de actividades realizadas en el día, luego se agrupan por categorías,
tomando en cuenta el tiempo empleado (en minutos) y multiplicándolas por el
múltiplo de la TMB o factor de actividad (o gasto de energía promedio por
actividad). Las categorías de actividad física son las siguientes:
77
ACTIVIDAD FÍSICA CATEGORÍA MÚLTIPLO DE LA TMB o

FACTOR DE ACTIVIDAD
Dormir, descansar Reposo 1.0
Manejando automóvil, escribiendo a

máquina, atendiendo a clase,
trabajando en laboratorio, viendo TV,
cocinando, planchando, jugando Muy ligera 1.5
cartas, tocando un instrumento
musical
Caminando a 4 – 5km/h, atendiendo

al público, limpieza de la casa,
Ligera 2.5
cuidando niños, trabajo de carpintería
y electricidad, jugar tenis de mesa
Caminando a 5.5 – 6.5km/h,

manejando bicicleta, bailando,
Moderada 5.0
trabajando en jardinería, cargando
bultos pesados
Jugando fútbol, vóley, básquet,

caminando con carga pesada cuesta
Pesada 7.0
arriba, cortando árboles, trabajo de
excavación manual
* Asignar 1/3 de hora para el mantenimiento cardiovascular y

muscular. Recomendación FAO/OMS 1985.
1) Ordenar las actividades de acuerdo al tiempo empleado:
HORA ACTIVIDAD TIEMPO
6:00 – 6:15 a.m. Aseo personal 15´
6:15 – 6:45 a.m. Tomar desayuno 30´
6:45 – 7:00 a.m. Caminar para tomar el bus 15´
78
7:00 – 8:00 a.m. Viajar en bus 60´
8:00 – 10:00 a.m. Asistir a clase 120´
etc. (Debe completar 1440 minutos).

2) Agrupar por categoría de actividad:
MÚLTIPLO DE
TIEMPO
CATEGORÍA DE LA TMB O FACTOR DE TMB
EMPLEADO
ACTIVIDAD FACTOR DE PONDERADO
(HORA)
ACTIVIDAD
En reposo 8 1.0 8.0
Muy ligera 14 1.5 21.0
Ligera 2 2.5 5.0
TOTAL 34.0
Promedio / hora
1.417
(Factor TMB/24h)
Gasto energético
1850.0
(1.417 x TMB)
Gasto Energético = 1850 Kcal/d
✓ Calcular el balance energético:
Balance Energético = Ingesta Energética vs Gasto Energético
Obtener la respuesta respetando el signo (+) (exceso) ó (-) (déficit)
EQUILIBRIO Ingesta energética = Gasto energético
BALANCE (+) Ingesta energética > Gasto energético
BALANCE (-) Ingesta energética < Gasto energético
79
✓ Calcular el porcentaje de adecuación de la dieta
𝐸𝑛𝑒𝑟𝑔í𝑎 𝑖𝑛𝑔𝑒𝑟𝑖𝑑𝑎
% 𝑑𝑒 𝑎𝑑𝑒𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 𝑥 100
𝐸𝑛𝑒𝑟𝑔í𝑎 𝑟𝑒𝑞𝑢𝑒𝑟𝑖𝑑𝑎
Energía ingerida = Ingesta de alimentos
Energía requerida = Gasto energético
Analizar el % de adecuación de la dieta obtenido, según los siguientes

parámetros:
VALORES NORMALES 90 – 110%
DÉFICIT < 90%
EXCESO > 110%

LA PRÁCTICA N°10
Tema: Cálculo del balance energético

80


• Objetivos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
• Referencias
81


• Salazar, J, Salazar Y. Guía de prácticas de laboratorio. Bioquímica I. UCSUR. Lima.

Edición 2021.
82
PRÁCTICA Nº 11
Concentración de glucosa en condición de ayuno y en

condición de alimentación normal en un tiempo de 24
horas
En un individuo en condición de alimentos o de ayuno de 24 horas se ve alteraciones de las
concentraciones de glucosa en circulación se ven afectas debido a que el organismo estimula
rutas metabólicas de los carbohidratos como glicólisis, glucogénesis, glucogenólisis y
gluconeogénesis con la finalidad de preservar las concentraciones de glucosa dentro de los
valores de referencia para mantener las funciones óptimas de cerebro, eritrocito, músculo,
entre otros.
Objetivo
✓ Determinar la concentración de glucosa en condición de ayunas y en condición de

alimentación normal en un tiempo de 24 horas.
Método de la glucosa oxidasa
✓ La glucosa reacciona con el reactivo enzimático que contiene una mezcla de las
enzimas Glucosa Oxidasa (GOD) y Peroxidasa (POD). En la primera etapa la Glucosa
es oxidada a Ac. Glucónico por la acción de la enzima GOD, liberándose como
producto H2O2, el cual en una reacción mediada por la enzima POD, reacciona con el
Ac. p-Hidroxibenzoico y 4-Aminoantipirina produciendose un compuesto coloreado
con un máximo de absorción a 505 nm., en cantidad proporcional a la cantidad de
Glucosa presente en la muestra.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
✓ Determinación de la concentración de glucosa en suero en condición de ayuno y

alimentación en 24 horas
✓ Identificar tubos de ensayos de 13 x 100 mm como Blanco (B), Estándar (S) y muestra
en ayuno (X1) y muestra en condiciones de alimentación (X2). Luego, Adicionar los
volúmenes que se describen en la tabla que se muestra a continuación:
83
Muestras y reactivos B S X1 X2
Muestra en condición de
- - 0,01 -
alimentación en 24 h
Muestra en condición de
- - - 0,01
ayuno
Estándar - 0,01 -
Reactivo enzimático (mL) 1 1 1 1
1. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o temperatura ambiente (20° a 25°C). Leer las
absorbancias ajustando a cero el espectrofotómetro con el blanco de reactivo. El color
resultante es estable por a lo menos treinta minutos. (https://www.valtek.cl/wp-
content/uploads/2020/02/Glucosa-GOD-PAP.-Inserto.pdf).
2. Calcular el factor de calibración y la concentración de glucosa en el suero.
3. Interpretar los resultados de acuerdo con los valores de referencia y posteriormente

identificar que rutas metabólicas de han activado bajo las condiciones de ayuno y de
alimentación de 24 horas.
MATERIALES
I. MATERIALES EN LA MESA DE LOS ESTUDIANTES

• 01 gradilla
• Propipetas
• Pipeta volumétrica de 5 mL
• Solución de glucosa de 60 mg/dL
• Solución de glucosa de 90 mg/dL
III. MATERIALES EN LA MESA CENTRAL DEL PROFESOR
• 01 estuche comercial de glucosa oxidasa

• Espectrofotómetro
• Baño de maría
• Cubetas
• Micropipetas de 10-50 µL; 100 – 1000 µL
• Puntas de micropipetas
• Vórtex
84

LA PRÁCTICA N°11
Tema: Concentración de glucosa en condición de ayuno y en condición de

alimentación normal en un tiempo de 24 horas
La actividad se desarrollará en grupos que serán conformados el primer día de clases. Cada
grupo elegirá un responsable que será el encargado de subir éste y los futuros informes en
formato PDF a las carpetas asignadas en el aula virtual.


• Objetivos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
• Referencias
85


2021.
86
87
PRÁCTICA Nº 12
Hidrólisis de lípidos
Los lípidos de la dieta son hidrolizados a nivel del yeyuno por acción de la lipasa pancreática.
En este proceso juegan un papel muy importante las sales biliares, compuestos que tienen la
propiedad de emulsionar los lípidos para una eficiente acción de la lipasa pancreática.
I. Objetivos
✓ Hidrolizar a los lípidos por la lipasa pancreática.

✓ Describir los factores que afectan la actividad enzimática de la lipasa
pancreática
La enzima lipasa puede degradar triglicéridos hasta monoglicéridos y glicerol. Para ello, es
necesario la presencia de micelas. Las micelas pueden formarse por emulsificación de los
lípidos debido a la acción de las sales biliares. La lipasa actúa sobre las micelas degradando
los lípidos, con lo cual la capa de lípido se vuelve cada vez más fina conforme se da la
degradación.
PROCEDIMIENTOS
Parte experimental
Para la demostración experimental de la acción hidrolítica de esta enzima, se

prepararán los siguientes medios de reacción:
B 1 2 3
Tampón fosfato 0.1 M (mL) 2.0 2.0 2.0 -
Aceite (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0
Sales biliares 1% (mL) 2.0 2.0 - 2.0
Agua destilada (mL) 5.0 - 2.0 2.0
88
Añadir 2 gotas de fenolftaleína a cada uno de los tubos, luego adicionar gota a
gota una solución de NaOH 0.05N hasta que aparezca una coloración débilmente
grosella estable, luego adicionar:
B 1 2 3
Pancreatina 1% (mL) - 5.0 5.0 5.0
Volver a incubar los tubos a la misma temperatura durante 1 hora, agitándolos

cada 5 minutos.
Al finalizar el tiempo de incubación, adicionar nuevamente a cada tubo 2 gotas

de fenolftaleína y proceder a titular, utilizando una bureta, con una solución de
NaOH 0.05N hasta que aparezca nuevamente la coloración ligeramente grosella.
Los resultados se expresarán como miliequivalentes de ácido esteárico liberado

por acción de la lipasa pancreática.
MATERIALES
• 01 gradilla
• 01 soporte universal con pinza mariposa01 Vórtex
• 01 fenolftaleína gotero 25mL

• 01 hidróxido de sodio ̴ NaOH 0.05 N gotero 25Ml
89
• 01 solución de pancreatina 1% frasco 100 mL

• 01 sales biliares 1% frasco 50 mL
• 01 aceite vegetal 30 mL
• 01 tampón fosfato 0.1M pH 7.8 frasco 100

LA PRÁCTICA N°12
Tema: Hidrólisis de lípidos



• Objetivos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
90
• Referencias
colocadas después de las conclusiones y elaboradas en formato APA (mínimo una
referencia por cada integrante del grupo).


2021.
91
PRÁCTICA Nº 13
Determinación de triglicéridos, colesterol en suero y

lipoproteínas: Perfil lipídico mínimo
TRIGLICÉRIDOS
La determinación de triglicéridos en plasma constituye un dato muy importante en el manejo

de ciertas dislipidemias. Su incremento en el plasma constituye un factor de riesgo positivo
para aterosclerosis.
I. Objetivos
✓ Determinación del nivel de triglicéridos en suero sanguíneo.
✓ Describir las técnicas para determinar la concentración sérica de triglicéridos
✓ Interpretar los resultados de acuerdo con los valores de referencias según la
Los triglicéridos del plasma son hidrolizados por una lipoproteína lipasa (LPL) que
forma como productos glicerol y ácidos grasos. El glicerol en presencia de ATP por
acción del glicerol quinasa es convertido en glicerol – 1 – fosfato, compuesto que es
convertido por el glicerol fosfato oxidasa (GPO) en dihidroxiacetona fosfato y peróxido
de hidrógeno, este compuesto en presencia de 4 – aminofenazona (4 – AF), clorofenol y
peroxidasa (POD) es transformado en una quinonimina de color rojo.
92
LPL
Triglicérido Ácido graso + Glicerol
Glicerol quinasa
Glicerol + ATP ADP + Glicerol – 1 – fosfato
GPO
Glicerol – 1 – fosfato + O2 Dihidroxiacetona fosfato + H2O2
POD
2H2O2 + 4 – AF + clorofenol Quinonimia roja
PROCEDIMIENTOS PARA DETERMINAR LA

CONCENTRACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS
Parte experimental
Preparar las siguientes reacciones:
93
B x St
Suero (µL) - 10 -
Estándar de TGC (µL) - - 20
Reactivo de trabajo (mL) 1 1 1
Mezclar e incubar durante 5 minutos en baño maría a 37°C, luego leer en el

espectrofotómetro a 505 nm.
Obtener las concentraciones de triglicéridos.
Interpretar los valores obtenidos de triglicéridos de acuerdo con los intervalos de

referencia que a continuación se muestra:
< 150 mg/dL
COLESTEROL
El colesterol es una sustancia cuyos niveles en la sangre mantienen una estrecha relación con
diversas patologías, por cuyo motivo su determinación puede contribuir al diagnóstico de:
aterosclerosis, mixedema, diabetes mellitus, nefrosis, hipertiroidismo, etc.
I. Objetivos
✓ Determinar el nivel de colesterol en suero sanguíneo

✓ Interpretar los valores de colesterol de acuerdo con los intervalos de
referencias
La técnica utilizada para la determinación se fundamenta en la hidrólisis previa

de los ésteres de colesterol por el colesterol esterasa, la posterior acción de la
enzima colesterol oxidasa que formará peróxido de hidrógeno en cantidades
estequiométricas y finalmente la participación de la peroxidasa que en presencia
de reactivos químicos formará un compuesto coloreado proporcional a la
cantidad de colesterol existente en la muestra de sangre.
94
Colesterol esterasa
Esteres de colesterol + H2O Colesterol + AGNE
Colesterol oxidasa
Colesterol + O2 Colesten – 3 – ona + H2O
Peroxidasa
2H2O2 + 4 – AF + fenol Quinonimia coloreada + 4 H2O
Parte experimental para determinar la concentración de colesterol total:
Preparar las siguientes reacciones:
B x St
Estándar de colesterol (µL) - - 10
Reactivo de trabajo (mL) 1 1 1
Incubar durante 5 minutos en baño maría a 37°C y leer en el espectrofotómetro a

505 nm.
Hallar la concentración de colesterol total
Interpretar el valor obtenido de acuerdo con los valores de referencia que se

muestra a continuación:
140 – 200 mg/dL
95
Procedimiento experimental para determinar la concentración de HDL-

colesterol:
Precipitación de LDL y VLDL
1. Adicionar 200 µL del suero comercial en un tubo de ensayo de 13 x 100

mm. Luego, agregar 500 µL del reactivo precipitante mezclar por 30
segundo en vórtex.
2. Posteriormente, centrifugar a 3000 rpm por 15 min, para obtener HDL en el
sobrenadante y en el precipitado se encuentran LDL y VLDL.
3. Finalmente, se debe determinar la concentración del HDL. Para ello, se
realiza el procedimiento que se describe en la tabla que se muestra a
continuación.:
3.1. Identificar tres tubos de ensayo de 13x100 como Blanco (B), estándar de
HDL-colesterol de 76,5 mg/dL (S), desconocido o paciente (D o P)
-Realizar el siguiente protocolo:
Tabla sobre procedimiento técnico para determinar concentración de HDL-c
505 nm
- Obtener la concentración de HDL-colesterol. Para esto, 1) determine el

fórmula de factor de calibración, 2) Factor de dilución (FD= Vol Final/Vol
Inicial). El cálculo del FD procede de tratamiento previo que se le realizó a
la muestra en el procedo de precipitación. VF= sumatoria de los volúmenes
(500 uL + 200 uL)= 700 uL. El VI= volumen de muestra de suero (200 uL).
Posteriormente, se divide el VF/VI para obtener el FD. Por último, se halla
la concentración de HDL= Absorbancia de muestra x FC x FD.
Una vez obtenido la concentración de HDL, se procede a la interpretación

los resultados de acuerdo con los valores de referencias (ver tabla que se
muestra a continuación):
96
Intervalos de referencia para HDL-c=
Determinación de la concentración de VLDL-c y LDL-c se llevará a cabo por

la fórmula de Friedewald
VLDL-c= Tg/5
LDL-c= Colesterol total -HDL-VLDL
Intervalos Referenciales:
LDL-c: menor a 130 mg/dL
VLDL-c: menor 30 mg/dL
MATERIALES
• 01 gradilla
• 03 pipetas graduadas de 5mL
• 01 propipetas
• 01 suero comercial
• 01 estuche comercial para determinar la concentración de triglicéridos
• 01 estuche para determinar HDL (reactivo precipitante )
• 01 estuche comercial de colesterol total
• 01 estándar de HDL-colesterol
97

• 01 vórtex
98

LA PRÁCTICA N°13
Tema: Determinación de triglicéridos, colesterol y lipoproteínas: Perfil lipídico

mínimo


• Objetivos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Recomendaciones
• Referencias
colocadas después de las conclusiones y elaboradas en formato APA (mínimo una
referencia por cada integrante del grupo).
99
100


2021.
101

Guía de Práctica de Laboratorio - Bioquímica I 2023-2

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Manual de Práctica de Bioquímica I

Medidas de bioseguridad y preparación de soluciones amortiguadoras 13

Determinación de ácido úrico en suero sanguíneo 29

Extracción del ADN 34

Determinación de proteínas plasmáticas totales y fraccionadas 39

Determinación de vitamina C en alimentos vegetales 45

Factores que afectan la actividad enzimática 50

Determinación de hemoglobina y urea 57

Digestión enzimática del almidón 65

Cálculo del balance energético 70

Concentración de glucosa en condición de ayuno y en condición de 80

Determinación de colesterol, triglicéridos y lipoproteínas: Perfil 93

NORMAS GENERALES PARA EL ESTUDIANTE DEL

1. LABORATORIO DE QUÍMICA 1, 2, 3 y 4 UCSUR

El Laboratorio es un ambiente físico estratégico y debidamente equipado donde se

2. INSTRUCCIONES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO

• Desarrollar los experimentos en forma ordenada y con mucha

La química es una ciencia activa y en continuo movimiento; tiene una importancia

La enseñanza de la Bioquímica equilibra el desarrollo teórico de sus conocimientos con el

Al término de cada práctica se propone un cuestionario de preguntas teóricas y problemas

INSTRUCCIONES PARA EL DESARROLLO DE LOS

PARTES DEL INFORME DE LABORATORIO

Apellidos Nombres N° Mesa Fecha

CRITERIOS QUE SE TOMARÁN EN CUENTA PARA LA

Medidas de bioseguridad y Soluciones amortiguadoras

1. MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

b) Comportamiento de los alumnos durante las prácticas

2. ELEMENTOS DE PROTECCIÓN PERSONAL Y DE LOS EQUIPOS

• Los estudiantes vestirán sus mandiles antes de ingresar al Laboratorio y

b) Lentes de seguridad y respiradores

d) Botiquín de primeros auxilios

Nelson, D. L., & Cox, M. M. (2017). Lehninger Pinciples of Biochemistry (SEVENTH

Salazar, J, Salazar Y. Guía de prácticas de laboratorio. Bioquímica I. UCSUR. Lima. Edición

Preparación de soluciones amortiguadoras

El poder amortiguador de los cambios de pH en un determinado sistema; es una expresión

✓ Determinar el pH teórico y práctico de diferentes soluciones

✓ Determinar la influencia del pH en la solubilidad de sustancias

✓ Identificar la naturaleza amortiguadora de la albúmina

II. Fundamento teórico

El poder amortiguador de los cambios de pH en un determinado sistema es una

El sistema amortiguador dentro de las células es el fosfato, está formado por el

(𝐻2 𝑃𝑂4 )1− (𝑎𝑐) + (𝑂𝐻)1−. (𝑎𝑐) → (𝐻𝑃𝑂4 )2− (𝑎𝑐) + 𝐻2 𝑂

El receptor de protón o base en el fosfato es la base conjugada del (H2PO4)1-, el

(𝐻𝑃𝑂4 )2− (𝑎𝑐) + (𝐻)1+ (𝑎𝑐) → (𝐻𝑃𝑂4 )1− (𝑎𝑐)

El sistema amortiguador extracelular es el carbonato, está formado por el par

𝐶𝑂2 (𝑎𝑐) + 𝐻2 𝑂 → 𝐻2 𝐶𝑂3 (𝑎𝑐)

El ácido carbónico del amortiguador carbonato de la sangre neutraliza el (OH)1-,

(𝐻𝐶𝑂3 )1− (𝑎𝑐) + (𝐻)1+ (𝑎𝑐) → 𝐻2 𝐶𝑂3 (𝑎𝑐)

Las soluciones amortiguadoras son muy importantes, se usan:

✓ Preparación de soluciones estándar (determinación potenciométrica

✓ Mantenimiento una concentración de H+ necesaria para la actividad

✓ Ecuación de Henderson – Hasselbach

La ecuación de Henderson – Hasselbach, ha sido derivada de la Ley de

Para el siguiente sistema en equilibrio:

Calculando Ka para el ácido débil, HA:

Despejando la concentración iones hidrógeno se tiene:

Aplicando logaritmo y multiplicando por (-1), se obtiene:

Expresión conocida como ecuación de Henderson – Hasselbach para un

Es un sistema endógeno (producido por un organismo vivo) capaz de

Como se mencionó, la potencia máxima de un tampón es cuando el pH

1. Tipos de amortiguadores biológicos:

✓ Sistema amortiguador bicarbonato

✓ Sistema amortiguador fosfato