Preparación de muestras para Preparación de muestras para Microscopio
Microscopio Óptico Electrónico de Barrido (MEB) ó (SEM)
(MO)
Tipo de Haz que se utiliza Haz de Luz
el microscopio
Tipo de escaneo Dependiendo de la muestra, pero como
(Dimensión) puede ser orgánica, entre otras más se
puede ver hasta en 2D la muestra.
Calidad de imagen Baja calidad
Se sacrifica la definición por la
dimensión de la muestra ya que se
puede observar en algunos casos hasta
en 3D
Tipo de muestra Puede ser de orgánico e inorgánico
requerida
Rango de zoom Desde x10 – x40
Pasos de preparación Las muestra inertes o inorgánicas de
origen no biológico suelen presentar
más dificultad para su estudio.
Complejidad del estudio Este estudio es de baja complejidad ya
que es uno de los más básicos de
preparación y sin tanto procedimiento.
Costo del muestreo Bajo costo ya que es un proceso tan
antiguo y convencional se ha logrado la
alta reducción de costo para realizar
este estudio.
Fijación En este caso La fijación y conservación
normalmente se aplica a muestras de
origen biológico,
aunque algunas inertes también
necesitan ser conservadas en
condiciones adecuadas.
Postfijación No existe este paso para este tipo
Disección Las muestras se pueden estudiar “in
toto”, cuando por su tamaño se han de
preparar
en su totalidad, o parcialmente, cuando
sólo es necesario extraer estructuras o
hacer
Haz de electrones
En este caso la muestra se hace por barrido o
en pocas palabras solo analiza una cara de la
muestra.
1D
Alta definición
El precio de la alta definición son las
dimensiones a observar ya que solo escanea
una cara o una dimensión del material.
De preferencia un metal y en caso de no serlo
se le colocará una capa de oro por ser un
superconductor y mejorar el estudio de
barrido
Desde x10 – x30 000
La preparación de la muestra es un poco más
laboriosa ya que se requiere de hasta 5 pasos
nada sencillos para la completa preparación
de la muestra.
Por el contrario, se requiere de un gasto un
poco más elevado ya que en su mayoría se
requiere que la muestra sea un material
conductor o se le aplique una capa de un
superconductor el cual el mejor es el oro por
lo cual eleva su costo por los cielos al
necesitarse de esa capa de cobertura para un
material no conductor.
Las muestras que se van a estudiar al SEM no
requieren de una fijación específica o distinta
a las ya indicadas en las técnicas de
microscopía tratadas, es decir tanto las
muestras fijadas para microscopía óptica
como para el TEM pueden ser observadas
satisfactoriamente en este tipo de
microscopía.
El tetróxido de osmio es el postfijador más
utilizado, tanto por su capacidad de fijar los
lípidos, como por favorecer ligeramente el
contraste de la muestra, sobre todo en
aquellas cuyo patrón morfológico es muy sutil.
Para el estudio al SEM, al igual que la TEM, la
muestra se ha de deshidratar, ya que algo de
humedad dentro de la cámara provocaría un
mal funcionamiento del microscopio, ya que el
vacío no sería adecuado y el haz de electrones
se perturbaría.
 secciones finas de la misma.
Inclusión y montaje La inclusión consiste simplemente en
embeber la muestra en una sustancia
que se endurece posteriormente
formando un cuerpo, de manera que la
muestra se pueda manipular y cortar
fácilmente.
Actualmente, el material utilizado en
las inclusiones es la parafina.
Desecación Es completamente lo contrario a lo que
la muestra requiere ya que para este
caso se necesita que la sustancia sea un
poco acuosa.
Para este caso no hay tal paso ya que los
requisitos indican que debe ser una muestra
completamente seca.
Es el paso por el cual la muestra pierde
súbitamente toda sustancia líquida, sin que se
vea mermada la estructura o morfología de
ésta. Para ello se utiliza un líquido de
transición que tiene una sublimación muy
rápida, para evitar toda tensión superficial y
que la muestra conserve un aspecto lo más
cercano posible a estado natural.